全 文 ：收稿日期:2016-04-01 接受日期:2016-05-05
基金项目:广西自然科学基金项目(2014GXNSFBA118124) ;广西
高校科研项目(2013YB164) ;桂林医学院“项目驱动教
学”专项
* 通讯作者 E-mail:funnyazi@ 163． com
天然产物研究与开发 Nat Prod Ｒes Dev 2016，28:1055-1059
文章编号:1001-6880(2016)7-1055-05
白肉榕叶提取物的生物活性及化学成分研究
韦乾蔚1，陈学理1，赵一燕1，古玉华1，徐汉虹2，李晶晶1，2*
1桂林医学院公共卫生学院，桂林 541004;2 华南农业大学 亚热带农业生物资源保护与利用国家
重点实验室 天然农药与化学生物学教育部重点实验室，广州 510642
摘 要:本文以白肉榕叶为研究对象，采用药剂浸泡法和平板涂布法分别测定了白肉榕乙醇粗提物对蚕豆蚜、
致倦库蚊和福寿螺的毒杀活性以及对蜡样芽胞杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾志贺氏菌和金黄色葡萄球菌 5 种
供试菌的抑菌活性。结果表明，白肉榕乙醇粗提物对蚕豆蚜、致倦库蚊和福寿螺有生物活性，而对上述 5 种供试
菌没有抑菌活性。采用液-液萃取法对白肉榕乙醇粗提物进行萃取分离，并对得到的石油醚萃取物、乙酸乙酯萃
取物和水相 3 种不同极性部位进行生物活性测定。生物测定结果表明，白肉榕叶的活性成分主要存在于石油醚
萃取物和乙酸乙酯萃取物中。从乙酸乙酯萃取物中进一步分离得到 1 个活性成分，经核磁共振氢谱(1H NMＲ)
和碳谱(13C NMＲ)鉴定为桦木醇(betulin)。该化合物对致倦库蚊 3 龄幼虫具有较好的杀虫活性，24 h的 LC50值
为 16． 44 mg /L。
关键词:白肉榕;叶;生物活性;化学成分
中图分类号:Ｒ284． 2;S482． 1 文献标识码:A DOI:10． 16333 / j． 1001-6880． 2016． 7． 012
Bioactivities and Chemical Constituents of Ficus vasculosa Leaves Extracts
WEI Qian-wei1，CHEN Xue-li1，ZHAO Yi-yan1，GU Yu-hua1，XU Han-hong2，LI Jing-jing1，2*
1School of Public Health，Guilin Medical University，Guilin 541004，China;2State Key Laboratory
for Conservation and Utilization of Subtropical Agro-bioresources /Key Laboratory of Natural Pesticide and Chemical
Biology，Ministry of Education，South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China
Abstract:The bioactivity and antibacterial activity of ethanol extract from Ficus vasculosa leaves were tested by reagent
impregnation method and spread-plate method，respectively． The results showed that，ethanol extract of F． vasculosa pos-
sessed bioactivity against Aphis fabae，Culex quinquefasciatus and Pomacea canaliculata，but exhibited no antibacterial
activity against Bacillus cereus，Escherichia coli，Salmonella typhi，Shigella dysenteriae and Staphyloccocus aureus． The
ethanol extract of F． vasculosa leaves were preliminarily partitioned using liquid-liquid isolation method，to give petroleum
