全 文 ：西北农业学报 ２０１６，２５（３）：４１３－４２２
Ａｃｔａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅ Ｂｏｒｅａｌｉ－ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ Ｓｉｎｉｃａ ｄｏｉ：１０．７６０６／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４－１３８９．２０１６．０３．０１３
网络出版日期：２０１６－０３－０６
网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／６１．１２２０．Ｓ．２０１６０３０６．１６１１．０２６．ｈｔｍｌ
青藏高原蕨麻种质资源遗传多样性ＰＯＤ同工酶分析
收稿日期：２０１５－０４－０８ 修回日期：２０１５－０６－２４
基金项目：科技部农业科技成果转化基金（２０１０ＧＢ２Ｇ００５１４）；国家自然科学基金（３０６０７０２６，３０６６００１９）；青海省自然科学基金
（２０１２－Ｚ－９０７）。
第一作者：刘贺贺，男，在读硕士，研究方向为药用植物资源开发与利用。Ｅ－ｍａｉｌ：５１６０９８３８４＠ｑｑ．ｃｏｍ
通信作者：李军乔，女，博士，教授，研究方向为植物资源开发与利用。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｊｑｌｉｌｙ２００２＠１２６．ｃｏｍ
刘贺贺１，２，蒋红霞１，２，富 贵１，２，白世俊１，２，包锦渊１，２，韦梅琴３，李军乔１，２
（１．青海民族大学 化学化工学院，西宁 ８１０００７；２．青海省生物技术与分析测试重点实验室，
西宁 ８１０００７；３．青海大学 农牧学院，西宁 ８１００１６）
摘 要 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析７５份蕨麻过氧化物同工酶，结果与形态学标记、细胞水平、分子
标记研究的结果一致，显示蕨麻的遗传多样性丰富。证实蕨麻具有丰富遗传变异，为合理保护与科学利用蕨
麻资源提供科学依据。检测显示，蕨麻叶片过氧化物同工酶电泳共出现１４条酶带；酶带多态位点百分率为
１００％；ＮＴＳＹＳｐｃ ２．１软件计算的遗传相似系数为０．２１４～１．０００，平均值为０．６８１；以遗传相似系数为基础，
采用非加权类平均法进行聚类分析，在相似系数为０．６７时分为２大类，第１类为蕨麻，第２类为鹅绒委陵菜。
蕨麻种质资源遗传多样性及遗传变异均较丰富。说明，蕨麻丰富的遗传多样性是在青藏高原复杂的地理环境
中长期进化的结果。
关键词 蕨麻；遗传多样性；过氧化物同工酶；聚丙烯酰胺凝胶电泳；相似系数；多态位点百分率
中图分类号 Ｑ８１４．９ 文献标志码 Ａ 文章编号 １００４－１３８９（２０１６）０３－０４１３－１０
蕨麻（Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ ａｎｓｅｒｉｎａ）属蔷薇科委陵菜
属（Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ），是鹅绒委陵菜（Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ ａｎｓｅｒｉ－
ｎａ Ｌ．）的变种，以叶为锯齿状奇数羽状复叶，匍匐
茎，单生小花，多年生草本植物为特征，因叶片被
有白色绒毛而得名，生河岸、路边、山坡草地及草
甸，海拔５００～４ １００ｍ，在甘肃、青海、西藏高寒
地区，根部膨大，含丰富淀粉［１］。蕨麻是药食兼用
的保健品，能够提高机体免疫能力，具有抗氧化、
抗衰老、抗疲劳、抗菌、抗病毒、抗真菌、抑制肿瘤、
保肝护肝、降低血脂及胆固醇等功效［２］。传统形
态学分类上，块根膨大的为蕨麻，块根不膨大的为
鹅绒委陵菜。
种质资源是遗传育种的物质基础，对种质资
源遗传多样性和亲缘关系的正确评价是合理利用
种质资源的前提。遗传多样性是确保物种延续和
不断进化的关键，开展蕨麻遗传多样性研究，对蕨
麻品种扩大遗传基础和选育新品种均有重要作
用。２０１０年开始，蕨麻研究中心利用形态学标
记、细胞学研究和分子标记的方法研究蕨麻种质
资源的遗传多样性，表明蕨麻不仅具有丰富的遗
传多样性，而且蕨麻的遗传变异较高。通常情况
下，植物的表现型与基因型一致，３种方法分析显
示大部分的蕨麻材料同样符合这一规律，少数蕨
麻材料存在不一致的情况，为证实差异的存在，笔
者应用生理生化标记的方法研究蕨麻种质资源的
遗传多样性。
同工酶的酶谱同等位基因之间有明确的对应
关系，因此成为一种十分有效的遗传多样性的检
测标记［３－４］。同工酶分析技术从蛋白质水平反映
物种的遗传差异，且材料来源丰富、实验技术简
单、结果易于比较，是一种十分有效的遗传标
记［５］。丁玲等［６－７］、沈镝等［８］和易刚强等［９］采用同
工酶的方法分析了菊花、芋和栀子的遗传多样性，
得到理想的结果。本试验采用聚丙烯酰胺凝胶电
泳技术，分析７５份蕨麻种质资源进行过氧化物同
工酶（ＰＯＤ）酶谱差异研究，从蛋白质水平上对遗
传多样性进行分析，以期进一步证实蕨麻种质资
源的遗传多样性及复杂的遗传变异，为合理保护
与科学利用蕨麻资源提供科学依据。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
蕨麻分布广泛，生长区域地理气候条件差别
较大，很难同时采集到不同地区同一个生长期内
的野生蕨麻，课题组为了规避这一问题，从２００８
年开始逐步采集中国各地区的蕨麻进行移栽，目
前已在青海省互助县、湟源县分别建立了２个蕨
麻种质资源圃，共有种质资源１２８份。有些地区
的蕨麻种质资源刚刚成活或植株仅有１～２株，故
选择有一定区域代表性且生长旺盛的７５份种质
资源进行同工酶测定。选取的７５份蕨麻种质资
源材料详见表１。
取幼苗期生长健壮的健康完整植株，剪取幼
嫩叶片１．０～２．０ｇ，使用蒸馏水简单冲洗叶片上
的泥土和其他杂物，放入冰盒内低温保存。采集
当天带回实验室，放入４℃冰箱内遮光保存，３ｄ
内完成同工酶的提取。
表１ 供试蕨麻种质材料
Ｔａｂｌｅ １ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｏｆ Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ ａｎｓｅｒｉｎａ
序号
Ｎｏ．
样品编号
Ｓａｍｐｌｅ ｎｕｍｂｅｒ
地 点
Ｌｏｃａｔｉｏｎ
海拔／ｍ
Ａｌｔｉｔｕｄｅ
经 度
Ｌｏｎｇｉｔｕｄｅ
纬 度
Ｌａｔｉｔｕｄｅ
块根是否膨大
Ｓｗｏｌｅｎ ｒｈｉｚｏｍｅ
ｏｒ ｎｏｔ
１ 林芝－４１ Ｌｉｎｚｈｉ－４１ 西藏林芝地区 Ｌｉｎｚｈｉ Ｔｉｂｅｔ ３ ６９１ ９１°１６．０９４′Ｅ ２９°３９．１５５′Ｎ 是 Ｙｅｓ
２ 林芝－４２ Ｌｉｎｚｈｉ－４２ 西藏林芝地区 Ｌｉｎｚｈｉ Ｔｉｂｅｔ ３ ６９１ ９１°１６．０９４′Ｅ ２９°３９．１５５′Ｎ 是 Ｙｅｓ
