全 文 ：苗药铁筷子挥发油镇痛作用及急性毒性研究
钱海兵，徐玉平，靳凤云* (贵阳中医学院，贵州贵阳 550002)
摘要 ［目的］研究苗药铁筷子挥发油的镇痛及急性毒性作用。［方法］采用小鼠扭体致痛法和热板致痛法考察苗药铁筷子挥发油的镇
痛作用，并采用改良寇氏法测定其 LD50及 95%可信区间。［结果］铁筷子挥发油对由冰醋酸引起的小鼠扭体反应有明显的抑制作用，可
以提高小鼠热板法的痛阈值;铁筷子挥发油对小鼠灌胃的 LD50为8． 50 ml /kg，95%的可信区间为7． 20 ～10 ml /kg。［结论］铁筷子挥发油
具有明显的镇痛作用，且毒性相对较低。
关键词 铁筷子;挥发油;镇痛;急性毒性
中图分类号 S567;Q946． 49 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2012)12 －07095 －02
The Analgesic Effect and Acute Toxicity of Essential Oil from Chimonanthus praecox
QIAN Hai-bing et al (Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang，Guizhou 550002)
Abstract ［Objiective］To study the analgesic effects and acute toxicity of essential oil from Chimonanthus praecox． ［Method］The analgesic
effects of essential oil were tested by hot-plates test，twisting body test，and the modified Karberss method was used to evaluate LD50 ． ［Result］
The essential oil from Chimonanthus praecox could significantly reduce the times of twisting body induced by acetic acid，and greatly improve
the pain threshold of hot-plate in mice． LD50 of essential oil from Chimonanthus praecox was 8． 50 ml /kg，95% confidence interval was 7． 20
－ 10 ml /kg． ［Conclusion］The essential oil from Chimonanthus praecox showed significant analgesic effects and had relatively low toxicity
Key words Chimonanthus praecox;Essential oil;Analgesic effect;Acute toxicity
基金项目 贵阳市科技计划项目(筑科合同［2011204］22 号) ;贵州省
科技基金项目(黔科合 J字［2009］2150 号)。
作者简介 钱海兵(1977 － ) ，男，河南卫辉人，副教授，从事中药药理学
研究，E-mail:qhb888@ sohu． com。* 通讯作者，教授，从事
中药质量控制，E-mail:jinfengyun01@ 163． com。
收稿日期 2012-01-19
苗药铁筷子(Helleborus thibetnus Franch．)为腊梅科腊梅
属(Chimonanthus)植物腊梅(Chimonanthus praecox(L．)
1ink．)及山腊梅(Chimonanthus nitens Oliv．)的干燥根［1］，其
化学成分主要以挥发油、生物碱和香豆素类化合物为主。药
理研究表明，其具有很好的杀菌和抑菌活性以及清除自由基
等作用，为民间作治疗风湿痹痛的常用中药材。课题组已经
对铁筷子挥发油成分进行了气相色谱 －质谱连用分析，并鉴
定出 30个化学成分，但对其药理作用尚未进行深入研究。
