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云南黄连市售品质量评价



全 文 :4China Pharmaceuticals
2016年 2月 5日 第 25卷第 3期
Vol. 25,No. 3,February 5,2016
*重庆三峡学院 2014年度大学生创新性实验计划项目,项目编号:2014020。
云南黄连市售品质量评价*
张德伟 1,封海霞 2,谢汉林 3,丁 博 3,牟腊梅 4
(1. 重庆市万州食品药品检验所,重庆 404000; 2. 重庆市食品药品检验检测研究院,重庆 401121;
3. 重庆三峡学院,重庆 404000; 4. 重庆文理学院,重庆 402160)
摘要:目的 建立测定云南黄连中黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱等单体生物碱和总生物碱含量的高效液相色谱(RP - HPLC)法和紫
外分光光度(UV)法,比较不同商品来源云南黄连质量的差异。方法 HPLC法采用色谱柱 Venusil MP C18柱(250 mm × 4. 6 mm,5 μm),
流动相为乙腈 - 0. 2%冰醋酸(三乙胺调 pH = 5. 05)梯度洗脱,检测波长 345 nm;UV法于 349 nm 波长处测定总生物碱吸光度。联合
上述方法对 10 批云南黄连药材进行测定,并对测定结果进行聚类分析。结果 黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱进样量分别在
0. 200 0 ~ 2. 000 0,0. 092 4 ~ 0. 924 0,1. 278 0 ~ 12. 780 0 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r≥0. 999 5),平均加样回收率依
次为 98. 61%,97. 35%,99. 03%,RSD 分别为 1. 28%,1. 52%,1. 19%(n = 6)。UV 法测总生物碱质量浓度在 5. 112 ~ 25. 560 μg /mL
范围内与吸光度呈良好的线性关系。采用聚类分析能将不同产地的 10 批云连药材分为 3 类。不同地区商品云南黄连生物碱含量存在
显著性差异。结论 该法准确、可靠、重复性好,对市场上云南黄连的质量状况起到良好的评价作用,可为进一步系统研究云南黄连奠
定基础。
关键词:云南黄连;黄连碱;盐酸巴马汀;盐酸小檗碱;总生物碱;高效液相色谱法;紫外分光光度法
中图分类号:R284. 1;R282. 71 文献标识码:A 文章编号:1006 - 4931 (2016 )03 - 0004 - 04
Quality Assessment of Coptis Teeta Wall. from Different Markets
Zhang Dewei1, Feng Haixia2, Xie Hanlin3, Ding Bo3, Mu Lamei4
( 1. Wanzhou Institute for Drug and Food Control, Chongqing, China 404000; 2. Chongqing Institute for Drug and Food Control, Chongqing, China
401121; 3. Chongqing Three Gorges University, Chongqing, China 404000; 4. Chongqing University of Arts and Sciences, Chongqing, China 402160 )
Abstract: Objective To establish a quantitative method for Coptisine,Palmatine hydrochloride,Berberine hydrochloride,Total alkaloid in
Coptis teeta by HPLC and UV,and to compare the quality of products from different commercial sources. Methods The HPLC method
used venusil MP C18 chromatographic column(250 mm × 4. 6 mm, 5 μm), mobile phase of acetonitrile to 0. 2% glacial acetic acid
( triethylamine pH = 5. 05 ),gradient elution,detection wavelength of 345 nm; 349 nm wavelength UV method in the determination of total
alkaloids of absorbance. There were 10 samples detective and cluster analysis. Results The linear range of coptisine, palmatine hy-
drochloride,berberine hydrochloride were 0. 200 0 - 2. 000,0. 092 4 - 0. 924 0,1. 278 0 - 12. 780 0 μg( r≥0. 999 5) . The average recovery
rates were 98. 61%,97. 35%,99. 03%,RSD = 1. 28%,1. 52%,1. 19% ( n = 6 ) . The UV method measured the mass concentration of total
alkaloids showed a good linear relationship with absorbance in the range of 5. 112 - 25. 560 μg /mL. 10 batches of different origin teeta
herbs could be divided into 3 categories by cluster analysis. There were significant differences between different areas of goods teeta al-
kaloid content. Conclusion The method is accurate,reliable,repeated,which could be used in judge the quality of commercial Coptis teeta.
