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广寄生及其不同寄主黄酮总量和微量元素含量的研究



全 文 :第 27卷 ,第 3期 光 谱 实 验 室 Vo l . 2 7 , No . 3
2 0 1 0年 5月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory May , 2 0 1 0
广寄生及其不同寄主黄酮总量和
微量元素含量的研究
① 联系人 ,电话: ( 0775) 2666297; E-mai l: yup ry@ 126. com
作者简介:庞瑞媛 ( 1957— ) ,女 ,广西兴业县人 ,高级实验师 ,主要从事生物化学研究工作。
收稿日期: 2009-08-26;接受日期: 2009-09-22
庞瑞媛① 罗济文 杨婷婷 王政玲 庞启毅
(玉林师范学院东校区教务处 广西玉林市教育东路  537000)
摘 要 用紫外分光光度法测定广西玉林产 5种广寄生及其不同寄主的黄酮总量 ;原子吸收分光光度
法测定广寄生和寄主的 Fe、Mg、 Zn、 Ca、Mn、 Cu、 Na、 K 8种微量元素的含量。结果表明: 寄主不同 ,广寄生黄
酮总量和微量元素含量存在差异 ;广寄生的黄酮总量比寄主高 ,广寄生的 K、Mg元素含量比寄主高。
关键词 广寄生 ;寄主 ;黄酮总量 ;微量元素
中图分类号: O657. 31   文献标识码: A   文章编号: 1004-8138( 2010) 03-1094-04
1 引言
广寄生 [Tax illus chinensis (D. C ) Danser ]是桑寄生科 ( Loranthaceac )钝果寄生属 ( Tax illus
Van Tiegh )植物 ,别名寄生茶 ,是 2005年版《中华人民共和国药典》中收载的桑寄生 ,具有补肝肾 ,
强筋骨 ,祛风湿 ,安胎等功效 [1 ]。黄酮类化合物和微量元素都是影响桑寄生药用功效的重要物质。虽
然近年来对桑寄生科药材的有效化学成分的研究较多 [2— 4 ] ,但对广寄生及其不同寄主黄酮总量和
微量元素含量的分析研究未见报道 ,本实验分析了广寄生及其 5个不同科属的寄主黄酮总量和 8种
微量元素含量 ,为进一步研究广寄生的药理作用及其开发利用提供实验数据。
2 实验部分
2. 1 材料
材料为广寄生及其不同的寄主。 寄主植物分别是桃金娘科 (Myrtaceae )水蒲桃 [ Syzygium
jambos ( L . ) Alston ]、苏木科 (Caesalpiniaceae )红花羊蹄甲 (B .blakeana Dunn. )、芸香科 ( Rutceae )
柚 [Citrus grandis (L ) Osbeck ]、蔷薇科 (Rosaceae )枇杷 [Eriobotrya japonica ( Thunb. ) Lindl . ]、樟
科 (Lauraceae )荫香 (Cinnamomum burmannii Bl . )共 5科 5种植物。采集叶子作为实验材料 ;每一采
集点的叶子是同一株植物同一枝条上 ,老嫩程度一致 ,每种材料共采集 5个点 ,地点是广西玉林市
城区。寄主植物均为庭园绿化树 ,在工业污染少 ,空气质量好的区域。采集时间 2008年 7月 10日。
采集的材料分别用清水冲洗干净 ,于烘箱中 70℃烘干至恒重 ,测定黄酮用的材料用高速中药粉
碎机粉碎 ,过 60目筛 ;测定微量元素用的材料研钵研细过 40目筛。
2. 2 仪器与试剂
T U-1901双光束紫外可见分光光度计 (北京普析通用仪器公司 ) ; AA-6601F型原子吸收分光
光度计 (日本岛津制作所 ) ; KQ-3200DB型数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器公司 ) ; ESJ60-4全
自动电子分析天平 (深圳市朗普电子科技公司 ) ; SHZ-88水浴恒温震荡器 (江苏省金坛市医疗仪器
厂 ) ; RE-2000旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器厂 ) ;钾、钠、铁、镁、钙、锌、铜、锰空心阴极灯 (河北省
衡水市宁强光源厂 ) ; 50mL聚四氟乙烯微波增压消解罐 (四川省分析测试研究所 ) ; KJ25B-A美的
微波炉 (广州美的微波炉制造公司 ) ; U PT-1优普系列超纯水机 (成都超纯水科技有限公司 )。
