全 文 ：茶 叶 科 学 2007，27（3）：201~210
Journal of Tea Science

收稿日期：2007-03-04 修订日期：2007-06-03
基金项目：云南省自然科学基金重点项目资助(编号：2003C0007Z)
作者简介：龚加顺(1971— )男，云南富源人，博士，博士后，副教授，主要从事普洱茶和食品生物技术研究。
云南普洱茶特征成分的功能与毒理学评价
龚加顺 1，陈文品 2，周红杰 3*，董兆君 4，张以芳 5
（1. 云南农业大学食品科技学院, 云南 昆明 650201；2. 西南农业大学食品科学学院，重庆 400716；3. 云南农业大学茶学系，云南 昆明
650201；4. 第三军医大学军事毒理学教研室, 重庆 400038；5. 云南农业大学动物科学技术学院，云南 昆明 650201）
摘要：研究了普洱茶特征成分茶褐素、茶多糖与蛋白质等的复合体对昆明种小白鼠的抗疲劳、降胆固醇以及毒理学效
应。实验结果显示：普洱茶特征成分提取物能显著提高小白鼠的抗疲劳作用和降低小鼠血液中的胆固醇含量，且优于
普洱茶水提物。普洱茶特征成分提取物经口 LD50>10g/kg，属实际无毒级物质。Ames实验中加 S9混合液和不加 S9混
合液的各剂量组回变菌落数与阴性对照差别无统计学意义，且无剂量反应关系。小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验与阴
性对照组比较差别无统计学意义。普洱茶特征成分提取物在 500~5000µg/ml浓度范围内未见诱发 CHL细胞染色体畸
变率增高。这说明，在实验条件下，普洱茶特征成分提取物属实际无毒级，也未见有致突变作用。
关键词：普洱茶；特征成分；抗疲劳；降胆固醇；急性毒性；致突变性
中图分类号：S571.1; Q523 文献标识码：A 文章编号：1000-369X（2007）03-201-10


Evaluation on the Function and Toxicity of Extraction of
Characteristic Components in Yunnan pu-erh Tea
GONG Jia-shun1, CHEN Wen-ping2, ZHOU Hong-jie3*,
DONG Zhao-jun4, ZHANG Yi-fang5
（1. Faculty of Food Science and Technology, Yunnan Agricultural University, Kunming 650201, China; 2. College of Food Science, Southwest
University, Chongqing 400716, China; 3. Department of Tea Science, Yunnan Agricultural University, Kunming 650201, China；4. Department of
Military Toxicology , Third Military Medical University, Chongqing 400038, China; 5. College of Animal Science and Technology, Yunnan
Agricultural University, Kunming 650201, China）
Abstract：The anti-fatigue, reduced cholesterol function, acute toxicity and the mutagenicity of extraction of characteristic
components in Yunnan pu-erh tea were studied using mouse as experimental animals. It had significant function of
anti-fatigue and reduced cholesterol for mouse, its effects was better than that of water extracts of pu-erh tea. The oral acute
toxicity in mouse，Ames test，micronucleus test in bone narrow and chromosome abnormality test of characteristic
components extraction in Yunnan pu-erh tea were also carried out．The oral LD50 value of this extraction in mouse was more
than 10.0g/kg．The number of relevant strain colonies had no remarkable increase in the Ames test with and without S 9
mixture, and the relationship of dose-response was also not found. The micronucleus rates and chromosome abnormality rates
at all range of doses had no significant difference compared with the control group. At the dose of 500~5000 g/ml　 , the
characteristic components extraction could not cause the increase of mutagenic rate of CHL (Chinese Hamster Lung
Fibroblast, CHL) cells. It suggested that the extraction of characteristic components in Yunnan pu-erh tea has no mutagenicity
for mouse．
Keywords：pu-erh tea, characteristic components, anti-fatigue, reduced cholesterol, acute toxicity, mutagenicity
μ
茶 叶 科 学 27卷

