全 文 ：海南四种暗罗属植物挥发油对三种癌
细胞的体外增殖抑制作用
张　园 1, 2 ,王　菁 1, 2 ,刘冰晶 1 ,袁　媛 1 ,陈光英 1＊ ,张信文 2＊
(1海南师范大学省部共建热带药用植物化学教育部重点实验室 ,海口 571158;
2海南师范大学生命科学学院)
　　摘要:目的　初步研究海南四种暗罗属植物斜脉暗罗 、香花暗罗 、海南暗罗和细基丸的茎 、叶挥发油提取物的
体外抗肿瘤活性。方法　采用 MTT法检测斜脉暗罗叶挥发油(PPL)、斜脉暗罗茎挥发油(PPS)、香花暗罗叶挥发
油(PRL)、香花暗罗茎挥发油(PRS)、海南暗罗叶挥发油(PLL)、海南暗罗茎挥发油(PLS)、细基丸叶挥发油(PCL)、
细基丸茎挥发油(PCS)八种挥发油对人类肺腺癌细胞(SPCA-1)、肝癌细胞(BEL7402)和白血病细胞(K562)的体外
增殖抑制作用。结果　八种提取物对 3种癌细胞均显示出一定的抗肿瘤活性。 PPL对所测试的 SPCA-1、BEL7402
和 K562三种癌细胞的抑制作用较其他七种提取物更加明显 , IC50值分别为 4.01、2.70、4.29μg/ml。其余几种挥发
油只对一种或两种细胞的增殖有较好抑制作用。结论　四种暗罗属植物茎和叶提取出的挥发油均具有不同程度
的抗肿瘤增殖活性 , 大部分挥发油活性较好。
　　关键词:暗罗属植物;挥发油;增殖抑制
　　中图分类号:RQ946;R730.5　　文献标志码:B　　文章编号:1002-266X(2011)15-0062-03
　　暗罗属隶属于番荔枝科 ,全球暗罗属植物约有
120余种 ,我国有 17种 ,其中海南 7种 ,分别为斜脉
暗罗 、细基丸 、海南暗罗 、香花暗罗 、沙煲暗罗 、陵水
暗罗和暗罗[ 1] 。在民间 ,暗罗属许多植物可供药
用 ,海南岛黎族地区暗罗属植物长期用作治疗气滞
腹痛 、痛经 、梅核气等疾病 [ 1] 。韩公羽等[ 2]发现陵
水暗罗根中提取的暗罗素具有抗疟 、抗霉菌的作用 。
吕子明等[ 3]发现陵水暗罗枝 、叶中的巯基吡啶类化
合物有较强的细胞毒活性 。Verma等 [ 4]发现印度暗
罗属植物长叶暗罗叶的提取物及叶的氯仿部位能抑
制人类各种癌细胞的增殖 。我们前期研究发现海南
暗罗属植物叶和茎氯仿 、乙醇 、乙酸乙酯提取物对人
癌细胞具有一定抑制作用 。为进一步研究其抗肿瘤
作用的有效成分 , 2010年 8月 ,我们提取了斜脉暗
罗 、香花暗罗 、海南暗罗和细基丸的茎和叶挥发油进
行抗肿瘤活性研究 ,现报告如下 。
1　材料与方法
1.1　材料 　高压灭菌锅 (日本森展企业有限公
司),倒置显微镜(重庆光学仪器厂);ELx800酶标
仪(BioTek公司), CO2恒温培养箱(日本 SANYO公
司),超净工作台(苏州净化设备厂),可调式移液器
(BRAND公司), 96孔细胞培养板(Pore公司),电
基金项目:新世纪优秀人才支持计划项目(NCET-08-0656)。
＊通讯作者
子天平 (Sartious公司)。RPMI1640培养液 、胰酶
(Gibco公司),四甲基偶氮唑蓝(MTT, Sigma公司),
超级新生牛血清(杭州四季青生物科技有限公司),
二甲基亚砜(DMSO,天津市化学试剂二厂)。人肺
腺癌细胞(SPCA-1)、人肝癌细胞 (BEL-7402)和人
白血病细胞(K562)由中科院上海生物所提供。细
胞用含 10%胎牛血清 、100 μg/ml青霉素 、100 μg/
ml链霉素 、0.2%NaHCO3的 RPMI1640培养液 ,于
37 ℃、5%CO2饱和湿度的培养箱中培养。
1.2　植物来源与样品制备　斜脉暗罗 、香花暗罗 、
海南暗罗和细基丸采自海南 ,由海南师范大学生命
科学学院钟琼芯副教授鉴定 ,标本保藏于省部共建
热带药用植物化学教育部重点实验室。分别取斜脉
暗罗 、香花暗罗 、海南暗罗 、细基丸的茎和叶各 25 g,
用 300 ml乙醚 30℃索氏回流 8 h,所得提取物为挥
发油组分 ,即斜脉暗罗叶挥发油(PPL)、斜脉暗罗茎
