全 文 ：RP-HPLC法同时测定鸡骨草药材中的相思子碱和下箴刺桐碱＊
黄平 ,莫虎 ,马雯芳 ,韦善新
(广西中医药研究院 ,南宁 530022)
摘要　目的:建立测定鸡骨草药材中相思子碱和下箴刺桐碱含量的方法。方法:采用反相高效液相色谱法 , 色谱柱为 Kromasil
C18(250mm×4.6mm, 5 μm),流动相为水 -甲醇 -乙腈 -冰醋酸 -三乙胺(82∶13∶5∶0.2∶0.3),流速为 1.0 mL· min-1 , 检测
波长为 220 nm, 柱温为室温。结果:相思子碱和下箴刺桐碱线性范围均为 1.1 ～ 55 mg· L-1(r=0.9999);平均回收率(n=6)
分别为 104.6%和 103.5%。结论:所建方法简便 、快速 ,结果准确 , 为鸡骨草药材的质量评价提供了可靠的方法。
关键词:鸡骨草;相思子碱;下箴刺桐碱;反相高效液相色谱法
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2009)10-1702-03
RP-HPLCsimultaneousdeterminationofabrine
andhypaphorineinAbruscantoniensis＊
HUANGPing, MOHu, MAWen-fang, WEIShan-xin
(GuangxiInstituteofTraditionalMedicalandPharmaceuticalSciences, Nanning530022, China)
Abstract　Objective:ToestablishamethodforthedeterminationofabrineandhypaphorineinAbruscantoniensis.
Methods:AnHPLCmethodwasadopted.ChromatographicassaywasperformedonKromasilC18 column(250mm×
4.6 mm, 5μm)atroomtemperature, withwater-methanol-acetonitrile-glacialaceticacid-triethylamine(82∶
13∶5∶0.2∶0.3)asmobilephase.Theflowratewas1.0mL· min-1 andthedetectionwavelengthwas220nm.Re-
sults:Theabrineandhypaphorinehadagoodlinearityintherangeof1.1-55mg·L-1(r=0.9999), therecover-
ies(n=6)were104.6% and103.5%, respectively.Conclusion:Themethodissimple, accurateandreproduci-
ble.ItcanbeusedforqualitycontrolofAbruscantoniensis.
Keywords:Abruscantoniensis;abrine;hypaphorine;RP-HPLC
　　豆科相思子属植物鸡骨草 Abruscantoniensis
Hance为中国药典收载的常用中药 ,有清热利湿 、解
毒止痛的功效。除民间配方用药外 ,鸡骨草是生产
鸡骨草胶囊 、鸡骨草丸 、鸡骨草肝炎冲剂等多种中成
药的原料 ,也是我国出口中草药品种之一 。两广民
间还有用鸡骨草煲汤 、煮凉茶的习俗 [ 1] 。为了加强
对鸡骨草药材及其制剂的质量控制 ,前人已对鸡骨
草中相思子碱的含量测定进行了研究 [ 2, 3] ,但对鸡
骨草中下箴刺桐碱的含量测定研究尚未见报道 。由
于下箴刺桐碱是豆科相思子属和刺桐属植物中常见
的生物碱 ,并有一定的生理活性 [ 4 ～ 6] ,可作为鸡骨草
质量控制的指标之一 。作者采用反相高效液相色谱
法同时测定了鸡骨草药材中的相思子碱和下箴刺桐
碱 ,获得满意结果。所建方法简便 、灵敏 、准确 ,为鸡
骨草药材质量评价提供了科学依据。
1　仪器与试药
1200高效液相色谱仪 ,包括二极管阵列检测
器 、Chemstation色谱工作站 (美国安捷伦公司);超
声波清洗器(必能信超声有限责任公司)。相思子
碱对照品 (美国 SIGMA-ALDRICH公司 , 纯度
99%),下箴刺桐碱对照品(纯度 >98%,自制 ,经 1H
-NMR、13 C-NMR、HSQC、HMBC和 MS鉴定结
构);甲醇和乙腈均为色谱纯 ,三乙胺和冰醋酸均为
分析纯 ,水为纯净水 。所用鸡骨草药材分别采购自
广西南宁 、桂林 、梧州等市县以及广州市和珠海市 ,
经广西中医药研究院中药室方鼎研究员鉴定品种为
—1702— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(10)
＊ 广西科技攻关项目(0424008-2A)
第一作者　Tel:(0771)5868986;E-mail:hping1208@yahoo.com.cn
AbruscantoniensisHance。
2　溶液的制备
