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斑马水塔花的组织培养和快速繁殖



全 文 :云南热作科技 第 卷26 25
斑马水塔花(Billbergia sebrina)是一种观赏凤
梨,是凤梨科水塔花属多年生附生草本植物。其叶
硬革质,绿色,有白色横向斑纹而具名;穗状花序
细长,弯垂,基部具红色苞片 ~ 枚,阔披针形;2 3
小穗疏生,银白色,有刺;萼片橙红色,尖端带紫
黄色;小花紫色,是一种具观叶、观花二者兼备的
观赏凤梨。斑马水塔花的繁殖一般采用分株繁殖,
繁殖系数低;播种繁殖,种子的发芽率极低,不易
形成规模化生产。笔者用斑马水塔花的种子诱导愈
伤组织及不定芽,形成斑马水塔花的快繁方法,希
望能为其它观赏凤梨的组织培养和快速繁殖提供一
定的参考。
材料与方法1
培养无菌苗1.1
采用斑马水塔花成熟种子,用 的酒精浸泡70%
~ ,用25 30s 0.1%HgCl2消毒 ,无菌水洗 ~ 次10min 4 5
后,接种在 蔗糖 ·1/2MS+ 15g L-1( )的培养基pH5.8
上,置于培养室( ± )℃、光照 ·26 2 10h d-1、 光 照
强度 条件下培养无菌幼苗。1500 lx
愈伤组织的诱导和分化1.2
切取幼苗茎尖组织接种到诱导愈伤组织培养基
上。培养基为 ~ ·MS+6-BA0.0 3.0mg L-1(单位下
同) ·+NAA0.2mg L-1(单位下同);MS+6-BA1.0+
~NAA0.0 1.0[ ]1-2 。培养基均附加蔗糖 ·30g L-1、 琼
脂粉 ·5g L-1, 为 。培养条件同上。pH 5.8
不定芽的继代和增殖1.3
将分化出的芽丛分割转移到继代和增殖的培养
基上,培养基为 ~ ;MS+6-BA1.0 2.0+NAA0.2 MS+
~ 。培养基均附加蔗糖 ·KT1.0 2.0+NAA0.2 30g L-1、
琼脂粉 ·5g L-1, 为 。培养条件同上。pH 5.8
生根与移栽1.4
不定芽伸长至 ~ 时,自基部切下,接种到生根2.5 3.0cm
培养基上。生根培养基为 ,附加 、 ~MS KT 0.5 NAA0.5 1.0
或 、 ~ 、蔗糖 ·KT0.5 IBA0.5 1.0 30g L
-1
、琼脂粉 ·5g L
-1
, 为pH
。培养5.8 条件同上。
带根小植株开瓶炼苗 ~ 后移植到基质中,基2 3d
质是经生物菌肥处理后的甘蔗渣与泥炭土、珍珠岩
按一定比例配制而成(甘蔗渣∶泥炭土∶珍珠岩=
∶ ∶ )。保湿培养,成活率可达 以上。6 3 1 95%
结果与讨论2
不同激素、生长素对愈伤组织诱导效果的影响2.1
种子萌发的幼苗伸长到 左右时,切取芽尖1cm
接种到诱导愈伤组织的培养基上, 后外植体切口7d
处膨大,出现淡黄色的愈伤组织, 左右形成颗粒15d
状愈伤组织,在愈伤组织上开始分化出不定芽。30d
后整个外植体全部愈伤化,并产生 ~ 个不定芽。3 4
不同的激素和生长素配比对愈伤组织的诱导效果不
同(表 ),在附加 和 的 种培养基上,有1 6-BA NAA 9
种诱导出愈伤组织,诱导率在 以上。其中8 30.0% 6-
最好,诱导的愈伤组织多、颗粒大,BA1.0+NAA0.2
颜色淡绿色,愈伤组织诱导率达 ;其次是96.7% 6-
斑马水塔花的组织培养和快速繁殖
梁国平,肖三元,杨焱
(云南省热带作物科学研究所 生物技术中心 ,,云南 景洪 666100)
摘要:试验筛选出斑马水塔花的诱导愈伤组织培养基 ·MS+6-BA1.0mg L-1 ·+NAA0.2mg L-1,愈伤组织诱导率
达 ;继代增殖培养基 ·96.7% MS+6-BA2.0mg L-1 ·+NAA0.2mg L-1,增殖倍数达 ~ 倍;生根培养基8 9 MS+KT
·0.5mg L-1 ·+NAA0.5mg L-1,生根率达 。幼苗经炼苗后,移栽到经菌肥处理的甘蔗渣∶泥炭土∶珍珠岩100%
= ∶ ∶ 的基质上,成活率达 以上。6 3 1 95%
关键词:斑马水塔花;种子;组织培养;快速繁殖
中图分类号:  文献标识码:  文章编号: ( )S682.190.353 A 1009-1335 2002 04-0026-03
收稿日期:2002-07-10
