全 文 ：毛平车前活性部位调节血脂作用的研究
吴斐华1 ,梁敬钰2 ,陈　荣2 , 余　平2
(1中国药科大学中药药理学教研室;2天然药物化学教研室 , 南京 210038)
【摘　要】　目的:研究毛平车前活性部位(PDMAF)调节血脂的作用。方法:小鼠腹腔注射蛋黄乳剂造成急
性高脂血症模型 ,观察 PDMAF对小鼠高脂血症的预防作用。以大鼠食饵性高脂血症为模型 , 给予高脂饲料的同
时给予 PDMAF , 连续 28 d。测定血清中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋
白胆固醇(LDL-C)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性 , 肝组织中 TC 与 TG 含量以
及肝指数。观察 PDMAF对高脂血清损伤的人脐静脉内皮细胞株(ECV304)细胞释放 NO的影响。结果:PDMAF
30 , 60 mg/kg 明显降低蛋黄乳高脂血症小鼠的血清 TC 和 TG。 PDMAF 60 mg/kg 明显降低大鼠食饵性高脂血症模
型的肝指数;PDMAF 30 , 60 mg/kg 明显降低大鼠食饵性高脂血症模型的血清 TC 、TG、LDL-C 、MDA含量 、TC/HDL-C
比值 ,肝组织的 TC 与 TG ,并明显升高血清 HDL-C 和 NO含量以及 SOD 活性。 PDMAF 10 , 30 , 100 mg/L 明显逆转
高脂血清损伤的 ECV304 细胞释放 NO。结论:毛平车前具有显著的调血脂和抗氧化作用 , 改善高脂血症大鼠血
管内皮的功能 ,提示其可用于防治高脂血症。
【关键词】　毛平车前;血脂调节作用;抗氧化
【中图分类号】　R965;R972.6　　【文献标识码】　A　　【文章编号】　1000-5048(2005)05-0448-05
　　车前草是车前科(Plantaginaceae)车前属(Plan-
tago)植物干燥全草 ,具有清热利尿 、祛痰凉血 、解
毒之功效 。现代研究表明 ,车前草具有多种药理作
用 ,如:利尿排石 、抗病原微生物 、镇咳祛痰 、平喘 、
护肝 、降压 , 降低血清胆固醇等[ 1 ,2] 。毛平车前
(Plantago depressa var.montata Kitag.)是车前的新
变种 ,主产于我国内蒙等地 ,资源丰富且有广泛的
药用价值[ 3] 。高脂血症及脂质代谢障碍是造成动
脉硬化的主要因素 ,由此引发的心脑血管疾病严重
危害人类健康。车前子用来防治高脂血症的基础
和临床研究已有报道[ 4 ,5] ,提示车前草防治高脂血
症前景良好 。本实验室利用大孔树脂色谱技术分
离制备了毛平车前活性部位(active fraction of Plan-
tago depressa var.montata Kitag., PDMAF), 探讨
PDMAF对高脂血症模型的降血脂和抗氧化作用以
及对受损内皮细胞的影响 。
1　材　料
1.1　试药与试剂
毛平车前全草采集于内蒙古自治区鄂伦春自
治旗甘河镇 ,经中国药科大学标本馆宋学华副教授
鉴定为 Plantago depressa var.montata Kitag.。辛伐
他汀片(simvastatin ,湖北丝宝药业有限公司);丙基
硫氧嘧啶片(南通精华制药有限公司);猪胆盐(中
国医药集团上海化学试剂公司);胆固醇(上海惠心
生化试剂公司);胰蛋白酶(1∶250 ,Sigma公司);RP-
MI 1640培养基(Gibco 公司);新生小牛血清(NBS ,
兰州民海生物工程有限公司);总胆固醇(TC)测定
试剂盒(上海荣盛生物技术有限公司);甘油三酯
(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白
(HDL-C)测定试剂盒(浙江东欧生物工程有限公
司);丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧
化氮(NO)测定试剂盒(南京建成生物工程研究
所)。其他试剂均为市售分析纯。
1.2　仪　器
FA1004电子天平(上海天平仪器厂);CO2孵箱
(Nuaire 公司);DG 3022A 型酶联免疫检测仪(国营
华东电子管厂);721型分光光度计(上海第三分析
仪器厂)。
1.3　动　物
普通级雄性 ICR小鼠(18 ～ 22 g)和雄性 SD大