３ 林芝－４４ Ｌｌｉｎｚｈｉ－４４ 西藏林芝地区 Ｌｉｎｚｈｉ Ｔｉｂｅｔ ３ ８３２ ９１°４５．１１８′Ｅ ２９°４９．２５４′Ｎ 是 Ｙｅｓ
４ 林芝－５７ Ｌｉｎｚｈｉ－５７ 西藏林芝地区 Ｌｉｎｚｈｉ Ｔｉｂｅｔ ３ １０８ ９４°２６．１８４′Ｅ ２９°３７．４１５′Ｎ 是 Ｙｅｓ
５ 日喀则－２４ Ｒｉｋａｚｅ－２４ 西藏日喀则地区 Ｒｉｋａｚｅ Ｔｉｂｅｔ ３ ７３９ ９０°１７．１９１′Ｅ ２９°１９．４８０′Ｎ 是 Ｙｅｓ
６ 日喀则－３１ Ｒｉｋａｚｅ－３１ 西藏日喀则地区 Ｒｉｋａｚｅ Ｔｉｂｅｔ ３ ７９０ ８９°３２．０３５′Ｅ ２９°２０．１３４′Ｎ 是 Ｙｅｓ
７ 日喀则－３２ Ｒｉｋａｚｅ－３２ 西藏日喀则地区 Ｒｉｋａｚｅ Ｔｉｂｅｔ ３ ７８８ ８９°２７．３８２′Ｅ ２９°１９．２８０′Ｎ 是 Ｙｅｓ
８ 日喀则－３４ Ｒｉｋａｚｅ－３４ 西藏日喀则地区 Ｒｉｋａｚｅ Ｔｉｂｅｔ ３ ８５５ ８８°５１．４３６′Ｅ ２９°１５．０２４′Ｎ 是 Ｙｅｓ
９ 那曲－０１ Ｎａｑｕ－０１ 西藏那曲地区 Ｎａｑｕ Ｔｉｂｅｔ ４ ６２９ ９１°４０．４７８′Ｅ ３２°１１．２１６′Ｎ 是 Ｙｅｓ
１０ 那曲－０２ Ｎａｑｕ－０２ 西藏那曲地区 Ｎａｑｕ Ｔｉｂｅｔ ４ ５０２ ９２°０１．４０６′Ｅ ３１°２７．４１５′Ｎ 是 Ｙｅｓ
１１ 那曲－０５ Ｎａｑｕ－０５ 西藏那曲地区 Ｎａｑｕ Ｔｉｂｅｔ ４ ６３０ ９１°５２．０７６′Ｅ ３１°１８．５２４′Ｎ 是 Ｙｅｓ
１２ 那曲－０６ Ｎａｑｕ－０６ 西藏那曲地区 Ｎａｑｕ Ｔｉｂｅｔ ４ ６３０ ９１°５２．０７６′Ｅ ３１°１８．５２４′Ｎ 是 Ｙｅｓ
１３ 那曲－０７ Ｎａｑｕ－０７ 西藏那曲地区 Ｎａｑｕ Ｔｉｂｅｔ ４ ６３９ ９１°３６．１９０′Ｅ ３０°４６．５０４′Ｎ 是 Ｙｅｓ
１４ 那曲－１７ Ｎａｑｕ－１７ 西藏那曲地区 Ｎａｑｕ Ｔｉｂｅｔ ３ ６９７ ９０°５４．５４８′Ｅ ２９°４０．４３７′Ｎ 是 Ｙｅｓ
１５ 那曲－１８ Ｎａｑｕ－１８ 西藏那曲地区 Ｎａｑｕ Ｔｉｂｅｔ ３ ６９７ ９０°５４．５４８′Ｅ ２９°４０．４３７′Ｎ 是 Ｙｅｓ
１６ 合作－０１ Ｈｅｚｕｏ－０１ 甘肃甘南 Ｇａｎｎａｎ Ｇａｎｓｕ ２ ９９９ １０２°５５．１５５′Ｅ ３４°５５．８３６′Ｎ 是 Ｙｅｓ
１７ 合作－０５ Ｈｅｚｕｏ－０５ 甘肃甘南 Ｇａｎｎａｎ Ｇａｎｓｕ ２ ９９４ １０３°０５．０４７′Ｅ ３４°４５．１９１′Ｎ 是 Ｙｅｓ
１８ 合作－０７ Ｈｅｚｕｏ－０７ 甘肃甘南 Ｇａｎｎａｎ Ｇａｎｓｕ ３ ０１７ １０３°１２．４３０′Ｅ ３４°４７．６６３′Ｎ 是 Ｙｅｓ
１９ 碌曲－０１ Ｌｕｑｕ－０１ 甘肃甘南 Ｇａｎｎａｎ Ｇａｎｓｕ ３ ０９１ １０２°５１．３３５′Ｅ ３４°５４．１１７′Ｎ 是 Ｙｅｓ
２０ 碌曲－０３ Ｌｕｑｕ－０３ 甘肃甘南 Ｇａｎｎａｎ Ｇａｎｓｕ ３ ００９ １０２°４２．４０２′Ｅ ３４°４８．８０４′Ｎ 是 Ｙｅｓ
２１ 碌曲－０５ Ｌｕｑｕ－０５ 甘肃甘南 Ｇａｎｎａｎ Ｇａｎｓｕ ３ ２３８ １０２°２６．９２１′Ｅ ３４°３３．７４７′Ｎ 是 Ｙｅｓ
２２ 碌曲－０６ Ｌｕｑｕ－０６ 甘肃甘南 Ｇａｎｎａｎ Ｇａｎｓｕ ３ ４６８ １０２°１７．７３８′Ｅ ３４°２４．７９５′Ｎ 是 Ｙｅｓ
２３ 兰 州 Ｌａｎｚｈｏｕ 甘肃兰州 Ｌａｎｚｈｏｕ Ｇａｎｓｕ １ ６４４ １０３°１５．０９２′Ｅ ３６°１０．００５′Ｎ 否 Ｎｏ
２４ 临潭－０１ Ｌｉｎｔａｎ－０１ 甘肃甘南 Ｇａｎｎａｎ Ｇａｎｓｕ ２ ８８８ １０３°２３．７５７′Ｅ ３４°４０．１２２′Ｎ 否 Ｎｏ
２５ 临潭－灰叶 Ｌｉｎｔａｎ－Ｇｒｅｙｌｅａｆ 甘肃甘南 Ｇａｎｎａｎ Ｇａｎｓｕ ２ ８８８ １０３°２３．７５７′Ｅ ３４°４０．１２２′Ｎ 否 Ｎｏ
２６ 夏河－０１ Ｘｉａｈｅ－０１ 甘肃甘南 Ｇａｎｎａｎ Ｇａｎｓｕ ３ ０２９ １０２°２９．９７９′Ｅ ３５°２０．３７８′Ｎ 否 Ｎｏ
２７ 夏河－０２ Ｘｉａｈｅ－０２ 甘肃甘南 Ｇａｎｎａｎ Ｇａｎｓｕ ２ ５８０ １０２°４６．６７２′Ｅ ３５°１２．９８１′Ｎ 否 Ｎｏ
２８ 玛曲－０２ Ｍａｑｕ－０２ 甘肃甘南 Ｇａｎｎａｎ Ｇａｎｓｕ ３ ６６８ １０２°１１．５９０′Ｅ ３４°０７．１０３′Ｎ 是 Ｙｅｓ
２９ 白玉－０１ Ｂａｉｙｕ－０１ 青海果洛州 Ｇｕｏｌｕｏ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ７９６ １００°４１．０７０′Ｅ ３３°１７．２３９′Ｎ 是 Ｙｅｓ
３０ 白玉－０２ Ｂａｉｙｕ－０２ 青海果洛州 Ｇｕｏｌｕｏ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ９８６ １００°５０．６９０′Ｅ ３３°１４．９７５′Ｎ 是 Ｙｅｓ
３１ 大武－０１ Ｄａｗｕ－０１ 青海果洛州 Ｇｕｏｌｕｏ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ６６６ １００°３３．３７９′Ｅ ３４°３３．３４６′Ｎ 是 Ｙｅｓ
３２ 大武－０３ Ｄａｗｕ－０３ 青海果洛州 Ｇｕｏｌｕｏ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ９８０ １００°１６．７２８′Ｅ ３４°１８．５５２′Ｎ 是 Ｙｅｓ
３３ 大武－０４ Ｄａｗｕ－０４ 青海果洛州 Ｇｕｏｌｕｏ Ｑｉｎｇｈａｉ ４ １７９ １００°１２．７２５′Ｅ ３４°１１．６６３′Ｎ 是 Ｙｅｓ
３４ 大武－０５ Ｄａｗｕ－０５ 青海果洛州 Ｇｕｏｌｕｏ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ７５７ １００°１７．３１８′Ｅ ３３°２６．８９９′Ｎ 是 Ｙｅｓ
３５ 门源－０１ Ｍｅｎｙｕａｎ－０１ 青海海北州 Ｈａｉｂｅｉ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ４９０ １０１°２４．３２２′Ｅ ３７°２２．３６５′Ｎ 否 Ｎｏ
３６ 海西－６１ Ｈａｉｘｉ－６１ 青海海西州 Ｈａｉｘｉ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ０４０ ９７°４７．５２２′Ｅ ３６°０１．４０２′Ｎ 否 Ｎｏ
３７ 班玛－０１ Ｂａｎｍａ－０１ 青海果洛州 Ｇｕｏｌｕｏ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ９９８ １００°２６．１８３′Ｅ ３３°１７．３１７′Ｎ 是 Ｙｅｓ
３８ 拉鸡山－０２ Ｌａｊｉｓｈａｎ－０２ 青海海南州 Ｈａｉｎａｎ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ８２１ １０１°２６．６０３′Ｅ ３６°２１．４２８′Ｎ 是 Ｙｅｓ