云南热作科技 Journal of Yunnan Tropical Crops Science & Technology 2002,25(4):26-28 CN53-1064/S
DOI:10.16005/j.cnki.tast.2002.04.005
云南热作科技 Journal of Yunnan Tropical Crops Science & Technology 2002,25(4):1-3 CN53-1064/S
,诱导率 。在培养基中只加BA1.0+NAA0.5 90.0%
不加 的,不能诱导出愈伤组织,在外植体NAA 6-BA
基部会产生 ~ 条根;而加入一定量的 不加1 2 6-BA
能诱导出愈伤组织。在加入 的组合中,NAA 6-BA1.0
随着 浓度的增加,愈伤组织的诱导率逐渐减NAA
少。这说明 在诱导愈伤组织的过程中起到很大6-BA
的作用,但并非 的量越大,愈伤组织的诱导率6-BA
越高,而是 与 的配比适合,诱导率才会提6-BA NAA
高。
不同生长调节物质对不定芽分化的影响2.2
培养 时, 种培养基中有的开始分化出不定15d 9
芽。 后观察(表 ), 种培养基共接种 管30d 2 9 270
(每管接一块),有 管诱导出不定芽,总数163 399
个,平均每块愈伤组织 个芽,平均诱导率2.4
。其中以加入 的培养基诱导60.4% 6-BA1.0+NAA0.2
的愈伤组织多、颗粒大,颜色淡绿色,分化的不定
芽也多、粗壮,诱导率达 ,诱导出不定芽100% 120
个,平均每块愈伤组织出 个不定芽。而随着4 6-BA
浓度的增加,愈伤组织减少、颗粒小,愈伤组织有
似海绵化,颜色淡黄色,分化的不定芽少,生势细
弱。加入 的,不定芽的诱导率仅6-BA3.0+NAA0.2
,平均每块愈伤组织只出 个芽。而加入40.0% 1.2 6-
的组合中,随着 浓度的增加,分化的不BA1.0 NAA
定芽减少,而不定根的数量反而增多。这说明NAA
对愈伤组织和不定芽的诱导有促进作用,但是NAA
浓度的增加不利于愈伤组织和不定芽的分化,却对
根的分化有利。
不同激素对不定芽继代增殖的影响2.3
为了进一步提高不定芽的分化能力,设计了 种4
激素组合的继代增殖培养基,将愈伤组织接种 后25d
观察分化情况,结果表明(表 ), 种激素组合都3 4
能分化出不定芽,其中以 为最佳,6-BA2.0+NAA0.2
分化出的不定芽成丛生状、且多,达 个,分化率315
达 ,增殖倍数是 倍;其次是100% 9 6-BA1.0+NAA
,分化率虽然达到 ,但是增殖倍数只有0.2 100% 4
倍。而另外两个组合不定芽的分化率、增殖倍数都
不高,反而不定根的数量随着 浓度的提高而增KT
加,在愈伤块上也能见到不定根。后两个组合的分
化率、增殖倍数分别是 、 和 、 。这68.5% 1.5 34.3% 1.3
说明在前两个组合中加入 对不定芽的分化有6-BA
利,而一定量的 对不定芽的分化有促进作用;NAA
后两个组合中加入 明显不利于不定芽的分化,反KT
而对不定根的分化有促进作用。
幼苗根系的诱导与移栽2.4
当幼苗伸长到 ~ 高时,从基部切下转接到2 3cm
生根培养基上。为了更好地诱导出不定根和促进幼
苗的伸长生长,我们设计了 种生根培养基进行培5
表 不同激素和生长素对愈伤组织诱导的影响 1
激素与生长素比 接种数 产愈数 产愈率( )%
6-BA0.0+NAA0.2 30 0 0
6-BA0.5+NAA0.2 30 12 40.0
6-BA1.0+NAA0.2 30 29 96.7
6-BA1.5+NAA0.2 30 25 83.3
6-BA2.0+NAA0.2 30 23 76.7
6-BA3.0+NAA0.2 30 21 70.0
6-BA1.0+NAA0.0 30 9 30.0
6-BA1.0+NAA0.5 30 27 90.0
6-BA1.0+NAA1.0 30 17 56.7
表 不同生长调节物质对不定芽分化的影响 2
激素与生长素比 接种数 分化数 不定芽总数 平均分化数 分化率( )%
6-BA0.0+NAA0.2 30 0 0 0 0
6-BA0.5+NAA0.2 30 22 44 2.0 73.3
6-BA1.0+NAA0.2 30 30 120 4.0 100