鼠(150 ～ 190 g),均由江宁青龙山动物繁殖场提供 ,
448
【收稿日期】　2005-02-28　　【＊通讯作者】　Tel:025-85391289　Fax:025-83353855　E-mail:jyliang@public1.ptt.js.cn
学 报
Journal of China Pharmaceutical University　2005 ,36(5):448-452
合格证号:SCXK(苏)2002-0018。
2　实验方法
2.1　PDMAF 的制备
毛平车前全草以 80%乙醇提取 3 次 ,提取液
过滤减压浓缩至无醇味 ,所得溶液分别用石油醚 、
乙酸乙酯 、正丁醇萃取 ,乙酸乙酯部位减压蒸干后 ,
上大孔树脂(D101型)柱 ,分别用 H2O 、20%乙醇 、
50%乙醇 、75%乙醇 、95%乙醇洗脱 , 50%乙醇和
75%乙醇部位减压浓缩干燥 , 合并得到固体即
PDMAF ,总得率 0.36%。
对PDMAF 的化学成分进行分离鉴定 ,显示其
主要由熊果酸 、齐墩果酸 、芹菜素及木犀草素等成
分组成 。HPLC法测定熊果酸 、齐墩果酸的含量分
别为 15.7%和 10.5%,分光光度法测定其黄酮类
成分的含量为 64.2%。
2.2　对蛋黄乳高脂血症小鼠血脂的影响[ 6]
取正常小鼠 50只 ,随机分为 5组 ,其中 3组分
别按 10 mL/kg 剂量经口给予 PDMAF 30 , 60 mg/kg
和辛伐他汀 8 mg/kg ,正常组和模型组给予等体积
的溶媒(0.5%羧甲基纤维素钠),连续 6 d。第 6天
给药后 2 h ,除正常组外 ,其余各组小鼠腹腔注射
75%蛋黄乳 20 mL/kg 。禁食过夜 ,自由饮水 ,给予
蛋黄乳后 10 h ,各组再给相应药物 1次 ,末次给药
后2 h ,小鼠摘眼球取血 ,分离血清 ,以试剂盒方法
测定 TC和 TG。
2.3　对大鼠食饵性高脂血症模型的影响
雄性 SD大鼠 50只 ,禁食不禁水 12 h 后 ,眼眶
后静脉丛取血 ,分离血清 ,按试剂盒方法测定血清
总胆固醇 。根据总胆固醇值分为 5组 ,每组 10只 。
正常组用普通饲料喂养 ,其余 4组用高脂饲料(2%
胆固醇 、0.5%猪胆盐 、10%猪油 、0.2%丙基硫氧
嘧啶 ,基础饲料 87.3%)喂养 ,此高脂饲料配方参
照文献[ 7] 稍加改进而成 ,喂养 28 d ,高脂喂养的
同时分别按10 mL/kg 剂量经口给予 PDMAF 30 、60
mg/kg ,辛伐他汀 8 mg/kg ,模型组和正常组给予等
体积的溶媒(0.5%羧甲基纤维素钠),连续 28 d ,大
鼠禁食不禁水 12 h后 ,处死 ,解剖 ,肝脏称重 ,计算
肝指数(肝脏重量/大鼠体重);分离血清测定 TC 、
TG 、HDL-C 、LDL-C 、SOD 、MDA 、NO ,并计算 TC/HDL-
C比值;取新鲜肝脏左叶前缘部分(约 300 mg),加
入异丙醇制成 10%肝组织匀浆 ,匀浆液 4 ℃放置
48 h后 ,3 500 r/min离心 ,取上清液按试剂盒方法
测定胆固醇 、甘油三酯[ 7] ,以μmol/mg 肝组织来表
示含量。
2.4　人脐静脉内皮细胞株(ECV304)细胞的培养
与处理
ECV304细胞购自中国科学院上海细胞生物学
研究所 。将 ECV304 细胞以 RPMI 1640 培养基
37 ℃,5% CO2饱和湿度下培养。细胞传代时以
0.25%的胰蛋白酶消化 ,稀释成 5×104个/mL 的细
胞悬液接种。
2.5　对高脂血清损伤的 ECV304细胞培养液中NO
含量的影响[ 8]
取对数生长期细胞消化成单细胞悬液 , 1×105
个 ECV304细胞接种于 24孔细胞培养板上 , 培养
48 h后 ,换无酚红无血清的 RPMI 1640培养液 ,分
为 7组 ,每组 3个平行 ,并重复实验 3次 。
正常组为 ECV304与100μL/mL的正常大鼠血
清共培养 ,模型组为 ECV304与 100 μL/mL 的高脂
血清(“2.3”方法中的模型组大鼠的血清)共培养 ,
正常大鼠血清和高脂血清见表 3 ～表 5。其余 5组
为 PDMAF(1 ,3 , 10 ,30 ,100 mg/L)与 ECV304及高脂
血清共孵育 , 培养液均为 1 mL , 培养 24 h 后 , 以
Griess法测定细胞培养液中NO含量[ 9] 。即细胞培
养液 100μL与Griess试剂100 μL在室温下反应 10
