全 文 ：总第 17 卷 19 5 期
2 15 0年 1 1月
大 众 科 技
P oP u la rs ci e n e c& T e chn ol ogy
V 01
.
17 N 0
.
1 1
NO Vem b e r 2 15 0
匙羹藤总皂昔抗氧化活性研究
吴华慧 李 妹 潘柳谷 黄燕军
( 广西 医科大学药学院 , 广西 南宁 5 3 0 0 21 )
【摘 要】 目的 : 研究匙羹藤总皂普对大鼠肝脏超氧化物歧化酶 ( SO D ) 、 过氧化氢酶 ( C AT )、 和脂质过氧化物 ( L P O )
作用的影响 。 方法 : 通过硫代巴 比妥酸 ( T B A )分光光度法测定大鼠肝脏脂质过氧化 (L PO) 的二级分解产物丙二醛 (M D )A 的含量 ,
以考察匙羹藤总皂普对实验大鼠肝脏 L Po 的作用影响 , 采用黄喋吟氧化酶法测定 s o D 活力 , 铂酸按显色法测定 c AT 的活力 ,
考察匙羹藤总皂普对实验大鼠肝脏 5 o D 和 c AT 的作用大小 。 结果 : 与对照组比较匙羹藤总皂普在 1
.
o m gm/ 1
一 6刀m gm/ 1浓度范
围可抑制 大鼠肝脏 L P o 作用 ; 在 1 . o m g/ ml 一 6 5 m gm/ 1浓度范 围内可提高大鼠肝脏 s o D 和 c AT 的活性 。 结论 : 匙羹藤总皂普可
以提高大鼠肝脏 SO D 和 C AT 的活性 , 降低 M D A 的产生 。【关键词】超氧化物歧化酶 ( S O D ) ; 过氧化氢酶 ( C AT ) ; 脂质过氧化物 ( L P O ) ; 匙羹藤
[ 中图分类号 ] R 93 [文献标识码 ] A [文章编号 ] 1 00 8 一 1 1 5 1 ( 2 0 15 ) 1 1一 00 57 一 02
S t u d y o n a n t i o x i d a n t a c t i v i t y o f t o t a l s a P o n i n s o f g y m n e m a s y l v e s t r e
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抗衰老生物学和 自由基生物学是近年来生命科学的研究
热点 , 研究和开发新型抗氧化功能食品和天然抗氧化剂能满
足人们对健康长寿 日益增长的要求 , 根据衰老的自由基理论 ,
研究抗衰老植物的报告颇多 , 其研究途径大致有三大类 : 一
是 , 研究抗衰老植物有无直接清除自由基的作用 ; 二是 , 研
究抗衰老植物能否提高机体内抗氧化酶的活性 , 以达到间接
清除自由基的目的 ; 三是 , 研究抗衰老植物是否具有抑制脂
质过氧化物及代谢废物的作用 。 本实验研究的匙羹藤总皂普 ,
在国内外的报道大多是对小鼠细胞的某些免疫学效应 、 药理
作用及临床应用上的研究 l3[ ] , 而对其抗氧化活性的生物化学
研究方法少见报道 。 本研究匙羹藤总皂普对大鼠肝脏线粒体
L PO 作用的影响 , 以及对大鼠肝脏线粒体 SO D 、 C AT 活性的
影响 。 笔者采用大鼠肝脏组织匀浆进行实验测定的方法 , 了
解匙羹藤总皂普对实验大鼠肝脏 SO D 、 C AT 、 L P O 作用的影
响 。
1
.