挥发油(PPS)、香花暗罗叶挥发油(PRL)、香花暗罗
茎挥发油(PRS)、海南暗罗叶挥发油(PLL)、海南暗
罗茎挥发油(PLS)、细基丸叶挥发油(PCL)、细基丸
茎挥发油(PCS)八种挥发油 ,储存于 4 ℃备用。
1.3　八种挥发油对三种癌细胞的抑制率(IR)及半
抑制浓度 (IC50值)测定 　采用 MTT比色法[ 5, 6] 。
SPCA-1、BEL-7402和 K562分别以 2×104 、7×104 、1
×104个 /ml接种于 96孔板中 ,每孔体积 180μl,在
CO2培养箱内培养 8 ～ 12h。同时设置空白组(仅加
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入不含细胞的培养液)和对照组(以培养液替代药
物)。待细胞贴壁后 ,加入不同浓度(板内终质量浓
度为 1、 10、 100 μg/ml)PPL、PPS、PRL、PRS、PLL、
PLS、PCL、PCS各 20 μl。加药细胞培养 44 h后 ,每
孔加入 MTT溶液(1mg/ml)50 μl,继续在培养箱内
孵育 4 h,取出倾去上清液 ,每孔加入 150μl的 DM-
SO,振荡 10 min,使用酶标仪于 570 nm下测定各孔
的光吸收值 ,实验重复 3次。 IR(%)=[ OD(空白
对照)-OD(药物作用)] /OD(空白对照)×100%。
测定 8种挥发油对三种细胞增殖抑制作用的 IC50
值 。
1.4　统计学方法　采用 SPSS13.0统计软件包进
行 OneWayAnova统计分析 。计量数据均以 x±s
表示 ,行 t检验 , P≤0.05为差异有统计学意义 。
2　结果
8种挥发油对三种癌细胞均有一定抑制作用(P
均 <0.05),且均呈一定剂量依赖性 ,在最大浓度为
100μg/ml时的抑制率均接近 100%。 8种挥发油
对 SPC-A-1、BEL-7402和 K562的 IR见图 1、图 2、图
3,对三种细胞增殖抑制作用的 IC50值见图 4。
对 SPCA-1抑制活性较好的 PPL的 IC50为 4.01
μg/ml, PRL的 IC50为 3.39 μg/ml, PRS的 IC50为
6.40μg/ml;对 BEL7402抑制活性较好的 PPL的
IC50为 2.70 μg/ml, PCL的 IC50为 6.43 μg/ml;对
K562抑制活性较好的 PPL的 IC50为 4.29 μg/ml,
PPS的 IC50为 4.90 μg/ml, PLL的 IC50为 5.56 μg/
ml。其中 PPL对三种细胞的抑制作用均较好 ,优于
其他七种。 PPS对 K562的抑制作用强于 SPCA-1
和 BEL-7402。PCL对三种人癌细胞抑制活性亦均
较好 , IC50均 <15μg/ml。 PLS和 PCS对三种癌细胞
均有一定抑制作用 , IC50均 <25 μg/ml,但与其余六
种提取物比较无显著差异 。
3　讨论
癌症是当今危害人类健康的主要疾病之一 ,目
前化学药物抗肿瘤作用确切 ,疗效显著 ,但毒副作用
图 1　8种挥发油对 SPC-A-1的抑制活性
　　注:PPL为斜脉暗罗叶挥发油 , PRL为香花暗罗叶挥发油 PLL为
海南暗罗叶挥发油 , PCL为细基丸叶挥发油 , PPS为斜脉暗罗茎挥发
油 , PRS为香花暗罗茎挥发油 PLS为海南暗罗茎挥发油 , PCS为细基
丸茎挥发油
大 ,长期应用易产生耐药性。我国有丰富的药用植
物资源 ,而位于我国最南端的海南 ,由于特殊的地理
位置和气候环境 ,资源尤其丰富 ,药用植物 2500多
种 ,占全国药用植物的 30%左右 。因此从海南药用
植物中寻找具有抗肿瘤活性的药物成为研究热点 ,
将对中药抗癌药物的开发起到一定推动作用 。
本研究首次对海南几种暗罗属植物中提取的挥
发油抗肿瘤活性进行报道 ,暗罗属植物挥发油提取
物的抗肿瘤活性总的来说较好 ,但种间存在一些差
异。成分分析表明 ,这几种挥发油里面主要成分是
倍半萜类 。多项研究表明 ,倍半萜类化合物具有抗
