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墓头回提取液对荷U14宫颈癌小鼠血清VEGF的影响



全 文 :84
第 1 2 卷 第 4 期
2010 年 4 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 12 No. 4
Apr . ,2010
程测定吸光度,得出多糖含量为24.9%。
2.6 回收率测定 精密移取样品液0.5mL置于具
塞试管中,分别精密加入不同浓度的标准液0.5mL,
制作5份,按照上述多糖测定的方法操作,计算回收
率,结果平均回收率为102%,RSD=2.8%。
2.7 精密度试验 精密量取葡萄糖标准品4mL置于
25mL容量瓶中依次加蒸馏水定容到容器刻度。从
中精密吸取1mL对照品溶液置于具塞试管中,一式6
份,按照2.3项操作测定吸光度,计算得RSD=1.34%。
2.8 稳定性试验 取样品溶液,按上述相同分析方
法进行操作,每隔一定时间测定吸光度,4h内连续
测定,得吸光度值为一定值不变。
2.9 重复性试验 精密移取样品液1mL置于具塞试
管中,一式6份,按照2.3项操作在690nm处测定吸光
度,计算得多糖平均含量为22.71%,RSD=2.6%。
3 讨 论
近些年对单味药材的多糖成分结构研究、药理
作用研究较多,大多数多糖为复合多糖[8],是一种多
糖的统称。实验研究表明多糖具有良好的调节免疫
作用,可以抗癌、抗氧化,有延缓衰老作用。经药理
细胞实验证明,本研究提取的多糖对SMMC-7721人
肝癌细胞的体外生长有显著的抑制作用。因此本方
多糖具有较好的开发前景,对其工艺的研究至关重
要。但是对复方中的复合多糖的药理作用研究以及
成分结构研究较少。而对抗扶正药方中的多糖类进
行了初级的含量测定研究,对其工艺进行了初步的
研究,在原来的水提取乙醇沉沉淀基础上进行纯化,
为以后本方多糖的进一步复合多糖的结构研究提供
参考依据。◆
参考文献
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版社,1997.
墓头回,又称墓头灰、箭头风、追风箭,为植物
败酱科异叶败酱(Patrinia Heterophylla Bge)及糙叶
败酱(Patrinia Scabra Bge)的根或全草。产于辽宁、
陕西、河南、河北、山西、广西等地。性凉,味苦,微酸
墓头回提取液对荷U14宫颈癌小鼠血清VEGF的影响
钟 璐 1,蒋秋燕 2
(1.广西中医学院,广西 南宁 530001 ;2.广西中医学院第一附属医院,广西 南宁 530023)
摘 要 :目的 :探讨墓头回提取液对荷U14宫颈癌小鼠实体瘤生长的作用和血清VEGF的影响。方法 :采用
U14移植性小鼠宫颈癌模型,墓头回提取液按所含浸膏量分别为1500、750和375mg/(kg·d)3个剂量组用于U14荷
瘤小鼠模型试验 ;用ELISA法检测各组动物血清VEGF含量变化。结果 :墓头回提取液高、中剂量组及顺铂阳性对
照组能降低宫颈癌荷瘤小鼠血清中VEGF的含量。结论 :墓头回提取液具有抑制肿瘤生长的作用。
关键词 :墓头回提取液 ;荷U14宫颈癌小鼠 ;血清VEGF
中图分类号 :R737.33 ;R285.5 文献标识码 :A 文章编号 :1673-842X (2010) 04- 0084- 03
收稿日期 :2009-10-10
基金项目 :广西研究生教育创新计划资助项目(2008106001005M13);广西自然科学基金资助项目(桂科自0728183)
作者简介 :钟璐(1983-),女,江西南昌人,2007级硕士研究生,研究方向 :中西医结合治疗妇科疾病。
通讯作者 :蒋秋燕(1963-),女,广西桂林人,教授、主任医师,学士,研究方向 :中西医结合治疗妇科肿瘤及宫颈炎性疾病。E-mail :
jqy688@163.com。
Effects of Mutouhui Extract on Serum VEGF In Mice with Cervical Cancer
ZHONG Lu1, JIANG Qiu-yan2
(1.Guangxi University of Traditional Chinese Medicine,Nanning 530001, Guangxi, China; 2. The First
Hospital Affiliated to Guangxi University of Traditional Chinese Medicine,Nanning 530023, Guangxi, China)
Abstract :Objective: To investigate the effect of Mutouhui extract on solid tumor in the animals and its
impact on serum VEGF. Methods: U14 cervical cancer transplanted mouse was used as experiment model,
different dosage of Mutouhui extract was administered to three groups of animal, 1500 mg/Kg, 750mg/Kg and
375mg/Kg per day. Serum VEGF concentration was analyzed with ELISA assay. Results: As the cisplatin
treated positive control group, in high-dose and middle-dose of Mutouhui extract treated group can reduce
the concentration of serum VEGF in subjects animal. Conclusion: Mutouhui extract has anti-tumor effects.
