全 文 ：［收稿日期］ 20140816(013)
［基金项目］ 国家中医药管理局“十二五”中医药重点学科建设项目(国中医药人教发［2012］32 号) ;广西省重点学科建设项目(桂教科
研［2013］16 号) ;右江民族医学院“大学生创新训练计划”项目(右医教字［2014］5 号) ;右江民族医学院民族医药协会科研
创新项目(20131108)
［第一作者］ 黄挺章，从事天然产物化学、药物化学、食品卫生及中草药研究，Tel:18777615314，E-mail:huangtingzhanggx@ 163． com
［通讯作者］ * 黄锁义，教授，硕士生导师，从事天然产物化学、食品卫生等研究，Tel:13507768926，E-mail:huangsuoyi@ 163． com
谷精草提取物的抗氧化活性考察
黄挺章，郭圣奇，齐梁煜，黄莹，黄春阳，钟兆银，黄锁义*
(右江民族医学院，广西 百色 533000)
［摘要］ 目的:考察谷精草水提物和醇提物的抗氧化活性。方法:采用 UV 检测谷精草水提物和醇提物对超氧阴离子自
由基、羟基自由基和 DPPH自由基的清除能力，通过普鲁士法测定提取物还原 Fe3 +的能力，并以丁基羟基茴香醚(BHA)为参
比测定提取物对金属离子(Fe2 +)的螯合能力。结果:谷精草水提物和醇提物对 3 种自由基均具有较强的清除作用，水提物的
半数抑制浓度(IC50)分别为 1. 389，3. 507，0. 341 g·L
－1，醇提物的 IC50分别为 0. 792，5. 525，0. 192 g·L
－1。提取物对 Fe3 +有还
原能力，对金属离子(Fe2 +)有较强的螯合能力，且随着提取液质量浓度的增加而增强，呈剂量效应关系。结论:谷精草水提物
和醇提物均具有较强的抗氧化活性，在相对低质量浓度下醇提物的抗氧化作用比水提物强。
［关键词］ 谷精草;提取物;抗氧化活性;自由基;螯合率
［中图分类号］ Ｒ283. 6;Ｒ284. 1;Ｒ284. 2 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2015)10-0013-03
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2015100013
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /11． 3495． Ｒ． 20150401． 0927． 008． html
［网络出版时间］ 2015-04-01 9:27
Investigation of Antioxidant Activity of Eriocauli Flos Extract HUANG Ting-zhang，GUO Sheng-qi，
QI Liang-yu，HUANG Ying，HUANG Chun-yang，ZHONG Zhao-yin，HUANG Suo-yi* (Youjiang Medical
University for Nationalities，Baise 533000，China)
［Abstract］ Objective:To investigate antioxidant activity of water extract and alcohol extract of Eriocauli
Flos． Method:Scavenging effect of water extract and alcohol extract of Eriocauli Flos on superoxide anion free
radical，DPPH radical and hydroxyl radical were determined by UV method，reduction ability of extract for Fe3 +
was determined by Prussian law，and with butylated hydroxyanisole (BHA)as reference，chelating ability of
extract on metal ferrous ion (Fe2 +)was determined． Ｒesult:Water extract and alcohol extract of Eriocauli Flos
had strong scavenging effects on three kinds of free radicals，half inhibitory concentrations (IC50)of water extract
were 1. 389，3. 507，0. 341 g·L －1，while IC50 of alcohol extract were 0. 792，5. 525，0. 192 g·L
－1 ． Extract
had reduction ability on Fe3 +，and had a strong chelating ability to Fe2 +，effects increased with increasing of
extract concentration，which showed corresponding dose-response relationship． Conclusion:Water extract and