芦丁生化试剂 (上海试剂二厂 ) ;无水乙醇、石油醚、 NaNO2、 Al( NO3 ) 3、 NaOH和 Mn、 Cu、 Zn、
Mg、 Fe、 Ca、Na、 K储备液 (浓度为 1mg· mL- 1 ) ;以上的试剂均是分析纯。 实验用水为高纯水。
2. 3 实验方法
2. 3. 1 总黄酮的提取及测定
提取方法:用超声波提取法 [5 ]。称取各样品 1g ,按料液比 1∶ 40的比例各加入 70%的乙醇溶液
40mL,摇匀 ,恒温水浴摇床振荡浸提 24h,超声萃取 (功率为 60W,温度为 60℃ ) ,萃取时间 45min,真
空抽滤 ,滤渣加 70%乙醇 40mL超声萃取 45min,真空抽滤 ,合并 2次滤液置于旋转蒸发器浓缩至约
20mL,用同等体积的石油醚萃取 2次 ,除去叶绿素和油脂杂质后 ,用 70%的乙醇溶液定容于 100m L
的容量瓶中。
校准曲线的制备: 准确称取干燥恒重的芦丁 20mg ,用 60%乙醇溶液溶解并定容于 100mL容量
瓶中 ,得到 0. 2mg /mL标准母液。 分别准确量取标准母液 0. 0、 1. 0、 2. 0、 3. 0、 4. 0、 5. 0、 6. 0mL置于
25mL容量瓶中 ,加入 60%乙醇 8mL、 5% NaNO2 1mL,摇匀放置 8min,再加入 10% Al( NO3 ) 3溶液
1mL,摇匀放置 6min,加 1mol /L氢氧化钠 8mL,用 60%乙醇溶液补至刻度 ,摇匀放置 , 10min后 ,以
60%乙醇作空白对比 ,在 510nm处分别测定其吸光度 ,电脑自动显示回归方程: y= 0. 0119x - 0.
0011,相关系数 r= 0. 9998。 表明有良好的线性关系 ,可作为黄酮总量的测定方法。
总黄酮的测定: 将提取出的样品液各取 1mL于 25mL的容量瓶中 ,参照校准曲线的制作过程 ,
在波长 510nm处测定其吸光度值。 根据电脑显示的样品浓度计算总黄酮得率。
按以上的提取和测定方法做精密度实验。 以柚广寄生样品做回收率实验。
2. 3. 2 微量元素的测定
样品的消解:用微波消解法 [6 ] ,称取 0. 5000g样品 ,置于聚四氟乙烯消解罐中 ,加入 10mL HNO3
和 2mL H2O2 ,静置 30min左右 ,置于微波炉中 ,先用低火加热 6min,接着中低火加热 3min,再低火
2min,最后取出冷却至室温。把消解液移入 100mL容量瓶中 ,用高纯水稀释至刻度。
标准工作溶液:用高纯水配备各元素的标准储备液 ,作为标准工作溶液系列 ,浓度见表 1。
仪器工作条件: 经多次实验确定了仪器的最佳参数条件 ,见表 2。
测定方法: 按表 2工作条件用火焰原子吸收光谱法测定标准溶液的吸光度 ,仪器自动处理数
据 ,并显示校准曲线 ,校准线性方程及相关系数见表 3。 在同一条件下 ,以空白溶液作参比 , 测定各
样品溶液吸光度 ,根据校准曲线、稀释倍数 ,计算各元素的含量。
为了考核方法的可靠性和准确性 ,取荫香样品溶液和柚、柚广寄生样品溶液 ,按本方法作荫香
的精密度实验 (相对标准偏差 RSD)和柚、柚广寄生的 Ca、 K元素加标回收率实验。
表 1 各元素标准溶液 (μg· mL- 1 )
元素 1 2 3 4 5 6 元素 1 2 3 4 5 6
Fe 0. 00 0. 05 0. 50 1. 00 2. 50 5. 00 Mn 0. 00 0. 05 0. 10 0. 50 1. 00 1. 50
Mg 0. 00 0. 20 0. 40 0. 50 0. 80 1. 00 Cu 0. 00 0. 01 0. 05 0. 10 0. 20 0. 30
Zn 0. 00 0. 10 0. 20 0. 30 0. 40 0. 80 K 0. 00 1. 00 2. 00 3. 00 4. 00 5. 00
Ca 0. 00 1. 00 5. 00 10. 00 15. 00 20. 00 Na 0. 00 0. 20 1. 00 2. 00 2. 50 4. 00
1095第 3期 庞瑞媛等:广寄生及其不同寄主黄酮总量和微量元素含量的研究
表 2 仪器最佳参数条件
元素 波长
( nm)
光谱通带
( nm)
灯电流
( m A)
燃烧器高度
( m m)
乙炔流量
( L /min)
空气流量
( L /min)
Fe 248. 3 0. 2 12 7. 0 2. 2 8. 0
Mg 285. 2 0. 5 8 7. 0 1. 8 8. 0
Zn 213. 9 0. 5 8 7. 0 2. 0 8. 0
Ca 422. 7 0. 5 10 7. 0 2. 0 8. 0