试验结合其临床应用，进行了铁筷子挥发油镇痛作用的研
究，并对其进行了急性毒性的初步研究，以期为铁筷子的进
一步开发应用提供理论依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。铁筷子，采自贵州龙里，经贵阳中医学院
王祥培副教授鉴定为腊梅科腊梅属植物腊梅(Chimonanthus
praecox(L．)1ink)的根。
1． 1． 2 试验动物。SPF级昆明种小鼠，体重(20 ± 2)g，雌雄
各半，购于第三军医大学大坪医院野战外科研究所医学实验
动物中心，许可证号 SCXK(渝)2001-0005。
1． 1． 3 主要仪器。YLS-6B智能热板仪，购自安徽省淮北正
华生物仪器设备有限公司。
1． 1． 4 主要试剂。铁筷子挥发油，按药典水蒸气蒸馏法制
备，得率为 0． 4%，试验时用金龙鱼调和油稀释。冰醋酸，购
自天津致远化学试剂有限公司。
1． 2 方法
1． 2． 1 铁筷子挥发油对醋酸引起的扭体反应的影响［2］。取
50只昆明种小鼠，雌雄各半，随机分为 5组，每组 10 只，分别
为模型对照组、阿司匹林组(0． 2 g /kg)和铁筷子挥发油高、
中、低剂量组(按生药量计为 20、10和 5 g /kg)。每日灌胃给
药 1次，连续给药 7 d，模型组给予等体积的蒸馏水;于末次
给药 1 h后，各组分别按 10． 0 ml /kg腹腔注射浓度 0． 6%醋
酸，观察各组动物 20 min 内扭体反应出现次数，并计算镇
痛率:
镇痛率(%)=(空白对照组扭体次数 －给药组扭体次
数)/空白对照组扭体次数 ×100。
1． 2． 2 铁筷子挥发油对小鼠热板刺激痛阈的影响［3］。取雌
性昆明种小鼠，试验前设定热板温度为(55 ± 0． 5)℃进行痛
阈筛选，小鼠空腹 12 h后，以放置于热板上小鼠出现舔后足
所需时间(s)为该鼠正常痛阈值。选择正常痛阈值在 5 ～ 30
s内的合格小鼠 50只，随机分为 5组。给药前再次测定小鼠
痛阈值 2次，取平均值作为该鼠给药前痛阈。分组及给药方
法同“1． 2． 1”。分别测定给药后 30、60和 90 min痛阈值。
1． 2． 3 铁筷子挥发油灌胃对小鼠急性毒性试验。参照文
献［4］，根据预试验结果得到 Dm为 16 ml /kg，Dn为 3． 8 ml /kg
(Dm为 100%致死剂量，Dn 为 0 致死剂量) ，即 Dm/Dn 为
4. 2。以纯挥发油给药量 16 ml /kg 为最高剂量组，各组间高
低剂量比设定为 0． 75，查表得应设计组数为 5 ～ 6组，各组给
药剂量依次为 16、12、9、6． 75、5． 06 和 3． 8 ml /kg。各浓度组
铁筷子挥发油按照第比稀释法配制。
取昆明种小鼠60只，随机分为6组，每组10只。禁食不
进水 12 h后，分别将上述剂量的铁筷子挥发油按 20． 0 ml /kg
给予动物一次性灌胃，即可观察给药后各组出现的毒性反
应，连续观察 7 d，记录动物的毒性反应及死亡情况，死亡动
物尸检，记录病变情况。
1． 2． 4 统计学处理。试验数据采用统计学软件 SPSS13． 0
处理，组间作 t检验，P ＜0． 05为有统计学意义。
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2012，40(12):7095 － 7096 责任编辑 石金友 责任校对 李岩
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.12.195
2 结果与分析
2． 1 铁筷子挥发油对醋酸引起的扭体反应的影响 由表 1
可知，与空白对照组相比，在醋酸诱发小鼠扭体反应试验中，
铁筷子挥发油具有明显的镇痛作用，高、中和低剂量组的镇
痛率分别达到 43%、37%和 19%，其中以高剂量组(20 g /kg)
最为明显(P ＜0． 01)。
表 1 铁筷子挥发油对醋酸诱发小鼠扭体反应的影响(珔x ± s，n =10)
组别 剂量∥g /kg 扭体次数 镇痛率∥%
空白组 － 25． 7 ±5． 10 －
阿司匹林 0． 2 10． 7 ±3． 06＊＊ 58
铁筷子挥发油高剂量组 20． 0 14． 7 ±3． 27＊＊ 43