min ,在酶标仪上于 540 nm 测定吸收度。根据
NaNO2的标准曲线 ,计算出细胞培养液中 NO2-的
含量 。
2.6　数据分析
实验数据以 x±s表示 ,并用 t 检验统计表示
组间差异 。
3　结　果
3.1　对小鼠蛋黄乳高脂血症模型血脂的影响
如表 1所示 ,与正常组相比 ,小鼠蛋黄乳高脂
血症模型组的血清 TC 和 TG 极明显升高(P <
0.01)。与模型组相比 , PDMAF 30 mg/kg 明显降低
血清 TC 和TG(P<0.05),PDMAF 60 mg/kg和辛伐
他汀 8 mg/kg 均极明显降低血清 TC 和 TG(P <
0.01)。可见 ,PDMAF对小鼠蛋黄乳高脂血症有一
定的预防作用 。
449第 5期 吴斐华等:毛平车前活性部位调节血脂作用的研究
Tab.1　Effect of PDMAF on serum TC and TG in hyperlipidemic mice in-
duced by yolk emulsion(x±s , n=10)
Group
Dose
(mg/ kg)
TC
(mmol/L)
TG
(mmol/L)
Normal - 2.05±0.37 0.51±0.074
Model - 8.40±1.47## 1.40±0.23##
PDMAF 30 6.71±1.51＊ 1.10±0.25＊
60 5.71±1.78＊＊ 0.92±0.17＊＊
Simvastatin 8 5.01±0.83＊＊ 0.87±0.18＊＊
##P<0.01 vs normal;＊P<0.05 , ＊＊P<0.01 vs model
3.2　对大鼠食饵性高脂血症模型肝指数的影响
表2可见 ,与正常组相比 ,大鼠食饵性高脂血
症模型组的肝指数明显升高(P <0.05)。与模型
组相比 , PDMAF 30 mg/kg 有降低肝指数的趋势 ,
PDMAF 60 mg/kg 和辛伐他汀 8 mg/kg 均显著降低
肝指数(P<0.05)。可见 ,PDMAF 可降低食饵性高
脂大鼠的肝指数 。
3.3　PDMAF 对大鼠食饵性高脂血症模型血清和
肝组织脂质的影响
表3可见 ,与正常组相比 ,大鼠食饵性高脂血
症模型组血清和肝组织的 TC 和 TG 均极明显升高
(P<0.01)。与模型组相比 ,PDMAF 30 mg/kg 极明
显降 低血 清 的 TC 和 TG 以 及 肝 组 织 TG
(P<0.01), 显著降低肝组织 TC(P <0.05);
PDMAF 60 mg/kg均极明显降低血清和肝组织中的
TC和 TG(P <0.01);辛伐他汀 8 mg/kg 也极明显
降低血清 TC和 TG以及肝组织 TG(P <0.01),显
著降低升高的肝组织TC(P <0.05)。可见 , PDMAF
可明显抑制大鼠食饵性高脂血症模型血清和肝组
织脂质的升高 ,该作用与辛伐他汀相当 。
Tab.2　Effect of PDMAF on liver index in rats fed with high-lipid diet
(x±s)
Group
Dose
(mg/ kg) No.of mice
Liver index
(×10-2)
Normal - 10 3.33±0.20
Model - 10 3.81±0.60#
PDMAF 30 10 3.45±0.55
60 10 3.26±0.29＊
Simvastatin 8 9 3.14±0.36＊
#P<0.05 vs normal;＊P<0.05 vs model
Tab.3　Effect of PDMAF on lipids of serum and liver in rats fed wi th high-lipid diet(x±s)
Group
Dose
(mg/ kg) No.of mice
Serum TC(mmol/ L)
d 0 d 28
Liver TC
(μmol/mg)
Serum TG
(mmol/ L)
Liver TG
(μmol/mg)
Normal - 10 2.05±0.37 2.11±0.24 2.47±0.43 0.42±0.11 3.07±0.77
Model - 10 2.04±0.35 7.52±1.81## 6.12±1.04## 1.07±0.24## 5.85±0.79##
PDMAF 30 10 1.99±0.26 5.64±0.99＊＊ 4.93±0.84＊ 0.75±0.21＊＊ 4.04±0.76＊＊
