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毛鸡骨草中相思子碱和下箴刺桐碱含量测定



全 文 :— 62 — 现代中药研究与实践2010年第24卷第6期Chin Med J Res Prac,2010 Nov.,Vol.24 No.6
·质量控制与管理·
毛 鸡 骨 草 为 豆 科 相 思 属 植 物 毛 相 思 子 Abrus
mollis Hance. 去除荚果后的干燥全草,又名毛相思
子、大叶鸡骨草,收载于《广西中药材标准》[1]。民
间习惯把毛鸡骨草当作鸡骨草药材入药,用于治疗急
慢性肝炎,或用于煲汤、煮凉茶等保健食疗。近年对
毛鸡骨草的化学成分进行了较系统的研究 [2-5],但对
其质量控制方面的研究报道还较少。相思子碱和下箴
刺桐碱是毛鸡骨草中的主要成分,具有一定的抗炎、
免疫增强和抗肝损伤作用 [6,7] ,可作为毛鸡骨草质量
控制的参考指标。本文采用高效液相色谱法 [8] 对不
同产地和部位毛鸡骨草药材中的相思子碱和下箴刺
桐碱含量进行了比较,为毛鸡骨草药材的质量评价提
供参考依据。
1 实验部分
1.1 仪器与试药
毛鸡骨草中相思子碱和下箴刺桐碱含量测定
黄 平, 麦秋良, 蒙晓芳
(广西中医药研究院,广西 南宁 530022)
摘要 :目的 测定不同产地和部位的毛鸡骨草药材中相思子碱和下箴刺桐碱含量。方法 高效液
相色谱法,色谱柱为 Lichrospher C18(250 mm×4.6 mm,5 μm) ;流动相为水 - 甲醇 - 乙腈 - 冰醋酸 - 三乙胺
(82 ∶ 13 ∶ 5 ∶ 0.2 ∶ 0.3),流速为 :1.0 mL• min-1,检测波长为 220 nm,柱温为室温。结果 测定样品
14 个,相思子碱和下箴刺桐碱两种成分均达到基线分离。结论 方法简捷、快速,结果准确,可为毛鸡骨
草药材的质量评价提供依据。
关键词 :毛鸡骨草 ;相思子碱 ;下箴刺桐碱 ;高效液相色谱法
中图分类号 :R927.2 文献标识码 :A 文章编号 :1673-6427(2010)06-0062-03
Determination of Abrine and Hypahorine in Abrus mollis Hance.by HPLC
HUANG Ping, MAI Qiu-liang, MENG Xiao-fang
(Guangxi Institute of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences, Nanning 530022, China)
Abstact:Objective To establish a method for the determination of abrine and hypaphorine in Abrus
mollis Hance. Methods An HPLC method was performed on Lichrospher C18 column (250 mm × 4.6 mm,5
μm) at room temperature, with water - methanol - acetonitrile - glacial acetic acid - triethylamine (82:13:5:0.2:0.3)
as mobile phase. The fl ow rate was 1.0 mL•min-1,and the detection wavelength was set at 220 nm. Results 14
samples had been determinated. Abrine and hypaphorine had been basically isolated. Conclusion The method is
simple, accurate and reproducible. It can be used for quality control of Abrus mollis Hance.
Key words: Abrus mollis Hance.;abrine;hypaphorine;HPLC
1200 高 效 液 相 色 谱 仪 包 括 二 极 管 阵 列 检 测
器 , Chemstation 色谱工作站(美国安捷伦公司);
B2200S 超声波清洗器(必能信超声上海有限公司);
相思子碱对照品(美国 SIGMA-ALDRICH 公司,纯
度 99%),下箴刺桐碱对照品(纯度﹥ 98%,广西中
医药研究院自制,经 1H-NMR、13C-NMR、HSQC、
HMBC 和 MS 鉴定结构);甲醇和乙腈为色谱纯,三
乙胺和冰醋酸均为分析纯,水为纯净水。所用毛鸡
骨草药材分别采购自广西桂林、来宾、玉林、贵港、
贺州、南宁、百色、崇左、百色等市县及广东省珠海
市,经广西中医药研究院中药室方鼎研究员鉴定品种
为 Abrus mollis Hance.。