ether fraction，EtOAc fraction and H2O fraction，respectively． The further bioassays results suggested that the active con-
stituents of F． vasculosa leaves existed in petroleum ether fraction and EtOAc fraction． One active compound was isolated
from the EtOAc fraction through further phytochemical investigation，its structure was identified as betulin by 1H NMＲ
and 13C NMＲ． Betulin exhibited potential insecticidal activity against the 3rd-instar larvae of C． quinquefasciatus，with
LC50 value of 16． 44 mg /L after treatment in 24 h．
Key words:Ficus vasculosa;leaf;bioactivity;chemical constituent
白肉榕 Ficus vasculosa Wall ex Miq．是桑科榕属
一种乔木，又名突脉榕，主要分布于我国广东、海南、
广西、云南及贵州，常见于季雨林中，越南、泰国、马
来西亚也有分布［1］。白肉榕是一种药食兼优的植
物，在我国云南西双版纳，其嫩叶被当地居民作为野
生木本蔬菜食用，因其富含维生素、微量元素、蛋白
质和氨基酸等营养成分，具有一定保健作用［2-4］。目
前，国内外有关白肉榕生物活性和化学成分的报道
很少，仅有 1 篇关于白肉榕抗氧化活性的报道，该研
究还发现白肉榕叶的乙醇提取物中含有多酚类、黄
酮类物质［5］。但关于白肉榕的农药活性及化学成
分的研究尚未见报道。本课题组前期试验发现，白
肉榕叶的乙醇提取物对蚕豆蚜具有杀虫活性，为了
进一步探索白肉榕在生物农药方面的开发应用价
值，本文对白肉榕的生物活性及其化学成分进行了
研究，从该植物中分离鉴定出 1 个三萜类化合物，并
对其生物活性进行了测定，以期为白肉榕资源的开
发利用提供理论依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 植物材料
白肉榕采自广西壮族自治区十万大山地区，由
广西林业勘探设计院钟业聪研究员鉴定。
1． 1． 2 供试昆虫
蚕豆蚜 Aphis fabae采自没有施过药的十字花科
蔬菜，于实验室以蚕豆叶饲养多代，取无翅成虫供
试。
致倦库蚊 Culex quinquefasciatus 引自广东省卫
生防疫站，将取回的卵放入脱氯的自来水中孵化，选
取个体大小一致的 3 龄幼虫进行试验。
1． 1． 3 供试软体动物
福寿螺 Pomacea canaliculata幼螺采自华南农业
大学教学农场水稻田沟边，于实验室饲养 7 d 后，选
用无损伤、大小一致的幼螺供室内生测试验。
1． 1． 4 供试菌种
蜡样芽胞杆菌 Bacillus cereus、大肠杆菌 Esche-
richia coli、伤寒杆菌 Salmonella typhi、痢疾志贺氏菌
Shigella dysenteriae和金黄色葡萄球菌 Staphyloccocus
aureus由桂林医学院提供，并用牛肉膏蛋白胨培养
基进行扩菌后于 4 ℃保存备用。
1． 1． 5 主要仪器和试剂
FE-130 植物粉碎机(河北黄晔科学仪器厂) ，
EYELA-1 型旋转蒸发仪(日本 Tokyo Ｒikakikai 公
司) ，101A-1E型电热恒温鼓风干燥箱(上海实验仪
器有限公司) ，LＲH-300-GⅡ光照培养箱(广东省医
疗器械厂) ，SW-CJ-1G 超净工作台(浙江苏州净化
设备有限公司) ，ZF7 三用紫外分析仪(巩义市予华
仪器有限责任公司) ，Bruker AV-600 核磁共振仪
(瑞士 Bruker 公司)。柱层析硅胶和 GF254硅胶板
(青岛海洋化工厂) ，氯仿、甲醇、丙酮、石油醚和乙
酸乙酯均为分析纯(广州化学试剂厂) ，10%吡虫啉
可湿性粉剂(安徽金泰农药化工有限公司) ，鱼藤酮
(广州市益农生化有限公司) ，茶皂素原粉(中国农
科院茶叶研究所)。
1． 2 实验方法
1． 2． 1 提取与分离
7． 5 kg植物材料于 40 ℃干燥后粉碎，将粉末置
于 95%乙醇中，冷浸提取 3 次后过滤，浓缩滤液得
