全 文 ：长叶点地梅 (Androsace longifolia) ，为报春花
科点地梅属的多年生草本花卉，生于多石砾的山
坡，岗顶和砾石质草原，对生境要求低，适应性
强，具有较好的耐践踏性，是一种良好的园林地被
植物。其植株低矮，花朵娇小，花色清新，东北地
区的花期在 5 月份左右 [1]，是该地区难得的早春
花卉，具有很高的观赏价值。据报道点地梅属植物
具有一定药用价值 [2-8] ，可以显著提高人肝癌细胞
抗增殖活性等 [9]，长叶点地梅的园林开发应用极
少，多处于野生状态，对其相关研究鲜有报道。目
前，对报春花科报春花属的植物组织培养研究的
较多，点地梅属植物组织培养方面的研究迄今很
少。聂勇[10]以点地梅[A.umbellate(Lour.)Merr.]无菌
苗的嫩叶为外植体，研究了不同质量浓度下的
2,4-D 和 6-BA 对愈伤组织诱导的影响。张彦妮
等 [11-12]对长叶点地梅愈伤组织的诱导和植株的再
生以及细胞悬浮培养的条件进行了研究。但这些
文献均未对长叶点地梅叶片愈伤组织诱导的影响
因子进行较为全面的研究。
愈伤组织是指在培养或自然条件下，植物细
胞脱分化不断增殖所产生的主要由薄壁细胞构成
的组织。其诱导成功与否影响到组织培养后续的
研究。研究表明，愈伤组织的形成除了与创伤有关
外，还主要与植物内源或外源的激素有关 [13]。因
此，在愈伤组织诱导的过程中，植物生长调节剂的
种类和浓度最为重要，研究最完善。然而，影响外
植体愈伤诱导的因素诸多且少有系统分析，尤其
忽略了大量元素、琼脂浓度、碳源及暗处理等条件
在愈伤诱导过程中的影响。本研究探讨植物生长
调节剂、大量元素 、琼脂浓度、碳源及暗处理对长
叶点地梅叶片诱导愈伤组织的影响，以期进一步
完善长叶点地梅组培快繁技术体系。
收稿日期：2015-03-10；修订日期：2015-04-11
作者简介：陈素波（1986—），女，内蒙古赤峰人，助理工程师，硕士，主要从事植物种植设计工作。
长叶点地梅叶片愈伤组织诱导影响因子分析
陈素波
(北京远大奥发园林绿化有限公司，北京 100000)
摘 要：以长叶点地梅(Androsace longifolia)无菌实生苗为试验材料，研究植物生长调节剂、大量元素、琼脂、蔗糖、暗处理等因子
对长叶点地梅愈伤组织诱导的影响。结果表明，2,4-D更适合长叶点地梅叶片愈伤的诱导，诱导愈伤组织最适宜的培养基是 MS
基本培养基附加 1.0 mg·L-1 2,4-D+0.2 mg·L-1 6-BA+3%蔗糖+0.8%琼脂，诱导率为 95.0%；暗处理不利于长叶点地梅叶片愈伤的
诱导。
关键词：长叶点地梅；愈伤组织诱导；影响因子
中图分类号：Q813 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006－6500.2015.06.031
Analysis of Callus-inducible Factor of Androsace longifolia Leaf
CHEN Su-bo
(Beijing Yuanda Landscaping Limited Company，Beijing 100000，China)
Abstract: Taking Androsace longifolia sterile seedlings as experimental materials, the effects of plant growth regulator, macroelement,
agar, sugar and dark treatment on Androsace longifolia blade callus induction was studied. The results showed that 2,4-D better suit-
ed to Androsace longifolia blade callus induction, the most suitable medium was MS basic medium supplemented with 1.0 mg·L -1
2,4-D + 0.2 mg·L-1 6-BA + 3% sucrose + 0.8% agar, induction rate was 95.0%; dark treatment was not conducive Androsace leaf
callus induction.