Mn 279. 5 0. 2 10 7. 0 2. 0 8. 0
Cu 324. 8 0. 5 6 7. 0 1. 8 8. 0
K 766. 5 0. 5 10 7. 0 2. 0 8. 0
Na 589 0. 2 12 7. 0 1. 8 8. 0
表 3 标准线性方程及相关系数
元素 线性方程 相关系数 元素 线性方程 相关系数
Fe A= 0. 0867874C+ 0. 0173747 0. 9954 M n A= 0. 16654177C+ 0. 00211944 0. 9999
Mg A= 0. 0166541C+ 0. 0856127 0. 9943 Cu A= 0. 12643C+ 0. 00342711 0. 9996
Zn A= 0. 414034C+ 0. 00688767 0. 9970 K A= 0. 141580C+ 0. 0598 0. 9941
Ca A= 0. 0338154C+ 0. 0310827 0. 9980 Na A= 0. 2025939C+ 0. 062714 0. 9996
3 结果与分析
3. 1 加标回收率实验结果
柚广寄生样品的总黄酮回收率是 98. 36% ; 柚的 Ca、 K加标回收率分别是 102. 30% 、 97. 88% ,
柚广寄生 Ca、 K加标回收率分别是 101. 38%、 101. 61% ,因此可知本测定方法准确可靠。
总黄酮含量测定的精密度实验结果 ( RSD% )在 0. 35%— 2. 42%之间 ;微量元素含量的精密度
实验结果 ( RSD% )为 0. 47%— 2. 23%之间 ,测定方法精密度好。
表 4 广寄生及其不同寄主总黄酮含量 (% ,n= 3)
寄主植物 寄生 RSD 寄主 RSD 含量比
水蒲桃 7. 51 0. 52 5. 44 0. 35 1. 38
红花羊蹄甲 2. 53 0. 41 1. 43 0. 99 1. 77
柚树 8. 19 0. 51 1. 78 2. 42 4. 60
枇杷 4. 92 0. 41 1. 29 0. 71 3. 81
荫香 8. 28 0. 45 1. 35 0. 36 6. 13
3. 2 总黄酮含量测定结果
总黄酮含量测定结果见表 4,从表 4中看出 ,不同寄主的广寄生总黄酮含量相差较大 ,这与肖义
军等测定不同寄主红花桑寄生总黄酮含量的结果相同 [ 4] ,寄生植物总黄酮含量最高的是荫香广寄
生 ,达 8. 28% ,最低的是红花羊蹄甲广寄生只有 2. 53% ,高低比值为 3. 27。5种寄主中总黄酮含量最
高的是水蒲桃 ,达 5. 44% ,含量最低的是枇杷 ,只有 1. 29% ,高低比值为 4. 22。
表 5 广寄生及其不同寄主微量元素含量 (n= 3, mg· g- 1 )
样品 Fe Mg Zn Ca Mn Cu Na K
水蒲桃广寄生 0. 1712 3. 4384 0. 0590 14. 3022 0. 0370 0. 0235 0. 4302 31. 1880
水蒲桃 0. 1243 2. 2992 0. 0216 7. 9264 0. 0244 0. 0152 0. 7128 10. 1292红花羊蹄甲广寄生 0. 0743 3. 7880 0. 0677 13. 7698 0. 0265 0. 0287 0. 5600 27. 6350
红花羊蹄甲 0. 1215 3. 0112 0. 0268 21. 3396 0. 0563 0. 0579 0. 9596 6. 9932柚树广寄生 0. 1379 2. 1070 0. 0235 29. 7000 0. 0160 0. 0120 0. 0450 19. 3600
柚树 0. 1995 1. 6990 0. 0462 20. 9200 0. 0138 0. 0064 0. 1868 8. 8170枇杷广寄生 0. 1039 2. 5640 0. 0710 12. 5400 0. 0200 0. 0076 0. 0273 18. 4700
枇杷 0. 1298 1. 9590 0. 0846 9. 3700 0. 0241 0. 0082 0. 1349 6. 3690荫香广寄生 0. 1132 1. 1976 0. 0391 5. 5488 0. 3364 0. 0032 0. 2934 30. 2080荫香 0. 1605 1. 1232 0. 0335 12. 6638 0. 4446 0. 0043 0. 5065 27. 1270