Key words :Mutouhui extract; Dutch U14 cervical cancer in mice; serum VEGF
DOI:10.13194/j.jlunivtcm.2010.04.86.zhongl.133
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涩,具有燥湿止带、收敛止血、清热解毒之功[1]。我
们前期研究发现,墓头回提取液高、中剂量组在U14
荷瘤小鼠试验中能够降低U14荷瘤小鼠不同切变率
下的全血黏度、血细胞比容 ;能够明显降低肿瘤组
织中的微血管密度(MVD);并对小鼠宫颈癌U14细
胞细胞体外生长有一定的抑制作用[2-4]。
血管内皮生长因子(vascular endothelial growth
factor, VEGF)属血小板衍生生长因子家族,在促进
肿瘤血管生成、转移中发挥重要作用,与宫颈癌的发
生、发展有密切的联系[5]。为明确墓头回抑制肿瘤
的作用机制,笔者探讨了墓头回提取液对荷U14宫
颈癌小鼠血清VEGF的影响,现报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1  试 验 动 物 SPF级 雌 性 昆 明 小 鼠,体 重
(20±2)g,购于广西医科大学实验动物中心,符合
健康一级动物标准,合格证号 :SCXK桂2003-0003。
1.1.2 肿瘤株 小鼠宫颈癌 U14细胞株,购于上海
药物研究所。
1.1.3 药物及试剂 墓头回原药材1.0kg,购于广西
中医学院第一附属医院中药房,经广西中医学院中
药鉴定研究所鉴定为异叶败酱(Patrinia Heterophylla
Bge),粉碎后用5000mL蒸馏水浸泡0.5h,水煎煮2
次,水提取液冷却后与75%乙醇以10 : 1比例醇沉
10h,真空过滤器过滤,合并2次滤液,加热浓缩至
100mL,水浴加热,得到浸膏150g,保存备用 ;顺铂
(齐鲁制药有限公司,批号: 706031CF)临用时以注
射用水配制成所需浓度(1mg/mL);人血管内皮细胞
生长因子(VEGF)酶联免疫分析试剂盒购于南宁市
桂海生物科技有限公司 ;其他所用试剂均为分析纯。
1.2 实验方法
1.2.1 动物分组 SPF级雌性昆明小鼠60只,按体
重随机分为6组,即墓头回提取液高、中、低剂量组、
空白组、模型组和顺铂组。每组10只。
1.2.2 瘤株复苏及传代 参照徐叔云法[6]。取出液
氮冻存的U14肿瘤株,直接放入37℃水浴快速复苏
后,用无菌生理盐水制成细胞悬液,采用台盼蓝法计
数活细胞,按(1~2)×106个肿瘤细胞每只小鼠,进行
腹腔接种传代,7天后接种后小鼠腹腔将出现大量腹
水,同法连续传代至第3代用于实验研究。取腹水显
著小鼠,腹部消毒后,无菌抽取腹水,离心机1000r/
min离心5min,弃上清液,沉淀用生理盐水洗涤2次,
台盼蓝法计数活细胞数目,用无菌生理盐水稀释,调
整细胞数约为2.0×109个/L的细胞悬液,备用。
1.2.3 给药 小鼠右前肢腋下消毒后,每只皮下接
种0.2mL细胞悬液造模。参照预实验及活性筛选给
药量,将墓头回浸膏配制为墓头回提取液高、中、低
3个剂量,按所含浸膏量计算,分别为1500、750和
375mg/(kg·d),从接种第2天开始,墓头回提取液组
按体重0.2mL/(10g·d),定时分组灌胃给药 ;顺铂组
腹腔注射顺铂注射液3mg/(kg·d) ;模型组每只每天
予生理盐水0.5mL灌胃。以上均连续给药10天。
1.2.4 血清中VEGF含量的ELISA测定 实验第11
天将小鼠摘取眼球取血,分离血清,备用 ;按照试剂
盒说明书,分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。标
准孔8孔,每孔中各加入样品稀释液100μL,移至第
2孔。反复作对倍稀释至第7孔,最后从第7孔中吸
出100μL弃去,使每孔体积均为100μL。第8孔作
为空白对照。待测样品孔中每孔各加入待测样品