Key words: Androsace longifolia; callus induction; impact factor
天津农业科学 Tianjin Agricultural Sciences 2015，21（6）：131-134
园林绿化
第 21卷天津农业科学
1 材料和方法
1.1 材 料
长叶点地梅无菌实生苗。
1.2 方 法
1.2.1 6-BA 与 NAA2,4-D 组合对长叶点地梅叶
片诱导愈伤的影响 将长叶点地梅无菌实生苗的
叶片切成 0.5 cm2 左右的小块，接入不同浓度
2,4-D 和 6-BA 组合及 NAA 和 6-BA 组合的 MS
培养基（表 1）上，每种培养基接种 30 个外植体。
30 d后，统计叶片的诱导率、愈伤的长势等指标。
1.2.2 大量元素对叶片诱导愈伤的影响 以长
叶点地梅叶片为外植体，根据 1.2.1 试验结果，确
定激素浓度配比，探究大量元素对叶片诱导愈伤
的影响，培养基类型分别为 MS、1/2MS、1/4MS，每
种培养基接种 20个外植体，30 d后，统计分析诱
导率及愈伤长势等。
1.2.3 碳源 、琼脂 、暗处理对叶片诱导愈伤的影
响 以 1.2.1 与 1.2.2 结果，确定培养基种类，以
长叶点地梅叶片为外植体（20 个），比较不同碳源
（蔗糖、麦芽糖、葡萄糖）、琼脂浓度（分别为
5.0，6.0，7.0，8.0，9.0 g·L-1）、暗处理（7，14，21 d）
等因素对叶片愈伤诱导的影响，30 d 后，统计分
析诱导率及愈伤长势等。
2 结果与分析
2.1 6-BA 与 NAA 或 2,4-D 组合对长叶点地梅
叶片诱导愈伤的影响
结果表明（图 1），2,4-D 与 6-BA 组合中，在
M4 的培养基上，叶片诱导愈伤的效果最佳，诱导
率高达 83.3%；与 6-BA 组合中，最佳培养基为
N3，诱导率为 53.3%。当各组合中激素配比相同
时，2,4-D 和 6-BA 组合的诱导率均高于 NAA 和
6-BA的组合，这表明，2,4-D 提高叶片的愈伤诱
导率的效果更佳。此外，在 M4与 N3的培养基中，
愈伤启动期分别为 13，12 d，差距不大；愈伤组织
的形态指标相似，均呈淡绿色，结构疏松（图 2，图
3），这表明，两种培养基均能在较短的时间内得
到分化能力较好的愈伤组织。因此，叶片诱导愈伤
最佳激素配比为 M4，即 1.0 mg·L -1 2,4-D+0.2
mg·L-1 6-BA，与 NAA 相比，2,4-D 更利于长叶点
地梅叶片愈伤组织的诱导。
编号
生长调节物质
/（mg·L-1） 编号
生长调节物质
/（mg·L-1）
2,4-D 6-BA NAA 6-BA
M1 0.5 0.2 N1 0.2 0.2
M2 0.5 0.4 N2 0.2 0.4
M3 0.5 0.8 N3 0.2 0.8
M4 1.0 0.2 N4 0.5 0.2
M5 1.0 0.4 N5 0.5 0.4
M6 1.0 0.8 N6 0.5 0.8
M7 2.0 0.2 N7 1.0 0.2
M8 2.0 0.4 N8 1.0 0.4
M9 2.0 0.8 N9 1.0 0.8
表 1 6-BA 与 NAA 或 2,4-D 组合诱导
长叶点地梅叶片愈伤组织
图 1 6-BA 与2,4-D和 NAA 组合对
长叶点地梅叶片诱导愈伤的影响
图 2 叶片在培养基 M4 上的生长状况
图 3 叶片在培养基 N3 上的生长状况
诱
导
率
/%
直
3
直
8
直
2/ 直
6
直
4/ 直
7
直
6/ 直
9
直
1
100.0
80.0
60.0
40.0
20.0
0.0
不同激素组合
·132·
第 6期
2.2 大量元素对叶片诱导愈伤的影响
大量元素是生物生长所需的必备元素，不同
植物对大量元素含量的要求不同，大量元素对叶
片诱导愈伤具有重要影响。试验结果表明，长叶点
地梅叶片诱导愈伤的最适培养基为 MS（图 4）。随
着大量元素浓度的降低，叶片愈伤组织的诱导率
呈下降趋势。在 MS培养基上诱导率达 95%，产生
的愈伤最多，愈伤组织呈淡绿色，质量大于 0.6 g，
长势最好；1/4MS 培养基上的叶片愈伤组织诱导
率仅为 50%，愈伤组织质量小于 0.3 g，长势最差。
2.3 碳源、琼脂、暗处理对叶片诱导愈伤的影响
培养基中的琼脂除有固化作用外，也会吸附
外植体的代谢产物，因此不同浓度的琼脂对外植
体的生长有不同程度的影响。结果（图 5）表明：琼
脂浓度对诱导率有较大的影响，愈伤组织诱导率
在一定琼脂浓度内升高，当琼脂浓度达到 8.0
