全 文 ：表 5　 验证试验结果
指标 浸出物得率/%
灯盏乙素
/(mg/g)
延胡索乙素
/(mg/g)
黄芪甲苷
/(mg/g)
1 28.41 15.60 1.03 1.37
2 27.10 15.61 1.00 1.42
3 26.31 15.14 1.02 1.32
平均值 27.27 15.45 1.02 1.37
RSD 2.72 1.74 1.33 3.52
索乙素为代表的生物碱类及以黄芪甲苷为代表的皂苷类等
多种活性物质 ,具有增加脑 、冠脉血流量 , 缓减心肌缺血 , 扩
张心脑血管 , 改善微循环等功效 , 因此本文以浸出物得率 ,灯
盏乙素 、延胡索乙素和黄芪甲苷的含量这 4个指标 , 采用综
合评分法优选提取工艺。根据 4个指标成分在控制制剂质
量中的影响作用大小 , 设定其权重依次为 0.3, 0.3, 0.2, 0.2,
这样经过方差分析优选出的工艺条件更加合理。
3.2　样品干燥处理　在醇提浸膏干燥过程中 , 采用了微波
真空干燥技术。在实际操作中要注意控制微波的功率 、干燥
时间和温度 , 防止样品糊化。
3.3　样品测定　在进行灯盏乙素和延胡索乙素的含量测定
过程中 , 采用高效液相色谱法 , 通过梯度洗脱 , 可同时测定灯
盏乙素和延胡索乙素的样品含量 , 简化了含量测定操作 , 此
方法未见报道。其中 , 这两种有效成分的提取分别比较了甲
醇 、乙醇 、水 3种溶剂 , 结果发现 , 灯盏乙素和延胡索乙素在
甲醇中的溶解性较好 , 提取效率最高 , 因此选用甲醇为提取
溶剂。另比较了加热回流提取法和超声提取法 ,结果表明加
热回流法提取得到灯盏乙素和延胡索乙素的含量均低于超
声提取法 , 故选用超声提取法。 流动相的选择 , 根据文献报
道 [ 2, 3] , 选用了三种流动相进行比较 ,如:甲醇-0.01 mol/L磷
酸缓冲液 、乙腈-0.01mol/L磷酸缓冲液 、乙腈-0.01 mol/L磷
酸缓冲液(用三乙胺分别调至 pH6.2、pH4.5、pH3.8、pH3.0)
等 , 并选用不同梯度洗脱 , 经过与对照品的色谱图对比 , 选择
灯盏乙素和延胡索乙素都有良好分离度的最佳分离条件。
参考文献:
[ 1] 　中国药典 [ S] .一部.2005.
[ 2] 　李守拙 ,潘海峰.HPLC测定半枝莲中野黄芩苷的含量 [ J] .中
草药 , 2003, 34(2):183-185.
[ 3] 　杨书良,田　凤 ,孙　婷.HPLC法测定延胡索止痛滴丸中延胡
索乙素 [ J] .中草药 , 2006, 37(12):1810-1811.
月光花豆乙醇提取物的抗炎作用
唐秀能 1, 2 , 　黄仁彬 1＊ , 　张志伟 2 , 　黄纯真1 , 　王乃平 1
(1.广西医科大学药理学教研室 ,广西 南宁 530021;2.广西中医学院附属瑞康医院 ,广西 南宁 530011)
收稿日期:2009-01-19
作者简介:唐秀能(1971-),男 ,硕士 ,主管药师 ,主要从事生化药理学 、临床药理学研究。 Tel:(0771)2188067 E-mail:tangxiuneng@yahoo.