202


普洱茶是产于云南澜沧江流域茶树原产地
的历史名茶，是以云南大叶种茶树鲜叶为原料加
工而成的特种茶类，是由云南大叶种晒青毛茶经
缓慢自然后发酵和人工促成固态发酵制成的发
酵茶，包括普洱散茶和以普洱散茶压制成型的各
种紧压茶，并具有其独特的品质特点，其色泽褐
红或带有灰白色，汤色红浓明亮，香气独特陈香，
叶底褐红色，滋味醇厚回甜。现代医学临床验证，
普洱茶对人体有保健作用。如：降脂减肥、抗动
脉硬化、防癌与抗癌、护胃、养胃及抗衰老等作
用[1,2]。在普洱茶加工过程中，大部分的多酚类
物质、茶黄素及茶红素氧化、聚合，形成茶褐素
（TB），使其含量成倍增加，从而使茶汤的收敛
性和苦涩味明显降低。此外，水溶性多糖大幅度
增加，为形成云南普洱茶特有的功能与品质奠定
了基础[3~6]。为了进一步证明这些成分所起的作
用以及为普洱茶深加工提供重要参考，本文探讨
了普洱茶特征成分提取物对昆明种小白鼠的抗
疲劳、降胆固醇及其毒理学效应。
1 材料与方法
1.1 实验动物
清 洁 级 （ 动 物 合 格 证 号 SCXK( 渝 )
20020004）昆明种小白鼠，由第三军医大学实验
动物中心提供。
1.2 实验材料
先将普洱茶用热水浸泡，过滤后的滤液再用
乙醇沉淀，此沉淀物经真空干燥后即得普洱茶特
征成分提取物[7]，其主要由茶褐素 58.3%，可溶
性多糖 33.3%，可溶性蛋白质 8.0%及少量的茶红
素、茶黄素、水溶性果胶等组成。
1.3 普洱茶特征成分提取物的功能实验方法
1.3.1 抗疲劳试验
采血及饲喂方法：实验小鼠先按常规方法饲
喂一周，使其适应环境，减少应激反应带来的不
便和实验误差。普洱茶特征成分提取物组：每天
饲喂普洱茶特征成分提取物每只鼠 25 mg（相当
于每公斤体重饲喂 500~600 mg)，连续饲喂 10 d。
普洱茶水浸液组：每天饲喂普洱茶水（将 250 mg
普洱茶浸泡于热水中，过滤得浸泡液 10 ml），连
续饲喂 10 d。对照组：每天供给足量的蒸馏水和
饲料，连续饲喂 10 d。各组小鼠试验过程中，正
常供给饲料。采取饲喂前后小鼠尾血，分离血清
后置于 Eppendorf管中，4℃冰箱保存，用于游泳
前血清尿素氮的测定。
游泳试验：小鼠取尾血后，在 28±2℃水浴
中游泳 1 h，泳后 1~1.5 h，再次取尾血分离血清，
4℃冰箱保存，用于游泳后血清尿素氮测定。存
活小鼠继续喂养。
运动耐力测定：将小鼠置于 28℃±2℃水浴
中游泳，直至全部淹死为止，记录每只小鼠游泳
持续时间（致死时间）。
血清尿素氮增量测定：血清中尿素在氨基硫
脲存在下，与二乙酰一肟在酸性溶液中混合加
热，经Fe3+的催化缩生成3-羟-5,6-二甲基和1,2,4-
三嗪红色化合物，其颜色深浅与尿素含量呈正
比。将样品与试剂混匀后，置于沸水浴中 10 min，
取出用流水冷却，以 520 nm 波长或绿色滤光片
比色，用空白管调零，读取测定管及标准管的吸
光光度值，按下列公式计算：
血清尿素氮（mmol/L）=测定管吸光度/标准
管吸光度×0.375×1000×0.2×0.1
泳后泳前差值即为血清尿素氮增量。
1.3.2 降低血液中胆固醇含量的试验
采血及饲喂方法：实验小鼠先按常规方法饲
喂一周，使适应环境，减少应激反应带来的不便
和实验误差。一周后对小鼠采取尾血分离血清，
4℃冰箱保存，用于测定饲喂样品前血清中总胆
固醇的含量。次日开始饲喂样品（饲喂剂量同
1.3.1），连续饲喂 10 d。试验第 11 d，再次采尾
3期 龚加顺，等：云南普洱茶特征成分的功能与毒理学评价

