全 文 ：鲜竹沥 (Bamboo Succus) 为禾本科植物粉绿竹 phyl-
lostachys glauca Me Clure 等刚竹属 phyllostachys 竹子的
鲜杆加工制得的中药，具有清热化痰的功效 [1]。 用于治疗
痰热咳喘 ,痰稠难咯 ,小儿痰热惊风 ,四肢抽搐；现代用于
乙型脑炎,流行性脑膜炎之高热、呕吐；痰热咳喘，中风口
噤 [2]。 文献报道竹沥的真伪鉴别和质量控制大多采用传统
经验法和简单理化方法 [3-4]，也有应用气相色谱法测定鲜
竹沥中的愈创木酚含量 [5]。 竹沥所含化学成分复杂，主要
含有氨基酸类、酚类、无机元素以及有机酸类成分，而且
因品种、产地、收集季节不同，其所含成分及其含量、药理
作用等有所差异， 仅以单一指标评价不能全面反映竹沥
的内在质量， 色谱指纹图谱是揭示中药内在物质概貌的
〔收稿日期〕2008－12－24
〔基金项目〕湖南省科技厅科技基金资助项目（06SK3072）。
〔作者简介〕周孟辉（1983-），女，2006 级硕士研究生，主要从事中药制剂工艺与质量标准研究。
〔通讯作者〕* 蒋孟良，教授，硕士研究生导师，E-mail：hhjml@163.com。
不同采收期水竹所制竹沥的
HPLC指纹图谱研究
周孟辉，李 红，蒋晓煌，蒋孟良 *
（湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 410208）
〔摘要〕 目的 建立竹沥的 HPLC 指纹图谱研究方法。 方法 采用 RP-HPLC 法，Dikma DiamonsilTMC18柱(250
mm×4.6 mm，5 μm)，乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,检测波长为 254 nm，流速为 1.0 mL/min。 对 10 个不同采收
期水竹制备成的竹沥检测，并进行相似度计算。 结果 建立了具有 29 个共有峰的竹沥指纹图谱；不同采收期水竹
制备成的竹沥质量存在指纹特征的差异。 结论 该方法准确、重复性好，为竹沥的质量控制提供了理论依据。
〔关键词〕 竹沥；水竹；高效液相色谱；指纹图谱
〔中图分类号〕R284.1 〔文献标识码〕A 〔文章编号〕1674－070X（2009）03－0033－04
HPLC fingerprints of bamboo juice from Phyllostachys
heteroclada Oliver in different picking periods
ZHOU Meng-hui， LI Hong， JIANG Xiao-huang， JIANG Meng-liang
（TCM University of Hunan, Changsha, Hunan 410007, China）
〔Abstract〕 Objective To establish a method for fingerprint analysis of bamboo juice with
HPLC. Methods RP-HPLC method was used, with Dikma Diamonsil TMC18 column (250 mm×
4.6 mm，5 m), gradient elution of acetonitrile and phosphoric acid (0.1％ ), the UV detection
wavelength of 254 nm and flow rate of 1.0 mL ／min． The bamboo juice from 10 batches of
Phyllostachys heteroclada Oliver collecting in different picking seasons were analyzed, and the
similarity degree was calculated. Results The HPLC-FPC of bamboo juice was set up with 29
common peaks; There existed certain fingerprints differences of bamboo juice quality in different
periods. Conclusion This method is accurate and repeatable, can provide a scientific basis for
the quality control of bamboo juice.
