全 文 ：第 30卷 ,第 3期 光　谱　实　验　室 Vol . 3 0 , No . 3
2 0 1 3年 5月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory May , 2 0 1 3
柳叶蜡梅叶挥发油体外抗氧化活性①
① 安徽省省级自然科学研究项目 ( K J2011B166)
② 联系人 ,手机: ( 0) 13855969819; E-mail: xych en1970@ yahoo. com. cn
作者简介:陈向阳 ( 1970— ) ,男 ,安徽省黄山市人 ,讲师 ,硕士 ,主要从事生态学和天然产物研究。
收稿日期: 2012-12-19;接受日期: 2013-01-07
陈向阳②　毕淑峰　姚 瑶　孙阳阳　罗旭芳
(黄山学院生命与环境学院　安徽省黄山市西海路 39号　 245041)
摘　要　以总还原力、对 DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除作用、金属离子螯合能力为指标评价
2%柳叶蜡梅叶挥发油体外抗氧化活性。结果表明:挥发油总还原力和对 DPPH自由基、超氧阴离子自由基
的清除作用的 IC50值分别为 182. 58、 89. 66、 53. 42μL。 挥发油总还原力和对 DPPH自由基的清除能力低
于 1mg /mL维生素 C,而对超氧阴离子自由基清除能力和金属离子的螯合能力明显高于 1mg /mL维生素
C和 0. 5mg /mLEDTA。柳叶蜡梅叶挥发油具有较好的体外抗氧化活性 ,值得进一步开发利用。
关键词　柳叶蜡梅 ;挥发油 ;抗氧化活性
中图分类号: O657. 32　　　文献标识码: A　　　文章编号: 1004-8138( 2013) 03-1484-04
1　引言
柳叶蜡梅 (Chimonanthus Sal ici fol icus Hu)为蜡梅科蜡梅属半常绿灌木 ,分布于安徽东南部、江
西西北部、浙江中南部等山区 ,为中国特有植物。挥发油是植物的活性成分之一 ,柳叶蜡梅叶挥发油
的化学成分已有报道 [1, 2 ] ,但对其抗氧化活性研究鲜见报道。本文以还原力、 DPPH自由基清除能力
等评价柳叶蜡梅叶挥发油的体外抗氧化活性 ,为柳叶蜡梅的药理研究和资源开发利用提供科学依
据。
2　实验部分
2. 1　仪器、试剂与材料
UV 754N型紫外可见分光光度计 (上海精密科学仪器有限公司 ) ,挥发油提取器。1, 1-二苯基苦
基苯肼 [DPPH,梯希爱 (上海 )化成工业发展有限公司 ] ,菲洛嗪 ( Ferrozine,东京化成工业株式会
社 ) ;乙二胺四乙酸 ( EDTA)、铁氰化钾等均为国产分析纯。实验室用水为蒸馏水。柳叶蜡梅叶采自
安徽省黄山市。
2. 2　实验方法
2. 2. 1　挥发油的提取
准确称取粉碎后的样品 20g ,置于烧瓶中 ,用挥发油提取器按水蒸气蒸馏法提取 6h,得到具有
浓郁香味的无色透明油状物 ,无水硫酸钠干燥后用丙酮稀释成体积分数 2% ,备用。
2. 2. 2　挥发油总还原力的测定
取不同体积挥发油样品 ,加入 pH6. 6磷酸缓冲液 ( 0. 2mol /L) 1mL及 1%铁氰化钾 1mL,置于
50℃水浴 20min后急速冷却 ,加入 10%三氯乙酸 1mL, 4000r /min离心 10min,取上清液 2. 5mL,加
入 2. 5mL蒸馏水和 0. 1%三氯化铁 0. 5mL,室温反应 10min,于 700nm处测吸光度 [3 ]。
2. 2. 3　挥发油对 DPPH自由基清除作用的测定
取不同体积挥发油与 4mL24mg /L的 DPPH乙醇溶液混合 ,避光 2h,在波长 517nm处测吸光
度 ( Ai ) ,以不加样品的 DPPH乙醇液为对照 ,测定对照组吸光度 ( A0 ) [4 ]。 清除率 (% )= ( 1- Ai /A0 )
× 100% 。
2. 2. 4　挥发油对超氧阴离子自由基清除作用的测定
分别向 5支试管加入 4. 5mL pH8. 2、 50mmol /L Tris-HCl缓冲液和不同体积的挥发油 ,混匀后
在 25℃恒温水浴中保温 20min,取出后立即加入在 25℃预热过的 3mmol /L邻苯三酚溶液 0. 3mL
启动反应。 5min后加 4滴 10mol /L盐酸终止反应 ,在 325nm处测吸光度 ( An )。 以加 0. 3mL