203
血分离血清，4℃冰箱保存，用于测定饲喂样品
后的血清中的总胆固醇的含量。
胆固醇测定方法：血清经无水乙醇处理，
蛋白质被沉淀，胆固醇及其酯则溶在无水乙醇
中，在乙醇提取液中加磷硫铁试剂（即浓硫酸
和三价铁溶液），胆固醇及其酯与试剂形成较稳
定的紫红色化合物，呈色程度与胆固醇及其酯含
量成正比，可用比色法（560 nm）定量测定。
1.4 普洱茶特征成分提取物的毒理学实验方法
1.4.1 小鼠经口急性毒性试验

实验动物：昆明种小白鼠; 性别和数量：20
只，雌雄各半；动物年龄：7周龄；动物体重：
18~22 g；实验环境和条件：室温 23±2℃，湿度
60±20%，自动通风，光照 14 h。饲料由第三军
医大学实验动物中心提供，自由摄食和饮用自来
水，饮水每日换一次；禁食时间：给药前禁食
12~16 h。
实验设计：依照我国卫生部颁发的《新
药审批办法》和《新药临床前研究指导原则
汇编》中有关规定。单次给药预试验结果如
表 1。

表 1 小鼠单次 ig.普洱茶特征成分提取物 LD50测定预试验
Table 1 Pre-test of extraction of characteristic components in Yunnan pu-erh tea
for mouse single intravenous administration i g.
预试验 Preliminary examination 剂量 Dose（g/kg） 动物数 Number 死亡数 Dead number 观察天数 Day
7.0 6 0 14
6.4 6 0 14
第一次
First
5.8 6 0 14
10.0 6 0 7
8.7 6 0 7
第二次
Second
7.6 6 0 7

剂量及分组：参考预实验结果，设立 10.0
g/kg体重 1个剂量组，共 20只小白鼠，雌雄各
半。
供试品给予途径及给药容量：灌胃，给药容
量为 0.5 ml/10 g体重。单次给药，药后立即观察、
记录动物的中毒反应、死亡情况及时间，连续观
察 14 d。
1.4.2 Ames试验
试剂：阳性对照组：直接诱变剂丝裂霉素 C
（mitomycin C, MMC）（0.5 µg/皿）、四硝基喹啉
-1-氧化物(4-nitroquinoline 1-oxide, 4-NQO)（0.5
µg/皿）和正定霉素（40 µg/皿）；间接诱变剂 2-
氨基芴（60 µg/皿）；均系 Sigma化学试剂公司产
品，4℃保存。
菌株：选用组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏
菌 TA97、TA98、TA100、TA102，由美国加州大学
Ames.BN教授惠赠。菌株保存方式：液氮冷冻保
存。菌株增菌培养：将细菌接种在肉汤培养基中，
在 37℃，空气振荡（100~120 r/min）条件下连续
培养约 10 h。
菌株遗传特性：TA97、TA98、TA100和 TA102
四株测试菌株除具有组氨酸合成缺失突变外，还
具有细胞壁脂多糖缺失突变和含有抗性 R因子，
前者可增加受试物渗透进入细胞的能力，而后者
使细菌产生氨基苄青霉素抗性并增加检测的敏
感性。另外，TA97、TA98和 TA100三菌株还具有
切除修复系统缺失突变（紫外线敏感），而 TA102
则具有四环素抗性因子。
大鼠 S9活化系统的制备：大鼠诱导采用苯
巴比妥酸和 β-奈黄酮联合诱导方法，雄性大鼠体
重 180~220 g，腹腔注射诱导剂，5 d后杀鼠制备
肝匀浆。肝匀浆的制备：将大鼠断头处死，75%
乙醇皮毛消毒，开腹取出肝脏称重，将肝组织剪
碎后，用 0.15 mol/L KCl溶液洗涤 4~5次。以每
茶 叶 科 学 27卷