6-BA1.5+NAA0.2 30 24 60 2.5 80.0
6-BA2.0+NAA0.2 30 23 35 1.5 76.7
6-BA3.0+NAA0.2 30 12 14 1.2 40.0
6-BA1.0+NAA0.0 30 14 20 1.4 46.7
6-BA1.0+NAA0.5 30 28 98 3.5 93.3
6-BA1.0+NAA1.0 30 10 8 0.8 33.3
合 计 270 163 399 2.4 60.4
第 期 梁国平等:斑马水塔花的组织培养和快速繁殖4 27
云南热作科技 第 卷28 25
养。结果发现(表 ),在加入 和4 KT0.5+NAA0.5
的两种培养基上, 左右可从幼苗基KT0.5+NAA1.0 7d
部看到根点, 后不定根的生根率达到 ,不30d 100%
定根伸长分别达 和 ,平均每株幼苗长 和 条8 5cm 5 6.5
根,而且幼苗生势粗壮。在培养基中只加入NAA0.5
的,诱导的不定根数、根长和幼苗生势较上述两种
培养基差。而 和 两种培KT0.5+IBA0.5 KT0.5+IBA1.0
养基虽然生根率也达 ,但不定根数更少,幼苗100%
生势更弱。可以看出, 对不定根的诱导有利,NAA
而加入一定量的 对不定根的诱导有促进作用。KT
幼苗在生根培养基上培养 ~ 后,长至 ~25 30d 4
,将瓶盖打开,炼苗 ~ 后,分别移栽到经生6cm 2 3d
物菌肥处理后的甘蔗渣与泥炭土、珍珠岩按 ∶ ∶6 3 1
比例配制的基质上。上述 种培养基培养的幼苗,以5
培养基培养的幼苗移栽成活率最高,KT0.5+NAA0.5
达到 以上;其次是 的幼苗,成活95% KT0.5+NAA1.0
率 ;再次是 的幼苗,成活率 ;后90.3% NAA0.5 75.5%
两种幼苗的成活率分别只有 和 。51.2% 68.5%
试验结果表明,斑马水塔花诱导愈伤组织的最
适培养基为 ;继代增殖培养基MS+6-BA1.0+NAA0.2
为 ;生根壮苗培养基为MS+6-BA2.0+NAA0.2 MS+
。斑马水塔花的愈伤组织诱导和分化KT0.5+NAA0.5
可以结合起来进行,在诱导愈伤组织的过程中,时
间长一些也可分化出不定芽来,但是分化的频率不
高。而在继代增殖培养过程中,适当提高 的浓6-BA
度,不仅使不定芽的数量提高,满足工厂化育苗,
而且能提高斑马水塔花的变异率。我们在组培过程
中获得一些变异苗,变异率虽然只有 ,但为我1.5%
们丰富花卉品种提供一条有效的途径。
节约生产成本可以提高组培苗在市场中的竞争
力,过去育苗基质主要使用商业泥炭土和珍珠岩,
生产成本较大,现在通过改进,利用糖厂弃去的甘
蔗渣,经生物菌肥发酵处理后与泥炭土、珍珠岩按
一定比例配制,不仅提高幼苗的成活率,而且大大
节约成本。实践证明:生物菌肥发酵处理后的甘蔗
渣,纤维分解快,有机肥效高,而且不易产生病原
菌,是一种价廉物美的基质。
表 不同激素对不定芽继代增殖的影响3
激 素 组 合 接种数 分化数 不定芽总数 分化率( )% 增殖倍数
6-BA1.0+NAA0.2 35 35 140 100 4
6-BA2.0+NAA0.2 35 35 315 100 9
KT1.0+NAA0.2 35 24 36 68.5 1.5
KT2.0+NAA0.2 35 12 15 34.3 1.3
表 不同培养基对幼苗生根的影响4
培 养 基 接种数 生根率% 平均根数 平均根长 幼苗生势
NAA0.5 50 100 4 5.5 中等
KT0.5+NAA0.5 50 100 5 8 粗壮
KT0.5+NAA1.0 50 100 6.5 5 粗壮
KT0.5+IBA0.5 50 100 2.5 4 细弱
KT0.5+IBA1.0 50 100 3 4.5 细
参考文献:
梅贝坚,艾华.凤梨科水塔花属三种植物的组织培养快速繁殖[J].植物生理学通讯, ,( ):[1] 1989 3 49
洪燕萍,林顺权,林庆良.凤梨科植物的离体培养综述[J].亚热带植物科学, , ( ): -[2] ( ) 2001 30 2 70 74
(下转第 页)50
云南热作科技 第 卷50 25
上采取措施促进花芽萌发生长,培养健壮的花穗,
是夺取龙眼丰产的重要环节。