３９ 刚察－０２ Ｇａｎｇｃｈａ－０２ 青海海北州 Ｈａｉｂｅｉ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ３８０ １００°３８．２５０′Ｅ ３７°０７．１８１′Ｎ 否 Ｎｏ
·４１４· 西 北 农 业 学 报 ２５卷
（续表１ Ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ ｔａｂｌｅ １）
序号
Ｎｏ．
样品编号
Ｓａｍｐｌｅ ｎｕｍｂｅｒ
地 点
Ｌｏｃａｔｉｏｎ
海 拔／ｍ
Ａｌｔｉｔｕｄｅ
经 度
Ｌｏｎｇｉｔｕｄｅ
纬 度
Ｌａｔｉｔｕｄｅ
块根是否膨大
Ｓｗｏｌｅｎ ｒｈｉｚｏｍｅ
ｏｒ ｎｏｔ
４０ 化隆－０２ Ｈｕａｌｏｎｇ－０２ 青海海东 Ｈａｉｄｏｎｇ Ｑｉｎｇｈａｉ ２ ６２１ １０２°１７．２９５′Ｅ ３６°０２．４８７′Ｎ 否 Ｎｏ
４１ 兴海－０１ Ｘｉｎｇｈａｉ－０１ 青海海南州 Ｈａｉｎａｎ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ４４６ ９９°５５．８８３′Ｅ ３５°３９．９９８′Ｎ 否 Ｎｏ
４２ 兴海－０２ Ｘｉｎｇｈａｉ－０２ 青海海南州 Ｈａｉｎａｎ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ４５３ ９９°５５．９０８′Ｅ ３５°３９．９７０′Ｎ 是 Ｙｅｓ
４３ 贵德－０２ Ｇｕｉｄｅ－０２ 青海海南州 Ｈａｉｎａｎ Ｑｉｎｇｈａｉ ２ ７９５ １０１°１９．５８８′Ｅ ３５°５１．０４０′Ｎ 否 Ｎｏ
４４ 贵南－０１ Ｇｕｉｎａｎ－０１ 青海海南州 Ｈａｉｎａｎ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ３５９ １０１°０５．５９９′Ｅ ３５°３０．０９１′Ｎ 是 Ｙｅｓ
４５ 河南－０３ Ｈｅｎａｎ－０３ 青海黄南州 Ｈｕａｎｇｎａｎ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ５６６ １０１°４２．７１９′Ｅ ３４°４２．８７６′Ｎ 是 Ｙｅｓ
４６ 河南－０４ Ｈｅｎａｎ－０４ 青海黄南州 Ｈｕａｎｇｎａｎ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ６２５ １０１°４７．０９７′Ｅ ３４°３７．７６０′Ｎ 是 Ｙｅｓ
４７ 久治－０１ Ｊｉｕｚｈｉ－０１ 青海果洛州 Ｇｕｏｌｕｏ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ９８３ １０１°０５．６６３′Ｅ ３３°２５．８５２′Ｎ 是 Ｙｅｓ
４８ 久治－０２ Ｊｉｕｚｈｉ－０２ 青海果洛州 Ｇｕｏｌｕｏ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ８６９ １０１°１８．０５４′Ｅ ３３°２３．３４２′Ｎ 是 Ｙｅｓ
４９ 久治－０３ Ｊｉｕｚｈｉ－０３ 青海果洛州 Ｇｕｏｌｕｏ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ６３１ １０１°２８．３２１′Ｅ ３３°２５．５０８′Ｎ 是 Ｙｅｓ
５０ 平安－０２ Ｐｉｎｇ｀ａｎ－０２ 青海海东 Ｈａｉｄｏｎｇ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ２６６ １０１°２０．５２８′Ｅ ３７°３７．５２２′Ｎ 否 Ｎｏ
５１ 湟源－０１ Ｈｕａｎｇｙｕａｎ－０１ 青海海北州 Ｈａｉｂｅｉ Ｑｉｎｇｈａｉ ２ ９２７ １０１°０１．５７０′Ｅ ３６°５１．３９９′Ｎ 否 Ｎｏ
５２ 湟源－０２ Ｈｕａｎｇｙｕａｎ－０２ 青海海北州 Ｈａｉｂｅｉ Ｑｉｎｇｈａｉ ２ ９１５ １０１°１１．１６５′Ｅ ３６°３２．５０３′Ｎ 否 Ｎｏ
５３ 祁连－灰叶 Ｑｉｌｉａｎ－Ｇｒｅｙｌｅａｆ 青海海北州 Ｈａｉｂｅｉ Ｑｉｎｇｈａｉ ２ ９２８ １００°２３．００６′Ｅ ３８°０４．２９６′Ｎ 否 Ｎｏ
５４ 祁连－０４ Ｑｉｌｉａｎ－０４ 青海海北州 Ｈａｉｂｅｉ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ６３４ １００°１３．３５９′Ｅ ３８°０３．００５′Ｎ 是 Ｙｅｓ
５５ 循化－０１ Ｘｕｎｈｕａ－０１ 青海海东 Ｈａｉｄｏｎｇ Ｑｉｎｇｈａｉ ２ ６３９ １０２°１８．５３５′Ｅ ３５°４４．６３８′Ｎ 否 Ｎｏ
５６ 循化－０２ Ｘｕｎｈｕａ－０２ 青海海东 Ｈａｉｄｏｎｇ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ２５５ １０２°１４．５０７′Ｅ ３５°４２．０３８′Ｎ 否 Ｎｏ
５７ 循化－０３ Ｘｕｎｈｕａ－０３ 青海海东 Ｈａｉｄｏｎｇ Ｑｉｎｇｈａｉ ２ ５２７ １０２°０７．１２１′Ｅ ３５°３６．３１１′Ｎ 否 Ｎｏ
５８ 循化－０４ Ｘｕｎｈｕａ－０４ 青海海东 Ｈａｉｄｏｎｇ Ｑｉｎｇｈａｉ ２ ７６０ １０２°１０．４４２′Ｅ ３５°３３．６４３′Ｎ 否 Ｎｏ
５９ 玉树－０１ Ｙｕｓｈｕ－０１ 青海玉树州 Ｙｕｓｈｕ Ｑｉｎｇｈａｉ ４ ２２５ ９６°３４．６３９′Ｅ ３３°１２．０８７′Ｎ 是 Ｙｅｓ
６０ 玉树－０２ Ｙｕｓｈｕ－０２ 青海玉树州 Ｙｕｓｈｕ Ｑｉｎｇｈａｉ ４ ４４４ ９６°４２．７１６′Ｅ ３３°０７．１２５′Ｎ 是 Ｙｅｓ
６１ 玉树－１３ Ｙｕｓｈｕ－０３ 青海玉树州 Ｙｕｓｈｕ Ｑｉｎｇｈａｉ ４ ２１１ ９６°４５．５２８′Ｅ ３２°５３．０８３′Ｎ 否 Ｎｏ
６２ 玉树－１８ Ｙｕｓｈｕ－１８ 青海玉树州 Ｙｕｓｈｕ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ７７８ ９７°０４．８１６′Ｅ ３３°２２．２４３′Ｎ 是 Ｙｅｓ
６３ 玉树－２０ Ｙｕｓｈｕ－２０ 青海玉树州 Ｙｕｓｈｕ Ｑｉｎｇｈａｉ ４ ４６１ ９７°１３．７８５′Ｅ ３３°２０．７６０′Ｎ 是 Ｙｅｓ
６４ 黄南－０３ Ｈｕａｎｇｎａｎ－０３ 青海黄南州 Ｈｕａｎｇｎａｎ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ８２１ １０１°２６．６０３′Ｅ ３６°２１．４２８′Ｎ 是 Ｙｅｓ
６５ 黄南－０４ Ｈｕａｎｇｎａｎ－０４ 青海黄南州 Ｈｕａｎｇｎａｎ Ｑｉｎｇｈａｉ ２ ９０９ １０１°３３．０７８′Ｅ ３６°１６．３７１′Ｎ 否 Ｎｏ
６６ 黄南－０５ Ｈｕａｎｇｎａｎ－０５ 青海黄南州 Ｈｕａｎｇｎａｎ Ｑｉｎｇｈａｉ ２ ７９５ １０１°１９．５８８′Ｅ ３５°５１．０４０′Ｎ 否 Ｎｏ
６７ 黄南－０６ Ｈｕａｎｇｎａｎ－０６ 青海黄南州 Ｈｕａｎｇｎａｎ Ｑｉｎｇｈａｉ ２ ７９５ １０１°１９．５８８′Ｅ ３５°５１．０４０′Ｎ 否 Ｎｏ