204
克肝重加 3 ml 0.15 mol/L KCl溶液的比例将肝组
织放入匀浆器中制成匀浆，9000 g离心 10分钟，
取其上清夜（S9）分装塑料管（2 ml/管）。液氮
或-75℃冰箱冷冻保存。每毫升 S9混合液组成如
下：0.1 ml S9；8 µmol MgCl2；33 µmol KCl；5 µmol
G-6-P；4 µmol NADP；0.5 ml 磷酸缓冲溶液
（pH7.4）。S9混合液在临用前配制。
诱变性试验方法：诱变性实验采用平皿
掺入试验保温法。将 0.1 ml 供试品溶液或溶
媒、0.1 ml 增菌液和 0.5 ml 磷酸缓冲溶液
（pH7.4，0.2 mol/L）或 0.5 ml S9混合液加入
无菌试管（13×100 mm）内，37℃振荡培养
20 min，振荡频率约 120 r/min，然后向试管
中加入 2 ml 融化的顶层琼脂（顶层琼脂加入
前维持 45℃水浴中）。振荡混悬管中成分后，
铺至基础培养基平皿表面。待顶层琼脂凝固
后，将平皿倒置放入培养箱中，37℃培养约
48 h。每测试浓度在活化和非活化条件下各作
三个平皿，重复试验一次。最终结果取两次
试验结果的平均值。
分组：普洱茶特征成分提取物设 5 000、1
000、100、10 µg/皿和 1 µg/皿五个测试浓度。设
空白对照，S9对照及阳性诱变剂对照。直接诱变
剂为 0.5 µg/皿MMC、0.5 µg/皿 4-NQQ（TA97、
TA100），40 µg/皿正定霉素（TA98），间接诱变剂
2-氨基芴（60 µg/皿）。
菌落计数：显微镜下确定细菌背景菌苔
生长良好，与溶剂对照相比无明显稀疏的条
件下进行回变菌落计数，用自动菌落计数仪
计数。
结果观察与判断：采用沙门氏菌诱变性实验
预培养试验方法，在加 S9 活化和非活化两种条
件下进行试验。每测试点做三个平行样本，并重
复试验一次。实验设空白对照、S9对照及相应的
阳性对照。再确认细菌背景生长良好的条件下，
计数回变菌落数。如供试品引起的回变菌落数超
过对照组一倍以上，并有剂量反应关系时，判断
供试品诱变实验阳性，否则是阴性。
统计分析：对数据进行方差分析。
1.4.3 普洱茶特征成分提取物小鼠骨髓细胞
微核试验
小鼠实验系统：昆明种小白鼠；性别和数量：
雄性，每组 6只；年龄：40日龄；体重：19~22
g；小白鼠每笼 5只，室温 25±5℃，湿度 80±10%，
自动通风，光照 14 h。自由饮用自来水，每日换
一次。
试验设计：试验设计依据为初步急毒资料：
小鼠灌胃给药 LD50>10.00 g/kg。
试验分组：分纯水、5.0、1.0、0.5 g/kg 和
0.1 g/kg。每组动物数为 6 只。给药途径为 0.2
ml/10 g 体重。取材时间为最高剂量组给药后分
别于 12、24、36、48 h 和 72 h 取材，观察不同
时间点小鼠微核率是否有变化。然后确定取材时
间。同时设溶剂对照、阳性对照（环磷酰胺 CP 60
mg/kg）组，均为给药后 24 h取材观察。
标本制作：按实验要求进行取材、推片、固
定、染色。
镜检和计数：染色标本在油镜下，计数 1 000
个嗜多染红细胞中微核细胞数。然后将每组动物
的均值以千分率表示（‰）。
数据处理：每一个剂量组算出平均数
±SD，与阴性对照组进行比较， 用 t值检测进行
统计。

结果判定：小白鼠骨髓微核率正常值一
般在 4‰以下。试验结果出现阳性变化，并有
剂量反应关系，由此可以判定为阳性。若仅
有一剂量点出现阳性变化，可再次在此剂量
和时间点进行重复试验，如仍为阳性结果，
并具有统计学显著性差异，可确定为此受试
物为阳性。
微核粒（‰）=
含微核嗜多染红细胞数
观察的嗜多染红细胞数
3期 龚加顺，等：云南普洱茶特征成分的功能与毒理学评价

205
1.4.4 普洱茶特征成分提取物-CHL染色体
畸变试验
细胞：中国仓鼠肺细胞 CHL（Chinese
Hamster Lung Fibroblast, CHL），经鉴定细胞核型
稳定，无支原体污染。
细胞来源：卫生部药检所；保存方式：细胞
贮存液态氮中。
细胞培养条件：细胞培养用 RPMI-1640 培
养基，放入 37℃、5% CO2培养箱中培养。
制备，贮存在-86℃超低温冰箱中。采用苯
巴比妥钠和β-奈黄酮联合诱导方法
剂量：通过细胞毒性试验以及直线回归法计
算细胞存活率 50%细胞生长抑制浓度，IC50=5
000 µg/ml。
据表 2的结果，本试验选择 5 000、2 500、
1 250 µg/ml和 500 µg/ml四个剂量组。生理盐水
对照及 S9混合液 0.5 ml 分别为阴性对照；直接
诱变剂丝裂霉素 C（MMC）0.25 µg/ml及间接诱
变剂环磷酰胺（CP）20 µg/ml， 分别为阳性对
照。