Key words: Coptis teeta; coptisine; palmatine hydrochloride; berberine hydrochloride; total alkaloid; RP - HPLC; UV
云南黄连(Coptis teeta Wall.)又称云连,为毛茛科
黄连属(Coptis)草本植物,产于云南西北部及藏东南地
区,为我国传统中药黄连的源植物之一 [ 1 - 2 ]。由于云连
生长环境要求极高,市场上售卖的药材多以野生为主,
由于长期过度采挖和生境的破坏,云连资源越来越匮
乏,已于 2002年被列为国家二级重点保护中药材 [ 3 ]。云
连味苦、性寒,具有清热燥湿、泻火解毒等功效。研究表
明,黄连药材的主要成分为黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小
檗碱等生物碱,尤其以小檗碱含量最高 [ 4 ]。目前关于黄
连中有效成分含量测定已有报道,但对市售不同区域产
云南黄连的质量评价未作考察。因此,笔者收集了不同
地区的市售云连,采用高效液相色谱(HPLC)法测定了
3种单体生物碱的含量,以及用紫外分光光度(UV)法测
定总生物碱的含量,为云连质量评价提供参考,为更加
系统全面地研究云南黄连奠定基础。
1 仪器与试药
Agilent 1260 型高效液相色谱仪(美国安捷伦科技
有限公司 ),包括 G1311C 四元泵,G1329B 进样器,
G1314F紫外检测器;Mettler XP204型电子天平(瑞士);
TG18M 型离心机(长沙平凡仪器仪表厂); 圣德利超纯
水机;DFY - 200 型万能粉碎机;KQ - 800DE 型数控超
声波清洗器;UV - 2501PC 型紫外可见分光光度仪(岛
津)。黄连碱对照品(成都曼思特生物科技有限公司,含
量为 98% ); 盐酸巴马汀对照品(批号为 110732 -
201309)、盐 酸 小 檗 碱 对 照 品 (批 号 为 110713 -
201212),均供含量测定用,由中国食品药品检定研究院
·药物研究·
Drug Research
5China Pharmaceuticals
2016年 2月 5日 第 25卷第 3期
Vol. 25,No. 3,February 5,2016
表 1 3个单体生物碱的线性回归方程
单体生物碱
黄连碱
盐酸巴马汀
盐酸小檗碱
线性范围(μg)
0. 200 0 ~ 2. 000 0
0. 092 4 ~ 0. 924 0
1. 278 0 ~ 12. 780
线性方程
Y = 105. 1 X - 1. 659
Y = 55. 51 X - 0. 073
Y = 235. 5 X + 2. 512
r
0. 999 8
0. 999 7
0. 999 9
提供; 乙腈为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析
纯。样品(购自云南、四川、重庆药材批发市场,共 10批)
经重庆三峡学院生命科学与工程学院周浓副教授鉴定
为毛茛科植物云南黄连 Coptis teeta Wall. 的干燥根茎,
药材粉碎后过 40目筛,备用。
2 方法与结果
2.1 单体生物碱含量测定 [ 5 ]
2. 1. 1 色谱条件及系统适用性试验
色谱柱:VenusilMPC18(2)柱(250mm ×4. 6mm,5μm);
流动相:A 为乙腈,B 为 0. 2%冰醋酸(三乙胺调 pH =
5. 05),梯度洗脱(0→15 min→25 min→35 min→55 min,
20%A→50%A→35%A→80%A); 检测波长:345 nm;
流速:1. 0 mL /min; 进样量:20 μL; 柱温:30 ℃。在此条
件下,色谱图见图 1。
2. 1. 2 溶液制备
精密称取黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱对照
品适量,加甲醇,分别制成质量浓度 0. 1000,0. 046 2,
0. 639 0 g / L的溶液,即得对照品溶液。称取样品粉末约