alcohol extract of Eriocauli Flos have strong antioxidant activity，and at a relatively low concentration，alcohol
extract is stronger than water extract about antioxidant effect．
［Key words］ Eriocauli Flos;extract;antioxidant activity;free radical;chelating rate
谷精草别名戴星草、珍珠草，功效疏散风热、明
目退翳，具有抗菌、祛痰、抑制癌细胞 DNA及蛋白质
合成等药理作用，常用于治疗风热目赤肿痛羞明、眼
生翳膜、风热头痛等证［1-2］，化学成分有谷精草素、
槲皮万寿菊素、挥发油等［3-7］。在临床应用中，谷精
草常与其他中药配伍，被广泛用于治疗病毒性角膜
炎、色素膜炎白内障、黑翳性视神经炎、流行结膜炎
等疾病，治疗效率可达 ＞ 90%［8］。谷精草还可消除
人体内活性氧自由基［5］，但相关研究未见详细报
道。本实验拟考察谷精草水提取物和醇提取物的体
外抗氧化活性，为其抗氧化活性成分的分离和开发
提供参考。
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第 21 卷第 10 期
2015 年 5 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 21，No． 10
May，2015
1 材料
GN2085 型电子天平(上海民桥精密科学有限
公司) ，755B型紫外-可见分光光度计(上海精密设备
有限公司)。谷精草(采自广西百色市右江区，经右
江民族医学院民族医学教研室覃道光副教授鉴定为
谷精草科植物谷精草 Eriocaulon buergerianum的干燥
带花茎的头状花序) ，焦性没食子酸(天津市盛茂精
细化工有限公司，批号 20100320) ，三羟甲基氨基甲烷
(Tris，上海山浦化工有限公司) ，1 1-二苯基-2-三硝基
苦肼(DPPH，南京建成生物工程研究所) ，丁基羟基茴
香醚(BHA，上海谱振生物科技有限公司)。
2 方法与结果
2． 1 谷精草提取物的制备［9］ 称取经粉碎过 50 目
筛的谷精草干燥粉末 40 g，分别加 15 倍量水或
75%乙醇室温浸泡 1 h，加热提取 2 h(75%乙醇需
回流提取) ，抽滤，取滤液，旋转蒸发除去溶剂，烘干
成浸膏，称定质量，分别用相应溶剂稀释成不同浓度
的谷精草水提液和醇提液。
2． 2 清除超氧阴离子自由基能力［10］ 取 10 mL具
塞比色管，加入 0. 05 mmol·L －1 Tris-HCl缓冲液(pH
8. 2)4. 0 mL，置于 25 ℃水浴保温 20 min ，取出，分
别加入 0. 1，0. 5，1. 0，1. 5，2. 0，2. 5 g·L －1样品液
(25 ℃水浴保温 20 min)0. 2 mL，加入 2. 5 g·L －1邻
苯三酚溶液(25 ℃水浴保温 20 min)0. 8 mL，混匀，
静置 4 min，加入 10 mmol·L －1 HCl溶液 2 滴终止反
应，混合，以 Tris-HCl 缓冲液调零，以相应试剂为参
比，于 321 nm处测定吸光度(A，n = 3) ，按清除率 =
［1 －(A1 － A2)/A0］× 100%计算。式中 A0 为加入
邻苯三酚但不加样品液的吸光度，A1 为加入邻苯三
酚和样品液的吸光度，A2 为样品液但不加入邻苯三
酚的吸光度。计算各提取物的回归方程［以 A 为纵
坐标，质量浓度(C)为横坐标］及半数抑制浓度，样
品清除自由基的能力以半数抑制浓度(IC50)表
示［11］，见表 1 和图 1。结果发现谷精草提取物具有
较强清除超氧自由基的能力，且醇提物的清除率优
于水提物。
表 1 谷精草提取物清除自由基的能力
Table 1 Scavenging effect of Eriocauli Flos extract on free radical
样品
清除超氧自由基 清除 DPPH自由基 清除羟基自由基
回归方程 Ｒ2 IC50 /g·L －1 回归方程 Ｒ2 IC50 /g·L －1 回归方程 Ｒ2 IC50 /g·L －1
水提物 A = 33. 485C + 3. 482 0. 994 1. 389 A = 122. 920C + 8. 064 0. 996 0. 341 A = 12. 718C + 5. 392 0. 960 3. 507
醇提物 A = 33. 47C + 23. 481 0. 900 0. 792 A = 122. 09C + 26. 511 0. 907 0. 192 A = 6. 188C + 15. 813 0. 948 5. 525
图 1 谷精草提取液对超氧阴离子自由基的清除能力
Fig． 1 Scavenging activity of Eriocauli Flos extract on superoxide
anion radical
2． 3 清除 DPPH自由基能力［10］ 取 5 支 10 mL 具
塞比色管，各加入新配置的 6 × 10 －4 mol·L －1 DPPH
溶液 0. 5 mL，分别加入质量浓度 0. 1，0. 2，0. 3，0. 4，
0. 5 g·L －1的样品液 1. 0 mL，加无水乙醇定容至 10