表 2 普洱茶特征成分提取物剂量分组
Table 2 Dose group for extraction of characteristic components of Yunnan pu-erh tea
剂量 Dose（µg/ml） LG（剂量，dose) 细胞抑制率（%）Cell control rate
500 2.70 0.1
1 000 3.00 0.5
2 000 3.30 1.2
3 000 3.48 5.0
4 000 3.60 9.6
5 000 3.70 16.4

代谢活化：为弥补传代培养细胞没有代谢活
化系统，用苯巴比妥钠和β-奈黄酮联合诱导大
鼠肝微粒体酶进行体外代谢活化试验。
药物作用时间：在无代谢活化条件下，药物
与细胞作用 24 h 及 48 h 收获细胞。有代谢活化
条件下，药物、S9混合液与细胞作用 6 h，洗涤、
换液，于给药后 24 h及 48 h收获细胞。
标本制作时间：药物与细胞作用 24 h及 48 h
收获细胞，制作标本。
镜检：每一浓度在油镜下分析 100个中期分
裂相。分别记录染色体数目及结构畸变。
结果判定：参照《新药（西药）临床前研究
指导原则》。
2 结果与分析
2.1 普洱茶特征成分提取物的生理作用
2.1.1 抗疲劳
抗疲劳作用主要与人或动物体内蛋白质和
含氮化合物的分解、形成血清尿素氮的形成速度
有关。抗疲劳物质能有效地减少体内蛋白质和含
氮化合物的分解，降低血清尿素氮的形成，提高
肝糖原和肌糖原的贮备能力，从而提高机体的耐
力和速度。用小鼠作动物模型，抗疲劳物质还能
明显延长实验小鼠在水中游泳存活时间。本试验
通过测定实验小鼠血清尿素氮增量及实验小鼠
在水中游泳存活时间、来确定普洱茶特征成分提
取物和普洱茶水浸液的抗疲劳作用能力。图 1表
示游泳前后小鼠血清尿素氮含量的变化。
从图 1可以看出，普洱茶特征成分提取物组
小鼠泳前泳后的血清尿素氮增量最小，普洱茶水
提取物居中，对照组小鼠泳前泳后的血清尿素氮
增量最大。小鼠运动耐力（致死时间）测定结果
也表明，普洱茶特征成分提取物组小鼠游泳时间
持续 391.5±68.2 min（n=4），显著高于普洱茶水
提取物组小鼠（252±67.3 min，n=4）和对照组
小鼠（250.5±68.7 min，n=4）。抗疲劳试验结果
表明，由茶褐素、茶多糖和蛋白质组成的复合体
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206
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
普洱茶特征成分提取物
extraction of TB,TP
and Pro.from pu-erh
tea
普洱茶水提液 water
extract of pu-erh
tea
蒸馏水 distilled
water
血
清
尿
素
氮
含
量
(m
mo
l/
L)
co
nt
en
t o
f u
re
a
ni
tro
ge
n
in
b
lo
od
se
ru
m
游泳前 before swimming
游泳后 after swimming A
B
A
图 1 普洱茶特征成分提取物和水浸提液对老鼠抗疲劳的影响（P＞0.01）
Fig. 1 Effect of extraction of TB and TPS and Pro. of pu-erh tea and water extracts of pu-erh tea on the
content of urea nitrogen in blood serum of mouse before and after it swimming（P＞0.01）
注：TB为茶褐素，TPS为茶多糖，Pro为蛋白质。Note: TB= Theabrowine, TPS=Tea Polysaccharide, Pro.=Protein.
的抗疲劳效果较普洱茶水提取物的效果显著，而
普洱茶水提取物的抗疲劳效果在本试验中并不
显著。试验结果还表明，普洱茶抗疲劳作用并非
完全由咖啡碱所引起，而茶褐素、茶多糖以及茶
蛋白等组成的复合体同样具有抗疲劳作用。但具
体是何成分起作用，正在研究之中。
2.1.2 降胆固醇作用
许多流行病学研究均证明血清胆固醇水平
与冠心病发病率有联系，降脂药物均有副作用,
不利于长期使用，且中止服药后血脂迅速上升，
因此必须注意饮食治疗。本实验用比色法测定血
清胆固醇含量，计算实验动物饲喂样品前后的血
清胆固醇含量差值，而判断普洱茶特征成分提取
物和普洱茶水浸液的降胆固醇作用。试验结果见
图 2。
从图 2可知，饮用普洱茶特征成分提取物比
饮用普洱茶水提取液的降胆固醇效果更好，与对
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
普洱茶特征成分提取物
extraction of TB,TP
and Pro.from pu-erh
tea
普洱茶水提液 water
extract of pu-erh tea
蒸馏水 distilled water
血
清
胆
固
醇
含
量
（
mg
/1
00
mL
）
co
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m
饮用前 before drinking
饮用后 after drinking
a
ab
b
图 2 普洱茶特征成分提取物和水浸提液对老鼠血液中胆固醇含量的影响（P＞0.05）
Fig. 2 Effect of extraction of TB and TPS and Pro. of pu-erh tea and water extracts of pu-erh tea on the
content of cholesterol in the blood serum of mouse.
注：TB为茶褐素，TPS为茶多糖，Pro为蛋白质。Note: TB= Theabrowine, TPS=Tea Polysaccharide, Pro.=Protein.
3期 龚加顺，等：云南普洱茶特征成分的功能与毒理学评价