〔Key words〕 bamboo juice； Phyllostachys heteroclada Oliver; HPLC； fingerprints
2009 年 6 月第 29 卷第 3 期
June． 2009 Vol． 29 No． 3
湖 南 中 医 药 大 学 学 报
Journal of TCM Univ． of Hunan 33
重要手段。 本文采用 HPLC 法对不同采收时期水竹制备
的竹沥进行指纹图谱的研究， 为竹沥的质量控制提供了
有效的方法。
1 实验材料
1.1 仪器
Waters 高效液相色谱仪 ， 包括 Waters1525 泵，Wa-
ters2410 检测器 （Refractive Index Detecter），Breeze 工作
站；SHB-III 循环水式多用真空泵 （郑州长城科工贸有限
公司）；AR1140 电子分析天平 （奥豪斯国际贸易有限公
司）；RE-52C 旋转蒸发器（巩义市英峪予华仪器厂）；KDM
型调温电热套（山东鄄城华鲁电热仪器有限公司）。
1.2 试药
乙腈为色谱纯， 其他试剂均为分析纯； 水为重蒸馏
水。 实验中所用样品来源见表 1。 经湖南中医药大学药学
院生药教研室周日宝教授鉴定， 均为禾本科刚竹属植物
水竹（Phyllostachys heteroclada Oliver.）的新鲜杆茎。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱 ：Dikma DiamonsilTMC18 柱 (250 mm×4.6 mm，
5 μm)；流动相：乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B）,梯度洗脱
程序为 0~15 min，2%~6%A；15~20 min，6%~12%A；20~35
min，12%~15%A；35~50 min，15%A；50~80 min，15%~40%
A；检测波长：254 nm；柱温:30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样
量：10 μL。
2.2 竹沥液的制备
称取水竹粉末 50 g，加 9 倍量水浸泡 1 h 后，武火煮
沸，沸后用文火煮 40 min，滤过，滤渣加 7 倍量水，武火
煮沸，沸后用文火煮 30 min，滤过，合并滤液，减压浓缩
（70 ℃水温）,定容至 100 mL 量瓶中，即得。
2.3 供试品溶液的制备
精密量取竹沥液 20 mL，放置冰箱 24 h，取出滤过，
滤液加水定容于 25 mL量瓶中， 取 10 mL， 离心 15 min
（转速 4 000 r/min），上清液过 0.45 μm 微孔滤膜，取续滤
液即得。
2.4 方法学考察
2.4.1 精密度实验 取供试品溶液（样品 1），连续进样 6
次， 测定高效液相色谱图，6 次进样各共有峰相对保留时
间的 RSD 在 0.2%～1.6%范围内， 相对峰面积的 RSD 在
1.1%～4.0%范围内，表明仪器精密度良好。
2.4.2 稳定性实验 取供试品溶液（样品 1），分别在 0、2、
4、6、8、12 h 进样，测定高效液相色谱图。 6次进样各共有
峰相对保留时间及相对峰面积的 RSD 分别为 0.2%～1.6%
与 1.1%～4.0%，表明供试品溶液在 12 h 内基本稳定。
2.4.3 重复性实验 取水竹粉末 50 g 6 份，按“2.2”项下
方法制备竹沥、再按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别
进样，测定高效液相色谱图，各共有峰相对保留时间及相
对峰面积的 RSD 分别为 0.2%～1.5%与 1.5%～4.8%， 表明
此分析方法的重复性较好。
2.5 数据分析
2.5.1 共有峰的确定 根据 10 批样品测定结果， 各批样
品指纹图谱色谱峰均在 80 min 内全部出完， 得出 29 个
共有峰， 10 批样品的重叠图见图 1。 色谱图以 1 号样品
为例，见图 2，其中 20 号峰（tR=45.86 min），峰面积较大、
且较稳定。 根据《中药注射剂色谱指纹图谱实验研究技术
指南(试行)》，选择 20 号峰作为参照峰，计算各峰的相对
保留时间(tR)和相对峰面积（si）。共有峰相对保留时间基本
符合《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行) 》中的
要求，RSD 值均低于 3.0%，见表 2。 但共有峰的峰面积及
相对峰面积相差较大， 表明竹沥所含成分及各成分的量
随采集时间的不同而有变化。
2.5.2 相似度计算 利用 Excel2003 软件对竹沥 HPLC