铁筷子挥发油中剂量组 10． 0 16． 3 ±6． 04＊＊ 37
铁筷子挥发油低剂量组 5． 0 20． 8 ±4． 26* 19
注:与模型对照组比较，* P ＜0． 05，＊＊P ＜0． 01。
2． 2 铁筷子挥发油对小鼠热板刺激痛阈的影响 由表 2
可知，与空白组相比，铁筷子挥发油在给药 60 min 后，具有
明显的提高小鼠热刺激痛阈的作用，且高、中和低剂量组均
有明显作用，高剂量(20 g /kg)作用最强。在给药 90 min
后，高剂量组(20 g /kg)仍具有明显作用，低剂量组作用已
不明显。结果表明，铁筷子挥发油的镇痛作用具有一定的
时间依赖性。
2． 3 铁筷子挥发油灌胃对小鼠急性毒性试验 铁筷子挥发
油经稀释后，毒性作用相对比较缓和，但各剂量组给药 20
min左右开始出现不适反应，有蜷卧、昏睡和群居等，部分出
现腹部抽动，重者呼吸抑制，出现死亡。各组死亡动物菌出
现在给药3 d以内，3 d后未出现死亡现象。死亡动物进行病
理学检查，结果未发现心、肝、肾、脾合肺等重要器官的明显
异常改变。按改良寇氏法计算出小鼠铁筷子挥发油 LD50为
8． 50 ml /kg，95%可信区间为 7． 20 ～10. 00 ml /kg。
表 2 铁筷子挥发油对小鼠热板刺激痛阈的影响(珔x ± s，n =10)
组别 剂量∥g /kg 基础痛阈值∥s
给药后痛阈值∥s
30 min 60 min 90 min
空白组 16． 76 ±4． 32 16． 03 ±3． 62 18． 15 ±4． 44 17． 47 ±4． 67
阿司匹林 0． 2 16． 03 ±3． 18 23． 37 ±4． 43＊＊ 26． 82 ±7． 03＊＊ 27． 28 ±5． 86＊＊
铁筷子挥发油高剂量组 20． 0 15． 81 ±3． 55 20． 91 ±6． 07 24． 16 ±4． 63＊＊ 25． 21 ±7． 99＊＊
铁筷子挥发油中剂量组 10． 0 16． 35 ±3． 66 19． 31 ±5． 68* 23． 26 ±6． 11* 22． 65 ±5． 96*
铁筷子挥发油低剂量组 5． 0 15． 88 ±3． 62 17． 10 ±4． 22 19． 51 ±5． 00* 19． 85 ±3． 51
注:与模型对照组比较，* P ＜0． 05，＊＊P ＜0． 01。
表 3 铁筷子挥发油灌胃对小鼠急性毒性试验
组别
剂量
mg /kg·d
logd∥x 动物数 n 死亡数 n死亡率 P P2 P － P2
1 3． 80 0． 579 8 10 0 0． 00 0． 00 0
2 5． 06 0． 704 2 10 1 0． 1 0． 01 0． 09
3 6． 75 0． 829 3 10 4 0． 4 0． 16 0． 24
4 9． 00 0． 954 2 10 6 0． 6 0． 36 0． 24
5 12． 00 1． 079 1 10 7 0． 7 0． 49 0． 21
6 16． 00 1． 204 1 10 9 0． 9 0． 81 0． 09
Σ － － － － 2． 7 1． 83 0． 87
3 讨论
扭体法是通过冰醋酸刺激小鼠腹膜发生炎症性疼痛而
表现扭体反应，多用于具有外周镇痛作用药物的筛选;热板
法是通过热刺激小鼠足部产生痛反应，多用于具有中枢镇痛
作用药物的筛选。课题组已经对铁筷子挥发油成分进行了
气相色谱 －质谱连用分析，并鉴定出 30 个化学成分［5］。该
试验结果进一步表明铁筷子挥发油具有明显抑制小鼠的扭
体反应、提高小鼠热刺激痛阈的作用，为铁筷子挥发油进一
步研究镇痛作用作用机制奠定了药效学基础。
急性毒性试验表明，铁筷子挥发油的 LD50为 8． 50
ml /kg，95%可信区间为 7． 20 ～ 10． 00 ml /kg。如按苗药铁筷
子挥发油得率相当于铁筷子生药量为 2 125 g /kg，但铁筷子
在民间成人临床应用同为 15 g，成人按 60 kg计算，依据药理
学试验中试验动物与人之间的等效剂量，相当于临床剂量的
850倍，说明铁筷子挥发油临床使用毒性较小，比较安全。
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