0. 1 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加 1%盐酸甲醇溶液
50 mL,称定质量,60 ℃温浴 30 min,超声提取 60 min,
放冷,补足失重,摇匀,用前以 4 000 r /min离心 10 min,
即得供试品溶液。
2. 1. 3 方法学考察
线性关系考察: 精密吸取2. 1. 2 项下对照品溶液
2,5,10,15,20 μL,注入液相色谱仪,以进样量 ( X )对峰
面积 ( Y )进行线性回归,绘制标准曲线。结果见表 1。
精密度试验: 精密吸取同一对照品溶液10 μL,按
拟订色谱条件连续进样 6次,记录峰面积。结果黄连碱、
盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的 RSD分别为 1. 2%,1. 7%,
0. 8%(n = 6),表明仪器精密度良好。
稳定性试验: 取用云南黄连(批号为 S4,购自成都
市荷花池中药材市场 )制备的同一供试品溶液,于 0,2,
4,8,12 h时进样 10 μL。结果黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸
小檗碱的 RSD 分别为 0. 8%,1. 1%,0. 6%(n = 5),表
明供试品溶液在 12 h内稳定。
重复性试验: 取用云南黄连(批号为 S4,购自成都
市荷花池中药材市场 ) 0. 1 g,依法平行制备 6 份供试品
溶液,按拟订色谱条件进样测定。结果黄连碱、盐酸巴马
汀、盐酸小檗碱含量的 RSD 分别为 1. 4% ,1. 8% ,
0. 9%(n = 6),表明方法重复性好。
加样回收试验:精密称取已知含量的云南黄连(批
号为 S4,购自成都市荷花池中药材市场 )0. 05 g,共 6份,
每份样品加入适量黄连碱对照品 10 mL、盐酸巴马汀
对照品 10 mL、盐酸小檗碱对照品 10 mL,挥干。按供
试品溶液制备方法制备溶液,依法测定峰面积并计算
含量。结果黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱平均回收
率为 98. 61%,97. 35%,99. 03%,RSD 分别为 1. 28%,
1. 52%,1. 19%(n = 6)。
2. 1. 4 样品含量测定
取 10 批云连,按 2. 1. 2 项下方法各制备 3 份供试
品溶液,用 0. 22 μm微孔滤膜过滤后,进样量 10 μL,依
法测定峰面积,以外标两点法计算云南黄连中黄连碱、
盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的含量。结果见表 2。
2.2 总生物碱含量测定 [ 6 ]
2. 2. 1 溶液制备
称取盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,加甲醇制
成 0. 639 g / L 的溶液,即得对照品贮备溶液; 精密量取
2 mL,置 25 mL容量瓶,用甲醇稀释至刻度,即得对照品
溶液。称取本品粉末约 0. 1 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,
加1%盐酸甲醇溶液 50 mL,称定质量,超声提取 60 min,
放冷,补足失重,过滤,取滤液 1. 0 mL,置 25 mL容量瓶
中,加甲醇定容至刻度,摇匀,4 000 r /min离心 10 min,
即得供试品溶液。以相应的试剂为空白溶液。
2. 2. 2 标准曲线制备
精密吸取 2. 2. 1 项下对照品溶液 1,2,3,4,5 mL,
置 10 mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,以相应的试剂
为空白,照 2010 年版《中国药典(一部)》附录ⅤA 紫
外 -可见光光度法,于 349 nm波长处测定吸光度(A),
以 A为纵坐标、盐酸小檗碱质量浓度(C)为横坐标绘制
标准曲线,得回归方程 A = 0. 068C - 0. 019 3,r = 0. 999 2