指纹图谱进行相关系数和夹角余弦计算。 本实验以 29 个
共有峰的峰面积进行相似度计算，结果见表 3。
3 讨论
3.1 色谱条件的选择
分别在 200、210、220、254、275、285 nm处检测，结果表
明：在 254 nm检测，峰数较多，基线较平稳，故选择 254 nm
作为指纹图谱的检测波长。 流动相条件优化过程中比较
了甲醇-水、甲醇-0.1%磷酸水、乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸
水， 结果表明乙腈-0.1%磷酸水系统的分离效果最佳，与
文献[6]报道一致。
3.2 竹沥液的制备
曾先对乙醇回流提取法、烧制法、蒸馏水回流提取法
制备的竹沥进行了考察，从峰数目和总峰面积来看，烧制
法均较少， 蒸馏水回流提取法和乙醇回流提取法相差不
表 1 样品来源
样品编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
采收时间
2007.12.4
2007.12.4
2008.1.6（小寒）
2008.1.6(小寒)
2008.2.4（立春）
2008.2.9
2008.4.4（清明）
2008.7.22（大暑）
2008.8.7（立秋）
2008.9.7（白露）
产地
长沙含浦
长沙植物园
长沙植物园
长沙含浦
长沙含浦
长沙植物园
长沙含浦
长沙含浦
长沙含浦
长沙含浦
湖南中医药大学学报 2009 年第 29 卷34
图 1 10 批竹沥指纹图谱重叠图
t/min
表 2 各批供试品共有峰的相对保留时间与相对峰面积实验结果
峰号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
t
0.161
0.174
0.193
0.206
0.225
0.238
0.255
0.347
0.361
0.461
0.479
0.522
0.613
0.701
0.750
0.781
0.807
0.903
0.963
1.000
1.067
1.307
1.365
1.392
1.518
1.538
1.558
1.617
1.682
RSD(%)
0.9
1.3
1.3
1.5
1.3
1.6
1.0
1.3
1.1
0.8
0.5
0.8
1.1
1.1
0.7
1.0
0.8
1.0
0.9
0.0
0.3
0.6
0.2
0.4
0.7
0.7
0.7
0.9
0.7
0.323 0.107 0.257 0.142 0.371 0.214 0.571 0.104 0.232 0.104
0.429 0.354 0.352 0.050 0.093 0.071 0.559 0.046 0.533 0.358
0.082 0.059 0.040 0.073 0.045 0.031 0.045 0.122 0.224 0.058
0.111 0.072 0.096 0.077 0.581 0.229 0.078 0.254 0.060 0.111
0.471 0.411 0.393 0.093 0.097 0.053 0.527 0.032 0.131 0.302
0.094 0.093 0.095 0.063 0.338 0.056 0.273 0.037 0.111 0.091
0.202 0.212 0.106 0.190 0.498 0.557 0.322 0.067 0.326 0.103
0.413 0.349 0.360 0.389 0.225 0.149 0.170 0.021 0.116 0.473
0.074 0.085 0.084 0.064 0.087 0.061 0.111 0.044 0.018 0.085
0.072 0.084 0.089 0.170 0.054 0.215 0.189 0.016 0.184 0.036
0.148 0.027 0.141 0.047 0.124 0.210 0.236 0.014 0.142 0.227
0.092 0.058 0.041 0.096 0.097 0.071 0.146 0.012 0.011 0.012
0.177 0.210 0.230 0.313 0.314 0.183 0.211 0.278 0.272 0.232
0.058 0.068 0.072 0.121 0.138 0.048 0.067 0.045 0.026 0.052
0.585 0.658 0.582 0.725 0.324 0.625 0.608 0.981 0.558 0.712
0.123 0.028 0.145 0.115 0.114 0.105 0.025 0.083 0.020 0.040