1
材料与方法
试剂和主要仪器
FJ
一
20 0 高速分散匀质机 (上海标本模型厂 ) ; 3kl s 台式高
速冷冻离心机 ( SGI M 公司 ) ; 数显式三用电热恒温水温箱 ;
电子天平 ; 7 2 2 型分光光度计 ; 超氧化物歧化酶 (S O D ) 测试
盒 、 过氧化氢酶 ( C AT ) 测试盒 、 蛋白定量测试盒 (上述测试
盒均为南京建成生物工程研究所制) 、 硫代巴 比妥酸 ; 冰醋酸 ;
L一半肌氨酸 ; 2一硫代巴比妥酸 ( T B A ) ; 1 , 1 , 3 , 3 一四乙氧基丙
烷 ( T E P ) ; s D 大鼠,体重 1 80 一2 2 0 9 (雌性各半 ) , 由广西医科
大学实验动物中心提供 (动物生产许可证 s c s K 桂 201 4 一 00 0 3) ;
试验用水为自制双蒸水 。
L Z 方法
L .2 1 肝匀浆的制备
①匀浆介质的制备 : 将 rT i s l . lZ g 及 E DAT 一 2N a3 7
.
23 m g
[收稿日期 ] 2 0 15 一 10 一 1 1
【基金项目】广西 自然科学基全项 目 “ 广西特色中草药匙羹藤总皂普提取工艺及生物活性研究” ( 20 12 C X N S E AA 2 39 田 1 )。
[作者简介 ] 吴华慧 ( 1 97 3一 ) , 女 , 广西 医科大学药学院讲师 , 硕士 , 从事天然产物活性研究及 医药化学教学工作 。
【通讯作者】李妹 ( 1968 一 ) , 女 (壮族 ) , 广西 医科大学药学院研究员 , 硕士 , 从事天然植物提取和杭氧化活性的研究。
加双蒸水 5 0 0m l ,再用 2 00m m o lL/ H C L 进行滴定至 PH 7 . 4 ,然后
加入 3 . 4 29 蔗糖 , s gN a c L, 用双蒸水稀释到 1 00 ml , 放入盐
水瓶中 , 以 9 磅压力进行消毒 30 m in , 4 ℃冰箱中备用 。
②取 s D (体重 1 809 一 2 2 09) 大鼠 , 禁食一天 , 颈椎脱臼处
死 , 取肝脏 , 立即用冰冷的生理盐水漂洗 , 除去血液 , 滤纸
吸干 , 称重 , 剪刀剪碎 , 用预冷的匀浆介质稀释成 20 % 肝匀
浆 ,高速分散匀质机匀浆 , 之后置高速冷凝离心机中 30 0 r/ 1l l i n
离心 巧 m in , 取上清液 , 用含糖 P B S 稀释配制成 10 %肝匀浆 。
用考马斯亮蓝法测定其蛋白含量 4[] 。
1:2 匙羹藤总皂昔对大鼠肝脏 L P O 的影响
在 1 . 0 1l l L 的 4g 几 肝反应液中依次加入 。刀5 1l l L 硫酸亚铁 、
0刀Zm L L 一半肌氨酸 、 不同浓度的匙羹藤总皂普样品 , 混匀 ,
37 ℃水浴 巧 m in , 再加入 2 刀m L 醋酸终止反应 , 最后加入
2刀m I J B A , 混匀 , 沸水中加热 15 m in , 流水冷却 , 在 5 32 n m
处测吸光度值 。
L .2 3 匙羹藤总皂昔对大鼠肝脏 SO D 的影响
采用试剂盒黄嘿吟氧化酶法测定 s o D 活力 。
计学意义 。
2 结果与讨论
2
.
1 不同剂量匙羹藤总皂昔对大鼠肝脏 L P O 影响
结果由表 3 可见 , 除雌性大鼠样品组 7 和雄性大鼠样品
组 5 与对照组比较无显著性差异外 , 其余各组肝脏 L P O 值均
低 于对 照组 (P 0< 刀5) 。 说 明匙羹藤 总皂普在 1 . o m gm/ 1一
6
.