荫香 RSD(% ) 0. 80 0. 47 0. 93 0. 90 2. 23 2. 19 0. 93 0. 84
1096 光谱实验室 第 27卷
  从本实验广寄生和寄主的总黄酮含量比值上看 ,广寄生总黄酮含量均比其寄主的高 ,说明这 5
种不同寄主的广寄生积累黄酮化合物的能力比其寄主高 ,但这结论是否有普遍性还有待进一步的
研究。
3. 3 微量元素含量测定结果
微量元素含量测定结果见表 5,从表 5中可看出 ,广寄生及其不同寄主的微量元素含量丰富 ,其
中以 K、 Ca、 Mg 3种元素的含量最高 ;广寄生的微量元素含量因寄主不同而发生较大的差异 ,如水
蒲桃广寄生的 K元素含量为 31. 1880mg· g- 1 ,而枇杷广寄生的 K元素含量为 18. 4700 mg· g- 1 ,前
者是后者的 1. 69倍 ;广寄生的 K元素和 Mg元素的含量均比其寄主的高 ,这是否与广寄生积累黄酮
化合物的能力有关联 ,还待进一步的研究。
黄酮类是广寄生的有效成分 ,而微量元素含量水平是决定植物类中药四性 (寒、凉、温、热 )的主
要原因之一。 本实验中 ,不同寄主的广寄生总黄酮含量和微量元素含量相差较大 ,为进一步研究广
寄生的药理作用及其开发利用提供了可靠的实验数据。
参考文献
[1 ]国家药典委员会编 .中华人民共和国药典 (一部 ) [M ].北京:化学工业出版社 , 2005. 210.
[2 ]陈乐生 .桑寄生药理研究 [ J] .陕西中医 , 2000, 21( 11): 520— 521.
[3 ]孙艳秋 ,刘珂 ,王守愚等 .槲寄生的研究进展 [ J ].中草药 , 2000, 31( 6): 471— 474.
[4 ]肖义军 ,陈元仲 ,陈炳华等 .不同寄主红花桑寄生总黄酮提取物抗白血病细胞株 HL-60的研究 [ J ].中国中药杂志 , 2008, 33( 4):
427— 430.
[5 ]李 ,李莉 ,倪永年 .槲寄生中总黄酮化合物提取工艺的研究 [ J ].食品科学 , 2006, 27( 12): 347— 349.
[6 ]黎中良 .微波消解原子吸收光谱法测定八角茴香中金属元素 [ J ].光谱实验室 , 2008, 25( 4): 202— 205.
Study of Total Flavonoids and Trace Element inTaxillus
Chinensis and Their Hosts
PAN G Rui-Yuan  LUO Ji-Wen  YAN G Ting-Ting WANG Zheng-Ling  PAN G Qi-Yi
( Yulin N orm al University ,Yul in ,Guang xi 537000, P. R .Ch ina )
Abstract  The tota l flav onoids of fiv e di fferent kinds o f Tax illus chinensis and thei r hosts
w hich w ere produced in Guangxi Yulin w ere determined by UV spectrophotometry. The atomic
abso rption spect ropho tometry w as used to determine the contents of 8 t race elements in the
Taxil lus chinensis and thei r host, including the Fe, Mg , Zn, Ca, M n, Cu, Na and K. Di fferent ho sts,
the contents of to tal f lav onoids and trace elements in Tax illus chinensis a re di fferent. The content
o f total f lav onoids of Tax illus chinensis was higher than thei r host. And the contents of t race
elements K and M g in parasi tic w ere also higher than that in host.
Key words  Taxil lus Chinensis; Ho st; Total Flav onoids; Trace Element
1097第 3期 庞瑞媛等:广寄生及其不同寄主黄酮总量和微量元素含量的研究