全 文 ：·研究简报·
中药王不留行中刺桐碱和异肥皂草苷分离鉴定和测定
鲁　静　林一星 　马双成
(中国药品生物制品检定所　北京　100050)
　　摘要　　用制备液相色谱从中药王不留行中分离出刺桐碱 、异肥皂草苷等成分 , 进行了结构
鉴定 ,并采用高效液相色谱法测定了不同产地王不留行药材中两种成分的含量。
　　关键词:王不留行　刺桐碱　异肥皂草苷　高效液相色谱法
　　王不留行(麦蓝菜 Vaccaria segetalis的成
熟种子)为常用中药 ,具有行血通经 、催生下
乳 、消肿敛疮的功效 ,近代化学成分药理研究
也有新的进展 ,据报道其含有生物碱 、黄酮 、皂
苷及环肽类等成分。本文报道从王不留行药材
分离鉴定刺桐碱(Hypaphorine),异肥皂草苷
(Isosaponarin)成分 。为比较它们在不同产地
样品中的分布情况 ,建立了高效液相色谱法测
定上述 2种成分含量的方法 ,以期提高该品种
的质量评价手段 。
1　仪器与试药
高效液相色谱仪(美国光谱物理公司):
SP 8800泵;SP 200紫外检测器;SP 4400积分
仪。
制备液相色谱仪(天津高新技术公司):
ZSB-3型输液泵;UV-3型紫外检测器。
试剂:甲醇 、乙醇等为分析纯。
样品:不同产地的王不留行样品(采自河
北邢台 、山东德州 、陕西宝鸡 、江苏南京 、黑龙
江 、四川自贡)。
2　提取与分离
药材细粉 2.5kg ,加石油醚(60 ～ 90℃),
冷浸过夜脱脂。药渣挥干溶剂 ,以 75%乙醇加
热回流提取 4次 ,回收乙醇 ,水液以乙酸乙酯
萃取 3次 ,水液继以正丁醇萃取 4次 , 回收溶
剂 , 得粗提取部分 36.5g 。
以上粗提物 10g ,加少量水溶解后 ,加至
D-101大孔树脂柱 , 以水 1500mL 、30%乙醇
1200mL 洗脱 ,水液弃去 ,稀醇洗脱液回收溶
剂并蒸干。取 500mg 加水 5mL 溶解 ,以制备
液相色谱分离 , 以 20%、30%、35%、40%、
60%甲醇顺序洗脱 ,按出峰情况收集相应色谱
峰流出液 ,分别减压回收溶剂 ,以甲醇-乙醚
结晶 ,得刺桐碱 50mg ,异肥皂草苷 20mg 。
3　鉴定
3.1　刺桐碱　为无色结晶 ,水溶性 , 碘化铋
钾试液反应阳性;mp 246℃,元素分析结果和
核磁共振等测定得分子式 C14H18N2O2 ,理论
值(%)C 68.29 ,H 7.32 ,N 11.38 ,实测值(%)
C 68.58 ,H 7.35 , N 11.19;UV λmax 289 、281 、
274nm;IR Umax cm-1 1640 ,1360;EI-MS m/
z 187(M+-59),143(187-COO-), 130 , 115
(吲 哚 环 ), 59 (N+ (CH3 )3 ), 58
(100%);1HNMR(CD3OD)δppm 3.32(9H , s.
N-(CH3)3 , 3.47(2H , d.J =7.2Hz , H -α),
3.94(1H , t.J =7.2Hz ,H -β ,6.90(1H , m.H
-5), 6.98(1H , m.H -8), 7.20(H , d.J =
8Hz ,H-7),7.26(H , s.H-2), 7.42(1H , d.J
=8Hz , H-6);13CNMR(CD3OD)δppm 125.1
(C-2),109.1(C-3),128.3(C-4),120.0(C
-5),122.6(C-6),119.0(C-7),112.4(C-
8)138.1(C-9), 171.6(COO-),80.7(α-C),
·163·18(3), 1998
海南省药品检验所　海口　570102
DOI :10.16155/j.0254-1793.1998.03.006
24.7(β-C),52.8(N -(CH3)3)。因此该化合
物鉴定为 N ,N ,N-三甲基色氨酸。查阅文献与
自 Erythrina hypaphorus(1911 年)和 Pter-
carous officinalis(1982 年)[ 1]种子提取的 Hy-
paphorine具同一结构 ,中文名称为刺桐碱[ 2] 。
该化合物为首次从王不留行种子中提取得到 。
3.2　异肥皂草苷　黄棕色粉末 ,盐酸—镁粉 ,
三氯化铝试液反应阳性 ,紫外甲醇光谱 λmax
332nm(带 I), 272nm ,证明为黄酮化合物 ,且
与Saponarin的最大吸收波长一致 ,分子中含
6-C 苷;甲醇钠光谱λmax 391nm(带 I),长移
59nm ,且强度不减弱 ,可能有 4-OH 取代 ,醋
酸钠光谱λmax 392nm(带 I),长移 60nm ,结构
中含 7-OH;三氯化铝光谱具有 4个主要吸
收峰 ,λmax 380(带 Ⅰa),344nm(带 Ⅰb), 301nm
(带Ⅱa), 280nm(带 Ⅱb),加酸后无变化 ,证明
不含邻二羟基取代 ,有 5-OH 取代;核磁共
振氢谱δ6.78 ,7.94各为 2个氢 , 归属为B环
芳核质子 ,6.67 ,6.71峰为 H -3 ,H -8质子 ,
支持紫外光谱对结构判断;薄层上酸水解检出
葡萄糖 , FAB-MS m/z 610(M+), 推测其结
构为 5 , 7 ,4-三羟基黄酮-6-C-β-D -葡萄糖-4-
β-D -葡萄糖苷 ,即异肥皂草苷(Isosaponarin)。
以上得到的 2个成分 ,经高效液相色谱分
析 ,归一化法纯度均大于 98%, 作为测定用对
照品 。
4　测定
4.1　色谱条件 　色谱柱:Nucleosil C18 5μm
