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红葱乙醇提取物的抗炎镇痛及壮阳作用



全 文 :44 中 国 临 床 药 理 学 杂 志
第 31 卷 第 1 期 2015 年 1 月(总第 183 期)
红葱乙醇提取物的抗炎镇痛及壮阳作用
Anti - inflammatory,analgesic and strengthening Yang activities of ethanol extract
from Eleutherine plicata
收稿日期:2014 - 05 - 16
修回日期:2014 - 10 - 27
基金项目:广东省教育部产学研结合基金资助
项目(2009B090300216)
作者简介:闵庆喜(1990 - ),男,硕士研究生,
主要从事中药化学研究
通信作者:朱全红,教授
Tel:(020)61648770
Fax:(020)61648770
E - mail:zqh@ smu. edu. cn
闵庆喜1,吴佩芳1,朱全红1,
王红星2
(1. 南方医科大学 中医药学院,广州 510515;
2. 广州白云华南生物科技有限公司,广州
510545)
MIN Qing - xi1,WU Pei - fang1,
ZHU Quan - hong1,
WANG Hong - xing2
(1. School of Chinese Medicines,
Southern Medical University,Guangzhou
510515,China;2. Guangzhou Baiyun
Huanan Bio - Tech Co.,Ltd,Guangzhou
510545,China)
摘要:目的 研究红葱乙醇提取物(EEEP)的抗炎、镇痛及壮阳作用。方法 将
动物随机分为空白组,阳性对照组,EEEP 高、中、低剂量组,采用二甲苯致耳肿
胀、致毛细血管通透性增加模型,醋酸扭体法疼痛模型,连续给药 4 d,计算耳肿
胀抑制率、染料渗出抑制率、扭体反应抑制率;采用正常雄性大鼠模型,连续给药
7 d,记录扑捉潜伏期、扑捉次数、射精次数。结果 95%,70% EEEP的低、中、高
3个剂量组与空白组相比,分别对二甲苯致小鼠耳肿胀、致皮肤毛细血管通透性
增加以及小鼠扭体反应有明显的抑制作用;但 70%EEEP对扑捉潜伏期、扑捉次
数、射精次数无显著影响,但随着给药剂量的增加,呈现出扑捉次数、射精次数增
加的趋势。结论 EEEP具有明显的抗炎、镇痛作用,并且对正常雄性大鼠的一
般性行为有增强的趋势。
关键词:红葱;抗炎;镇痛;壮阳
DOI:10. 13699 / j. cnki. 1001 - 6821. 2015. 01. 014
中图分类号:R977. 12;R285. 5 文献标志码:A
文章编号:1001 - 6821(2015)01 - 0044 - 04
Abstract:Objective To study the anti - inflammatory,analgesic and
strengthening Yang activities of ethanol extract from Eleutherine plicata
(EEEP). Methods Mices or rats were divided into the blank group,
positive control group,EEEP of the low - dose group,middle - dose
group and high - dose group. The models of ear edema in mice,increa-
sing blood capillary permeability of the skin induced by dimethylbenzene
and the twist induced by acetic acid with administration for 4 days were
used to study the inhibition ratio of ear edema,leakage of dye,writhing
response. An model of normal male rats with administration for 7 days
was used to study capture incubation period (CIP),capture times (CT)
and ejaculation times. Results Compared with blank group,high - dose
group,middle - dose group and low - dose group of 95% ,70% EEEP
have obvious inhibitory effects on ear edema,increasing capillary per-
meability of skin in mice induced by dimethylbenzene and the twist re-
spectively,but no significant effect on CIP,CT and ejaculation times.
However,with the increase of the dose,it showed a tendency to increase
CT and ejaculation times. Conclusion EEEP has significant anti - inf-
la-mmatory,analgesic activities and definite effects on sexual behaviours
of normal male rats .