６８ 黄南－０７ Ｈｕａｎｇｎａｎ－０７ 青海黄南州 Ｈｕａｎｇｎａｎ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ３５９ １０１°０５．５９９′Ｅ ３５°３０．０９１′Ｎ 是 Ｙｅｓ
６９ 黄南－０８ Ｈｕａｎｇｎａｎ－０８ 青海黄南州 Ｈｕａｎｇｎａｎ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ２９２ １００°５９．６４７′Ｅ ３５°３０．５２９′Ｎ 是 Ｙｅｓ
７０ 黄南－０９ Ｈｕａｎｇｎａｎ－０９ 青海黄南州 Ｈｕａｎｇｎａｎ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ２９０ １００°４４．７７３′Ｅ ３５°１４．５９０′Ｎ 是 Ｙｅｓ
７１ 黄南－１０ Ｈｕａｎｇｎａｎ－１０ 青海黄南州 Ｈｕａｎｇｎａｎ Ｑｉｎｇｈａｉ ３ ３７１ １００°５２．１０５′Ｅ ３５°１２．９５１′Ｎ 否 Ｎｏ
７２ 甘德－０１ Ｇａｎｄｅ－０１ 青海果洛州 Ｇｕｏｌｕｏ Ｑｉｎｇｈａｉ ４ ２２５ １００°０５．０５３′Ｅ ３４°０３．４３６′Ｎ 是 Ｙｅｓ
７３ 甘德－０２ Ｇａｎｄｅ－０２ 青海果洛州 Ｇｕｏｌｕｏ Ｑｉｎｇｈａｉ ４ ０４５ ９９°５３．０８５′Ｅ ３４°５７．４６３′Ｎ 是 Ｙｅｓ
７４ 达日－０２ Ｄａｒｉ－０２ 青海果洛州 Ｇｕｏｌｕｏ Ｑｉｎｇｈａｉ ４ ０２８ ９９°４８．１１６′Ｅ ３３°３７．５３５′Ｎ 是 Ｙｅｓ
７５ 大通－０２ Ｄａｔｏｎｇ－０２ 青海海北州 Ｈａｉｂｅｉ Ｑｉｎｇｈａｉ ２ ８９８ １０１°２７．３６８′Ｅ ３７°１４．４３２′Ｎ 否 Ｎｏ
１．２ 试验方法
１．２．１ 酶液的制备 称蕨麻叶片１．０ｇ，蒸馏水
冲洗３次，滤纸吸干后剪碎。放入４℃预冷的研
钵中，加入２ｍＬ ０．１ｍｏｌ／Ｌ 的 Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ
８．９）的酶液提取液，冰浴下研磨至匀浆。低温提
取１ｈ，转移至离心管中离心，４ ℃下１０ ０００
ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ。取上清液，加等体积质量分
数为４０％的蔗糖溶液，混匀后置４℃ 冰箱保存，
备用。
１．２．２ 凝胶制备 采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶
电泳，胶板厚度为１．５ｍｍ。分离胶质量浓度７０
ｇ／Ｌ，凝胶母液［６］（表２）按 Ａ∶Ｃ∶Ｇ∶水＝
４∶５∶８∶４．５（Ｇ储备液当天配制）的体积比混
匀，混匀后从上部一侧缓缓加入凝胶，约占整个胶
板的３／４，加入过程中防止气泡的产生。为保持
胶面的平整，在上面加一层双蒸水。在日光灯下
凝聚，１ｈ后当水面与胶面出现明显界面时说明
分离胶凝聚完成。用吸水纸吸去胶面上的水，加
入浓缩胶，浓缩胶质量浓度为５０ｇ／Ｌ，凝胶储备
液按Ｂ∶Ｄ∶Ｅ＝２∶３∶４的体积比混匀。加完浓
缩胶后插上梳子，日光灯下凝聚，１ｈ后浓缩胶凝
聚完成。
１．２．３ 电 泳 待胶完全凝聚后，取下梳子，加样
电泳。每样孔进样量２０μＬ，以溴酚蓝为指示剂。
电泳槽内加入ｐＨ ８．３的Ｔｒｉｓ－Ｇｌｙ电极缓冲液约
５００ｍＬ，４℃冰箱中恒温电泳。电泳初始电压
·５１４·３期 刘贺贺等：青藏高原蕨麻种质资源遗传多样性ＰＯＤ同工酶分析
１５０Ｖ，溴酚蓝电泳至分离胶时稳压３００Ｖ。溴酚
蓝电泳到分离胶底端１ｃｍ处时，停止电泳。
１．２．４ 染 色 ＰＯＤ 同工酶显色参考胡能书
等［１１］和郭尧君［１２］采用的醋酸联苯胺法，并进行改
良。电泳完毕，小心剥取凝胶用蒸馏水漂洗数次，
置醋酸联苯胺染液５～１０ｍｉｎ，出现清晰过氧化
物酶带后迅速倒出染液，蒸馏水洗数次，拍照、保
存。染液配制：将１ｇ联苯胺溶于９ｍＬ冰醋酸
中，再加３６ｍＬ蒸馏水，混匀配成联苯胺溶液。
使用时取５ｍＬ联苯胺溶液，２ｍＬ ３０ｇ／Ｌ 的
Ｈ２Ｏ２，９３ｍＬ蒸馏水，混匀。
１．３ 数据处理
凝胶板上酶谱带颜色深浅反应同工酶活性的
强弱。根据电泳图（图１），将酶活性分为强、较
强、弱３个等级，绘制电泳模式图（图２）。分别计
算酶带迁移率（Ｒｆ＝酶带迁移距离／前沿指示剂
距离）。根据电泳模式图将酶带分布情况转化为
０，１二态性数值，有酶带记为“１”，无酶带记为
“０”，建立ＰＯＤ同工酶谱带的相对迁移率和二态
数据。
表２ 凝胶储备液配方
Ｔａｂｌｅ ２ Ｇｅｌａｔｉｎ ｒｅｓｅｒｖｅ ｆｌｕｉｄ ｆｏｒｍｕｌａ
编码
Ｃｏｄｅ
１ｍｏｌ／Ｌ
ＨＣｌ／ｍＬ
三羟甲基
氨基甲烷／ｇ
Ｔｒｉｓ
四甲基
乙二胺／ｍＬ
ＴＥＭＥＤ
丙烯酰胺／ｇ
Ａｃｒ
甲叉双丙
烯酰胺／ｇ
Ｂｉｓ
维生素Ｂ２／ｇ
Ｖｉｔａｍｉｎ Ｂ２
蔗糖／ｇ
Ｓｕｃｒｏｓｅ
硫酸铵／ｇ
ＡＰＳ
双蒸水／ｍＬ
Ｄｅｉｏｎｉｚｅｄ
ｗａｔｅｒ
ｐＨ
Ａ ２４ １８．３０ ０．１２５ ５０ ８．９
Ｂ ２４ ３．０００ ０．３２０ ５０ ６．７
Ｃ １５．０ ０．４５０ ５０
Ｄ １０．０ ０．３６５ ５０
Ｅ ０．４ ５０
Ｆ ２０ ５０
Ｇ ０．１５ ５０
图１ ７５份蕨麻过氧化物同工酶酶谱
Ｆｉｇ．１ Ｂａｎｄｉｎｇ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｉｓｏｚｙｍｅ ｉｎ ７５ Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ ａｎｓｅｒｉｎａ
·６１４· 西 北 农 业 学 报 ２５卷
图２ 蕨麻过氧化物同工酶模式
Ｆｉｇ．２ ＰＯＤ ｉｓｏｚｙｍｅ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ ａｎｓｅｒｉｎａ
计算各酶的多态位点百分率［１３］（Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
ｏｆ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ Ｂａｎｄｓ，ＰＰＢ），ＰＰＢ＝ＮＰＢ／ＴＮＢ
×１００ ％，式中，ＮＰＢ（Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ
Ｂａｎｄｓ）为多态性条带数，ＴＮＢ（Ｔｏｔａｌ Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
Ｂａｎｄｓ）为总条带数。使用 ＮＴＳＹＳｐｃ ２．１计算
ＰＯＤ酶谱带的遗传相似系数（Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ，
ＧＳ），计算公式［１４］如下：ＧＳ＝２ａ／（２ａ＋ｂ＋ｃ），其
中，ａ为２个物种群共有的多态条带，ｂ为Ｘ 物种
群特有条带数，ｃ为Ｙ 物种群特有条带数。再用
非加权组平均法（Ｕｎｗｅｉｇｈｔｅｄ Ｐａｉｒ Ｇｒｏｕｐ Ｍｅｔｈ－