1.2 方法与结果
1.2.1 色 谱 条 件 色 谱 柱 为 Lichrospher C18 (250
mm×4.6 mm, 5 μm),流动相为水 - 甲醇 - 乙腈 - 冰醋酸 -
三乙胺(82 ∶ 13 ∶ 5 ∶ 0.2 ∶ 0.3),临用前经过滤、
超声脱气处理 ;流速 :1.0 mL•min-1 ;紫外检测波长
为 220 nm,柱温为室温,进样量为 10 μL。在此色谱
条件下,对照品和样品的色谱图见图 1。
收稿日期:2010-02-20
基金项目:广西科技攻关项目(编号: 0424008-2A)
作者简介:黄 平,研究员,从事中草药化学及质量标准化研究。
DOI:10.13728/j.1673-6427.2010.06.024
— 63 —现代中药研究与实践2010年第24卷第6期Chin Med J Res Prac,2010 Nov.,Vol.24 No.6

1.2.2 溶液的制备 ①对照品溶液的制备 :精密称
取对照品相思子碱和下箴刺桐碱对照品各 5.5 mg,
置于 50 mL 量瓶中,加流动相溶解,定容,摇匀,
制成每 1 mL 含相思子碱和下箴刺桐碱各 0.11 mg 的
对照品混合溶液。 ②样品溶液的制备 :取过 40 目
筛的毛鸡骨草药材粉末约 1.0 g,精密称定,置锥形
瓶中,加流动相 50 mL,称定重量。浸泡过夜。超声
处理(80 W,50 kHz)30 min,放冷,再称定重量,
用流动相补足减失的重量,摇匀,用注射器取上清
液,经 0.45 μm 微孔滤膜过滤,续滤液即为供试品溶
液。
1.2.3 线性关系考察 精密吸取对照品混合储备液
0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL, 分 别 置 10
mL 量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,过滤,即
得系列浓度对照品混合溶液。精密吸取各对照品混合
溶液 10 μL 进样,在 “1.2.1” 项色谱条件下测定。以
对照品浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准工
作曲线并进行回归计算,相思子碱、下箴刺桐碱回归
方程分别为 :
Y = 14.3X + 77.1, r = 0.999 9
Y = 10.4X + 64.5,r = 0.999 9
结果表明相思子碱和下箴刺桐碱浓度均在 1.1~55
mg•L-1 范围内,与峰面积呈良好的线性关系。
1.2.4 精密度试验 精密吸取同一对照品混合溶液 10
μL,重复进样 6 次,测定峰面积,结果相思子碱和下
箴刺桐碱峰面积的 RSD(n = 6) 分别为 1.4 % 和 1.5 %,
表明仪器精密度良好。
1.2.5 重复性试验 精密称取同一批毛鸡骨草样品
(11 号样品)6 份,按 “1.2.2” 项下的方法操作,测
定并计算各份供试品溶液中相思子碱和下箴刺桐碱
的含量。结果相思子碱的平均含量为 0.56 mg•g-1,
RSD = 2.3 % ; 下箴刺桐碱的平均含量为 0.67 mg•g-1,
RSD = 2.5 %。表明方法的重复性良好。
1.2.6 稳定性考察 精密吸取同一批供试品溶液,分
别于 0、3、6、9、12 h 进样测定,计算相思子碱和
下箴刺桐碱的含量,RSD(n = 5)分别为 1.6 % 和 2.0
%。结果表明,供试品溶液在室温条件下 12 h 内稳定。
1.2.7 回收率试验 取已知含量(相思子碱含量为
0.56 mg•g-1,下箴刺桐碱含量为 0.67 mg•g-1)的同批
毛鸡骨草药材(11 号样品)粉末 0.5 g 共 6 份,精密
称定,分别加入浓度为 0.17 mg• mL-1 的相思子碱对
照品溶液和浓度为 0.10 mg•mL-1 的下箴刺桐碱对照
品溶液各 1.0 mL,按 “1.2.2” 项下的方法制备供试溶
液,各取 10 μL 进样测定,结果相思子碱和下箴刺桐
碱的平均回收率(n = 6)分别为 105.6 % 和 102.5 %,
RSD 分别为 2.2 % 和 2.0 %。
1.2.8 样品的测定 分别取不同产地的毛鸡骨草样
品,按 “1.2.2” 项下的方法制备供试品溶液,在 “1.2.1”
项下色谱条件进行分析,以峰面积按外标法计算含
量。不同产地毛鸡骨草中相思子碱和下箴刺桐碱的含
量见表 1。
2 结论
本研究结果表明,不同部位的毛鸡骨草药材中
相思子碱和下箴刺桐碱的含量有所不同。相思子碱在
根部含量最高,其次是茎,最少为叶 ;下箴刺桐碱的
含量在茎部最高,其次是根,最少为叶。对各产地毛
鸡骨草药材中的生物碱含量比较,广西来宾的药材中
相思子碱含量较高,而广西蒙山的则较低 ;广西横县
和南宁药材中下箴刺桐碱的含量相对较高,而百色的
则较低。
参考文献
[1] 广西壮族自治区卫生厅 . 广西中药材标准 [M ]. 南宁 : 广西科学技术出版
社 , 1992,58.