2.1　对照品混合储备液　精密称取对照品相思子
碱和下箴刺桐碱各 5.5 mg,置于 50 mL量瓶中 ,加
流动相溶解 ,定容 ,摇匀 ,制成每 1mL含相思子碱和
下箴刺桐碱各 0.11 mg的混合溶液。
2.2　供试品溶液　取过 40目筛的鸡骨草药材粉末
约 1.0 g,精密称定 ,置锥形瓶中 ,加流动相 50 mL,
称定重量 ,浸泡过夜。超声处理(80 W, 50 kHz)30
min,放冷 ,再称定重量 ,用流动相补足减失的重量 ,
摇匀 ,用注射器取上清液 ,经 0.45 μm微孔滤膜过
滤 ,续滤液即为供试品溶液 。
3　色谱条件
色谱柱为 KromasilC18 (250 mm×4.6 mm, 5
μm);流动相为水 -甲醇 -乙腈 -冰醋酸 -三乙胺
(82∶13∶5∶0.2∶0.3),临用前经过滤超声脱气处理;
流速 1.0 mL·min-1;紫外检测波长为 220 nm;柱温
为室温;进样量为 10μL。在此色谱条件下 ,对照品
和样品的色谱图见图 1。
图 1　对照品(A)和 9号鸡骨草样品(B)的色谱图
Fig1　HPLCchromatogramsofreferencesubstances(A), No.9
sampleofAbruscantoniensis(B)
1.相思子碱(abrine)　 2.下箴刺桐碱(hypaphorine)
4　方法学考察
4.1　线性关系考察　精密吸取对照品混合储备液
0.1, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0 mL,分别置 10 mL
量瓶中 ,用流动相稀释至刻度 ,摇匀 ,滤过 ,即得系列
浓度对照品混合溶液 。精密吸取各对照品混合溶液
10 μL进样 ,在 “3”项色谱条件下测定。以对照品浓
度为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,绘制标准工作曲线并
进行回归计算 ,相思子碱 、下箴刺桐碱回归方程分别
为:
Y=14.3X+77.1　 r=0.9999
Y=10.4X+64.5 　r=0.9999
结果表明相思子碱和下箴刺桐碱浓度均在 1.1 ～ 55
mg· L-1范围内 ,与峰面积呈良好的线性关系 。
4.2　精密度试验　精密吸取同一对照品混合溶液
10 μL,重复进样 6次 ,测定峰面积 ,结果相思子碱和
下箴刺桐碱峰面积的 RSD(n=6)分别为 1.4%和
1.6%,表明仪器精密度良好。
4.3　重复性试验　精密称取同一批鸡骨草样品(7
号样品 ,广西南宁)6份 ,按 “ 2.2”项的方法操作 ,测
定并计算各份供试品溶液中思子碱和下箴刺桐碱的
含量 。结果相思子碱的平均含量为 0.34 mg· g-1 ,
RSD=2.4%;下箴刺桐碱的平均含量为 0.20 mg·
g-1 , RSD=2.7%。表明方法的重复性良好 。
4.4　稳定性考察　精密吸取同一批供试品溶液 ,分
别于 0 , 3, 6, 9, 12 h进样测定 ,计算相思子碱和下箴
刺桐碱的含量 , RSD(n=5)分别为 1.6%和 2.0%。
结果表明 ,供试品溶液在室温条件下 12 h内稳定。
4.5　回收率试验　取已知含量 (相思子碱含量为
0.34 mg·g-1 ,下箴刺桐碱的含量为 0.20 mg·g-1)
的同批鸡骨草药材(7号样品 ,广西南宁)粉末 0.5 g
共 6份 ,精密称定 ,分别加入浓度为 0.17 mg· mL-1
的相思子碱对照品溶液和浓度为 0.10mg·mL-1的
下箴刺桐碱的对照品溶液各 1.0 mL,按 “ 2.2”项下
方法制备供试溶液。各取 10 μL进样测定 ,结果相
思子碱和下箴刺桐碱的平均回收率(n=6)分别为
104.6%和 103.5%, RSD分别为 2.3%和 2.1%。
5　样品测定
分别取不同产地的鸡骨草样品 ,按 “ 2.2”项下
方法制备供试品溶液 ,在 “3”项色谱条件下进行分
析 ,以峰面积按外标法计算含量 。不同产地鸡骨草
中相思子碱和下箴刺桐碱的含量见表 1。
6　讨论
6.1　提取方法的选择 　有文献报道用甲醇为提取
溶剂 ,用索氏提取器加热回流提取约 2 ～ 3 h[ 2] ,但
经实践觉得此方法操作比较复杂 ,提取物中叶绿素
杂质等也较多 。本文改用超声波提取法 ,操作较简
便 ,可以缩短提取时间。以流动相作为提取溶剂 ,其
中的醋酸有利于生物碱类成分的溶出 ,叶绿素等杂
质的干扰也相对较少。分析超声提取时间在 15 ～
60 min内的提取效果 ,发现超声提取时间超过 30
min后 ,提取液中的相思子碱和下箴刺桐碱含量变
化不大 ,但杂质明显增加。因此选用超声提取时间
为 30 min。
—1703—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(10)
表 1　不同产地鸡骨草样品中相思子碱和
下箴刺桐碱含量测定结果 (mg· g-1)
Tab1　ContentsofabrineandhypaphorineinAbrus
cantoniensisfromdifferenthabitats
编号
(No.)