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肿瘤活性。
于峰等 [ 7]发现从菊科植物中分离出的三种倍
半萜类化合物对人脑神经胶质瘤细胞 、肝癌细胞 、人
黑色素瘤和人乳腺癌脑转移肿瘤细胞的生长具有抑
制作用 。王璐等 [ 8]发现土木香中的 18种倍半萜对
人肺癌细胞 、人胃癌细胞 、人急性早幼粒白血病细
胞 、人慢性髓性白血病细胞 、人前列腺癌细胞 、人乳
腺癌细胞具有增殖抑制作用。
分析本研究资料 , 4种暗罗属植物挥发油均具
有较好的抗肿瘤增殖活性 ,下一步我们将对活性较
好的几个暗罗植物挥发油行进一步的活性成分分
析 ,分离出单体化合物 ,进行体内体外的活性验证 ,
确定其有效成分 ,并进行一些相关的抗癌机理研究 ,
确定有效单体的具体抗癌机制 ,为抗肿瘤中药的开
发提供基础数据和参考。
参考文献:
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殖活性研究 [ J] .天然产物研究与开发 , 2010, 22(3):506-509.
[ 8] 王璐 ,赵烽 ,何恩其 ,等.18种土木香倍半萜对 6种人源肿瘤细
胞增殖的影响 [ J] .天然产物研究与开发 , 2008, 20(5):808-812.
(收稿日期:2010-11-10)
子痫前期患者血清 HSP-70和
hs-CRP检测及意义
王永静 1 ,靳卫国 2 ,席作明1 ,赵　青 1 ,牛占杰 2 ,孙雪晶1
(1聊城市东昌府区妇幼保健院 ,山东聊城 252000;2聊城市人民医院)
　　摘要:目的　探讨热休克蛋白 70(HSP-70)和超敏 C反应蛋白(hs-CRP)在子痫发生中的作用。方法　选取子
痫前期患者 90例(观察组), 其中病情为轻度 30例 , 重度 60例;正常妊娠晚期孕妇 50例(对照组)。分别用 ELISA
双抗体夹心法 、免疫比浊法检测血清 HSP-70及 hs-CRP水平。结果　观察组血清 HSP-70及 hs-CRP水平均显著高
于对照组 , 且重度者明显高于轻度者 , P均 <0.01。结论　HSP-70和 hs-CRP均参与了妊娠期高血压疾病的发生 、
发展 , 二者可作为诊断及病情判定 、预后评估的指标之一。
　　关键词:子痫;超敏 C反应蛋白;热休克蛋白 70
　　中图分类号:R714.245　　文献标志码:B　　文章编号:1002-266X(2011)15-0064-02
　　动物实验和产后胎盘组织细胞中热休克蛋白
(HSP)70的表达以及心血管疾病与超敏 C反应蛋
白(hs-CRP)的相关研究为妊娠期高血压疾病发病
机制的研究提供了新线索 。 2010年 4 ～ 10月 ,我们
检测了子痫前期患者血清 hs-CRP和 HSP-70水平 ,
旨在探讨二者在子痫发生中的作用。
1　资料与方法
1.1　临床资料　观察组为 90例子痫前期患者 ,年
龄(31.6±1.26)岁 ,孕周(34.6±1.46)周 ,基础体
质量(50.5±0.76)kg。均符合 《妇产科学》[ 1]中子
痫前期诊断标准 ,排除器质性心脏病 ,高血压 ,糖尿
病 ,肿瘤 , 感染 ,肝肾等疾病。其中病情为轻度 30
例 ,重度 60例 。同时选取同期血压正常的妊娠孕妇
50例作为对照组 ,年龄(31.1±0.95)岁 ,孕周(34.1
±1.85)周 ,基础体质量(50.2±0.85)kg。
1.2　血清 hs-CRP及 HSP-70水平检测　抽取两组
清晨空腹静脉血 3ml, 1 000 r/min离心 5 min,分离
血清 ,采用免疫比浊法检测 hs-CRP水平 , ELISA法
检测 HSP-70水平 , 450 nm波长测量其吸光度值
(OD值),以标准浓度为横坐标 , OD值为纵坐标 ,绘
制标准曲线 ,以 OD值于标准曲线上计算相对应的
浓度 ,单位为 ng/ml。
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