om g/ m l 浓度范围可以抑制大鼠肝脏脂质过氧化 。
表 3 总皂昔对大鼠肝脏 L P O 的影响 (n = 4 , 丁士 s )
气履广 L p。含量 (u几。 1/ g 蛋白 )雌 雄 抑制率 (% )雌 雄
对照 组
样品组
1
2 2 30士 0 0 1 2 9 0 5士 0 0 1
éùō1 9斗5士 0 0 21 9 55士 0 0 3
1 9 00士 0 0 1
1 了56士 0 0 3
1 6 52 士 0 0 6
1 6 32 士 0 0 5
1 6斗3士 0 0 2
2 5 1 9士 0 0 2
2 5 9 6士 0 0 1
2 11 0士 0 0 3
2 0 9 8士 0 0 斗
2 0 8斗士 0 0 8
1 9 8 6士 0 0 0
1 9 8 5士 0 0 2 26 3 2 .
13 2 9
10 6 斗
2 了 3 了
2 了 了8
28 2 6
.
3 1 6 斗
3 1 6 了
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注 : 样品组与对照组比较 , 经 t检验 , 除 . 组的 P > 0 ` 05 外 , 其余各组
P < 0
`
0 5
。
表 1 S O D 活力测定操作表
试剂 测定管 (几 1 ) 对照 管 ( 几 1 )
试剂一 1 0 1 0
样品 0 5
蒸馏水 0 5
试剂二 0 1 } 0 1试剂三 0 1 } 0 1
试剂四 0 1 }
混匀 , 置 3了℃恒温水浴 斗0毗 n
显 色齐叮 } : 。 } 2 。
.2 2 不同剂量匙羹藤总皂昔对大鼠肝脏 S O D 的影响
结果见表 4 , 匙羹藤总皂普加入量在 1 .0 一 6 5 0m g 之间 ,
与对照组比较 SO D 活性明显提高 , 说明匙羹藤总皂普可以提
高大鼠肝脏线粒体 SO D 的活性 。
理哭钧H盯阴30c103朋脆39犯óùōé2 8 9士 0 0 32 8 8士 0 0了
2 9 1士 0 0 6
2 9 1士 0 0 2
3 15士 0 2 0
3 2 2 士 0 0 8
3 斗6士 0 0 1
3 斗3士 0 0了
3 83士 0 0 1
3 8 1士 0 1 3
3 96士 0 2 1
斗 05士 0 2 6
斗 29士 0 2 0
斗 89士 0 1 1
斗 98士 0 0 1
5 08士 0 0 2
102345渊6x几乙自j月件J召, .。一
混匀 , 室温静置 1 0 m in , I C m 光径 , 双蒸水调零 , 5 50 n m
处测吸光度值 。
组织匀浆中 SO D 活力计算公式 :
s o D 活力 (砚m即 r o t ) = (对照 o D 值一测定 o D 值 ) /
对 照 O D 值 二 50 % x 稀 释 倍数 二 待 测 样 本 蛋 白浓 度
(m g p or tm/ l )
1:2 匙羹藤总皂普对大鼠肝脏 C A I
, 的影响
采用试剂盒钥酸钱显色法测定 C AT 的活力 。
表 4 总皂昔对大鼠肝脏 S O D 活性的影响 ( n = 4 , 丁士 s )
组别 总皂着 SOD 活力 ( U加 g p r o t ) 提高率 (% )
(几g ) 雌 雄 雌 雄
对照 组 0 2 斗3士 0 0 1 3 5了士 0 0 1
样品组
注 : 与对照组比较经 t 经验 , 样品组各点 p < 0 ` 05
表 2 C A T 活力测定操作表
对照 管 (ml ) 测定管 (m l )
组织匀浆 0 0 5
试剂一 ( 37 ℃预温 ) 1 O 1 O
试剂二 ( 37 ℃预温 ) O 1 } 。 1
混匀 , 37 ℃准确反应 l m m
试剂三 1 O 1 O
试剂四 O 1 } 。 1
组织匀浆 0 0 5
.2 3 不同剂量匙羹藤总皂昔对大鼠肝脏 C A T 的影响