com.cn
＊通讯作者:黄仁彬 ,教授 ,博士生导师 ,研究方向:生化药理学。 Tel:0771-5339805E-mail:huangrenbin518@163.com
关键词:月光花豆乙醇提取物;抗炎;前列腺素 E2;肿瘤坏死因子-α;白介素-1
中图分类号:R285.6　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2009)11-1767-03
　　目前 , 抗炎镇痛作用的药物多为西药 , 且副作用多。月
光花(Calonyctionaculeatum)属于旋花科(Convolvulaceae)植
物 , 原产热带美洲 ,现广泛分布于全热带地区。在国内主要
分布广东 、广西 、云南等地 , 属一年生缠绕草本植物。月光花
豆是月光花的朔果 , 有舒筋活络 、消肿止痛 、活血化瘀之功
效 , 在广西民间用于腰腿痛 、风湿痛 、月经痛 、软组织损伤等
方面的治疗 , 有较好疗效。本实验对月光花豆乙醇提取物的
抗炎作用进行研究 , 为进一步开发利用月光花豆并把其开发
成为新药提供理论及实验依据。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　实验动物　健康♂性 Wister大鼠:体重(200±20)
g;昆明种小鼠:体重(20±2)g;SPF级 。广西医科大学医学
实验动物中心提供。实验动物生产许可证:SCXKG桂 2003-
0003, 实验动物使用许可证:SYXK桂 2003-0005。
1.1.2　药物及试剂　月光花豆乙醇取提物 , 广西医科大学
药理教研室提供 ,批号:20080118(月光花豆乙醇提取物的制
备:月光花豆适量粗粉碎 ,加 10倍量 70%乙醇 , 浸泡 12 h后
回流提取 2 h, 待冷却后过滤 ,留第一次滤液;取第一次药渣
加 8倍量 70%乙醇 ,回流提取 2 h,待冷却后过滤 ,留第二次
滤液。取第二次药渣加 8倍量 70%乙醇 , 回流提取 2h,待冷
却过滤。合并三次滤液 ,于水浴冷却装置回收乙醇。收集提
取液并进行减压浓缩 , 得到浓缩物后 , 再分别配成所需的相
应浓度的月光花豆乙醇提取物)。冰醋酸:成都市科龙化工
试剂厂 , 批号:20070101;地塞米松磷酸钠注射液(1 mL∶5
mg),天津药业集团新郑股份有限公司 ,批号 061012;伊文斯
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兰:中国医药上海化学试剂公司 , 批号:F20030714;角叉菜
胶:福建食品有限公司 , 批号:20030910;二甲苯 ,天津市化学
试剂三厂 , 批号:040511。 甲醇:成都市科龙化工试剂厂 ,
AR;氢氧化钾:天津化学试剂三厂 , AR;盐酸:广东省廉江市
爱廉化试剂有限公司;肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β
(IL-1β)试剂盒均由晶美生物工程有限公司提供;SOD试剂
盒 、MDA试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。
1.2　实验方法
1.2.1　小鼠二甲苯致耳廓肿胀实验 [ 1] 　♂性小鼠 , (20±
2)g, 随机分为 5组 , 12只 /组 , 给药组灌胃给予(ig)月光花
豆乙醇提物 , 分别相当于 5.0 g生药 /kg、 2.50 g生药 /kg、
1.25 g生药 /kg, 阳性组灌胃地塞米松 0.005 g/kg, 空白对照
组给予等体积的蒸馏水 ,连续给药 5 d。末次给药后 1 h, 于
小鼠右耳正反面均匀涂抹二甲苯 30 μL/只 , 1 h后脱颈椎处
死 , 用 8mm打孔器在左右相同的部位打下耳片 ,精确称重 ,
计算肿胀度(mg)及肿胀抑制率(%)。
肿胀度(mg)=右耳耳片重(mg)-左耳耳片重(mg)