ｏｄ ｗｉｔｈ Ａｒｉｔｈｍｅｔｉｃ Ａｖｅｒａｇｅ，ＵＰＧＭＡ）进行聚类
分析并绘制相似系数树状聚类图。
２ 结果与分析
２．１ ＰＯＤ同工酶分析
７５份蕨麻种质资源叶片的ＰＯＤ电泳染色结
果共出现１４条酶带。不同蕨麻材料出现３～１０
条不同酶带，７７％的材料含有６～９条酶带，酶带
出现最多的是７号（日喀则－３２）、９号（那曲－０１）、
１０号（那曲－０２）和６９号（黄南－０８）材料，有１０条
酶带；出现最少的是５２号（湟源－０２）和７１号（甘
德－０１）材料，仅有３条酶带。
１４条酶带分别用 ＰＯＤ－１、ＰＯＤ－２、ＰＯＤ－３、
ＰＯＤ－４……ＰＯＤ－１４ 表 示，Ｒｆ 值 为 ０．１０３～
０．７９３。根据酶带的迁移率的大小，分为Ⅰ区、Ⅱ
·７１４·３期 刘贺贺等：青藏高原蕨麻种质资源遗传多样性ＰＯＤ同工酶分析
区、Ⅲ区。Ⅰ区（Ｒｆ＜０．２０７）有４条酶带，包括
ＰＯＤ－１～ＰＯＤ－４；Ⅱ区（０．３２８＜Ｒｆ＞０．４６６）有５
条酶带，包括ＰＯＤ－５～ＰＯＤ－９；Ⅲ区（Ｒｆ＞０．６６５）
有５条酶带，包括ＰＯＤ－１０～ＰＯＤ－１４。ＰＯＤ同工
酶活性强的条带在Ⅰ区和Ⅱ区分布较为集中，Ⅲ
区分布较为分散。
酶带出现率为６．６７％～９６．００％，迁移率及
出现频率见表３。酶带ＰＯＤ－１和ＰＯＤ－５的出现
率低于１０．００％，可作为特异性酶带，特异性的酶
带是蕨麻材料的遗传特异性表现，具有较强的特
异性。酶带出现率在８０％以上的高频率有３条
酶带，分别是ＰＯＤ－２（出现率为９６％）、ＰＯＤ－７（出
现率为９３％）和ＰＯＤ－１２（出现率为８１％）。出现
率在３０％～８０％的中频率酶带共６条，占条带总
数的４２．９％。出现率在３０％以下的低频条代数
为５条，占条带总数的３５．７％，说明ＰＯＤ同工酶
的多态性极高。
按照多态位点百分率公式，多态位点百分数
为１００％。有７２份材料含有酶带ＰＯＤ－２，有７０
份材料出现酶带ＰＯＤ－７，７５份蕨麻种质资源材料
没有共有条带，１４条酶带全部为多态性酶带，说
明酶带ＰＯＤ－２和ＰＯＤ－７为蕨麻资源ＰＯＤ同工
酶比较稳定遗传的酶带。多态性酶带数和百分率
直接反映材料的多态性，间接反映酶谱的多样性信
息含量，又可作为度量遗传变异水平高低的指标。
２．２ ７５份蕨麻种质资源的相似系数
ＮＴＳＹＳｐｃ ２．１软件计算７５份材料２ ８５０对
两两不同材料的相似系数，结果见表４。相似系
数为０．２１４～１．０００，平均值为０．６８１。
蕨麻材料７号（日喀则－３２）与１７号（合作－
０５）、７１号（黄南－１０）、７５号（大通－０２），４号（林芝－
５７）与５４号（祁连－０４），１４号（那曲－１７）与７５（大
通－０２）号５组之间，相似系数最小（ＧＳ＝０．２１４），
亲缘关系最远。同一个地区的材料如１号（林芝－
表３ 蕨麻同工酶酶带迁移率（Ｒｆ）及出现频率（Ａｆ）
Ｔａｂｌｅ ３ Ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｆｒｏｎｔ ａｎｄ ａｐｐｅａｒ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ＰＯＤ ｉｓｏｚｙｍｅｓ ｏｆ Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ ａｎｓｅｒｉｎａ
酶带 Ｂａｎｄ ＰＯＤ－１ ＰＯＤ－２ ＰＯＤ－３ ＰＯＤ－４ ＰＯＤ－５ ＰＯＤ－６ ＰＯＤ－７ ＰＯＤ－８ ＰＯＤ－９ ＰＯＤ－１０ ＰＯＤ－１１ ＰＯＤ－１２ ＰＯＤ－１３ ＰＯＤ－１４
Ｒｆ ０．１０３ ０．１３８ ０．１７２ ０．２０７ ０．３２８ ０．３６２ ０．３９７ ０．４１３ ０．４６６ ０．６６５ ０．６７０ ０．７２４ ０．７５９ ０．７９３
Ａｆ／％ ６．６７ ９６．００ ６６．６７ ５０．６７ ５．３３ ６４．００ ９３．３３ ５７．３３ １３．３３ ２６．６７ ６６．６７ ８１．３３ ５４．６７ ２２．６７
表４ 蕨麻材料的相似系数（部分）
Ｔａｂｌｅ ４ Ｍａｔｒｉｘ ｏｆ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ａｍｏｎｇ ７５ Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ ａｎｓｅｒｉｎａ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ（ｐａｒｔ ｏｆ ｒｅｓｕｌｔｓ）
序号
Ｎｏ． １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ １１ １２ １３ １４ １５ １６ １７ １８ １９ ２０ ２１ ２２ ２３ ２４ ２５
１ １．０００
２ ０．９２９ １．０００
３ ０．６４３ ０．７１４ １．０００
４ ０．７１４ ０．７８６ ０．６４３ １．０００
５ ０．７８６ ０．７１４ ０．７１４ ０．５００ １．０００
６ ０．９２９ ０．８５７ ０．５７１ ０．６４３ ０．８５７ １．０００
７ ０．６４３ ０．７１４ ０．４２９ ０．７８６ ０．５７１ ０．７１４ １．０００
８ ０．８５７ ０．７８６ ０．５００ ０．７１４ ０．７８６ ０．９２９ ０．７８６ １．０００
９ ０．７８６ ０．７１４ ０．４２９ ０．６４３ ０．７１４ ０．８５７ ０．７１４ ０．９２９ １．０００
１０ ０．９２９ ０．８５７ ０．５７１ ０．７８６ ０．７１４ ０．８５７ ０．７１４ ０．９２９ ０．８５７ １．０００
１１ ０．７８６ ０．８５７ ０．５７１ ０．７８６ ０．７１４ ０．８５７ ０．８５７ ０．９２９ ０．８５７ ０．８５７ １．０００
１２ ０．８５７ ０．７８６ ０．５００ ０．７１４ ０．７８６ ０．９２９ ０．７８６ １．０００ ０．９２９ ０．９２９ ０．９２９ １．０００
１３ ０．７１４ ０．７８６ ０．６４３ ０．７１４ ０．７８６ ０．７８６ ０．７８６ ０．７１４ ０．６４３ ０．６４３ ０．７８６ ０．７１４ １．０００
１４ ０．７８６ ０．７１４ ０．５７１ ０．６４３ ０．８５７ ０．８５７ ０．７１４ ０．９２９ ０．８５７ ０．８５７ ０．８５７ ０．９２９ ０．６４３ １．０００
１５ ０．６４３ ０．７１４ ０．５７１ ０．６４３ ０．５７１ ０．７１４ ０．５７１ ０．６４３ ０．７１４ ０．５７１ ０．７１４ ０．６４３ ０．６４３ ０．５７１ １．０００
１６ ０．７８６ ０．８５７ ０．７１４ ０．７８６ ０．７１４ ０．８５７ ０．７１４ ０．７８６ ０．７１４ ０．７１４ ０．８５７ ０．７８６ ０．７８６ ０．７１４ ０．８５７ １．０００
１７ ０．４２９ ０．５００ ０．７８６ ０．４２９ ０．５００ ０．３５７ ０．２１４ ０．２８６ ０．３５７ ０．３５７ ０．３５７ ０．２８６ ０．４２９ ０．３５７ ０．６４３ ０．５００ １．０００