图1 相思子碱和下箴刺桐碱对照品溶液(A)和毛鸡骨草供试液(B)的
色谱图
Fig 1 HPLC chromatograms of references(A)and sample of Abrus moills(B)
1. 相思子碱(Abrine) 2. 下箴刺桐碱 (hypaphorine)
表1 不同产地和部位毛鸡骨草样品中相思子碱和下箴刺桐碱含量测定结果
(mg·g-1)
Tab.1 Contents of abrine and hypaphorine in Abrus mollis from different
habitats (mg•g-1)
样品产地
广西桂林
广西来宾
广西玉林
广西贵港
广西贺州
广西蒙山
广西南宁
广西横县
广西百色
广东珠海
广西崇左(全草)
广西崇左(根)
广西崇左(茎)
广西崇左(叶)
相思子碱
0.21
1.63
0.13
0.19
0.71
0.06
0.16
0.34
0.17
0.16
0.56
0.71
0.54
0.15
下箴刺桐碱
0.23
0.78
0.07
0.19
0.13
0.30
0.34
0.83
0.04
0.17
0.67
0.57
0.69
0.10
样品编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
— 64 — 现代中药研究与实践2010年第24卷第6期Chin Med J Res Prac,2010 Nov.,Vol.24 No.6
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[5] 史海明,温 晶,屠鹏飞 . 毛鸡骨草的化学成分研究 [J]. 中草药,2006,
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[7] 陈学芬,钟正贤,李燕婧,等 . 海帕刺桐碱药理作用的研究 [J]. 中国中
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[8] 黄 平,莫 虎,马雯芳,等 .RP-HPLC 法同时测定鸡骨草药材中的相思
子碱和下箴刺桐碱 [J]. 药物分析杂志,2009,29(10):1702-1704.
目前,糖尿病的治疗药物主要是化学药胰岛素
类、磺酰脲类、双胍类,但在市场上出现治疗糖尿病
的中成药中非法添加磺酰脲类、双胍类降糖化学药,
增加了糖尿病治疗用药的不安全因素。本文参考相关
文献 [1,2],建立了一种同时检测在中成药中添加多种
磺酰脲类化学药物成分的方法,为检查降糖中成药中
非法添加降糖化学药的筛查提供依据。
1 仪器与材料
试药 :格列本脲对照品 ( 中国药品生物制品检
HPLC 法检测降糖中成药添加磺酰脲类药物
潘广洲,孙红刚
(山东省聊城市药品检验所,山东 聊城 252000)
摘要 :目的 建立降糖中成药添加磺酰脲类药物的 HPLC 检测方法。 方法 采用色谱柱为 Diamonsil
ODS(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为 0.02 mol•L-1 醋酸铵缓冲液与乙腈梯度洗脱,流速为 1.0 mL•min-1,
检测波长为 235 nm。结果 选定的色谱条件下,磺酰脲类药物有很好的分离。结论 该法灵敏准确,可作
为检查降糖中成药中非法添加磺酰脲类药物的一种筛查手段。
关键词 :HPLC ;降糖中成药 ;磺酰脲类 ;掺伪鉴别
中图分类号 :R927.1 文献标识码 :A 文章编号 :1673-6427(2010)06-0064-02
Determination of Sulfa Drugs Added to the Hypoglycemic of Chinese Patent Medicine
by HPLC
PAN Guang-zhou, SUN Hong-gang
(Liaocheng Institute for Drug Control, Liaocheng 252000, China)
Abstract: Objective To establish a method for determining sulfa drug which may illegally adulterated
into Chinese patent medicine by HPLC. Methods An HPLC method was performed on a Diamonsil ODS
column(250 mm×4.6 mm,5 μm) with 0.02mol/L ammonium acetate and methanol as mobile phase.The fl ow rate
was 1.0 mL•min-1. The detection wavelength was set at 235 nm. Results Sulfa drugs were separated well under
the selected chromatographic conditions. Conclusion The method was sensitive and accurate. It could be used
as a screening tool to determine sulfa drug illegally added to Chinese patent medicine.
Key words: HPLC; hypoglycemic of Chinese Patent Medicine; sulfa drug; detection of adulteration
收稿日期:2009-12-14
作者简介:潘广洲(1981-),硕士研究生。研究方向:中药学。
定所,批号 :100135-0103)、格列美脲对照品 ( 中国
药品生物制品检定所,批号 :100674-200301)、格
列喹酮对照品 ( 中国药品生物制品检定所,批号 :
100280-200301)、格列齐特对照品 ( 中国药品生物制
品检定所,批号:100269-200402)、格列吡嗪对照品 ( 中
国药品生物制品检定所,批号 :100281-200602)。
样 品 :参 芪 降 糖 胶 囊 ( 河 南 A 厂, 批 号 :
080103),消糖灵胶囊 ( 烟台 A 厂,批号:0708031),
糖尿乐胶囊 ( 吉林 A 厂, 批号 :20080666),格列本
脲 片 ( 山 西 A 厂, 批 号 :0807101), 降 糖 甲 片 ( 吉
林 B 厂, 批 号 :080602), 参 芪 降 糖 胶 囊 ( 河 南 A
厂, 批号 :080611),甘露消渴胶囊 ( 陕西 A 厂, 批