60 10 2.05±0.30 4.82±1.23＊＊ 4.35±0.81＊＊ 0.61±0.18＊＊ 3.53±0.69＊＊
Simvastatin 8 9 2.05±0.40 4.69±1.00＊＊ 4.98±0.74＊ 0.69±0.21＊＊ 4.29±1.26＊＊
##P<0.01 vs normal;＊P<0.05 , ＊＊P<0.01 vs model
3.4　对大鼠食饵性高脂血症模型血清脂蛋白的影
响
如表 4所示 ,与正常组相比 ,大鼠食饵性高脂
血症模型组的血清 LDL-C 和 TC/HDL-C 均极明显
升高(P <0.01),HDL-C 极明显降低(P <0.01)。
与模型组相比 , PDMAF 30 mg/kg 明显降低血清中
LDL-C含量(P <0.05),并显著升高血清中 HDL-C
含量(P <0.05),也极明显降低TC /HDL-C 比值(P
<0.01);PDMAF 60 mg/kg 和辛伐他汀 8 mg/kg 均
极显著降低血清中 LDL-C含量和升高 HDL-C 含量
(P<0.01 , P<0.01),并极明显降低 TC /HDL-C比
值(P<0.01)。
3.5　对大鼠食饵性高脂血症模型血清 SOD ,MDA
和NO的影响
如表5所示 ,与正常组相比 ,模型组的血清SOD
Tab.4　Effect of PDMAF on serum lipoproteins in rats fed wi th high-lipid
diet(x±s)
Group
Dose
(mg/ kg)
No.of
mice
LDL-C
(mmol/ L)
HDL-C
(mmol/ L)
TC/HDL-C
(mmol/ L)
Norma l - 10 0.79±0.20 1.19±0.25 1.84±0.41
Model - 10 6.01±1.14## 0.69±0.15## 11.60±4.86##
PDMAF 30 10 4.75±1.10＊ 0.85±0.17＊ 6.83±1.59＊＊
60 10 4.28±0.75＊＊ 0.94±0.19＊＊ 5.19±1.25＊＊
Simvastatin 8 9 3.45±0.83＊＊ 1.00±0.26＊＊ 4.93±1.62＊＊
##P<0.01 vs normal;＊P<0.05, ＊＊P<0.01 vs model
活力和 NO 含量均极明显降低(P <0.01),血清
MDA 极明显升高(P <0.01)。与模型组相比 ,
PDMAF 30 mg/kg 显著升高大鼠食饵性高脂血症模
型血清 SOD 活力和 NO 含量 , 并明显降低血清
MDA含量(P<0.05)。PDMAF 60 mg/kg 极显著升
高大鼠食饵性高脂血症模型血清 SOD活力和 NO
含量 , 并极明显降低血清 MDA 含量(P<0.01)。
450 学 报 　 Journal of China Pharmaceutical University 第 36卷
辛伐他汀8 mg/kg显著升高血清 NO 含量(P <
0.05),极明显降低血清MDA含量(P<0.01)。可
见 ,PDMAF降低食饵性高脂大鼠血清MDA的含量
和升高 NO 的作用与辛伐他汀相当 ,但是 ,PDMAF
60 mg/kg 升高 SOD 活性的作用强于辛伐他汀
8 mg/kg 。
Tab.5　Effect of PDMAF on serum SOD and MDA in rats fed high lipidic
diet(x±s)
Group
Dose
(mg/kg)
No.of
mice
SOD
(U/mL)
MDA
(nmol/mL)
NO
(μmol/ L)
Normal - 10 292.9±30.6 7.73±1.06 88.6±13.8
Model - 10 224.4±37.0## 10.68±1.54## 65.0±13.7##
PDMAF 30 10 260.5±35.6＊ 9.12±1.44＊ 78.9±11.4＊
60 10 286.5±49.9＊＊ 8.04±1.60＊＊ 85.6±12.9＊＊
Simvastatin 8 9 245.6±32.9 8.56±1.51＊＊ 80.3±13.2＊
##P<0.01 vs normal;＊P<0.05 , ＊＊P<0.01 vs model
3.6　对高脂血清损伤的 ECV304细胞培养液中NO