产地
(origin)
相思子碱
(abrine)
下箴刺桐碱
(hypaphorine)
1 广东广州(Guangzhou, Guangdong) 0.22 0.07
2 广东珠海 (Zhuhai, Guangdong) 0.29 0.09
3 广西玉林 (Yulin, Guangxi) 0.20 0.17
4 广西钦州 (Qinzhou, Guangxi) 1.40 0.42
5 广西金秀 (Jinxiu, Guangxi) 0.29 0.39
6 广西凭祥 (Pingxiang, Guangxi) 1.19 0.46
7 广西南宁 (Nanning, Guangxi) 0.34 0.20
8 广西横县 (Hengxian, Guangxi) 0.75 0.31
9 广西梧州 (Wuzhou, Guangxi) 0.39 0.42
10 广西桂林 (Guilin, Guangxi) 0.18 0.09
6.2　检测波长的选择　利用 DAD检测器在 190 ～
400nm范围内扫描 ,发现相思子碱和下箴刺桐碱样
品的最大吸收波长为 220, 278, 290 nm,分别在三处
波长下对样品进行测试 ,发现在 220nm处灵敏度较
高 ,峰形较好 。因此 ,选择 220nm作为检测波长。
6.3　流动相的选择　参考文献 [ 2] ,选择水 -甲醇
-乙腈 -冰醋酸 -三乙胺溶剂系统 ,并对其中各成
分比例进行了相应的调整;采用本文水 -甲醇 -乙
腈 -冰醋酸 -三乙胺(82∶13∶5∶0.2∶0.3)为流动
相 ,相思子碱和下箴刺桐碱达到基线分离 ,峰形对
称 ,分离度好 。
6.4　小结　比较 10批鸡骨草药材的测定结果可发
现 ,不同产地的样品中生物碱的含量也不相同 ,部分
样品中下箴刺桐碱的含量大于相思子碱。下箴刺桐
碱是豆科刺桐属 、相思子属及黄芪属植物中常见生
物碱 ,可影响一些叶螨的生育[ 4] ,也是一种霉菌性
激素拮抗剂[ 5] 。它曾被认为是一种具有神经毒 ,可
导致惊厥的化合物[ 6] 。目前在一些动物实验中虽
然未能观察到下箴刺桐碱的毒性 [ 7] ,但它仍是一种
值得关注的化合物 。
参考文献
1　BAILong-hua(白隆华), DONGQing-song(董青松), PURui-
ling(蒲瑞翎).StudyonChinesemedicineChicken-boneherbal(中
药鸡骨草研究概况).GuangxiAgricSci(广西农业科学), 2005, 34
(5):476
2　WANGTian-yong(王天勇), YANGWen-yuan(杨文远).Separa-
tionanddeterminationofabrineinabruscantoniensisHancebyre-
versedphasehighperformanceliquidchromatography(鸡骨草和相思
子中相思子碱的反相高效液相色谱分离和测定).ChinJAnalLab
(分析实验室), 1996, 15(6):29
3　SHIHai-ming(史海明), HUANGZhi-qin(黄志勤), WENJing
(温晶), etal.HPLCdeterminationofabrineinAbruscantoniensis
Hance(HPLC法测定鸡骨草药材中相思子碱含量).ChinJPharm
Anal(药物分析杂志), 2007, 27(11):1716
4　OimetryNZ, El-GengaihiS, RedaAS, etal.Biologicalefectsof
someisolatedAbrusprecatoriusL.alkaloidstowardsTetranychuscurti-
caeKoch.AnzSchadlingskdePflanzenschutzUmweltschutz, 1992, 65
(5):99
5　KawanoT, KowanoN, LapeyrieF.Afungalauxinantagonist, hypapho-
rinepreventstheindole-3-aceticacid-dependentireversiblein-
activationofhorseradishperoxidase:inhibitionofcompoundII-me-
diatedformationofP-670.BiochemBiophysResCommun, 2002, 294
(3):553
6　BudavariS.TheMerckIndex.11thed.Rahway:Merck＆Co.Inc,
1989.773
7　Bel-KassaouiB, LamnaouerD, AbdennebliEH, etal.Roleofhypa-
phorineinthetoxicityofAstragaluslusitanicus.NatProdRes, 2008,
22(5):461
(本文于 2008年 6月 5日收到)
—1704— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(10)