10mmol / L HCl代替邻苯三酚溶液为对照 ,测其吸光度 ( A0 ) [5 ]。 清除率 (% ) = ( A0 - An ) /A0×
100%。
2. 2. 5　挥发油对金属螯合性的测定
将不同体积挥发油加入 2. 8mL蒸馏水中 ,加 2mmol /L的 FeCl2· 4H2O 50μL和 5mmol /L的
Ferrozine 150μL, 10min后在 562nm处测吸光度 ( At ) ,以相同体积蒸馏水代替挥发油作为空白对
照 ,测其吸光度 ( A0 ) [6 ]。金属螯合率 (% )= ( 1- At /A0 )× 100%。
3　结果与讨论
3. 1　挥发油的总还原力
由图 1可知 , 2%柳叶蜡梅叶挥发油总还原力随着样品体积的增加而逐渐增加 ,两者呈现较好
的量效关系。挥发油的总还原力低于 1mg /mL维生素 C,样品量少时 ,两者还原力的差异较少 ,随着
体积的增加 ,两者还原力的差异逐渐增大。 挥发油体积 (x )与吸光度 ( y )间的回归方程为 y=
0. 0026x+ 0. 0253(r= 0. 9795) , IC50 (吸光度为 0. 50时样品量 )为 182. 58μL。
3. 2　挥发油对 DPPH自由基的清除能力
由图 2可知 ,随着挥发油样品量的增加 ,对 DPPH自由基的清除作用逐渐增强 ,两者呈量效关
系 ,但随着样品量的增多 ,清除率增加的幅度逐渐降低。 1mg /mL维生素 C样品量与清除率的变化
趋势与挥发油一致 ,但维生素 C的清除作用强于挥发油。 挥发油体积 ( x )与清除率 (y )之间的回归
方程为 y= 0. 4412x+ 10. 443(r= 0. 9662) , IC50 (清除率为 50%时的样品量 )为 89. 66μL。
图 1　挥发油的总还原力 图 2　挥发油对 DPPH自由基的清除作用
1485第 3期 陈向阳等:柳叶蜡梅叶挥发油体外抗氧化活性
3. 3　挥发油对超氧阴离子自由基的清除能力
由图 3可知 ,挥发油对超氧阴离子自由基有极佳的清除作用 ,当样品量为 100μL时 ,清除率达
95. 93% 。挥发油对超氧阴离子的清除作用明显优于 1mg /mL维生素 C,样品量为 20μL时 ,挥发油
与维生素 C清除率差异较小 ,随着样品量的增多 ,两者的清除率差异逐渐增大。挥发油体积 (x )与
清除率 ( y )之间的回归方程为 y= 1. 1002x- 8. 776(r= 0. 9919) , IC50为 53. 42μL,而维生素 C的
IC50为 101. 61μL时 ,清除率为 50%时 ,维生素 C体积是挥发油的 1. 90倍。
3. 4　挥发油对金属离子螯合能力
金属离子在自由基氧化过程中起催化剂作用 ,将金属离子螯合可以大大降低金属离子的催化
作用 ,从而阻止自由基的链式反应。由图 4可知 ,挥发油对金属离子的螯合率优于 0. 5mg /mL的
EDT A,样品量为 20μL时 ,挥发油和 EDTA螯合率分别为 74. 42%和 23. 40% ,但随着样品量的增
加 ,挥发油螯合作用未显著增加。
图 3　挥发油对超氧阴离子自由基的清除作用 图 4　挥发油对金属离子的螯合作用
4　结论
人体衰老及癌症、炎症、多种心脑血管疾病等都与自由基过量和失衡有关。人工合成的抗氧化
剂具有潜在毒性、致癌等缺点 ,而天然抗氧化剂具有安全、低毒等优点 ,从传统中药中寻找和发现天
然抗氧化剂具有重要意义。
本研究以还原力、金属螯合性、对 DPPH自由基、超氧阴离子的清除作用为指标评价柳叶蜡梅
叶挥发油的体外抗氧化活性。结果表明 , 2%柳叶蜡梅叶挥发油总还原力略低于 1mg /mL维生素 C,
其 IC50为 182. 58μL;挥发油对 DPPH自由基、超氧阴离子自由基清除作用的 IC50分别为 89. 66、
53. 42μL,挥发油对 DPPH自由基的清除能力低于 1mg /mL维生素 C,但对超氧阴离子自由基的清
除能力明显高于 1mg /mL维生素 C;挥发油对金属离子螯合能力高于 0. 5mg /mL的 EDT A。 2%柳
叶腊梅叶挥发油就具有较好的体外抗氧化活性 ,柳叶蜡梅叶挥发油具有开发天然抗氧化剂潜力。
参考文献
[1 ]李阳春 ,孙静芸 ,盛春等 .柳叶腊梅挥发油 GC指纹图谱研究 [ J] .中成药 , 2008, 30( 8): 1190— 1192.