( n = 5 )。结果表明,盐酸小檗碱质量浓度在 5. 112 ~
25. 560 μg /mL范围内与吸光度呈良好的线性关系。
2. 2. 3 样品含量测定
取 2. 2. 1项下供试品溶液,照 2010年版《中国药典
(一部)》附录ⅤA紫外 -可见光光度法,依法测定计算。
结果见表 2。
A B
1. 黄连碱 2. 盐酸巴马汀 3. 盐酸小檗碱
A. 对照品溶液 B. 供试品溶液
图 1 高效液相色谱图
t / mint / min
1
2
3
0 5 10 15 20 25
2
1
3
0 5 10 15 20 25
·药物研究·
Drug Research
6China Pharmaceuticals
2016年 2月 5日 第 25卷第 3期
Vol. 25,No. 3,February 5,2016
表 2 不同商品来源云南黄连中生物碱含量(mg / g,n = 3)
化合物
平均值
编号
S1
S2
S3
S4
S5
S6
S7
S8
S9
S10
来源
四川省绵阳市
重庆市朝天门中药材市场
重庆市北碚区
成都市荷花池中药材市场
四川省达州市
重庆市开县
重庆市万州区商贸城
云南省大理市三月街药材市场
云南省洱源县三营药材市场
云南省昆明市菊花村药材市场
黄连碱
17. 080 6 ± 0. 150 6
10. 203 1 ± 0. 005 4
13. 471 4 ± 0. 013 5
20. 102 1 ± 0. 012 1
20. 463 6 ± 0. 010 8
8. 179 9 ± 0. 008 4
22. 562 8 ± 0. 018 9
8. 541 9 ± 0. 001 6
7. 368 7 ± 0. 005 3
18. 600 2 ± 0. 017 3
14. 859 4
盐酸巴马汀
4. 859 7 ± 0. 012 3
5. 502 2 ± 0. 019 4
4. 775 6 ± 0. 006 5
7. 893 0 ± 0. 009 1
5. 240 2 ± 0. 002 4
5. 686 5 ± 0. 022 8
5. 570 5 ± 0. 011 4
5. 489 6 ± 0. 003 6
5. 465 2 ± 0. 000 1
5. 073 7 ± 0. 025 4
5. 555 6
盐酸小檗碱
78. 633 4 ± 0. 015 8
71. 750 3 ± 0. 007 5
78. 783 9 ± 0. 013 3
92. 060 3 ± 0. 016 1
86. 848 4 ± 0. 008 2
56. 174 2 ± 0. 011 2
88. 944 5 ± 0. 009 9
80. 255 9 ± 0. 005 5
78. 043 8 ± 0. 005 2
85. 869 4 ± 0. 015 9
79. 936 4
合计
100. 573 8 ± 0. 042 2
87. 455 7 ± 0. 006 5
97. 030 9 ± 0. 012 9
120. 055 3 ± 0. 013 5
114. 552 2 ± 0. 008 6
72. 040 5 ± 0. 010 9
115. 728 3 ± 0. 020 0
94. 175 7 ± 0. 005 3
90. 877 8 ± 0. 002 4
109. 543 3 ± 0. 016 7
100. 203 3
总生物碱
141. 964 6 ± 0. 036 4
122. 618 6 ± 0. 037 7
135. 815 1 ± 0. 005 3
178. 100 6 ± 0. 105 3
172. 017 2 ± 0. 031 7
91. 241 0 ± 0. 030 6
126. 321 7 ± 0. 065 2
107. 446 3 ± 0. 041 7
149. 735 0 ± 0. 064 0
203. 093 5 ± 0. 087 3
139. 135 8
图 2 高效液相色谱法测定不同商品来源云南黄连中
生物碱含量的聚状分析树状图
2.3 聚类分析
分别采用不同商品来源云连中生物碱含量测定结
果进行聚类分析。采用 SPSS统计软件的 Ward法,选取