促进花芽及时萌发3.1
龙眼在 月底至 月上旬萌动抽出的花芽自然成1 2
花率高,但由于早春天气变化无常,在花芽萌动生
长期,如遇到干旱或低温会使花芽不能按时抽出,
导致成花率差。因此,必须采取有效措施促进花芽
适时萌发。其主要措施为:①灌水,在 月中下旬对1
遇旱的果园进行全园灌水,弱树可以施水肥,促进
花芽适时萌发。②叶面追肥,在 月中下旬全园喷一1
次“营养丰产素”或绿芬威 号等叶面肥,可促进花1
芽萌发,待花芽萌动后可再喷一次,可促进花芽生
长发育。
培养健壮的花穗3.2
龙眼花穗的质量直接影响其坐果率和产量。花
穗徒长过长,雌花率低,坐果率也低;花穗过短,
则花量少,产量低。在生产栽培上应培养长约 ㎝30
左右、侧穗花枝较多的粗壮花穗,这种花穗雌花比
率大,坐果率高。花穗形成期应做好以下工作:
( )消除小叶对花穗生长的影响 。 ~ 月份1 2 3
是花穗快速分化发育的时期,这期间气温的高低决
定龙眼混合花穗是趋向于发育成花或是营养枝。若
气温高于 ℃时,则混合花穗上的叶片生长占优18
势,新叶的生长消耗了大量养分,会导致花穗发育
中途终止,使花蕾萎缩脱落,逆转发育成营养枝。
因此,这个时期要及时采取措施消除花穗上的小
叶,保证花穗的正常生长发育。具体方法是:用人
工摘除花穗上刚展开的红色嫩叶,如果小叶太多
时,可用乙烯利(浓度为 ㎏水加 ~ 乙烯1 100 150mg
利)进行喷杀,但使用时要十分谨慎,避免杀伤老
叶和花蕾。
( )控制花的数量,提高花的质量。龙眼的花2
穗长,花量大,如不加以控制,会因花穗长花量大
而消耗大量养分,引起大量落花落果,出现坐果率
低或花而不实现象。在生产上,常采用疏花或喷
“龙眼丰产素”等措施来控制花量,提高花质,效
果很好。在花穗长约 ㎝且明显现蕾时,喷一次20
“龙眼丰产素”,可防止花穗徒长,抑制部分雄花
的开放,推迟开花期,在花期有效地减少树体营养
消耗,提高雌花比率,增加坐果率。
( )施壮花肥。在 月上中旬,对生长势弱的3 2
植株或秋冬施肥不足的果园,应补施壮花肥,促进
花穗生长,以培养健壮的花穗。此次肥宜施速效的
多元肥,不宜偏氮,以防花穗徒长。树冠 ~ 的5 6m
植株每株施复合肥 ~ ㎏。对于花期叶色褪绿较1 1.5
明显的植株,可用营养丰产素或绿芬威 号进行一次1
叶面追肥。
( )灌水。如果花穗生长期天气干旱,要及时4
灌水,保证花穗正常生长。
参考文献:
吴仁山.龙眼栽培工作历[M].广西:广西科学技术出版社,[1] 2000
石尧清,彭成绩.南方主要果树生长发育与调控技术[M].北京:中国农业出版社, .[2] 2001 219
(上接第 页)28
Tissue culture and quick propagation of Billbergia sebrina
LIANG Guo-ping, XIAO San-yuan, YANG Yan
(Tropical Crops Research Institute of Yunnan, Jinghong 666100, China)
Abstract:It is screened out that the inducing culture medium of Billbergia sebrina · is MS+6-BA1.0mg L-1+NAA
·0.2mg L-1, ; ·the inductive rate is up 96.7% Multiplicative culture medium is MS+6-BA2.0mg L-1 ·+NAA0.2mg L
-1, ~ ; ·the multiple is 8 9 times Rootage culture medium is MS+KT0.5mg L-1 ·+NAA0.5mg L-1,the root is 100%.
The transplanting survive rate of young seedling was over 95% on planting medium, the bagasse:turf:perlite=6:3:1.
Key words:Billbergia sebrina; seed; tissue culture; quick propagation