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表达的影响 〔J〕 .新疆医科大学学报 , 2005, 28 (3):224
(2008-11-11　收稿)
〔编校　薛丽萍〕
墓头回提取液对小鼠宫颈癌 U14细胞株抑制增殖的实验研究①
蒋秋燕　唐乾利②③　方　刚②　钟　璐②　广西中医学院第一附属医院 (广西　南宁)　530023
中国图书分类号　R73-36+1　　文献标识码　A　　文章编号　 1001-4411 (2009) 15-2130-03
① 2007年广西自然科学基金资助项目 (课题编号:桂科自 0728183)
②广西中医学院
③通讯作者
【摘　要】　目的:探讨墓头回提取液对小鼠宫颈癌 U14细胞株体外生长的影响。方法:以不同药物浓度和不同时间作用
于宫颈癌 U14细胞株后 , 采用 MTT法检测其对细胞增殖的影响 , 并通过倒置显微镜观察细胞形态学变化。结果:墓头回提取液
对宫颈癌 U14细胞有一定的抑制作用 , 其抑制率与药物浓度 、 作用时间有关系;倒置显微镜观察细胞胞体变长 , 颗粒感增强 , 细
胞浆减少 , 细胞质减少 , 细胞脱落呈悬浮状 , 可见细胞碎片。结论:墓头回提取液可抑制小鼠宫颈癌 U14细胞株的增殖。
【关键词】　墓头回提取液　宫颈癌 U14细胞　抑制增殖
Experimentalresearchoninhibitiveeffectofdiversifoliouspatriniarootextractson
U14 cellineofcervicalcancerinrats
JIANGQiu-Yan, TANGQian-Li, FANGGangetal.TheFirstAfiliatedHospitalofGuangxiColegeofTraditional
ChineseMedicine, Nanning530 023, Guangxi, China
〔Abstract〕 　Objective:ToexploretheinhibitiveefectofdiversifoliouspatriniarootextractsonU14 celllineofcervicalcancerin
ratsinvitro.Methods:Afterdealedwithdifferentmedicinedensityandthedifferenttime, theproliferationofcervicalcancerU14cellline
wasdetectedbyMTTmethod, cytomorphologychangewasobservedunderinvertedmicroscope.Results:Thediversifoliouspatriniarootex-
tractssuppressedtheproliferationofU14celllineofcervicalcancer, theinhibitionratewasrelatedtomedicinedensityandtime;granular
sensationofcellsstrengthened, thecytoplasmandcytoplasmareduced, thefaledoffcelassumedsuspendedshape, celfragmentsareobvi-
ous.Conclusion:ThediversifoliouspatriniarootextractsmaysuppresstheproliferationofU14 cellineofcervicalcancerinrats.
〔Keywords〕 　Diversifoliouspatriniarootextracts;U14 cellineofcervicalcancer;Suppressionofproliferation
　　墓头回又名脚汗草 、 箭头风 , 为败酱科败酱属糙叶败酱
(PatriniaScabraBge)及异叶败酱 (PatriniaHeterophylaBge),
草本植物 , 药用根 、 茎或全草。味稍苦 、 性温 , 有特殊撷草
样臭气 , 主治崩中 、 赤白带下 、 跌打损伤 〔1〕。近年来研究证
