全 文 ：［收稿日期］ 20120508(017)
［基金项目］ 大理市科技局科研基金资助项目(2008SF11)
［通讯作者］ * 杨月娥，高级实验师，从事生药学研究及资源开
发利用研究，Tel:0872-2257411，E-mail:dlyye@
126． com
HPLC-DAD同时测定鸡肉参中芦丁、
槲皮苷、槲皮素的含量
杨月娥* ，朱恩焕，胡文，袁云，马兴芬，刘德举
( 大理学院药学院，云南 大理 671000)
［摘要］ 目的:建立同时测定鸡肉参中芦丁、槲皮苷、槲皮素含量的 HPLC-DAD 方法。方法:采用 Diamonsil-C18色谱柱
(150 mm ×4. 6 mm，5. 0 μm) ，柱温 30 ℃，以甲醇(A)-0. 5%磷酸水溶液(B)为流动相，进行梯度洗脱(0 ～ 5 min，48% ～52%A;
6 ～ 10 min，70% ～30%A) ，检测波长 254 nm，流速 1. 0 mL·min －1。结果:3 种黄酮类成分在 10 min内达到良好分离，芦丁、槲皮
苷、槲皮素的线性范围分别为 0. 3 ～1. 0 mg(r =0. 999 8) ，0. 030 ～ 0. 10 mg(r = 0. 999 8) ，0. 010 ～ 0. 033 mg(r = 0. 999 5) ;平均加
样回收率分别为 100. 95%(RSD 0. 98%) ，99. 51%(RSD 1. 54%) ，102. 84%(RSD 3. 53%)。结论:该方法简便，快速，精确，可
同时测定鸡肉参中芦丁、槲皮苷、槲皮素的含量，具有较好的重复性和稳定性，可作为鸡肉参药材的质量控制方法。
［关键词］ HPLC;鸡肉参;芦丁;槲皮苷;槲皮素
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)05-0120-03
Simultaneous Determination of Rutin，Quercetin and Quercitroside
in Incarvillea mairei by HPLC-DAD
YANG Yue-e* ，ZHU En-huan，HU Wen，YUAN Yun，MA Xing-fen，LIU De-ju
(College of Pharmaceutical Science，Dali University，Dali 671000，China)
［Abstract］ Objective:To establish an HPLC-DAD method for simultaneous determination of rutin，
quercetin and quercitroside in Incarvillea mairei． Method:A Dikma Diamonsil C18 column (4. 6 mm × 150 mm，
5 μm)was used． The column temperature was set at 30 ℃;the investigated compounds were separated with
gradient mobile phase consisting of methanol (A)-0. 5% phosphoric acid (B) ;the flow rate was 1. 0 mL·min －1
and the detection wavelength was kept at 254 nm． Result:The good separation of three flavonoids was achieved
within 10 min． The linearity was achieved in the range of 0. 30-1. 0 mg (r = 0. 999 8)for rutin，0. 030-0. 10 mg
(r = 0. 999 8)for quercetin and 0. 010-0. 033 mg (r = 0. 999 5)for quercitrosid． The average recoveries were
100. 95% (RSD 0. 98%) ，99. 51% (RSD 1. 54%)and 102. 84% (RSD 3. 53%)respectively． Conclusion:
The method is simple，rapid and accurate，which can be able to detect rutin，quercetin and quercitroside
simultaneously，and can be used for quality control of I． mairei．
［Key words］ HPLC;Incarvillea mairei;rutin;quercetin;quercitroside
鸡肉参是白族民间常用药物之一，具有补血、调
经、健胃、生津等功效，常用于治疗胃病、黄疸、消化
不良、月经不调、久病体虚、头晕贫血等病症［1］。角
蒿属植物中主要化学成分为单萜生物碱、大环精胺
类生物碱、环烯醚萜苷类、黄酮类、神经酰胺类、甾醇