0.050 0.047 0.052 0.048 0.127 0.079 0.035 0.037 0.021 0.039
0.994 1.055 1.202 0.957 1.718 1.308 0.298 0.142 0.637 0.616
0.301 0.297 0.336 0.382 0.224 0.442 0.023 0.191 0.131 0.084
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
0.061 0.070 0.049 0.031 0.064 0.657 0.098 0.024 0.107 0.014
0.206 0.135 0.294 0.179 0.236 0.048 0.093 0.100 0.164 0.212
0.316 0.332 0.222 0.279 0.241 0.058 0.045 0.119 0.049 0.193
0.098 0.107 0.097 0.098 0.110 0.198 0.041 0.135 0.052 0.011
0.078 0.074 0.067 0.034 0.557 0.037 0.017 0.056 0.073 0.139
0.135 0.111 0.104 0.056 0.521 0.072 0.108 0.126 0.029 0.119
0.067 0.080 0.042 0.111 0.147 0.138 0.142 0.040 0.014 0.025
0.080 0.079 0.105 0.091 0.048 0.038 0.044 0.064 0.056 0.022
0.058 0.061 0.040 0.026 0.091 0.057 0.019 0.054 0.026 0.037
s
0.243
0.285
0.078
0.167
0.251
0.125
0.258
0.267
0.071
0.111
0.132
0.064
0.242
0.070
0.636
0.080
0.054
0.893
0.241
1.000
0.118
0.167
0.185
0.095
0.113
0.138
0.081
0.063
0.047
RSD(%)
61.3
71.0
74.0
95.9
75.5
79.0
64.4
56.3
36.5
64.7
61.3
71.2
20.6
49.7
25.8
59.1
55.8
53.5
55.8
0
163.3
44.6
59.8
55.0
140.8
100.4
63.1
41.3
46.2
Si
周孟辉，等 不同采收期水竹所制竹沥的 HPLC 指纹图谱研究第 3 期 35
表 3 10 批竹沥的指纹图谱相似度
图 2 竹沥样品 HPLC 色谱图
t/min
大，但前者具有操作简单、安全、成本低廉等优点。 因此本
实验采用蒸馏水回流提取法制备竹沥液。
3.3 供试品溶液的制备
曾对乙醚萃取法、醇沉法进行考察，乙醚萃取法出峰
数少，而醇沉法使某些成分含量降低。 为了尽量保留竹沥
中各物质的实际存在状态，保证信息的完整性，本实验对
样品进行了简单处理，使其出峰较多，给出的信息充分。
3.4 参照峰的选择
图 2中 21 号峰（tR=49.06 min）为愈创木酚，其峰相对
其它峰太小，不适合做参照峰，而以特征图谱中出峰时间
稳定、 面积较大的共有峰——20 号峰为参照峰建立特征
共有峰群。 尽管目前尚不能确定该参照峰为何种化学成
分，但以此建立的特征峰群特征性强、稳定性好，可用于
竹沥的鉴别与质量评价。
3.5 相似性评价
通过计算可以看出不同采收期水竹制备成竹沥的相
似度有所不同，虽然共有峰较多，但各共有峰的丰度不尽
相同， 表现出各样品的差异。 从表 3 可以看出 12、1、8、9
月的水竹制备成竹沥相似度比较高， 而 2、4、7 月的相似
度低， 说明不同采收期水竹制备的竹沥所含成分在组成
和比例上有不同程度的变化， 大体可认为秋冬采收的水
竹制备的竹沥为一类，春夏为另一类。 这似乎与文献报道
烧制鲜竹沥的时间，一年之中，以秋、冬季为好相一致 [7]。
参考文献：
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（11）：20.
样品编号
1
2
3
4
5
相关系数
0.964
0.974
0.965
0.955
0.792
夹角余弦
0.981
0.984
0.980
0.972
0.884
样品编号
6
7
8
9
10
相关系数
0.861
0.723
0.731
0.907
0.920
夹角余弦
0.917
0.850
0.812
0.945
0.953
（本文编辑 徐爱良）
湖南中医药大学学报 2009 年第 29 卷36