Key words:Eleutherine plicata;anti - inflammatory;analgesia;strengthe-
ning Yang
Chin J Clin Pharmacol 45
Vol. 31 No. 1 January 2015(Serial No. 183)
红葱(Eleutherine plicata)为鸢尾科(Iridaceae)红
葱属(Eleutherine)植物,又名小红蒜[1]。鳞茎入药,味
甘、辛,性微温,养血补虚,活血止血,主治体虚乏力、
头晕心悸、关节痛、跌打肿痛、吐血、咯血、衄血、崩漏
及外伤出血[2]。本实验采用二甲苯致小鼠耳肿胀、皮
肤毛细血管通透性增高两种非特异炎症模型及醋酸
扭体法,观察红葱乙醇提取物(EEEP)的抗炎、镇痛作
用;通过观察给药后雄性大鼠的性行为,研究 EEEP
的壮阳作用。
材料与方法
1 材料
药品与试剂 红葱,采集于广州华南生物科技有
限公司药材基地,经马骥教授鉴定为鸢尾科红葱 E.
plicata鳞茎,EEEP[3 - 4]制备成浓缩液,配制 3 个浓度
4,8,16 g·kg -1;地塞米松,规格:每片 0. 75 mg,批号:
120701,广东华南药业集团有限公司生产;阿司匹林,
规格:每片 50 mg,批号:120404,舒泰神(北京)生物制
药股份有限公司生产;他达拉非,规格:每片 20 mg ,
批号:A972230,波多黎各 Lilly del Caribe Inc. 生产;黄
体酮注射液,规格:每支 20 mg /mL,批号:120402,浙
江仙琚制药股份有限公司生产;苯甲酸雌二醇注射
液,规格:每支 1 mg /mL,批号:090801,上海通用药业
股份有限公司生产。95%乙醇,天津市富宇精细化工
有限公司生产;丙酮,天津市永大化学试剂开发中心
生产;冰醋酸,广东光华化学厂有限公司生产;伊文思
蓝 (EB),中国医药集团上海化学试剂公司提供;二甲
苯,天津市大茂试剂厂生产。
仪器 GG17R系列旋转蒸发仪,上海申生科技有
限公司产品;微量移液器,德国艾本德 Eppendorf 股份
公司产品;8453 紫外可见光分光光度计,美国 Agilent
公司产品。
动物 SPF 级昆明小鼠 160 只,雌雄各半,体重
(20 ± 2)g;SPF级 SD大鼠,雄性 75 只,雌性 20 只,体
重(180 ± 20)g,均由南方医科大学实验动物中心提
供。许可证号:SCXK(粤)2011 - 0015。
2 实验方法
2. 1 分组与给药
动物随机分为 5 组:空白组,阳性对照组,高、中、
低 3 个剂量实验组。抗炎镇痛试验中,各组均灌胃给
药,连续给药 4 d。雄性大鼠性功能影响实验中,阳性
对照组性行为测试前 1 h 给药 1 次,其他各组分别灌
胃给药,每天 1 次,连续给药 7 d。
2. 2 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响[5]
空白组,给予等体积 0. 9%NaCl;阳性对照组给予
地塞米松 0. 01 g·kg -1;低、中、高 3 个剂量实验组,分
别给予 95%EEEP 4,8,16 g·kg -1。
每组 12 只小鼠,末次给药 40 min后,于小鼠右耳
(两面)均匀涂抹二甲苯(30 μL /只),左耳不涂,作为
对照。20 min 后,将小鼠颈椎脱臼处死,用直径为 8
mm的打孔器沿左右耳同一部位打下圆耳片,在电子
天平上称重,右耳与左耳重量之差即为肿胀度,并计
算肿胀抑制率(inhibition ratio of swelling,IRS)。
IRS(%)=(平均肿胀度blank -平均肿胀度test)/
平均肿胀度blank × 100%
2. 3 对二甲苯致小鼠皮肤毛细血管通透性增加的
影响[6]
空白组,给予等体积 0. 9% NaCl;阳性对照组,给
予阿司匹林 1 g·kg -1;低、中、高 3 个剂量实验组,分
别给予 95%EEEP 4,8,16 g·kg -1。
每组 10 只小鼠,末次给药 60 min 后,小鼠尾静
脉注射 0. 5%伊文思蓝、0. 9%NaCl溶液 0. 1 mL /20 g,
并立即于小鼠右耳(两面)均匀涂抹二甲苯(30
μL /只)。30 min后,将小鼠颈椎脱臼处死,用直径为 8
mm的打孔器沿右耳边缘打下圆耳片,将致炎的圆耳
片剪成数片,置于丙酮 -水(7 ∶ 3)2 mL 内浸泡 72 h,
将伊文思蓝染料渗出,离心,上清液于 590 nm 处测吸
光度值。
2. 4 对小鼠醋酸致扭体反应的影响[7]