平方 Euclidean距离作为样品度量标准,对 10批样品进
行系统聚类分析,绘出树状图。结果见图 2。
根据聚类分析结果,将 10批样品分为 3类:第1类
有 6批药材,即 S1 ~ S3及 S7 ~ S9,此类药材中黄连碱、
盐酸巴马汀、盐酸小檗碱及总生物碱(UV法测定)含量
均低于均值,第 2 类有 1 批药材,即 S6,此类药材中黄
连碱和总生物碱(UV法测定)低于均值,其中总生物碱
远低于均值,盐酸巴马汀和盐酸小檗碱略高于均值;
第 3 类有 3 批药材,即 S4,S5,S10,此类药材中黄连
碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱及总生物碱(UV 法测定)
含量均高于均值。结果见表 3。
3 讨论
目前,市场上的黄连药材中,以雅连、味连为主,云
连栽培规模小、产量低,以野生为主 [ 7 ]。本试验中收集不
同地区商品药材,测量其总生物碱含量,同时测定盐酸
小檗碱、黄连碱、盐酸巴马汀在各批次样品中的含量。结
果表明,不同地区经销的云连生物碱含量存在显著性差
异,特别是黄连碱含量差异较大。
黄连类药材的有效成分主要为生物碱,化学成分复
杂。在试验过程中,通过优化提取溶剂、提取时间,调整
流动相、流速,更换色谱柱、变化柱温等条件,确定了本
研究中样品的提取条件和色谱方法。结果表明,本方法
简单易行、准确灵敏,重复性好,可用于评价不同商品来
源云连及相关产品的品质。
本试验结果表明,市售云连来源复杂,质量参差不
齐。造成市售云连质量差异的因素可能与来源、产地和
生长年限等有关 [ 8 - 9 ]。人工种植云连作为市售云连药材
的主要来源,其种植来源问题亟需解决,种植药材质量
也需要进一步提升,才能从基源上确保云连的临床用药
安全和疗效。中药材市场作为商品云连流通的一个关键
节点,对云连质量的影响不可忽视。建议相关部门应该
更严格管理药材市场,控制好云连的市场准入关口,尽
量消除商品云连的掺伪现象,从而保证云连品质。
作者简介:张德伟(1979 -),男,汉族,大学本科,主
管中药师,主要从事中药材品质研究及成分分析工作,
(电话 ) 023 - 58152381。
参考文献:
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科学出版社,2000: 180 - 183.
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京:中国医药科技出版社,2013: 97 - 98.
[3 ] 傅国立 . 中国植物红皮书 -稀有濒危物 [M] . 北京: 科学出
版社,1992: 522.
项目
产地编号
单体生物碱 黄连碱
(HPLC法 ) 盐酸巴马汀
盐酸小檗碱
总含量
总生物碱 (UV法 )
第 1类
S1,S2,S3,S7,S8,S9
13. 204 8
5. 277 1
79. 402 0
97. 640 4
130. 650 2
第 2 类
S6
8. 179 9
5. 686 5
56. 174 2
72. 040 5
91. 241 0
第 3类
S4,S5,S10
19. 722 0
6. 069 0
88. 259 4
114. 716 9
184. 403 8
表 3 不同商品来源云连中生物碱含量聚类分析的
不同组别各组分的平均含量(mg / g,n = 3)
0 5 10 15 20 25
S1
S3
S9
S7
S2
S8
S6
S4
S5
S10
编号
平方 Euclidean距离
·药物研究·
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7China Pharmaceuticals
2016年 2月 5日 第 25卷第 3期
Vol. 25,No. 3,February 5,2016
*广西贵港市科学研究与技术开发计划,项目编号:贵科学攻关12090280。
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生物碱 [ J ] . 中草药,2012,43 (3 ) : 509 - 512.