含量的影响
如图 1所示 ,与正常组相比 ,高脂血清损伤的
ECV304细胞培养液中 NO 含量极明显下降(P <
0.01),与模型组相比 , PDMAF 10 , 30 , 100 mg/L 均
使高脂血清所致的 ECV304细胞培养液中NO含量
明显升高(P <0.01),该作用呈现剂量依赖性 。
Fig.1　Effect of PDMAF on the release of NO from endothelial cells in-
duced by hyperlipidemic serum(x±s , n=3)
##P<0.01 vs normal;＊＊P<0.01 vs model
4　讨　论
血浆中 TC 、TG以及 LDL-C的升高能促进动脉
粥样硬化的发生。降低血脂 ,特别是 LDL-C ,可延
缓或减轻动脉粥样硬化的发生和发展 。HDL-C是
将肝外组织中的 TC运送到肝脏的主要运载工具 ,
是一种抗动脉粥样硬化的脂蛋白。本研究结果表
明 ,PDMAF 能明显降低大鼠食饵性高脂血症模型
组的血清 TC 、TG 和 LDL-C的含量 ,提高 HDL-C含
量。即 PDMAF 可以明显调节脂质代谢紊乱 ,有利
对抗动脉粥样硬化。
本实验结果表明:PDMAF 30 、60 mg/kg 均能有
效降低血清 MDA ,升高 SOD 活性。可见 , PDMAF
可以明显降低高脂血症时超氧自由基对血管内皮
的损伤 ,有利于过氧化脂质的分解和代谢 ,保护血
管内皮。
高脂血症中血管内皮功能受损 ,内皮细胞释放
的NO减少 ,抑制血管舒张 ,促进血小板聚集 ,增强
白细胞粘附和迁移 , 促进血管平滑肌细胞的增
殖[ 10] 。本研究结果表明:PDMAF 30 , 60 mg/kg 能
明显升高大鼠食饵性高脂血症模型组的血清 NO
含量 。体外实验结果表明 ,PDMAF 10 ,30 ,100 mg/L
能明显逆转高脂血清所致的 ECV304细胞培养液
中NO含量下降 ,而且呈现剂量依赖性 。其机制可
能为:PDMAF 作为一种抗氧化剂能减少氧自由基
的生成 ,减少超氧阴离子对 NO 的破坏;还可能通
过抑制高脂血清中的 LDL氧化成 ox-LDL而使 NOs
的表达增加 ,提高NO含量 。
大鼠食饵性高脂血症模型中 ,大鼠肝脏体积增
大 , 颜色呈浅 黄 , 肝指 数明显 升高 。 PDMAF
60 mg/kg能明显抑制食饵性高脂大鼠升高的肝指
数 ,提示其具有护肝作用 。这可能与 PDMAF 中所
含的齐墩果酸和熊果酸有关。另外 , PDMAF 能明
显降低小鼠蛋黄乳高脂血症模型的血脂 , 提示
PDMAF 可能通过抑制脂质的吸收或阻止胆汁酸的
肝肠循环而降低血脂。
综上所述 ,PDMAF 能明显调节小鼠蛋黄乳高脂
血症模型的血脂 ,又能显著调节大鼠食饵性高脂血
症的脂质代谢 ,改善自由基代谢 、升高 NO含量 ,提
示PDMAF可用于防治高脂血症 ,保护血管内皮 ,预
防动脉粥样硬化 ,具有良好的前景。作用机制可能
与抑制脂质的吸收或阻止胆汁酸的肝肠循环 ,提高
机体抗氧化能力有关 ,其确切机制有待进一步研究。
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Lipid-regulating Effect of Active Fraction from Plantago de-
pressa var.montata Kitag.
WU Fei-Hua1 ,LIANG Jing-Yu2 ,CHEN Rong2 ,YU Ping2
(1Department of Pharmacology for Chinese Materia Medica;2Department of Phytochemistry , China Pharmaceutical Uni-
versity , Nanjing 210038 ,China)
【ABSTRACT】　AIM:To investigate the lipid-regulating effect of active fraction from Plantago depressa var.montata
Kitag(PDMAF).METHODS:The protective effect of PDMAF was studied on the model mice with acute hyperlipi-