到植物乙醇粗提物。用去离子水将乙醇粗提物饱和
悬浮，依次用石油醚和乙酸乙酯溶液萃取、浓缩后，
分别得到石油醚萃取物(129． 7 g)、乙酸乙酯萃取物
(70． 0 g)和水相浸膏(89． 0 g) ，用于生物活性测定。
通过生物活性测定，选取活性较好的乙酸乙酯
萃取物上硅胶柱，先用石油醚:乙酸乙酯系统梯度洗
脱(9∶ 1，7∶ 3) ，接着用石油醚 ∶ 乙酸乙酯 ∶ 甲醇系统
梯度洗脱(5∶ 5 ∶ 1，5 ∶ 5 ∶ 3) ，最后用甲醇冲柱。每个
梯度洗脱的流分合并浓缩，得到 5 个馏分段(I ～
V)。选取馏分 II进行进一步硅胶柱层析分离，结合
溶剂重结晶，最终得到化合物桦木醇(26． 5 mg)。
1． 2． 2 化合物结构鉴定
通过核磁共振氢谱(1H NMＲ，600 MHz)、碳谱
(13C NMＲ，150 MHz) ，并与相关文献报道的数据进
行比较，确定化合物的化学结构。
1． 2． 3 蚕豆蚜室内毒杀活性测定
采用载虫叶片浸渍法［6］测定对蚕豆蚜的杀虫
活性。待测样品用丙酮溶解，加入蒸馏水配制成所
需浓度(丙酮含量不超过 2%) ，以含 2%丙酮的蒸
馏水作空白对照。将带有蚕豆蚜的叶片采下，用毛
笔剔除若虫和有翅蚜，将带虫(约 50 头)蚕豆叶在
药液中浸渍 5 s后取出，放入垫有湿润滤纸的直径 9
cm的培养皿中，于处理 24 h 后检查并记录试虫死
亡数。
1． 2． 4 致倦库蚊室内毒杀活性测定
参照文献报道的方法［7］测定提取物对致倦库
蚊 3 龄幼虫的杀虫活性。称取一定量的待测样品，
用丙酮溶解后配成所需浓度，其中丙酮含量不超过
2%，以相同含量的丙酮溶液做空白对照。取 25 mL
待测药液置于塑料杯内，每杯加入 15 头致倦库蚊 3
龄幼虫，于(20 ± 2)℃条件下浸养。分别于药后 12
h和 24 h观察试虫的反应，并记录死亡虫数。
1． 2． 5 福寿螺室内毒杀活性测定
采用药剂浸泡法进行福寿螺的室内杀螺试
验［8］。称取一定量的待测样品，用丙酮溶解，然后
用去氯水稀释成所需浓度(丙酮含量不超过 2%) ，
以相同含量的丙酮溶液做空白对照。用塑料杯盛放
100 mL药液，每杯放入 10 头幼螺，放入生菜，杯口
用纱布封口以防其逃逸。处理 72 h 后，将杯内幼螺
转移到盛有去氯水的杯中，24 h 后检查，不动的幼
螺视为死亡。
1． 2． 6 抑菌活性测定
采用带药培养基涂布法进行活性测定［9］。用
6501 天然产物研究与开发 Vol. 28
丙酮和无菌水(1 ∶ 1)的混合溶液溶解样品，配成一
定浓度的供试药液，准确吸取 1 mL 药液(对照用混
合溶液代替药液)加入到 9 mL 牛肉膏蛋白胨培养
基中，混匀后倒入 9 cm 灭菌培养皿中，配置成厚薄
均匀的带药培养基。取菌悬液 0． 1 mL 加到培养基
表面，用涂布器涂布均匀，放入 37 ℃培养箱中恒温
培养，分别于处理 12、24 h和 48 h后，观察菌落生长
情况并记录。
1． 2． 7 数据分析
每个样品设三次重复，数据的处理与分析采用
Excel 2010 和 DPS软件进行数据处理和统计分析。
测定结果均以“平均值 ±标准误”表示。方差分析
采用邓肯氏(Duncan’s)差异分析，以 P ＜ 0． 05 为差
异显著。
2 结果与分析
2． 1 粗提物及不同萃取物对蚕豆蚜的杀虫活性
表 1 中生物测定结果表明，除水层外白肉榕叶
的粗提物及各萃取物均对蚕豆蚜表现出杀虫活性，
其 24 h 的死亡率分别为 88． 42%、72． 71% 和
94. 45%，说明对蚕豆蚜具有杀虫活性的成分主要集
中在石油醚和乙酸乙酯萃取物。
表 1 白肉榕叶的乙醇粗提物及萃取物(1 mg /mL)对蚕豆蚜 24 h的杀虫活性
Table 1 Insecticidal activities of the ethanol extract and its different fractions of the leaf of F． vasculosa against A． fabae at the concen-
tration of 1mg /mL after 24 h
样品
Sample
平均死亡率 ±标准误
Average mortality ± SE(%)
乙醇粗提物 Ethanol extract 88． 42 ± 0． 45a
石油醚萃取物 Petroleum ether fraction 72． 71 ± 2． 28b
乙酸乙酯萃取物 EtOAc fraction 94． 45 ± 1． 40a
水相 H2O fraction 47． 62 ± 3． 06c