抑制率 =(空白组平均肿胀度 -给药组平均肿胀度)/空白
组平均肿胀度 ×100%
1.2.2　角叉菜胶致小鼠足趾肿胀的影响 [ 2]　动物分组及给
药方法同 1.2.1项。末次给药后 1 h, 在每鼠右侧足趾皮下
注射 1%角叉菜胶 0.05 mL, 4 h后沿踝关节剪下左右两足 ,
称重 , 计算肿胀度及肿胀抑制率。
肿胀度(mg)=右足重量(mg)-左足重量(mg)
抑制率 =(空白组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/空白组
平均肿胀度 ×100%
1.2.3　角叉菜胶对大鼠足趾肿胀的影响 [ 3] 　♂性大鼠 ,
(200±20)g,随机分为 5组 , 每组 10只。高剂量组 、中剂量
组 、低剂量组灌胃给予月光花豆乙醇提物 , 分别相当于 3.50
g生药 /kg、 1.75 g生药 /kg、0.875 g生药 /kg。空白对照组给
予同体积的蒸馏水 ,阳性组给予 0.003 g/kg地塞米松。每天
给药 1次 , 连续 5d。末次给药 1 h后于每只大鼠右后足皮
下注射 1%角叉菜胶 0.1 mL, 并于注射后 60 min、 120 min、
180min测量左右踝关节圆周 , 随后拔眼球取血备用 ,并沿踝
关节切下致炎足和正常足 , 电子天平称重 ,计算肿胀度和抑
制率(计算公式同上)。
1.2.4　醋酸致小鼠腹膜通透性增高实验 [ 4] 　动物分组及给
药方法同 1.2.1项。末次给药 1 h,尾静脉注射(iv)0.5%伊
文斯兰生理盐水溶液 0.1 mL/10 g,随即腹腔注射 0.6%冰醋
酸 0.2 mL, 20 min后将小鼠脱颈椎处死 , 剪开腹部皮肤 , 用 6
mL生理盐水(NS)分数次洗涤腹腔 ,吸出洗涤液 , 加 NS合并
至 10 mL, 3 000 r/min离心 , 取上清液于 590 mn波长处 , 测
吸光度(OD值)。
1.2.5　对小鼠棉球肉芽肿的影响 [ 5] 　♂性小鼠 , (20 ±2)
g,在乙醚浅麻醉无菌条件下 ,右腋下埋入已称重灭菌棉球(5
mg/个)一个 , 缝合皮肤 , 消毒。 术后随机分为 5组 , 每组 12
只并开始给药 ,每天 1次 , 连续 7d,于第 8天处死动物 , 取棉
球于 70 ℃烘干 2 h, 精确称重 , 减去棉球原重量即为肉芽肿
重量。
1.2.6　对角叉菜胶致小鼠肿胀足 PGE2 、MDA含量及 SOD
活性的影响　取实验 1.2.3项小鼠致炎足及正常鼠右足 ,称
重后按 10%浓度浸于生理盐水中 ,剪碎 ,浸泡 2 h后 , 离心浸
泡液 ,取上清液 。离心浸泡液 ,取上清液 200 μL,加 0.5mol/
l氢氧化钾-甲醇液 2 mL, 在 50 ℃水浴异构化 20 min后 , 用
甲醇稀释至 4 mL, 于紫外分光光度计波长 278 nm处测定其
吸光度(OD)值 , 代表 PGE2 的生成量 [ 6] ;另取上清液 , 按
MDA及 SOD检测试剂盒中的操作方法测定 MDA含量及
SOD活性。
1.2.7　对角叉菜胶致足趾肿胀大鼠血清 TNF-α、IL-1β 含量
的影响　取实验 1.2.3项大鼠眼球血 , 进行血清分离后 ,按
试剂盒说明 ,分别用酶联免疫法测定大鼠血清 TNF-α、IL-1β
的含量。
1.3　统计学处理
实验数据以均数 ±标准差(x±s)表示 , 使用 SPSS13.0
统计学软件进行方差分析 , 并作组间比较。
2　结果
2.1　月光花豆乙醇提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀 、角叉
菜胶致小鼠足趾肿胀的影响
见表 1。
表 1　 月光花豆乙醇提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀 、角叉菜胶致小鼠足趾肿胀的影响(x±s, n=12)
组别 剂量 /(g生药 /kg) 耳廓肿胀度 /mg 耳廓抑制率 /% 足趾肿胀度 /mg 足趾抑制率 /%