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照（蒸馏水）相比，达显著水平。由于茶褐素、
茶多糖在普洱茶发酵过程中均大幅度增加，这为
普洱茶奠定了良好的品质基础。
2.2 普洱茶特征成分提取物的毒理学评价
由于普洱茶特征成分提取物具有较好的保
健作用，为了更好地开发利用普洱茶特征成分，
我们评价了普洱茶特征成分提取物的毒理学。
2.2.1 小鼠经口急性毒性试验
普洱茶特征成分提取物的小鼠经口急性
毒性试验表明，小鼠无明显抑制性症状，如
活动减少、伏卧不动等。个别小鼠有严重中
毒症状。按照《新药临床前研究指导原则汇
编》之规定，本实验连续观察 14 d。小鼠单
次灌胃普洱茶特征成分提取物（20.0 g/kg）
后，死亡均发生在第一天，20 只小鼠中有 1
只死亡，第二天起小鼠活动自如，皮毛光滑，

未再出现死亡，存活动物体重无明显变化。
选用 1993 年 7 月卫生部药政司颁布的《新药
临床前研究指导原则汇编》中推荐的 Bliss
法，在微机上运行《药理学计算与程序》之
P33 计算 LD50及其 95%可信限：LD50为＞10
g/kg 体重。
2.2.2 Ames试验结果
鼠伤寒沙门氏菌诱变性实验是目前广泛应
用的致突变性试验方法，具有快速、灵敏的特点，
其结果对于评价供试品的遗传毒性具有重要价
值。普洱茶提取物在 S9 活化和非活化两种测试
条件下，1~5 000 µg/皿测试浓度范围内，诱发
TA97、TA98、TA100和 TA102产生的回变菌落
数与阴性对照组相比均无明显增加。上述结果表
明在 1~5 000 µg/皿测试浓度范围内，普洱茶提取
物对 TA97、TA98、TA100和 TA102四种测试菌
株均无致基因突变作用（见表 3）。
表 3 普洱茶特征成分提取物的 Ames 实验结果
Table 3 Ames test of extraction of characteristic components of Yunnan pu-erh tea
回变菌落数（个/皿±SD，n=6）(Number of relevant colonies) 浓度(µg/皿)
Concentration S9混合液 TA97 TA98 TA100 TA102
溶剂 Solvent - 107.0±7.17 28.3±5.28 100.3±5.57 296.2±13.79
0.0 - 108.0±4.89 27.5±3.94 101.5±8.53 299.5±11.18
1 - 112.5±6.75 25.67±4.63 108.83±8.13 298.33±11.04
10 - 116.3±8.29 27.3±6.06 106.7±9.00 299.8±9.37
100 - 114.2±7.76 26.7±7.03 107.3±8.94 306.2±18.95
1000 - 116.3±6.12 25.8±6.37 110.3±9.71 303.2±13.61
5000 - 124.3±8.31 27.0±5.55 108.3±11.76 341.5±15.31
四硝基喹啉-1-氧化物(0.5) - 1179.2±199* / 1078.3±83.88e /
正定霉素（40） - / 1034.375.38* / /
丝裂霉素 C（0.5） - / / / 1514.5±53.62 e
溶剂 Solvent + 106.5±6.41 29.8±4.36 107.8±8.84 272.5±8.55
0.0 + 107.2±6.55 28.0±4.36 110.5±7.66 261.2±6.55
1 + 115.17±7.57 28.8±5.27 115.83±7.14 307.17±12.98
10 + 116.33±11.22 27.33±5.28 112.0±5.33 306.83±10.82
100 + 119.8±6.46 31.7±4.89 113.7±7.2 308.8±12.22
1000 + 114.7±7.34 29.7±5.96 112.5±7.23 310.8±13.29
5000 + 121.8±9.33 29.5±7.15 117.7±13.41 309.0±12.39
2-AF（60.0） + 1483.0±61.19* 1610.2±62.13* 1418.3±40.57* 1483.5±38.40*
2-AF（60.0） - 132.2±10.50 32.3±5.35 124.0±8.20 282.3±9.83
注：*试验组回变菌落数超过阴性对照组一倍以上。4-NQQ、MMC、2-AF和正定霉素为阳性对照。
Note: *The number of relevant colonies of positive group was more than that of negative group. 4-NQQ, MMC, 2-AF and DNR were selected as the
positive group.