4.6mm ×220mm;流动相:35%甲醇 10min※
45%甲醇 15min;流速:0.7mL/min;检测波
长:280nm 。在此条件下的色谱结果如图 1。
4.2　实验方法及方法学考察
4.2.1　供试品溶液的制备 　取样品粉末
2.5g ,精密称定 ,加甲醇 25.0mL ,称重 ,水浴
回流 30min ,放冷后 ,补足失重 ,滤过 ,精密吸
取续滤液 10mL ,蒸干 ,残留物以水 6mL 分次
溶解 ,洗涤容器并倾入预先处理好的大孔树脂
柱(1.2cm ×8cm 柱床)顶端 , 分 2 次以水冲
洗 ,每次 2mL , 从第二次开始收集洗脱液于
25mL量瓶中 ,并以 40%乙醇洗脱定容 ,摇匀
后过 0.5μm 微孔滤膜 ,滤液作为供试品溶液。
图 1　王不留行样品色谱图
1.刺桐碱　2.异肥皂草苷
4.2.2　对照品溶液的制备　精密称取刺桐碱
和异肥皂草苷对照品适量 , 加甲醇制成每
1mL 含 0.025 、0.17mg 的溶液 ,作为对照品溶
液。
4.2.3　线性关系的考察　精密吸取对照品溶
液 1.0 、3.0 、5.0 、7.0 、9.0μL 注入液相色谱
仪 ,按色谱条件测得峰面积积分值 ,以进样量
为横坐标 ,峰面积积分值为纵坐标 ,作图及回
归处理 ,得方程:
Y 刺桐碱 =-6122 +84292X 　r =0.9998
Y 异肥皂草苷 =-22714.8 +403980.2X 　r =
0.9998 上述结果表明:刺桐碱在 0.025 ～
0.225μg , 异肥皂草苷在 0.072 ～ 1.548μg 范
围呈良好线性关系 。
4.2.4　重复性试验　按供试品溶液制备方法
处理同一样品 6份 ,依法测定 ,测得含量 ,两成
分 RSD 分别为 2.85%、2.53%。
4.2.5　回收率测定　准确称取已测知含量的
样品 ,定量加入对照品 ,依法测定 ,测得回收率
平均值 102.3%和 99.04%, RSD 分别为
3.32%和 3.28%。
4.2.6　样品测定　取不同产地的样品 ,按供
试品溶液制备方法 ,制备样品 ,并按色谱条件
·164· 药物分析杂志
测定 ,结果见表 1 。
表 1　不同产地王不留行样品含量测定结果(%)
样品产地 刺桐碱 异肥皂草苷
河北邢台 0.068 0.395
河南洛阳 0.075 0.405
山东德州 0.073 0.314
陕西宝鸡 0.061 0.345
江苏南京 0.057 0.375
黑龙江　 0.074 0.418
四川自贡 0.056 0.292
5　讨论
5.1　测定方法采用定时改变流动相配比的洗
脱方式 ,主要克服单一浓度洗脱时间长的问
题 ,能有效改变峰形 ,实验证明色谱重现性良
好。
5.2　不同产地的样品 , 2种成分含量变化范
围不大 ,说明药材品质较为稳定。
参考文献
1 Dantel H Janzen , et al.The Indole Alkaloid , Hypaphorine
and Pterocarpus S eed Protect ion.Phytochemist ry , 1982 , 21
(5):1035
2 张雪吾.英汉药学用语词典.太原:山西科学技术出版
社 , 1994
(本文于 1997年 1月 10日收到)
Separation , Identification and Determination of Hypaphorine
and Isosaponarin in Semen Vaccariae
Lu Jing ,Lin Yixing and M a Shuangcheng
(Nat iona l Inst itute for the Control of Pharm.&Bio.Products ,Beij ing , 100050)
　　Abstract:This paper reports the separation of hypaphorine and isosaponarin from Semen Vac-
cariae by preparatived liquid chromatog raphy , and the ident ification by spect ra data.A HPLC deter-
mination method w as established fo r determination of the tw o components in the crude drug.
　　Key words:Seme Vaccariae ,hypapho rine , isosaponarin ,HPLC
反相高效液相色谱法测定洛伐他汀的血浆药物浓度
孙考祥　吴琳华　胡君茹　黄海燕　田辉凯　樊宏伟
(哈尔滨医科大学附属二院临床药学药物研究所　150086)
　　摘要　　采用反相高效液相色谱法测定血浆中洛伐他汀浓度 , 色谱柱采用 Nova-Pak C18柱
(4μm , 3.9mm×150mm), 柱温控制在 50℃, 流动相为乙腈—磷酸铵缓冲液(0.05mol/mL , pH3.7)(48∶
55 , V/V),检测波长为 238nm ,血浆样品应用 SPE 固相小柱萃取。方法的线性范围为 5 ～ 500ng/m L ,
最低检测浓度为 5ng/mL , 10 、100、500ng/m L 3 种浓度的平均回收率为(92.43±7.18)%, 日内 、日间
RSD 均小于 8%。
　　关键词:高效液相色谱法　洛伐他汀　血药浓度
　　洛伐他汀(Lovastatin)为甲基羟戊二酰辅 酶 A(HMC—CoA)还原酶抑制剂 ,抑制内源性
·165·18(3), 1998