空白对照组 - 8.88±1.72 37.40±10.56
地塞米松组 0.005g 6.13±2.17＊ 31.0 27.78±8.51＊ 25.72
月光花豆醇提物 5.0 6.00±2.13＊＊ 32.4 26.88±9.17＊ 28.13
月光花豆醇提物 2.5 7.38±1.68 16.9 30.60±7.26 18.18
月光花豆醇提物 1.25 7.86±2.47 11.5 31.30±11.65 16.31
　　与空白对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01。
2.2　月光花豆乙醇提取物对小鼠腹膜血管通透性增高及小
鼠棉球肉芽肿重量的影响　见表 2。
2.3　月光花豆乙醇提取物对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的影
响　见表 3。
2.4　对角叉菜胶致小鼠肿胀足 PGE2 、MDA含量及 SOD活
性的影响　见表 4。
2.5　对角叉菜胶致足趾肿胀大鼠血清 TNF-α、IL-1含量的
影响　见表 5。
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表 2　 月光花豆乙醇提取物对小鼠腹膜血管通透性增高及小鼠棉球肉芽肿重量的影响(x±s, n=12)
组别 剂量 /(g生药 /kg) OD值 OD抑制率 /% 棉球肉芽肿重量 /mg 肉芽肿抑制率 /%
空白对照组 - 0.267±0.045 9.58±2.14
地塞米松组 0.005g 0.170±0.018＊＊ 36.3 7.34±2.13＊ 23.38
月光花豆醇提物 5.0 0.178±0.018＊＊ 33.3 5.49±2.19＊＊ 42.69
月光花豆醇提物 2.5 0.179±0.032＊＊ 33.3 6.52±2.65＊＊ 31.94
月光花豆醇提物 1.25 0.245±0.063 8.23 6.86±2.17＊ 28.39
　　与空白对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01。
表 3　 月光花豆乙醇提取物对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的影响(x±s, n=10)
组别 剂量/(生药 /kg)
足趾踝关节圆周肿胀度 /mm
1h 2h 3h
足趾肿胀度
/mg
足趾抑制率
/%
空白对照组 - 3.45±0.86 4.45±0.86 3.25±0.82 42.46±8.77 -
地塞米松组 0.003g 1.85±0.52＊＊ 1.35±0.75＊＊ 1.30±0.54＊＊ 15.36±5.23＊＊ 79.35
高剂量组 3.50g 2.10±0.94＊＊ 2.45±0.50＊＊ 2.15±0.75＊＊ 25.22±6.36＊＊ 40.80
中剂量组 1.75g 2.55±0.44＊＊ 2.95±0.50＊＊ 2.34±0.68＊＊ 26.86±5.50＊＊ 36.74
低剂量组 0.875g 2.80±0.53＊ 3.55±0.52＊ 2.75±0.54＊ 32.02±6.95＊ 24.59
　　与空白对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01。
表 4　 对角叉菜胶致小鼠肿胀足 PGE2、MDA含量及 SOD活性的影响(x±s, n=12)
组别 剂量 /(g生药 /kg) PGE2(OD) MDA/(nmol/mL) SOD/(U/mL)
空白对照组 - 0.229±0.045 17.60±1.28 198.40±32.03
地塞米松组 0.005g 0.172±0.024＊＊ 16.05±1.37＊ 242.27±37.12＊
月光花豆醇提物 5.0 0.181±0.021＊＊ 13.32±1.79＊＊ 269.09±28.05＊＊