100μL,将反应板置37℃ 120min ;弃去液体,滤纸
印干。每孔中加入生物素标记抗体工作液100μL,
将反应板充分混匀后置37℃ 60min,洗板3次,滤纸
印干。每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液
100μL,置37℃ 60min,洗板5次,滤纸印干。每孔
加入底物溶液90μL,37℃避光显色,反应5~10min。
依序每孔加入50μL终止溶液混匀。在加终止液后
15min以内用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的
光密度(OD值)。
计算每个样品的浓度 :以标准物的浓度为横
坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半
对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由
标准曲线查出相应的浓度 ;再乘以稀释倍数 ;或用
标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归
方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓
度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
1.3 统计学处理
所有数据用SPSS 11.0软件进行统计分析,计量
资料以均数±标准差表示,组间比较采用成组设计
的t检验。
2 实验结果
2.1 墓头回提取液对小鼠宫颈癌U14模型血清VEGF
的影响
见表1。
表1 墓头回提取液对小鼠宫颈癌
U14模型血清VEGF的影响
组别 n 剂量(mg·kg-1·d-1) VEGF(pg/mL,x—±s)
空 白 组 10 12.00±2.77**
模 型 组 10 - 83.13±25.34
低剂量组 10 375 71.74±20.16
中剂量组 10 750 67.58±19.14*
高剂量组 10 1500 54.27±18.23**
顺 铂 组 10 3 76.16±21.71
注 :与模型组比较*P<0.05,**P<0.01。
由表1可以看出,空白组小鼠血清中含有微
量的VEGF,接种U14肿瘤后,模型组血清中VEGF
的含量明显增高,与空白组相比有统计学意义
(P<0.01);墓头回提取液高、中剂量组与模型组比较
血清中VEGF量降低,有统计学意义(P<0.05),提示
墓头回提取液高、中剂量可以降低肿瘤小鼠血清中
异常增高的VEGF的量。
3 讨 论
肿瘤的生长和转移离不开新生血管的形成,新
生血管不仅为肿瘤细胞增殖提供营养,且促进肿瘤
的生长及转移播散,而血管生成的关键是血管内皮
细胞的增殖,VEGF作为一种最重要的血管生长因
子在血管生成中起着至关重要的作用[7]。
本实验以荷U14宫颈癌小鼠为动物模型,观察
结果显示墓头回提取液能降低宫颈癌U14荷瘤小鼠
血清中血管内皮细胞因子(VEGF)的含量,并呈量
效关系,高、中剂量组血清中VEGF含量显著低于模
型组(P<0.05)。
由此笔者认为,墓头回提取液对宫颈癌U14小
鼠具有一定的抗肿瘤作用,其作用机制可能是通过
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“创新是一个民族进步的灵魂”。十六大报告提
出了建设小康社会的教育奋斗目标,“形成全民学
习、终身学习的学习型社会,促进人的全面发展。”
早在上世纪60年代,法国著名教育家保罗·朗格就
已经提出了终身教育的概念并论述了学习型社会的
基本内涵。70年代,联合国教科文组织提出了“向
学习化社会前进”的目标。90年代,美国政府将“把
美国变成人人学习之国”做为教育发展战略。可见,
构建学习型社会,促进人的全面发展已成为世界各
国领导人及教育界学者的共识。高等院校、高职院
校、成人教育学院、远程教育院所等办学模式的多元
化协调发展成为建构学习型社会的重要组成部分。