吡虫啉 Imidacloprid 95． 36 ± 2． 96a
空白对照 CK 17． 86 ± 1． 63d
注:对照药剂吡虫啉浓度为 20 mg /mL;同列数据后小写字母不相同者表示差异显著(P ＜ 0． 05)。
Note:The concentration of imidacloprid was 20 mg /mL． The data in the same column followed by different letters indicated significant different among
treatments(P ＜ 0． 05)
2． 2 粗提物及不同萃取物对致倦库蚊的毒杀活性
水相对致倦库蚊 3 龄幼虫表现出较强的杀虫活
性，处理 24 h后，致倦库蚊的死亡率为 92． 57%，其
次是乙酸乙酯萃取物 71． 58%(表 2) ，而其余的提
取物的杀虫活性较弱。
表 2 白肉榕叶的乙醇粗提物及其萃取物(0． 5 mg /mL)对致倦库蚊 3 龄幼虫的毒杀活性
Table 2 Insecticidal activities of the ethanol extract and its different fractions of the leaf of F． vasculosa against the 3rd-instar larvae of
C． quinquefasciatus at the concentration of 0． 5 mg /mL
样品
Sample
平均死亡率 ±标准误 Average mortality ± SE(%)
12 h 24 h
乙醇粗提物 Ethanol extract 27． 03 ± 1． 29d 54． 17 ± 1． 04d
石油醚萃取物 Petroleum ether fraction 9． 43 ± 1． 39e 44． 41 ± 1． 32e
乙酸乙酯萃取物 EtOAc fraction 50． 53 ± 2． 18c 71． 58 ± 0． 62c
水相 H2O fraction 78． 42 ± 2． 52b 92． 57 ± 0． 62b
鱼藤酮 Ｒotenone 100． 00 ± 0． 00a 100． 00 ± 0． 00a
空白对照 CK 0． 00 ± 0． 00f 0． 00 ± 0． 00f
注:对照药剂鱼藤酮浓度为 20 mg /mL;同列数据后小写字母不相同者表示差异显著(P ＜ 0． 05)
Note:The concentration of rotenone was 20 mg /mL． The data in the same column followed by different letters indicated significant different among treat-
ments(P ＜ 0． 05)
2． 3 粗提物及不同萃取物对福寿螺的毒杀活性
在 1 mg /mL的浓度下，石油醚萃取物对福寿螺
的有较好的毒杀活性，处理 7 h 后死亡率达到
95. 53%，其次是乙醇提取物，死亡率为 60． 63%，其
7501Vol. 28 韦乾蔚等:白肉榕叶提取物的生物活性及化学成分研究
余的提取物活性较差(表 3)。
表 3 白肉榕叶的乙醇粗提物及其萃取物(1 mg /mL)对福寿螺的 72 h毒杀活性
Table 3 Molluscicidal activities of the ethanol extract and its different fractions of the leaf of F． vasculosa against P． canaliculata at the
concentration of 1 mg /mL after 72 h
样品
Sample
平均死亡率 ±标准误
Average mortality ± SE(%)
乙醇粗提物 Ethanol extract 60． 63 ± 0． 63c
石油醚萃取物 Petroleum ether fraction 95． 53 ± 0． 31b
乙酸乙酯萃取物 EtOAc fraction 33． 31 ± 0． 86d
水相 H2O fraction 21． 52 ± 1． 39e
茶皂素 Tea saponin 100． 00 ± 0． 00a
空白对照 CK 3． 33 ± 3． 33f
注:对照药剂茶皂素浓度为 50 mg /mL;同列数据后小写字母不相同者表示差异显著(P ＜ 0． 05)。