demia which was induced by intraperitoneal injection of yolk emulsion.The investigation also employed the hyperlipi-
demic model rats which were induced by feeding with the high-lipid diet for 28 days.The 28-day feeing was accompa-
nied by oral administration of PDMAF and simvastation to the rats , respectively.Effects of PDMAF on the hyperlipidem-
ic rats were investigated by measurement of the concentrations of total cholesterol(TC), triglyceride(TG), low density
lipoprotein cholesterol(LDL-C),high density lipoprotein cholesterol(HDL-C),malondialdehyde (MDA), nitric oxide
(NO)and the activity of superoxide dismutase(SOD)in serum.The contents of TC and TG in liver as well as liver in-
dex were also determined.Moreover , the effect of PDMAF on the release of NO from endothelial cells induced by hyper-
lipidemic serum was evaluated.RESULTS:Treatment with PDMAF(30 ,60mg/kg)remarkably lowered serum TC and
TG in the hyperlipidemic mice.Administration of PDMAF (60 mg/kg)significantly reduced the liver index in hyper-
lipidemic rats.Administration of PDMAF (30 ,60 mg/kg)could significantly decrease the levels of serum TC ,TG ,LDL-
C as well as the ratio of TC/HDL-C.They also significantly reduced the liver TC and TG ,but remarkably increased
serum SOD ,HDL-C and NO.Furthermore ,Administration of PDMAF (10 , 30 , 100 mg/L)concentration-dependently
promoted NO production of ECV304 induced by hyperlipidemic serum in vitro.CONCLUSION:These results suggest
that PDMAF possess obvious lipid-regulating effects and antioxidative effects.Moreover ,PDMAF results in the improve-
ment in the damaged vascular endothelium induced by hyperlipidemic serum.Such characteristics will be of significance
to prevent and/or treat hyperlipidemia.
【KEY WORDS】　Plantago depressa var.montata Kitag.;Lipid-regulating effect;Antioxidative effect
452 学 报 　 Journal of China Pharmaceutical University 第 36卷