空白组,给予等体积 0. 9% NaCl;阳性对照组,给
予阿司匹林 1 g·kg -1;低、中、高 3 个剂量实验组,分
别给予 70%EEEP 0. 4,0. 8,1. 6 g·kg -1。
每组 10 只小鼠,末次给药 40 min 后,均腹腔注
射 0. 6%醋酸 0. 2 mL,记录 20 min内扭体的次数。扭
体反应评判标准:小鼠呈现腹部内凹、腹前壁紧贴笼
底、臀部歪扭以及后肢伸张的特殊姿势。抑制率 =
[1 -(扭体反应次数test /扭体反应次数blank)]× 100%。
2. 5 对雄性大鼠性功能的影响[8]
空白组,给予等体积蒸馏水;阳性对照组,给予他
达拉非 2. 1 mg·kg -1;低、中、高 3 个剂量实验组,分
别给予 70%EEEP 0. 26,1. 3,6. 5 g·kg -1。
每组 15 只大鼠,分别在性行为测试前 48,4 h,雌
性大鼠皮下注射苯甲酸雌二醇 20 μg 和黄体酮 500
μg(分别用香麻油 0. 1 mL溶解)来诱导雌鼠发情。给
药 1 h后,将雄性大鼠放入观察笼中,15 min 后,放入
雌鼠,观察并记录 40 min 内雄性大鼠的捕捉潜伏期、
捕捉次数和射精次数。
46 中 国 临 床 药 理 学 杂 志
第 31 卷 第 1 期 2015 年 1 月(总第 183 期)
结 果
1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
与空白组比较,95% EEEP 高、中、低剂量实验组
均能显著降低二甲苯致小鼠耳肿胀度,结果见表 1。
表 1 红葱乙醇提取物(实验组)对二甲苯致小鼠耳肿胀度的
影响
Table 1 Effect of ethanol extract from Eleutherine plicata (test
group)on ear edema in mice induced by dimethylbenzene
Group No.
Dose
(g·kg -1)
Degree of swelling
(mg)
Inhibition ratio
(%)
Normal 9 11. 23 ± 3. 64
Model 11 0. 01 5. 74 ± 1. 89** 48. 9
Test
Low 9 4 6. 31 ± 2. 60** 43. 8
Middle 12 8 3. 89 ± 2. 64** 65. 3
High 8 16 4. 95 ± 1. 29** 55. 9
Compared with normal group,* P < 0. 05,**P < 0. 01
2 对二甲苯致小鼠皮肤毛细血管通透性增加的影响
与空白组比较,95% EEEP 高、中、低剂量实验组
均能显著抑制二甲苯所致小鼠皮肤毛细血管通透性
的增加,结果见表 2。
表 2 红葱乙醇提取物对二甲苯致小鼠皮肤毛细血管通透性
增加的影响
Table 2 Effect of ethanol extract from Eleutherine plicata on
blood capillary permeability of the skin in mice induced by dimeth-
ylbenzene
Group No.
Dose
(g·kg -1)
A
Inhibition ratio
(%)
Normal 10 0. 17 ± 0. 12
Model 9 1 0. 10 ± 0. 03* 40. 0
Test
Low 10 4 0. 10 ± 0. 04* 41. 8
Middle 9 8 0. 08 ± 0. 06** 54. 1
High 9 16 0. 06 ± 0. 03** 61. 6
Compared with normal group,* P < 0. 05,**P < 0. 01
3 对小鼠醋酸致扭体反应的影响
由表 3 可见,与空白组相比,70% EEEP 高、中、低
剂量实验组的扭体次数显著减少,有明显的镇痛作用
(P < 0. 01)。
4 对雄性大鼠性功能的影响
由表 4 可见,与空白组相比,70% EEEP 的低、中、
高剂量实验组能提高雄性大鼠对雌性大鼠的扑捉次
数及射精次数,但差异未见统计学意义(P > 0. 05)。
表 3 红葱乙醇提取物对小鼠醋酸扭体反应的影响
Table 3 Effect of ethanol extract from Eleutherine plicata on twist
induced by acetic acid
Group No.