茶 叶 科 学 27卷

208
表 4 普洱茶特征成分提取物给药小鼠不同时间微核率（X±SD）
Table 4 The micronucleus rates of rats administered extraction of characteristic components of Yunnan pu-erh tea
剂量（mg/kg）
Dose
取样时间（h）
Gather sample time
动物数（只）
Number of mouse
微核细胞率（‰）
Micronucleus rates
24 4 2.00±0.71
12 4 1.25±0.43
溶剂对照
Control (solvent)
24 4 2.25±1.79
36 4 2.50±0.50
48 4 2.25±0.83
普洱茶提取物（5.0g/kg）
Extraction of characteristic
Components of Yunnan pu-erh tea 72 4 1.75±1.48
注：与溶剂对照组相比较，P<0.01。Note: *Compared with solvent group, P<0.01.

直接诱变剂MMC（0.5 µg/皿）、4-NQQ（0.5
µg/皿）和正定霉素（40 µg/皿）和间接诱变剂 2-
氨基芴（60 µg/皿），在相应试验条件下，诱发四
菌株产生的回变菌落数均超过阴性对照组两倍
以上，表明所用实验系统可靠。
2.2.3 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验
小鼠普洱茶特征成分提取物 5.0 g/kg灌胃给
药后 12、24、36、48 h 和 72 h，对骨髓嗜多染
红细胞的微核率无明显影响（见表 4）。根据上
述结果，选定取材时间为给药后 24 h。
普洱茶特征成分提取物 5.0、1.0、0.5 g/kg
和 0.1 g/kg四个剂量组给药后 24 h，对骨髓嗜多
染红细胞的微核率无明显影响（见表 5）。各组
微核率分别为 2.67±1.11‰、 2.00±1.15‰、
3.00±1.00‰和 2.17±1.34‰，与溶剂对照组
1.67±0.75‰相比较，P>0.05，无显著性差别。
而环磷酰胺（CP）阳性对照组微核率高达
30.0±2.0‰，与溶剂对照组相比较，经统计学检
测差异非常显著（P<0.01），表明本系统可靠。
说明在本实验条件下，普洱茶特征成分提取物
对昆明种小鼠无致骨髓细胞微核形成作用。
2.2.4 特征成分提取物-CHL染色体畸变试验
CHL 染色体畸变试验目前广泛应用的致突
变试验方法， 具有快速、 灵敏的特点， 其结
果对于评价样品的遗传毒性具有重要价值。在本
试验中，无论是 24 h 及 48 h 收获细胞进行染
色体畸变分析， 空白对照、 溶剂对照、 S9 混
合液对照染色体畸变率在正常范围 （见表 6），
在 S9 活化和非活化两种测试条件下，普洱茶
特征成分提取物在 500~5 000 µg/ml 浓度范
围内染色体畸变率也在正常范围， 因此， 在本
试验系统条件下，普洱茶特征成分提取物在
500~5 000 µg/ml 浓度范围内未见诱发 CH L
细胞染色体畸变率增高。直接诱变剂丝裂霉素 C