类和三萜类等［2-3］，其中黄酮类成分具有较好的神
经营养活性［4］。目前，有关鸡肉参中芦丁、槲皮苷、
槲皮素 3 种黄酮类成分含量的研究尚未见报道。笔
者在前期生药学研究及总三萜成分含量测定的基础
上［5-6］，建立了应用 HPLC-DAD 法同时测定鸡肉参
中 3 种黄酮类成分的方法，并对云南产的 3 个批次
的鸡肉参含量进行了分析。
·021·
第 19 卷第 5 期
2013 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 5
Mar．，2013
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2013.05.002
1 仪器与试药
Agilent-1100 型高效液相色谱仪，包括四元梯度
泵、高速自动进样器、柱温箱和紫外检测器，Agilent-
1100 工作站，Agilent-Chemistation 数据处理系统。
KQ5200DB型数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器
公司) ，F120 中药粉碎机(北京中兴伟业仪器有限公
司) ，AB104 型电子天平(上海天平仪器厂)。芦丁
(批号 100080-200707)、槲皮苷 (批号 111538-
200403)、槲皮素(批号 100081-200406)对照品均购
于中国药品生物制品检定所，磷酸、甲醇、乙醇分析
纯均产于北京化工厂，甲醇(Fisher，色谱纯) ，超纯
水。鸡肉参药材采于云南大理苍山花甸坝，经大理
学院生药学教研室杨月娥高级实验师鉴定为紫葳科
角蒿属滇川角蒿 Incarvillea mairei H． Léveillé
Grierson的根，药材自然干粉碎得样品。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Diamonsil-C18(4. 6 mm × 150 mm，
5. 0 μm)色谱柱，流动相甲醇(A)-0. 5%磷酸(B)系
统，梯度洗脱 (0 ～ 5 min，48% ～ 52% A;6 ～ 10
min，70% ～30%A)流速 1. 0 mL·min －1，检测波长
254 nm，柱温 30 ℃，进样量 5 μL。
2. 2 供试品溶液的制备 精密称取鸡肉参粉末
1. 5 g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇 40 mL，超声提取
45 min，过滤，滤渣加 10 mL 甲醇重复超声 1 次，过
滤，滤液合并，减压浓缩，放冷，移至 10 mL 量瓶中，
加甲醇定容至刻度，摇匀，取少量经微膜(0. 45 μm)
滤过作为供试品液，备用。
2. 3 混合对照品溶液的制备 分别精密称取芦丁、
槲皮苷、槲皮素对照品适量，用甲醇配制成浓度分别
为 1. 5，0. 15，0. 05 g·L －1的芦丁、槲皮苷和槲皮素对
照品混合溶液，备用。
2. 4 线性关系考察 分别精密量取对照品溶液
5. 0，4. 0，3. 5，3. 0，2. 5，2. 0，1. 5 mL 于 5 mL 量瓶中
加甲醇定容，摇匀，分别注入高效液相色谱仪，进样
量 5 μL，测定峰面积。其回归方程和线性范围分别
为芦丁 Y = 3 520X － 46. 774(r = 0. 999 8) ，0. 30 ～
1. 0 mg;槲皮苷 Y = 6 136. 3X － 17. 06(r = 0. 999 8) ，
0. 030 ～ 0. 10 mg;槲皮素 Y = 5 843. 7X + 0. 024 1
(r = 0. 999 5) ，0. 010 ～ 0. 033 mg。
2. 5 精密度试验 精密量取同一浓度对照品溶液，
在上述色谱条件下重复进样 6 次，计算芦丁、槲皮
苷、槲皮素色谱峰面积的 RSD，分别为 0. 43%，
0. 51%，0. 68%，表明仪器精密度良好。
2. 6 重复性试验 取同一批鸡肉参样品，按 2. 2 方
法平行制备 6 份供试品液，分别按 2. 1 项下色谱条
件进样测定，计算芦丁、槲皮苷、槲皮素含量的平均
值分别为 0. 563 6 mg·g －1，RSD 0. 79%;0. 051 23
mg·g －1，RSD 0. 68%;0. 015 49 mg· g －1，RSD
0. 64%，结果表明方法重复性良好。
2. 7 稳定性试验 取同一供试品液(样品批号 1)
分别在 2，4，8，12，24 h，在 2. 1 项条件下进样分析，
计算芦丁、槲皮苷和槲皮素峰面积的 RSD，分别为
0. 73%，0. 70%，0. 83%，结果表明供试品溶液在
24 h内稳定性良好。
2. 8 加样回收率试验 精密称取同一已知含量样
品粉末每份约 0. 5 g，共 6 份，精密加入混合对照品
溶液 1. 5 mL，按 2. 2 方法制备供试品液，分别按 2. 1
项色谱条件进样分析，计算加样回收率和 RSD。结
果见表 1。
表 1 鸡肉参中三种待测物加样回收率试验
成分
样品量
/ g
样品中