Dose
(g·kg -1)
Writhing
times
Inhibition ratio
(%)
Normal 10 42. 0 ± 2. 4
Model 10 1 18. 4 ± 1. 9** 56. 1
Test
Low 10 0. 4 19. 7 ± 14. 4** 53. 1
Middle 10 0. 8 18. 6 ± 6. 7** 55. 7
High 9 1. 6 17. 3 ± 6. 4** 58. 8
Compared with normal group,* P < 0. 05,**P < 0. 01
表 4 红葱乙醇提取物对雄性大鼠性功能的影响
Table 4 Effect of ethanol extract from Eleutherine plicata on sex-
ual function of male rats
Group No.
CIP
(s)
CT
(frequency)
Ejaculation time
(frequency)
Normal 13 114. 7 ±114. 2 5. 5 ±6. 7 0. 15 ±0. 38
Model 13 169. 0 ±108. 7 11. 5 ±7. 7* 1. 23 ±1. 79*
Test
Low 13 172. 0 ±140. 4 9. 2 ±5. 8 0. 62 ±0. 96
Middle 15 169. 0 ±269. 1 8. 1 ±9. 6 0. 47 ±1. 06
High 15 352. 6 ±359. 3 5. 6 ±5. 0 0. 27 ±0. 78
CIP:Capture incubation period;CT:Capture times;Compared with normal
group,* P < 0. 05,**P < 0. 01
另外,随着 70%EEEP的剂量增加,雄性大鼠对雌性大
鼠的扑捉次数及射精次数有增加的趋势。
讨 论
抗炎镇痛药用途广泛,目前应用最广的是非甾体
类抗炎药(NSAIDs),以阿司匹林、扑热息痛、布洛芬
为代表[9]。但 NSAIDs 有许多潜在的严重不良反应,
在用药初期大多不明显,但长期用药,尤其是长期大
剂量用药可能出现消化道溃疡及出血,血小板功能障
碍,肝肾毒性,影响心血管系统,出现过敏反应、神经毒
性等不良反应,这些不良反应绝大多数与该类药抑制正
常组织的前列腺合成有关[10]。因此,寻求高效低毒的
抗炎镇痛药成为了医药工作者们努力的新方向。
本研究发现,95% EEEP 高、中、低剂量实验组均
能显著抑制二甲苯致小鼠耳肿胀及小鼠皮肤毛细血
管通透性增高。在二甲苯致小鼠耳肿胀试验中,中剂
量组抑制效果最优;在二甲苯致小鼠皮肤毛细血管通
透性增加试验中,随着 95%EEEP剂量的增加,抑制效
果增强。而 70%EEEP对醋酸致小鼠疼痛反应有明显
的抑制作用。本实验室前期研究发现,95% EEEP 对
Chin J Clin Pharmacol 47
Vol. 31 No. 1 January 2015(Serial No. 183)
醋酸致小鼠疼痛反应的抑制作用不明显[11],提示红
葱提取工艺的不同对镇痛作用有不同的影响。
对雄性大鼠的扑捉潜伏期、扑捉次数、射精次数
的观察研究表明,70% EEEP 对正常雄性大鼠无明显
的壮阳作用。但随着给药剂量的增加,雄性大鼠的扑
捉次数、射精次数也增加,表明其具有一定的壮阳作
用。而不同的提取工艺对提取物的药理活性具有很
大的影响,因此红葱的壮阳作用还有待进一步研究。
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单侧肾积水大鼠用药后第 1 天,造影组大鼠左肾细胞
凋亡率与对照组比较差异无统计学意义;解除梗阻
后,造影组大鼠左肾细胞凋亡率较对照组增高,同时,
造影组大鼠肾 Bax mRNA 表达亦明显上调,提示 Bax
基因介导肾小管细胞过度凋亡可能是造影剂急性肾
损害和不可逆肾损伤的主要原因。
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