表 5 普洱茶特征成分提取物不同剂量给药小鼠微核率（ x ± sd）
Table 5 The micronucleus rates of mouse administered different dose of extraction of
characteristic components in Yunnan pu-erh tea

剂量（mg/kg）
Dose
动物数（只）
Number of mouse
微核细胞率（‰）
Micronucleus rates
溶剂 Solvent 对照 6 1.67±0.75
0.1 6 2.17±1.34
0.5 6 3.00±1.00
1.0 6 2.00±1.15
5.0 6 2.67±1.11
普洱茶特征成分提取物
Extraction of characteristic
components of Yunnan pu-erh tea
CP60 6 30.00±2.00*
注：*与溶剂对照组相比较，P<0.01。Note: * comparable with result of solvent，P<0.01.


3期 龚加顺，等：云南普洱茶特征成分的功能与毒理学评价

209
表 6 普洱茶特征成分提取物染色体畸变结果分析
Table 6 Effect of extraction of characteristic components in Yunnan pu-erh tea on the chromosome abnormality rates of
Chinese Hamster Lung Fibroblast (CHL)
染色体畸变
Abnormal chromosome
分组
Groups
浓度（mg/mL）
Concentration
S9混合
液
时间（h）
Time
细胞数（个）
Number of cells
b 提取物 f p r t o
畸变率（%）
Aberration rates
结果判定
Result
- - 24 100 1 1 - 空白对照组
Blank group - + 24 100 0 -
- - 24 100 1 1 - 溶剂对照组
Solvent - + 24 100 1 1 -
- 24 100 1 1 2 - 5.0
+ 24 100 0 -
- 24 100 1 1 - 2.5
+ 24 100 1 1 -
- 24 100 1 1 - 1.25
+ 24 100 1 1 -
- 24 100 1 1 - 0.5
+ 24 100 1 1 -
- 48 100 1 1 - 5.0
+ 48 100 1 1 2 -
- 48 100 0 - 2.5
+ 48 100 1 1 -
- 48 100 1 1 - 1.25
+ 48 100 1 1 2 -
- 48 100 1 1 -
普洱茶特征成分
提取物组
Extract of
characteristic
components of
pu-erh tea
0.5
+ 48 100 -
丝裂霉素 C
Mitomycin C
0.002 - 24 100 12 3 10 1 4 0 3 33 ++
环磷酰
Cyclophosphamide
0.02 + 24 100 16 7 9 5 6 1 8 52 +++
注：普洱茶特征成分提取物单体型间隙；b单体型断裂，t单体型易位，r环状染色体，f碎片或粉碎化，p多倍体，o其他。畸变率<5%：-，
>5%：±，>10%：+，>20%：++，>50%：+++。
Note: monosomyc-type clearance of TB；b-chromatid-type breaks，t-monosomy translocation，r-ring chromosome，f-chip，p-polyploid，o-others.
Aberrance rate <5%：-，>5%：±，>10%：+，>20%：++，>50%：+++.

（MMC，0.25 µg/ml）染色体畸变率显著增高。
间接诱变剂环磷酰胺（CP，20 µg普洱茶特征成
分提取物/ml）无 S9混合液时染色体畸变率在正
常范围，有 S9混合液时染色体畸变率显著增高，
表明本试验系统可靠。
3 结论
3.1 普洱茶特征成分提取物具有显著的抗
疲劳和降胆固醇的作用，且效果优于普洱茶水提
取液。
3.2 选用灌胃给药途径，普洱茶特征成分提
取物的 LD50＞10 g/kg体重（95%可信限），属实
际无毒级物质。
3.3 在本试验条件下，普洱茶特征成分提取
物在 1~5 000 µg/皿浓度范围内，有、无 S9活化
系统条件下对沙门氏菌 TA97、TA98、TA100和
TA102均无致基因突变性。
3.4 在本实验条件下，普洱茶提取物对昆明
种小鼠无致骨髓细胞微核形成作用。
3.5 在本试验系统条件下，普洱茶提取物在
500~5 000 µg/ml浓度范围内未见诱发 CHL细胞
染色体畸变率增高。

茶 叶 科 学 27卷

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参考文献：
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