含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
RSD
/%
芦丁 0. 501 5 2. 924 0 2. 250 0 5. 197 0 101. 02 100. 95 0. 98
0. 500 7 2. 873 0 2. 250 0 5. 162 0 101. 73
0. 504 8 2. 958 0 2. 250 0 5. 191 0 99. 24
0. 501 1 2. 845 0 2. 250 0 5. 131 0 101. 60
0. 502 5 2. 890 0 2. 250 0 5. 148 0 100. 36
0. 501 7 2. 885 0 2. 250 0 5. 174 0 101. 73
槲皮苷 0. 501 5 0. 264 6 0. 225 0 0. 491 4 100. 80 99. 51 1. 54
0. 500 7 0. 260 0 0. 225 0 0. 481 1 98. 27
0. 504 8 0. 267 7 0. 225 0 0. 498 6 102. 62
0. 501 1 0. 257 4 0. 225 0 0. 477 4 97. 78
0. 502 5 0. 261 5 0. 225 0 0. 485 9 99. 73
0. 501 7 0. 265 8 0. 225 0 0. 486 0 97. 87
槲皮素 0. 501 5 0. 079 9 0. 075 0 0. 156 3 101. 87 102. 84 3. 53
0. 500 7 0. 078 5 0. 075 0 0. 155 9 103. 20
0. 504 8 0. 080 8 0. 075 0 0. 156 0 100. 27
0. 501 1 0. 077 7 0. 075 0 0. 158 1 107. 20
0. 502 5 0. 079 0 0. 075 0 0. 152 4 97. 87
0. 501 7 0. 078 4 0. 075 0 0. 158 4 106. 67
2. 9 样品含量测定 取不同的 3 批鸡肉参样品，分
别按 2. 2 项方法制备供试品液各 3 份，依本文 2. 1
项色谱条件，注入高效液相色谱仪，将所得峰面积代
入标准曲线，计算芦丁、槲皮苷和槲皮素的含量，结
果见表 2。
·121·
杨月娥，等:HPLC-DAD同时测定鸡肉参中芦丁、槲皮苷、槲皮素的含量
表 2 3 批鸡肉参中 3 种待测成分的含量(n = 3) mg·g － 1
批号 芦丁 槲皮苷 槲皮素
1 0. 565 8 0. 051 3 0. 015 4
2 0. 564 9 0. 051 1 0. 015 5
3 0. 565 6 0. 051 2 0. 015 6
2. 10 色谱行为 根据对照品及供试品溶液色谱图
(图 1)及有关文献报道，通过 DAD检测器结构解析
并与文献比对，进行了结构确证。
1. 芦丁;2. 槲皮苷;3. 槲皮素
图 1 混合对照品(A)和鸡肉参样品(B)HPLC-DAD
3 讨论
3. 1 提取方法确定 考察了 60%甲醇，70%甲醇，
100%甲醇，60%乙醇，70%乙醇，95%乙醇几种不同
提取溶剂，对鸡肉参中芦丁、槲皮苷、槲皮素提取率
的影响，结果发现纯甲醇提取效果最好且杂质较少，
这个结论与 2010 年版《中国药典》中的相应提取方
法一致［7］;对超声提取法和加热回流法的提取效果
进行了比较，发现回流提取法提取槲皮素、槲皮苷优
于超声提取，但提取物中杂质较多，超声提取芦丁优
于回流提取。超声提取操作简单，节省时间，易于平
行获取供试品液，故最终选择超声提取方法。
3. 2 流动相的选择 分别对甲醇-水，甲醇-磷
酸［8-9］，甲醇-乙腈-磷酸溶液［10］等多个流动相进行
了比较研究，流动相中加入磷酸溶液对改善峰形具
有明显的效果，但用乙腈和甲醇的分离效果相差不
大，故选择甲醇-0. 5%磷酸溶液作为流动相，混合对
照品和样品中 3 种黄酮成分均达到基线分离且吸收
率较高。
3. 3 检测波长的选择 利用 DAD 检测器在 200 ～
400 nm扫描对照品溶液的吸收光谱，兼顾 3 种黄酮
成分的较大吸收，选择 254 nm［11］和 355 nm 进行检
测。比较以上两个波长检测结果，发现 254 nm各成
分峰形好且有最大吸收，基线平稳，各色谱峰之间的
分离度较高，故选定 254 nm为检测波长。
芦丁、槲皮苷均为鸡肉参民间治疗胃病、消化不
良及骨折肿痛的有效成分，槲皮素为鸡肉参民间治
疗黄疸的有效成分，本实验同时测定芦丁、槲皮苷和
槲皮素三者含量的变化情况，可在鸡肉参药材质量
控制、扩大药用植物资源及临床应用方面提供科学
依据，有助于西南地区角蒿属植物的开发利用。
［参考文献］
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［责任编辑 顾雪竹］
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第 19 卷第 5 期
2013 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 5
Mar．，2013