明墓头回有杀伤肿瘤细胞作用 〔2〕 , 本课题组前期实验研究证
实墓头回提取液可以降低 U14宫颈癌小鼠的血液粘度而起到
抗肿瘤的作用 〔3〕。本研究采用 MTT法观察墓头回提取液对体
外培养小鼠宫颈癌 U14细胞株增殖的抑制作用 , 并对其形态
变化进行初步观察。
1　材料与方法
1.1　材料与仪器
1.1.1　细胞株　小鼠宫颈癌 U14细胞株购自上海药物研究
所 , 由广西中医学院药理实验室传代保存。细胞用含有 10%
灭活小牛血清 、 100 U/ml青霉素 、 100 μg/ml链霉素的 RPMI
-1640培养液于 37 ℃ 5%CO2条件下培养。
1.1.2　药物的制备　墓头回原药材 1.0kg, 经鉴定为异叶败
酱 , 粉碎后用 5 000 ml蒸馏水浸泡 0.5 h, 水煎煮 2次 , 水提
取液冷却后与 75%乙醇以 10∶1比例醇沉 10 h, 真空过滤器过
滤 , 合并 2次滤液 , 加热浓缩至 100 ml, 水浴加热 , 得到浸
膏 150 g, 保存备用 , 临用时取 5 g浸膏高压灭菌后 , 以 1640
培养液配制成所需浓度。
1.1.3　试剂及仪器　MR-300酶标仪为美国产 , 倒置显微镜
为日本产。 MTT(噻唑蓝)购自 Sigma公司 , RPMI1640和小
牛血清为 Gibco公 司 产 品 , 其 余 均 为 国 产 分 析 纯 试
剂。
1.2　方法
1.2.1　噻唑蓝 (MTT)法确定墓头回提取液对宫颈癌 U14细
·2130· 中国妇幼保健 2009年第 24卷
胞体外生长的抑制作用　参照 Latime等的方法 〔4〕 , 取对数生
长期的宫颈癌 U14细胞 , 浓度为 5 ×103个 /L, 加入到 96孔
板 , 每孔加含细胞的培养液 180 μl, 置 37 ℃5% CO2培养箱
孵育 24h后 , 以依次加入终浓度为 0.1、 0.2、 0.3、 0.4、 0.5
mg/ml的墓头回提取液 , 同时以 1640培养液作为空白对照
组 , 每孔的终体积均为 200μl, 分别培养 24 h、 48 h、 72 h后
加入 20μlMTT(2 g/L), 37 ℃5% CO2培养箱孵育 4 h后 ,
弃上清 , 每孔加入 DMSO200 μl, 于 492 nm波长处测定吸光
度 OD值 , 每个浓度平行测定 3孔。按下列公式求出生长抑制
率 (IR), 实验重复 3次取平均值。
抑制率 IR/%=(1-实验组平均 A值 /空白对照平均 A
值) ×100%
1.2.2　细胞形态学观察　倒置显微镜观察:细胞爬片后 , 分
别加入 0.2、 0.3、 0.4 mg/ml浓度的墓头回提取液作用 72 h
后 , 倒置显微镜观察 , 摄片。
1.3　统计学处理　所有数据用 SPSS11.0软件包分别作单因
素方差分析 , 计量资料结果以均值 ±标 准 差 (x ±s)表
示。
2　结果
2.1　MTT法检测结果　MTT法检测不同浓度 、 不同时间墓
头回提取液对 U14细胞细胞抑制的效果 , 结果表明 , 墓头回
提取液对 U14细胞细胞体外生长具有一定的抑制作用 , 其抑
制作用随时间 、 浓度的增加而不断加强 , 呈现时效 、 量效关
系 (不同浓度之间比较的方差分析结果 , F=1 411.457, P<
0.01;不同时间各组之间的方差分析结果 , F=258.368, P
<0.01)。见表 1。
表 1　墓头回提取液对 U14细胞细胞
增殖的抑制率 (x±s, n=9)
药物浓度
(mg/ml)
时间
24h 48 h 72 h
0.1 0.019 1±0.003 7 0.065 7±0.010 4 0.158 9±0.074 9 F=258.368
0.2 0.257 7±0.037 1 0.322 6±0.010 5 0.416 0±0.016 6 P<0.01
0.3 0.346 1±0.017 2 0.472 8±0.011 9 0.535 4±0.012 3
0.4 0.501 3±0.010 6 0.555 3±0.010 1 0.620 1±0.012 9
0.5 0.560 6±0.017 9 0.615 7±0.014 3 0.653 3±0.012 7
F=1 411.457, P<0.01