１８ ０．５００ ０．５７１ ０．８５７ ０．５００ ０．５７１ ０．４２９ ０．２８６ ０．３５７ ０．４２９ ０．４２９ ０．４２９ ０．３５７ ０．５００ ０．４２９ ０．７１４ ０．５７１ ０．９２９ １．０００
１９ ０．７８６ ０．８５７ ０．７１４ ０．７８６ ０．７１４ ０．７１４ ０．７１４ ０．６４３ ０．５７１ ０．７１４ ０．７１４ ０．６４３ ０．９２９ ０．５７１ ０．５７１ ０．７１４ ０．５００ ０．５７１ １．０００
２０ ０．７１４ ０．７８６ ０．９２９ ０．５７１ ０．７８６ ０．６４３ ０．５００ ０．５７１ ０．５００ ０．６４３ ０．６４３ ０．５７１ ０．７１４ ０．６４３ ０．５００ ０．６４３ ０．７１４ ０．７８６ ０．７８６ １．０００
２１ ０．７１４ ０．７８６ ０．９２９ ０．５７１ ０．７８６ ０．６４３ ０．５００ ０．５７１ ０．５００ ０．６４３ ０．６４３ ０．５７１ ０．７１４ ０．６４３ ０．５００ ０．６４３ ０．７１４ ０．７８６ ０．７８６ １．０００ １．０００
２２ ０．７８６ ０．８５７ ０．８５７ ０．６４３ ０．８５７ ０．７１４ ０．５７１ ０．６４３ ０．５７１ ０．７１４ ０．７１４ ０．６４３ ０．７８６ ０．７１４ ０．５７１ ０．７１４ ０．６４３ ０．７１４ ０．８５７ ０．９２９ ０．９２９ １．０００
２３ ０．７８６ ０．８５７ ０．８５７ ０．７８６ ０．７１４ ０．７１４ ０．５７１ ０．６４３ ０．５７１ ０．７１４ ０．７１４ ０．６４３ ０．７８６ ０．５７１ ０．７１４ ０．８５７ ０．６４３ ０．７１４ ０．８５７ ０．７８６ ０．７８６ ０．８５７ １．０００
２４ ０．５７１ ０．６４３ ０．６４３ ０．５７１ ０．５００ ０．５００ ０．３５７ ０．４２９ ０．５００ ０．５００ ０．５００ ０．４２９ ０．５７１ ０．３５７ ０．７８６ ０．６４３ ０．８５７ ０．７８６ ０．６４３ ０．５７１ ０．５７１ ０．６４３ ０．７８６ １．０００
２５ ０．５７１ ０．６４３ ０．５００ ０．４２９ ０．６４３ ０．６４３ ０．５００ ０．５７１ ０．６４３ ０．５００ ０．６４３ ０．５７１ ０．７１４ ０．５００ ０．７８６ ０．６４３ ０．７１４ ０．６４３ ０．６４３ ０．５７１ ０．５７１ ０．６４３ ０．６４３ ０．８５７ １．０００
注：最上一行及最左侧一列的编号是样品编号。
Ｎｏｔｅ：Ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｆ ｔｏｐ ｒｏｗ ａｎｄ ｌｅｆｔ－ｍｏｓｔ ｃｏｌｕｍｎ ａｒｅ ｓａｍｐｌｅ ｎｕｍｂｅｒ．
·８１４· 西 北 农 业 学 报 ２５卷
４１）和２号（大武－０４），虽同是来自自西藏林芝地
区达孜县，采样点的不同，其同工酶的种类和酶带
的活性也不完全一样，相似系数为０．９２９。６６号
（黄南－０５）和６７号（黄南－０６）材料同样来自同一
地点，其相似系数仅为０．７８６。说明，居群内存在
着一定的遗传变异。
材料来源较近的８号（日喀则－３４）与１２号
（那曲－０６），２０号（碌曲－０３）、２１号（碌曲－０５）和４９
号（久治－０３），４１号（兴海－０１）、７２号（甘德－０１）和
７３号（甘德－０２），４８号（久治－０２）、６０号（玉树－０２）
和６１号（玉树－１３），５０号（平安－０２）、５９（玉树－０１）
号和６２（玉树－１８）号两两之间１３组，地域相距较
远的材料１号（林芝－４１）与３２号（大武－０３），１６号
（合作－０１）与４４号（贵南－０１），３１号（大武－０１）与
４５号（河南－０３），３４号（大武－０５）与３８号（拉鸡山－
０２）４组，共１７组材料间的相似系数最大（ＧＳ＝
１．０００），亲缘关系最近。可见，地域相距近和远的
地区均存在变异小、亲缘关系近的蕨麻材料。
２．３ 蕨麻种质资源的聚类分析
使用ＮＴＳＹＳＰＣ ２．１软件进行聚类分析，绘
制树状图，见图３。结果表明，在相似系数为０．７２
时分为５类，第１类包括２８份蕨麻材料，其中西
藏有１１份材料，甘肃有２份材料，青海有１５份材
料；第２类包括１６份蕨麻材料，其中西藏有３份，
甘肃有７份，青海有６份；第３类包括７份蕨麻材
料，其中甘肃有１份，青海有６份；第４类包括１４
份蕨麻材料，其中西藏有１份，甘肃有３份，青海
有１０份；第５类包括１０份蕨麻材料，全部来自青
海，５份材料来自玉树，海东和黄南地区各２份材
料，果洛地区１份材料；第１类与第２类在相似系
数为０．７０时聚为一类即第１大类，亲缘关系相对
较近，４４份材料中块根膨大的３６份，为蕨麻。第
３类与第４类在相似系数为０．６７时聚为一类，并
在相似系数为０．７４时与第５类聚为第２大类，３１
份材料中块根不膨大的１７份，为鹅绒委陵菜。
图３ ７５份蕨麻过氧化物同工酶聚类结果
Ｆｉｇ．３ Ｃｌｕｓｔｅｒ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＰＯＤ ｉｓｏｅｎｚｙｍｅ ｏｆ ７５ Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ ａｎｓｅｒｉｎａ
·９１４·３期 刘贺贺等：青藏高原蕨麻种质资源遗传多样性ＰＯＤ同工酶分析
西藏的１５份蕨麻材料中有１４份聚在第１大
类，１５号（那曲－１８）聚类到第２大类。甘肃的１３
份材料有９份材料也聚在第１大类，其余４份材
料聚类到第２大类，４７份青海的蕨麻材料在第１
大类中有２０份，第２大类中有２６份。可见，蕨麻
的种质资源中遗传差异最大的是青海，其次是甘
肃，最小是西藏。海拔３ ０００ｍ的１８份材料，６份
聚类到第１大类，１２份聚类到第２大类，海拔
３ ０００～４ ０００ｍ的材料和海拔４ ０００ｍ以上的材
料也出现类似情况，且在第２大类中均有分布。
３ 结论与讨论
３．１ 蕨麻种质资源遗传多样性丰富
遗传多样性包括一个物种所有个体间遗传变
异的总和，是居群生存和发展的前提［１５］。遗传变
异是种群长期适应环境变化的结果，遗传多样性
丢失导致小种群对环境变化（如污染、气候变化）
的响应能力非常有限［１６］。蕨麻研究中心采用的
形态学标记、细胞学研究和分子标记的方法研究
表明蕨麻种质资源多样性丰富。多态性酶带数和
多态位点百分率可以直接反映材料的多态性，间
接反映酶谱的多样性信息含量，还可作为度量遗
传变异水平高低的指标。相似系数可用来比较群
体或个体间相似程度的度量参数，相似系数越高，
说明相似程度越大，遗传背景相似性越强［１７］。本
试验使用生化标记的方法揭示蕨麻１４条ＰＯＤ同
工酶酶带全部为多态性酶带数和多态位点百分率
达到最大１００％，显示蕨麻种质遗传多样性丰富，
与形态学标记、细胞学研究和分子标记的研究结
果一致。
研究显示，７５份蕨麻材料的１４条ＰＯＤ同工
酶酶带中无共同酶带，未检测到同工酶酶带及活
性完全一致的材料。仅有部分材料，如１号（林
芝－４１）与３２号（大武－０３）等１７组材料的相似系
数为１．０００，仅具有相同的酶带及酶带条数，酶带