结果见表 5 , 匙羹藤总皂普加入量在之间 , 与对照组比较
C AT 活性明显提高 , 说明匙羹藤总皂普可以提高大鼠肝脏线
粒体 C AT 的活性 。
表 5 总皂昔对大鼠肝脏 C A T 活性的影响 (n =4 , 丁士 s )
混匀 , 0 5 c m 光径 , 4 05 n m 处 , 双蒸水调零 , 测吸光度值 。
组织匀浆中 C AT 活力计算公式 :
e AT 活力 ( U 力11即 r o t ) = (对照 o D 值一测定 o D 值 ) X 2 7 1
x ( 16/ o x 取样量 ) 二待测样本蛋白浓度 (m gP or tm/ l)
1 .2 5 数据处理
采用统计学软件 SP S S 1 3 . 0 进行分析 , 结果以均数士标准
差 ( 丁士 s ) 表示 。 组间分析采用 o ne ~认 b ) A N o vA 和 s N K 一q
两两比较得到相应 P 值 。 以 P < 0 . 05 或 P < 0 . 01 差异显著 , 有统
组别 总皂着 CAT 活力 ( U加 g p r o t ) 提高率 (肋
(几 g ) 雌 雄 雌 雄
对照 组 0 10 2 1士 0 0 1 10 59士 0 0 1
样品组
1 1 0 0 10 82 士 0 0 3 1 1 02 士 0 0 1 5 9了 斗 0 6
2 2 0 0 1 1 06士 0 0 了 1 1 89士 0 13 8 3 3 12 2 了
3 3 0 0 12 19士 0 0 6 12 02 士 0 2 1 19 3 9 13 5 0
斗 斗 0 0 12 35士 0 0 2 12 56士 0 2 6 2 0 9 6 18 6 0
5 斗 5 0 13 25士 0 2 0 12 9斗士 0 2 0 2 9 了了 2 2 19
6 5 5 0 13 了8士 0 0 8 13 59士 0 11 3斗 9 了 2 8 3 3
了 6 0 0 1斗 20士 0 0 1 13 9了士 0 0 1 3 9 0 8 3 1 9 2
8 6 5 0 1斗 58士 0 0 了 1斗 28士 0 0 2 斗2 8 0 3斗 8斗
注 : 与对照组比较经 t 经验 , 样品组各点 p < 0 ` 05
( 下转第 6 页 )
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(上接第 58 页 )
.2 4 讨论
研究大鼠肝脏 L P O 、 SO D 、 C AT 己经有一套较成熟的实
验方法 , 通过加入匙羹藤总皂普对大鼠肝脏线粒体作用模型
的影响 , 用细胞匀浆硫代巴比妥酸 (T h i o b而 tu 五e a e i d , T B A )比
色 , 测定大鼠肝脏线粒体 L P O 的含量 , 说明匙羹藤总皂普在
1
.
0 一 6刀om g 范围内具有抑制 L P o 及其代谢废物的作用 ; 采
用试剂盒黄嘿吟氧化酶法测定 SO D 活力 , 测定体系中加入匙
羹藤总皂普 (l .0 一 6 5 0m g/ m l) , 可提高大 鼠肝脏线粒体 s o D
的活性 , 采用试剂盒钥酸钱显色法测定 C AT 的活力 , 测定体
系中加入匙羹藤总皂普 (l .0 一 6 5 0m g/ m l) , 提高了大鼠肝脏
线粒体 C AT 的活性 , 说明匙羹藤总皂普能提高机体内抗氧化
酶的活性 , 以达到间接清除 自由基之 目的 。 通过匙羹藤对大
鼠肝脏细胞抗氧化能力指标 L PO 、 SO D 、 C AT 的影响的研究 ,
预测其对人体抗氧化作用的功效 ,为其做为功能性食品添加剂
的开发利用提供科学依据及开发前景 。
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