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(收稿日期:2015 - 10 - 14 )
高效抗逆转录病毒治疗艾滋病的生存时间及临床疗效分析*
吕日英 1,李健龙 2,覃雄林 2,朱宇佳 1,覃琼芬 1,付少萍 1,李仕雄 1,许超宇 1,江 波 1
(1. 广西医科大学第八附属医院,广西 贵港 537100; 2. 广西壮族自治区贵港市疾病控制中心,广西 贵港 537100)
摘要:目的探讨艾滋病患者高效抗逆转录病毒治疗后生存时间、治疗效果和影响因素。方法 收集贵港地区各抗病毒治疗点收治
的 3 100 例艾滋病患者作为研究对象,患者均接受高效抗逆转录病毒治疗 (HAART)治疗,采用 COX比例风险模式对患者抗病毒治疗
后生存期因素进行分析,分析影响 HAART效果的危险因素。结果 3 100 例患者中,146 例确诊感染人类免疫缺陷病毒 (HIV )后进行中
医治疗,占 4. 71%;56. 00%患者体重下降,35. 81%患者持续发热;19. 37%患者带状疱疹;11. 58%患者持续腹泻;7. 50%患者吞咽困
难。190 例死亡,占 6. 13%;76 例停药,占 2. 45%;527 例失访,占 17. 00%;2 307 例继续治疗,占 74. 42%。通过多因素分析结果显示,
治疗开始时 CD4 + T细胞水平数、入治时出现机会性感染种类数、平均每月漏服药物次数等为患者高效抗逆转录病毒治疗的影响因素
(P < 0. 05)。结论 HAART治疗艾滋病效果理想,治疗过程中应采取有效措施监测患者 CD4 + T变化以及机会性感染情况,同时治疗过
程中应加强药物教育,动态了解患者用药情况,并及时调整治疗方案。
关键词:艾滋病;高效抗逆转录病毒;生存时间;影响因素;疗效
中图分类号:R969. 4;R978. 7 文献标识码:A 文章编号:1006 - 4931 (2016 )03 - 0007 - 03
Study of Survival Time and Clinical Efficacy of Highly Active Antiretroviral Therapy for HIV /AIDS
Lyu Riying1, Li Jianlong2, Qin Xionglin2,Zhu Yujia1, Qin Qiongfen1, Fu Shaoping1, Li Shixiong1, Xu Chaoyu1, Jiang Bo1
( 1. Eighth Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Guigang, Guangxi, China 537100;
2. Guigang Center for Disease Control, Guigang, Guangxi, China 537100 )
Abstract: Objective To study the survival time, treatment effect and Influence factors of highly active antiretroviral therapy for the
HIV / AIDS patients. Methods 3 100 cases of HIV /AIDS patients admitted in Guigang were collected as the research object,all pa-
tients received HAART and adopted COX proportional hazards model to analyze the survival factors and the risk factors that influenced
the effect of HAART. Results In the 3100 cases of patients, 146 cases of HIV infection received TCM treatment, accounting for
4. 71% ; 56. 00% suffered weight loss,35. 81% with persistent fever; 19. 37% zoster; 11. 58% persistent diarrhea; 7. 50% with dyspha-
gia. 190 cases died, accounting for 6. 13% ; 76 cases stopped medication, accounting for 2. 45% ; 527 cases were lost, accounting for
17. 00% ; 2 307 cases continued treatment,accounting for 74. 42% . Multivariate analysis showed that treatment begin CD4 + T cell count
level,opportunistic infections occur when the number of types of treatment,the average monthly number of medication leakage as the in-
fluential factors of the highly active antiretroviral therapy ( P < 0. 05 ) . Conclusion HAART AIDS treatment has ideal efficacy. During
the course of treatment effective measures to monitor changes in patients with CD4 + T and opportunistic infection should be taken,drug
education should be strengthened,and dynamic understanding of the patient should be achieved to make timely adjustment of the treatment.
Key words:HIV; HAART; survival time; influencing factors; efficacy
近年来,广西艾滋病疫情呈上升趋势,对人类免疫
缺陷病毒 (HIV) /获得性免疫缺乏综合征 (AIDS)的治疗
及其疗效观察是当务之急。高效抗逆转录病毒治疗
(HAART)可有效抑制患者体内病毒复制并促使免疫功
能恢复,改变 HIV感染后的发病过程,包括降低各种机
会性感染和病死率,以达到延长患者生命、提高其生活
质量的目的。同时,由于患者体内病毒量极大下降,可减
少 HIV 的传播,从而降低新发感染率。由于 HAART的
效果受到很多因素的影响,如患者的依从性、个体差异、
药物方案、药物毒副作用、开始治疗时间、治疗前血浆病
毒载量的水平等,因此及时评价 HAART后患者的生存
时间和治疗效果、了解影响患者生存时间和 HAART效
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·药物研究·
Drug Research