的活性并不一致，可见，蕨麻种质资源的丰富性使
不同地区间的蕨麻材料存在一定差异，这与蕨麻
广阔的生态适应性相一致。因而蕨麻在食用、药
用及生态应用上的开发前景巨大，在研究、利用和
保护野生蕨麻种质资源时，应注意不同地区和居
群的代表性。
３．２ 蕨麻种质资源亲缘关系复杂
本试验聚类结果显示，５０份蕨麻材料中仅有
３６份聚为蕨麻一类，剩余的１４份聚到鹅绒委陵
菜一类中，２５份鹅绒委陵菜材料中１７份聚到鹅
绒委陵菜类中，此聚类结果与形态学标记和分子
标记的聚类结果———不同比例的蕨麻材料聚到鹅
绒委陵菜中的结果一致。在采样时发现同一地区
的蕨麻性状也存在较大的差异，在甘肃临潭蕨麻
原变种和灰叶蕨麻变种共同生长，在多数采样地，
甚至同一株蕨麻，其块根的性状及色泽都不尽相
同。表明蕨麻的遗传变异高、遗传关系复杂。蕨
麻的表型是环境是基因决定还是由二者共同决
定，需要进一步深入研究。
蕨麻这种遗传复杂的关系是长期在复杂的地
理环境中适应的结果，使得蕨麻能在环境复杂的
情况下正常生长发育繁殖。同样，人们能够获得
不同品质的蕨麻资源，也为遗传育种提供了丰富
变异。
目前研究表明，许多植物在冰期时存在避难
所，而在最后一次大冰期后，不同的植物甚至同种
植物的不同种群表现不同的进化反应（扩张或者
不扩张），这些研究为植物分布区中心和边缘，种
群繁殖分配策略的比较研究提供了基础［１８－２０］。蕨
麻在青藏高原广泛分布，与其他许多植物一样在
冰川时期存在避难所。本试验研究的蕨麻材料来
自中国三大自然区之一的青藏高原，其自然环境
的垂直变化和水平分异与低海拔区域迥然不同，
具有独特的地生态现象及其空间格局。目前报道
的３６种高山植物的谱系地理分析显示，谱系地理
模式主要表现为：一、冰期退却到高原边缘的避难
所，冰后期回迁到高原面；二、地理隔离造成冰期
存在多处避难所（含微型避难所），冰后期发生局
域性扩张［２１－２２］。由蕨麻复杂的亲缘关系推测蕨麻
的谱系地理模式为上述的第２种，即蕨麻在冰川
时期就地寻找避难所，躲过了严酷的环境条件，并
在冰川时期结束后逐渐分布青藏高原。生境变化
较小的蕨麻发生较小甚至不发生变异，保持了较
为原始生长类型，生境变化大的蕨麻材料发生了
较大的变异。
青藏高原及其周围地区，由于特殊的环境条
件使得蕨麻在青藏高原的分布一直处于野生状
态，为了生存繁衍，蕨麻需要适应各种不同的微环
境，环境的变化影响蕨麻同工酶基因的表达，恶劣
的环境条件是导致蕨麻表现丰富的遗传多样性的
重要原因。
参考文献 Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ：
［１］ 中国科学院．中国植物志［Ｍ］．北京：科学出版社，１９８５：
·０２４· 西 北 农 业 学 报 ２５卷
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Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．Ｆｌｏｒａ Ｒｅｉｐｕｂｌｉｃａｅ Ｐｏｐｕｌａｒｉｓ
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·１２４·３期 刘贺贺等：青藏高原蕨麻种质资源遗传多样性ＰＯＤ同工酶分析
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Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ ａｎｓｅｒｉｎａｉｎ Ｑｉｎｇｈａｉ－Ｔｉｂｅｔａｎ
Ｐｌａｔｅａｕ ｏｆ Ｃｈｉｎａ Ｂａｓｅｄ ｏｎ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｉｓｏｚｙｍｅ
ＬＩＵ Ｈｅｈｅ１，２，ＪＩＡＮＧ Ｈｏｎｇｘｉａ１，２，ＦＵ Ｇｕｉ １，２，ＢＡＩ Ｓｈｉｊｕｎ１，２，
ＢＡＯ Ｊｉｎｙｕａｎ１，２，ＷＥＩ Ｍｅｉｑｉｎ３ ａｎｄ ＬＩ Ｊｕｎｑｉａｏ１，２
（１．Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｑｉｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｆｏｒ Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ，Ｘｉｎｉｎｇ ８１０００７，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｑｉｎｇｈａｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｔｅｓｔ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｘｉｎｉｎｇ ８１０００７，Ｃｈｉｎａ；
３Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ Ｃｏｌｅｇｅ，Ｑｉｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉｎｉｎｇ ８１００１６，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｗｅ ｕｓｅｄ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｏｆ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｉｓｏｚｙｍｅ ｉｎ
７５ Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ ａｎｓｅｒｉｎａ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ
ｉｎ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｍａｒｋｅｒｓ，ｃｅｌ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒｓ，ａｎｄ Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａａｎｓｅｒｉｎｅｈａｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉ－
ｔｙ．Ｂｙ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｉｓｏｅｎｚｙｍｅ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ｗｅ ｆｏｕｎｄ １４ｅｎｚｙｍｅ ｂａｎｄｓ ｏｆ Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ ａｎｓｅｒｉｎａ ｌｅａｆ；
ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｂａｎｄｓ ｗａｓ １００％；ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｓｏｆｔｗａｒｅ
ＮＴＳＹＳｐｃ ２．１ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ０．２１４ｔｏ １．０００，ａｎｄ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｖａｌｕｅ ｗａｓ ０．６８１；Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ
ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ｃｌｕｓｔｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｗａｓ ｄｏｎｅ ｂｙ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｕｎｗｅｉｇｈｔｅｄ ｐａｉｒ ｇｒｏｕｐ ｍｅｔｈｏｄ ｗｉｔｈ ａ－
ｒｉｔｈｍｅｔｉｃ ｍｅａｒｎｓ ｕｓｅｄ Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ ａｎｓｅｒｉｎａ ｍａｔｅｒｉａｌ，Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ ａｎｓｅｒｉｎａ ｗａｓ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｔｗｏ ｃａｔｅｇｏ－
ｒｉｅｓ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｗａｓ ０．６７，ｔｈｅ ｍａｉｎ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｃａｔｅｇｏｒｙ ｗａｓ Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ ａｎｓｅｒｉｎａ
ｍａｔｅｒｉａｌ，ｔｈｅ ｍａｉｎ ｏｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄ ｃａｔｅｇｏｒｙ ｗａｓ Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ ａｎｓｅｒｉｎｅ ｍａｔｅｒｉａｌ．Ｉｎ ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ，ｒｉｃｈ ｇｅ－
ｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ ａｎｓｅｒｉｎａ ｗａｓ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄ ｇｅｏ－
ｇｒａｐｈｉｃａｌ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｑｉｎｇｈａｉ Ｔｉｂｅｔ Ｐｌａｔｅａｕ ｉｎ ｌｏｎｇ ｔｉｍｅ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ ａｎｓｅｒｉｎａ；Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ；ＰＯＤ ｉｓｏｚｙｍｅ；Ｐｏｌｙａｃｒｙａｍｉｄｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ；
Ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ；Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｂａｎｄｓ
Ｒｅｃｅｉｖｅｄ ２０１５－０４－０８ Ｒｅｔｕｒｎｅｄ ２０１５－０６－２４
Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｉｔｅｍ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｆｕｎｄ ｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉ－ｔｅｃｈ Ａｃｈｉｅｖｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ
ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｎｏ．２０１０ＧＢ２Ｇ００５１４）；ＮＮＳＦ ｏｆ Ｃｈｉｎａ（Ｎｏ．３０６０７０２６，Ｎｏ．３０６６００１９）；Ｆｕｎｄ Ｐｒｏｊｅｃｔ
ｉｎ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ Ｑｉｎｇｈａｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ（Ｎｏ．２０１２－Ｚ－９０７）．
Ｆｉｒｓｔ ａｕｔｈｏｒ ＬＩＵ Ｈｅｈｅ，ｍａｌｅ，ｍａｓｔｅｒ ｓｔｕｄｅｎｔ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｒｅａ：ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｐｌａｎｔ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
ａｎｄ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ．Ｅ－ｍａｉｌ：５１６０９８３８４＠ｑｑ．ｃｏｍ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ ＬＩ Ｊｕｎｑｉａｏ，ｆｅｍａｌｅ，Ｐｈ．Ｄ，ｐｒｏｆｅｓｓｏｒ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｒｅａ：ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｐｌａｎｔ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ
ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ．Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｊｑｌｉｌｙ２００２＠１２６．ｃｏｍ
（责任编辑：潘学燕 Ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ ｅｄｉｔｏｒ：ＰＡＮ Ｘｕｅｙａｎ）
·２２４· 西 北 农 业 学 报 ２５卷