mL，暗光反应 30 min，以无水乙醇调零，在 517 nm
处测定 A(n = 3) ，按清除率 = ［(A1 － A2)/A1］×
100%计算，式中 A1 为空白吸光度(t = 0 min) ，A2 为
反应 30 min后的吸光度，见表 1 和图 2。结果表明
谷精草提取物对 DPPH 具有一定的清除能力，且醇
提物的清除率优于水提物。
图 2 谷精草提取液对 DPPH自由基的清除能力
Fig． 2 Scavenging activity of Eriocauli Flos extract on DPPH
radical
2． 4 清除羟基自由基的能力［12］ 采用 Fenton反应
体系产生羟基自由基。在 10 mL具塞比色管中依次
加入 9 mmol·L －1 FeSO4 1. 0 mL和 9 mL·L
－1水杨酸-
乙醇溶液 2. 0 mL，充分混匀后分别加入质量浓度为
0. 1，0. 5，1. 0，1. 5，2. 0，2. 5 g·L －1的样品液 2. 0 mL，
加入 8. 8 mmol·L －1 H2O2 2 mL 启动反应，室温反应
1 h，与空白液比较，于 510 nm 处测定 A(n = 3) ，计
算清除率，结果见表 1 和图 3。表明谷精草提取液
对羟基自由基具有清除能力，在相对低质量浓度下
醇提液清除羟基自由基的能力优于水提液。
2. 5 还原 Fe3 +的能力［12］ 在 10 mL具塞比色管中
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2015 年 5 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 21，No． 10
May，2015
图 3 谷精草提取液对羟基自由基的清除能力
Fig． 3 Scavenging activity of Eriocauli Flos extract on
hydroxyl radical
依次加入质量浓度为 0. 1，0. 5，1. 0，1. 5，2. 0，2. 5 g·
L －1的样品溶液 2. 5 mL，0. 2 mol·L －1磷酸盐缓冲液
(pH 6. 6)和 1%铁氰化钾各 2. 5 mL，混匀后置于 50
℃水浴中反应 20 min，加入 10%三氯乙酸 2. 5 mL，
混匀，如溶液浑浊则离心(3 000 r·min －1，10 min) ，
取上清液 2. 5 mL，加水 2. 5 mL和 0. 1%三氯化铁溶
液 0. 5 mL，混匀，以相应试剂为参比，于 700 nm 处
测定 A(n = 3)。得谷精草水提物、醇提物清除羟基
自由基的回归方程分别为 A = 0. 681C + 0. 102(Ｒ2 =
0. 991) ，A = 0. 774C + 0. 292(Ｒ2 = 0. 970) ，提示谷精
草不同提取液对还原 Fe3 +均具有较强的能力，且醇
提物还原 Fe3 +能力优于水提物。
2. 6 金属离子(Fe2 +)螯合能力［12］ 分别取 0. 2 g·
L －1的谷精草样品液和 BHA 溶液 0. 1，0. 2，0. 3，
0. 4，0. 5 mL，分别置于 10 mL 具塞比色管中，加入
0. 2 mol·L －1 FeSO4 溶液 0. 1 mL，混匀，加入 5 mmol·
L －1菲洛嗪 0. 2 mL，加无水乙醇定容至 5 mL，剧烈振
荡混合，室温放置 10 min。以无水乙醇调零，于 562
nm处测定 A(n = 3)。按螯合率 =(A0 － A1)/A0 ×
100%计算，式中 A0 为不加样品时的吸光度，A1 为加
入样品时的吸光度。得谷精草水提物、醇提物、BHA
对金属离子(Fe2 +)螯合能力的回归方程依次为 A =
44. 350C － 0. 059(Ｒ2 = 0. 982) ，A = 17. 000C + 10. 646
(Ｒ2 =0. 999) ，A = 31. 230C － 0. 087(Ｒ2 = 0. 990)。由
图 4可知，谷精草提取液和 BHA 都能够对金属离子
(Fe2 +)有螯合作用，并呈现良好的量效关系;谷精草
提取物对金属(Fe2 +)的螯合能力比 BHA强。
3 讨论
通过对自由基的清除作用考察，证实谷精草提
取物是一种有效的自由基清除剂，在消除自由基过
程中使溶液中自由基数目减少。谷精草水提物和醇
提物均具有较强的抗氧化活性，且在相对低浓度下
醇提物的抗氧化作用总体比水提物强。自由基具有
强氧化性，在正常情况下，人体内的自由基处于不断
图 4 谷精草提取液和 BHA对金属离子(Fe2 +)的螯合能力
Fig． 4 Chelating ability of Eriocauli Flos extract and butylated
hydroxy anisole on metal ferrous ion (Fe2 +)
产生与清除的动态平衡，以确保机体正常的生命活
动。当体内自由基的动态平衡被破坏，自由基可损
害机体的组织和细胞，进而导致心脏病、癌症等疾病
的产生与恶化，更能引起生物机体的衰老加快［5，13］。
说明清除体内自由基、抗氧化是预防机体衰老及多
种疾病的重要措施。
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［责任编辑 刘德文］
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