g·L-1时，诱导率达到最大值 95%。启动期不受琼
脂浓度的影响，随着琼脂浓度变化，叶片愈伤的启
动期均保持在 13～15 d。形态指标上，当琼脂浓度
为 5.0 g·L-1 时，培养基呈半固体状态，愈伤组织
质地疏松，长势不佳。随着琼脂浓度逐渐增加，愈
伤组织的长势越来越好，琼脂浓度为 8.0 g·L-1
时，愈伤组织呈浅绿色，长势最好。当琼脂浓度为
9.0 g·L-1时，愈伤组织颜色加深，质地相对紧实，
长势不佳。这表明琼脂在高浓度的条件下，培养基
硬度加强，不利于外植体对营养物质的吸收。因
此，长叶点地梅叶片诱导愈伤最佳琼脂浓度为
8.0 g·L-1。
不同植物材料对碳源的吸收状况不同，因此
对碳源种类的要求也不同。培养基上添加浓度均
为 3%的麦芽糖、葡萄糖，结果（图 6）发现：蔗糖作
为碳源时诱导的愈伤最佳，诱导率达 90%，愈伤
组织的生长状况最好，产生愈伤组织较多。诱导率
最低的为葡萄糖，产生的愈伤较少。3种碳源的混
合效果与单一碳源的作用效果相差不大。在各组
合中，愈伤诱导效果最佳的是 50%蔗糖与 50%麦
芽糖混合，诱导率为 61.0%，比单一使用麦芽糖、
葡萄糖时有较小程度的提高，但低于单独使用蔗
糖时的诱导率，因此长叶点地梅愈伤组织诱导蔗
糖为最佳碳源，不宜使用混合碳源。
将外植体进行不同时间的暗处理后发现：暗
处理 4 d 后，叶片开始变黄，暗处理 7 d 后移至光
下培养，光下培养 14 d 后开始产生愈伤，诱导率
仅为 5%，愈伤组织呈黄绿色，长势一般，叶片切
口处有褐化发生，且培养基受到褐化物质的污染。
叶片在暗处理 14 d 和 21 d 后，均无愈伤组织产
生，且叶片失绿，外植体变黑褐色死亡。因此，长
叶点地梅叶片诱导愈伤时不适合进行暗处理。
3 结论与讨论
目前，长叶点地梅在组织培养方面的研究较
少，仅局限于生长调节剂的种类及浓度。植物愈伤
组织的诱导、增殖及形态建成主要受外植体本身、
培养基和培养环境等 3 大因素的调控 [14]，但少有
人对其系统地比较研究。本试验对生长调节剂、大
量元素 、琼脂浓度、碳源及暗处理对长叶点地梅
叶片诱导愈伤组织的影响进行了研究，发现长叶
点地梅叶片诱导愈伤的最佳培养基为 MS+1.0
mg·L-1 2,4-D+0.2 mg·L-1 6-BA+3%蔗糖+0.8%琼
图 4 不同培养基对长叶点地梅叶片愈伤组织诱导的影响
图 5 不同琼脂浓度对长叶点地梅叶片愈伤组织诱导的影响
图 6 不同碳源对长叶点地梅叶片愈伤组织诱导的影响
诱
导
率
/%
100.0
80.0
60.0
40.0
20.0
0.0
诱
导
率
/%
100.0
80.0
60.0
40.0
20.0
0.0
5.0 6.0 7.0 8.0 9.0
琼脂浓度 /（g·L-1）
1/4MS 1/2MS MS
培养基
诱
导
率
/%
90.0
80.0
70.0
60.0
50.0
40.0
30.0
20.0
10.0
0.0
52%葡萄糖+50%蔗糖
50%麦芽糖+52%葡萄糖
50%蔗糖+50%麦芽糖
葡萄糖
麦芽糖
蔗糖
碳源
陈素波：长叶点地梅叶片愈伤组织诱导影响因子分析 ·133·
第 21卷天津农业科学
脂，诱导率达 95.0%。一般认为，NAA更利于芽的
增值，2,4-D 在愈伤组织的诱导过程中较为常用，
本研究也得到相似结论，认为 2,4-D更适合长叶
点地梅叶片诱导愈伤，可以提高愈伤组织诱导率。
时永杰等 [15]以白羊草(Bothriochloa ischaemum)幼穗
为外植体进行组织培养，发现在暗光培养条件下，
更利于愈伤组织的产生与生长。本试验将叶片先
进行不同时间的暗处理（7，14，21 d），再置于光下
诱导愈伤，结果却发现，暗处理不利于长叶点地梅
叶片对愈伤的诱导。差异的产生可能是由于不同
植物材料对光照的要求不同，也体现了本研究对
暗处理这一条件探究的意义。
以上研究结果表明，生长调节剂、琼脂浓度及
暗处理，不仅对长叶点地梅叶片诱导愈伤的数量
有影响，而且也影响所诱导愈伤的质量。愈伤组织
的质量是影响长叶点地梅再生的关键性因素，一
般情况下，淡绿色疏松的愈伤组织质量较好，分化
能力较强，而其他因子只对诱导率即愈伤组织的
数量有较大的影响。本研究通过对生长调节剂、大
量元素 、琼脂浓度、碳源及暗处理等因子影响长
叶点地梅叶片诱导愈伤的的探索，为进一步完善
长叶点地梅组培快繁体系奠定了基础。
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