医学成人教育做为医学终身教育的一支办学
力量,在建立学习型社会中具有不可忽视的作用。
它在办学形式上有着自身特点及发展特色。在面临
政策限制的困境及窘局的情况下又亟待改革和创
新。
1 医学成人教育在医学终身教育中的作用及特点
医学人才的培养脱离不开它的实践经验性,所
以医学生的培养更不可能一蹴而就。“医生越老越
值钱”的俚语就说明医务工作者需要不断实践、终
身学习。单纯的高等院校学历教育,无法满足知识
爆炸,科技飞速更新的时代对医务人员的要求。“生
命所系,性命相托”,医务人员的知识快速更新及高
素质是民心所向。医学成人教育为医务人员提高学
历层次,加强专业知识掌握,提高业务能力提供了一
条可循之路。医学成人教育有以下特点 :(1)夜大
和函授等灵活机动的办学形式更有利于学生利用业
余时间充电。(2)入学准入门槛较低,有利于吸收
高考落榜及医学类中专层次的学员,普及大众化教
建立学习型社会与医学成人教育创新探析
孙延娜
(辽宁中医药大学继续教育学院,辽宁 沈阳 110032)
摘 要 :构建学习型社会是国家政策,时事所需。医学成人教育是医学终身教育的重要承载体。从医学成人教
育在医学终身教育中的作用及特点、面临问题、专业开办情况及目前医学相关培训现状等方面探讨了建立学习型社
会中医学成人教育的发展问题。
关键词 :学习型社会; 医学成人教育
中图分类号 :G40-032 文献标识码 :A 文章编号 :1673-842X (2010) 04- 0086- 02
收稿日期 :2009-10-22
基金项目 :辽宁省教育科学规划‘十一五’规划课题(JG08EB008)
作者简介 :孙延娜(1977-),女,辽宁鞍山人,实验师,硕士,研究方向 :受体及受体后信号传导及教学管理研究。
Constituting a Study-orientated Society and Innovating Explore of Medical Education for Adults
SUN Yan-na
(Continuous Educational Department of Liaoning University of TCM, Shenyang 110032, Liaoning, China)
Abstract :To constitute a study-orientated society is one of our countrys policy and meets the
current needs. Medical education for adults is an important institution of life-long education. This article
discusses the developing problems of the traditional medical education for adults under this environment
by investigating the fuction and characteristics of adults education in life-long medical education, present
problems, the operation of the major and the medicine-related training situation.
Key words :study-orientated society; medical education for adults
调控VEGF的表达,从而达到抑制新生血管生成,最
终实现拮抗肿瘤生长的作用。近年来从中药及植物
中提取并用于肿瘤治疗的成分越来越多[8],植物提
取成分已成为新抗肿瘤药物的重要来源。本实验为
墓头回提取物中具有抗肿瘤活性单体的分离及抗肿
瘤新药的开发提供一定的实验依据,其具体的抗癌
机制有待进一步探讨。◆
参考文献
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