Note:The concentration of tea saponin was 50 mg /mL． The data in the same column followed by different letters indicated significant different among treat-
ments(P ＜ 0． 05)．
2． 4 乙醇粗提物对 5 种供试菌的抑菌活性
白肉榕叶乙醇粗提物(5 mg /mL)对蜡样芽胞杆
菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾志贺氏菌和金黄色葡
萄球菌这 5 种供试菌基本没有抑菌活性。
2． 5 化合物的结构鉴定
桦木醇:白色不定型粉末;1H NMＲ(600 MHz，
CDCl3) ，δ:4． 70(1H，s，H-29a) ，4． 60(1H，s，H-
29b) ，3． 83(1H，d，J = 12． 0 Hz，H-28a) ，3． 36(1H，
d，J = 10． 8 Hz，H-28b) ，3． 21(1H，dd，J = 4． 8，11． 4
Hz，H-3) ，2． 40(1H，m，H-19) ，1． 70(3H，s，H-30) ，
1． 04(3H，s，H-27) ，1． 00(3H，s，H-26) ，0． 99(3H，s，
H-23) ，0． 84(3H，s，H-25) ，0． 78(3H，s，H-24) ;13 C
NMＲ(150 MHz，CDCl3) ，δ:14． 8(C-27) ，15． 3(C-
23) ，16． 0(C-25) ，16． 1(C-26) ，18． 3(C-6) ，19． 1(C-
30) ，20． 8(C-11) ，25． 2(C-12) ，27． 1(C-2) ，27． 4(C-
24) ，28． 0(C-21) ，29． 2(C-15) ，29． 8(C-16) ，34． 0
(C-7) ，34． 3(C-10) ，37． 2(C-22) ，37． 3(C-13) ，38． 7
(C-1) ，38． 9(C-4) ，40． 9(C-8) ，42． 7(C-14) ，47． 8
(C-17) ，47． 8(C-18) ，48． 8(C-19) ，50． 4(C-9) ，55． 3
(C-5) ，60． 6(C-28) ，79． 0(C-3) ，109． 7(C-29) ，
150. 5(C-20)。经与文献对照，该化合物的氢谱、碳
谱信号与文献报道［10］的基本一致，故鉴定为桦木
醇。
2． 6 化合物的生物活性
从乙酸乙酯层分离得到的桦木醇对致倦库蚊 3
龄幼虫表现出较强的杀虫活性，处理 24 h 后，其
LC50值为 16． 44 mg /L(表 4)。但桦木醇对蚕豆蚜和
福寿螺的生物活性较弱，在 50 mg /L的处理浓度下，
对蚕豆蚜处理 24 h和福寿螺处理 72 h 后的死亡率
分别为 38． 28%和 31． 53%。
表 4 桦木醇对致倦库蚊 3 龄幼虫的 24 h毒力
Table 4 The 24 h-toxicity of betulin against the 3rd-instar larvae of C． quinquefasciatus
化合物
Compound
回归方程
Ｒegression equation
相关系数
Correlation coefficient
LC50(mg /L)
95% Confidence intervals
桦木醇 Betulin Y = 1． 95 + 2． 50x 0． 9900 16． 44(12． 74 ～ 21． 22)
鱼藤酮 Ｒotenone Y = 4． 12 + 2． 94x 0． 9810 1． 99(1． 61 ～ 2． 46)
3 结论与讨论
本研究初步探索了白肉榕在农业病虫害防治领
域的开发和应用价值，研究结果显示白肉榕叶的乙
醇粗提物对蚕豆蚜、致倦库蚊和福寿螺均表现出生
物活性，其生物活性成分主要存在于石油醚萃取物
和乙酸乙酯萃取物。首次对白肉榕的化学成分进行
了研究，从乙酸乙酯萃取物中分离得到 1 个化合物，
通过波谱解析鉴定为桦木醇，该化合物对致倦库蚊
有较好的毒杀活性，由此推测桦木醇可能为白肉榕
的活性成分之一。本研究只选取了乙酸乙酯萃取物
的一个馏分段进行分离，其他馏分段和萃取物的活
性成分有待进一步系统分离。综上所述，白肉榕在
生物农药方面的应用具有很大潜力，本研究结果为
8501 天然产物研究与开发 Vol. 28
今后开发利用该植物资源提供了科学依据。
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