月光花豆醇提物 2.5 0.191±0.011＊＊ 14.17±2.22＊＊ 243.90±29.76＊
月光花豆醇提物 1.25 0.197±0.011＊ 15.57±1.53＊ 230.25±23.83＊
　　注:与空白对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01。
表 5　对角叉菜胶致足趾肿胀大鼠血清 TNF-α、IL-1
含量的影响(x±s, n=10)
组别 剂量 /(g生药 /kg)
动物数
/n
TNF-α
/(ng/mL)
IL-1β
/(ng/mL)
空白对照组 - 10 0.42±0.07 0.67±0.10
地塞米松对照组 0.003g 10 0.31±0.06＊＊ 0.46±0.50＊＊
月光花豆醇提物 5.0 10 0.27±0.07＊＊ 0.43±0.08＊＊
月光花豆醇提物 2.5 10 0.34±0.06＊ 0.54±0.07＊
月光花豆醇提物 1.25 10 0.39±0.06 0.63±0.08
　　注:与空白对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01。
3　讨论
炎症是具有血管系统的活体组织对损伤因子所发生的
以防御为主的反应。在炎症的早期 , 炎症介质刺激血管 , 血
管扩张 , 内皮间隙扩大 ,血管壁通透性增强 , 血浆蛋白渗出到
组织间隙 , 随着渗出的增加 , 造成组织肿胀。在炎症晚期和
慢性炎症期 , 由于巨噬细胞和纤维母细胞等的增生 ,形成肉
芽组织。我们用二甲苯 、冰醋酸 、角叉菜胶和棉球作为致炎
因子观察月光花豆乙醇提取物对实验性渗出 、肿胀和增生的
影响。实验结果表明 , 月光花豆乙醇提取物能减轻二甲苯致
小鼠耳廓水肿反应 , 降低醋酸诱发小鼠腹腔毛细血管通透性
的增高 , 抑制角叉菜胶致大 、小鼠足肿胀的程度及棉球致小
鼠肉芽组织的增生 , 显示出良好的抗炎作用。
本实验结果表明月光花豆乙醇提取物尚能降低小鼠炎
足中炎性渗出液 PGE2、MDA含量 ,恢复其 SOD活力 , 对抗炎
症时细胞因子 TNF-α、IL-1β 的大量产生 , 提示其抗炎作用可
能通过抑制 COX途径 , 进而阻断炎性介质 PGs的合成与释
放 , 并通过降低机体细胞受自由基攻击程度 , 减少细胞损伤 ,
从而降低炎症反应程度 ,达到抗炎的效果。细胞因子之间的
作用是复杂的网络结构 ,还有许多细胞因子在炎症中发挥重
要的作用 , 如 IL-2, IL-13, IL-10, IL-19等都在炎症发生发展过
程中发挥或拮抗或促进的作用 ,月光花豆乙醇提取物对这些
因子是否有影响 ,还有待进一步的研究。
参考文献:
[ 1] 　徐叔云 , 卞如镰 , 陈　修.药理实验方法学 [ M] .北京:人民
卫生出版社, 1991, 719.
[ 2] 　JamesB, PerianayagamSK, SharmaKK.etal.Anti-inflammato-
ryactivityofTrichodesrnaindicumrootextractinexperimentalani-
mals[ J].JEthnopharmacol, 2002, 104:410-414.
[ 3] 　陈　奇.中药药理研究方法学 [ M] .北京:人民卫生出版社 ,
1993:305.
[ 4] 　华伦荣 , 刘仕昌 , 王建华 , 等.东方病毒清胶囊解热抗炎作用
的研究 [ J] .中药新药与临床药理 , 1994, 5(3):26-28.
[ 5] 　崔祝梅 , 杨　锋.前列腺片对前列腺增生及抗炎镇痛作用的
实验研究 [ J] .中成药 , 1994, 5(14):38.
[ 6] 　陈　奇.中药药理研究方法学 [ M].北京:人民卫生出版社 ,
1993, 370-371.
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