[2 ]欧阳婷 ,麦曦 ,夏红英等 .柳叶腊梅挥发油化学成分的 GC-M S分析 [ J ].南昌大学学报 (理科版 ) , 2010, 34( 1): 78— 80.
[3 ]莫开菊 ,柳圣 ,程超 .生姜黄酮的抗氧化活性研究 [ J ].食品科学 , 2006, 27( 9): 111— 113.
[4 ]赵金伟 ,李范洙 ,张先 .苹果梨酚类物质抗氧化活性研究 [ J ].食品科学 , 2010, 31( 17): 170— 172.
[5 ]杨润亚 ,明永飞 ,王慧 .无花果叶中总黄酮的提取及抗氧化活性研究 [ J] .食品科学 , 2010, 31( 16): 78— 82.
1486 光谱实验室 第 30卷
[6 ]杨少辉 ,宋英今 ,王洁华等 .雪莲果体外抗氧化和自由基清除能力 [ J] .食品科学 , 2010, 31( 17): 166— 169.
Antioxidant Activity of Vol atile Oil from Leaves
of Chimonanthus salicifolicus Hu in Vitro
CHEN Xiang-Yang　 BI Shu-Feng　 YAO Yao　 SUN Yang-Yang　 LUO Xu-Fang
(College o f Life and Environment Science, Huangshan University, Huangshan , Anhui 245041, P. R.China)
Abstract　 The antioxidant activi ty in vitro of 2% volatile oil from leaves of Chimonanthus
Salicifolicus Hu was evaluated by total reducing pow er, scavenging capaci ty against DPPH· and
O
-
2· , metal chelating ability. The results show ed that the IC 50 values of to tal reducing pow er,
scavenging capaci ty against DPPH· and O-2 · were 182. 58, 89. 66, 53. 42μL. The total reducing
power, and scavenging capacity against DPPH· of volati le oil w ere lower than that of 1mg /mL V C,
but the scavenging capaci ty against O
-
2· and metal chelating ability of v olatile oil were significant ly
higher than that of 1mg /mL VC and 0. 5mg /mL EDTA. The volatile oil f rom leaves of Chimonanthus
Salicif olicus Hu had good antioxidant activity in vit ro. It is w orth to develop fo r application.
Key words　Chimonanthus sal ici fol icus Hu; V olatile Oil; Antioxidant Activity
投 稿 须 知
作者来稿一经交付 ,即被认为作者这份稿件没有投寄其他期刊 ;并且一旦录用则视为作者同意将该论文
以书面形式、光盘形式和以网络形式发表的权利转让给了本刊编辑部 ,任何文摘刊物都可免费刊登摘要。 若
不同意上述意见 ,请另投他刊。
《光谱实验室》编辑部
中国学术期刊 (光盘版 )电子杂志社声明
《光谱实验室》已许可中国学术期刊 (光盘版 )电子杂志社在中国知网 ( w w w. cnki. net)及其系列数据库产
品中以数字化方式复制、汇编、发行、信息网络传播《光谱实验室》全文。 该社著作权使用费与《光谱实验室》稿
酬一并支付。 作者向《光谱实验室》提交文章发表的行为即视为同意我社上述声明。
中国学术期刊 (光盘版 )电子杂志社
2012-09-17
1487第 3期 陈向阳等:柳叶蜡梅叶挥发油体外抗氧化活性