2.2　倒置显微镜结果　肿瘤细胞形态学变化:空白对照组
U14细胞呈单层生长 , 多角形或短梭形 , 胞核圆形或椭圆形 ,
胞浆透亮 , 多突起 , 具有较好的折光性 , 胞浆丰富透亮 , 部
分细胞内可见分泌颗粒 (图 1)。 0.2、 0.3、 0.4 mg/ml浓度
的墓头回提取液作用细胞 72 h后观察 , 可见细胞密度明显减
少 , 胞体变长 , 细胞内颗粒感增强 , 细胞间隙逐渐增宽 , 细
胞胞质减少 , 胞浆减少 , 细胞脱落呈悬浮状 , 存活细胞减少 ,
细胞核碎裂 , 可见细胞碎片 , 随着墓头回提取液作用浓度的
增加 , 上述现象更加明显 (图 2)。
　　可见细胞镶嵌排列 , 呈栅栏状或成腺趋势生长。
图 1　小鼠 U14细胞 (×20)
　　可见细胞损伤明显 , 颗粒感明显增强 , 胞浆溶解, 培养液中大量
死亡细胞和细胞碎片。
图 2　0.4 mg/ml浓度墓头回提取液作用 72h细胞 (×20)
3　讨论
据统计 , 世界范围内每年大约有 50万左右的宫颈癌新发
病例 , 占所有癌症新发病例的 5%;其中 80%的病例发生在
发展中国家 , 我国则占 3/5, 而且年轻宫颈癌的发病率和死亡
率有明显升高的趋势 〔5〕。
中药作为抗肿瘤药 , 具有有效成分种类多 、 抗瘤谱广 、
副作用小的特点 , 因而日益受到人们的重视。近年来以中药
的提取物来研制抗癌有效制剂 , 是挖掘开发抗肿瘤药的重要
途径之一 〔6, 7〕。据统计 〔8〕 , 来源于植物药的抗癌制剂占其抗癌
药总数的 32.25%。墓头回在我国广大的地区均有出产 , 在我
国医药史上应用时间悠久 , 尤其是在妇产科方面。本实验以
墓头回提取液的 5种浓度分别作用于宫颈癌 U14细胞 24、 48、
72 h后 , 发现随着药物浓度的增加 、 作用时间的延长 , 抑制
率也增加。低剂量墓头回提取液 (0.1 mg/ml)对 U14细胞的
抑制作用并不明显;而浓度为 0.2、 0.3、 0.4mg/ml墓头回提
取液作用 U14细胞 , 其抑制率的量效关系明显;0.5mg/ml与
0.4mg/ml的墓头回提取液抑制率相当 , 而各药物浓度作用
72 h后效果最明显。因此 , 本实验选择浓度为 0.2、 0.3、 0.4
mg/ml的墓头回提取液作用 U14细胞 72 h后 , 通过倒置显微
镜主要从细胞体积 、 细胞质感 、 细胞浆 、 细胞质等方面进行
·2131·蒋秋燕等　墓头回提取液对小鼠宫颈癌 U14细胞株抑制增殖的实验研究　第 15期　
形态学观察 , 与对照组比较 , 主要的变化为细胞数量减少 ,
同时细胞胞体变大 、 边缘模糊 , 颗粒感增强 , 细胞脱落呈悬
浮状 , 可见细胞碎片。证实墓头回提取液能够抑制宫颈癌
U14细胞的增殖 , 并显示了良好的应用前景。 因此进一步探
讨其抗癌的效能和机制 , 深入进行临床研究具有重要意义。
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(2008-12-10　修回)
〔编校　刘莹琦〕
HSG/MFN2和 nm23在卵巢癌中的表达及其意义①
白　云　姜广建②　李卫红③　华北煤炭医学院生物科学系 (河北　唐山)　063000
中国图书分类号　R711.75　　文献标识码　A　　文章编号　1001-4411 (2009) 15-2132-03
①国家自然基金资助项目 (编号: 30770247)
②通讯作者
③华北煤炭医学院医学实验动物中心
【摘　要】　目的:探讨 HSG/MFN2和 nm23在卵巢癌发生 、 发展过程中的作用及意义。方法:用免疫组化法检测 HSG/
MFN2和 nm23在不同卵巢组织中的表达情况。结果:①HSG/MFN2阳性染色主要位于细胞浆 , 呈棕黄色颗粒 , 正常卵巢组织 、
良性卵巢肿瘤 、 恶性卵巢癌组 , HSG/MFN2的阳性表达率分别为 43.3%、 46.7%和 73.3% ;与正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤组
比较 , 恶性卵巢癌组 HSG/MFN2表达率呈上升趋势 , 差异均有统计学意义 (P<0.05)。 ②nm23阳性染色主要位于细胞基质中 ,
为棕黄色细颗粒。正常卵巢组织 、 良性卵巢肿瘤 、 恶性卵巢癌组 nm23的阳性表达率分别为 26.7%、 43.3%和 70.0% ;与正常
卵巢组织和良性卵巢肿瘤组比较 , 恶性卵巢癌组 nm23表达率呈上升趋势 , 差异均有统计学意义 (P<0.05)。 结论:HSG /
MFN2和 nm23在恶性卵巢癌组织中表达上调 , 与卵巢癌淋巴结转移和临床病理分期密切相关 , nm23蛋白低表达的卵巢癌发生
转移的危险性高 , 提示 nm23能显著抑制肿瘤转移。
【关键词】　HSG/MFN2　nm23　卵巢癌　免疫组化
ExpressionandsignificanceofHEG/MFN2andnm23 inovariancancer
BAIYun, JIANGGuang-Jiang, LIWei-Hongetal.DepartmentofBiologicalScience, TheNorthChinaCoalMedical
Colege, Tangshan063000, Hebei, China
〔Abstract〕 　Objective:Toexplorethefunctionandsignificanceofhyperplasiasuppressorgene/mitofusin-2 (HSG/MFN)and
nm23 inthecourseofoncogenesisandgrowthofovariancancer.Methods:TheexpressionlevelsofHSG/MFN2andnm23 indiferentovari-
antissuesweredetectedbyimmunohistochemistryassay.Results:①ThepositivestaningofHSG/MFN2 locatedmainlyincytoplasm, the
positiverateofHSG/MFN2 innormalovariantissues, benignovariantissuesandmalignantovariantissueswere43.3%, 46.7% and
73.3%, respectively;thepositiverateofHSG/MFN2 inmalignantovariantissueswassignificantlyhigherthanthoseinnormalovariantis-
suesandbenignovariantissues(P<0.05).②Thepositivestaningofnm23 locatedmainlyincytoplasm, thepositiverateofnm23 innor-
malovariantissues, benignovariantissuesandmalignantovariantissueswere26.7%, 43.3%and70.0%, respectively;thepositiverate
ofnm23inmalignantovariantissueswassignificantlyhigherthanthoseinnormalovariantissuesandbenignovariantissues(P<0.05)
.Conclusion:Theup-regulationofHSG/MFN2 andnm23 inmalignantovariancanceriscorrelatedwithlymphaticmetastasisandpatho-
logicstaging, ovariancancerwithlowlevelofnm23 ispronetometastasis, whichindicatestheinhibitiveeffectofnm23ontumormetasta-
sis.
〔Keywords〕 　Hyperplasiasuppressorgene/mitofusin-2;nm23;Ovariancancer;Immunohistochemistry
　　HSG/MFN2基因是我国学者陈光慧等在 1997年利用差异
显示技术得到的一个新基因 , 发现这一基因可以抑制 Ras-
Raf-ERK-MAPK途径 , 从而有效地阻遏细胞周期和抑制细
·2132· 中国妇幼保健 2009年第 24卷