全 文 :Mycosystema
菌 物 学 报 15 March 2011, 30(2): 319-324
jwxt@im.ac.cn
ISSN1672-6472 CN11-5180Q
©2011 Institute of Microbiology, CAS, all rights reserved.
基金项目:国家产业技术体系专项:药用菌的栽培;四川省平台项目:四川重要名贵食用菌菌种资源信息档案库建设;国家现代农业产业技术体系:
四川食用菌创新团队精深加工研究岗位[No. 川农业 2009(75)]
*Corresponding author. E-mail: zly6559@126.com
收稿日期: 2010-10-12, 接受日期: 2010-11-23
尖顶羊肚菌对急性酒精性胃黏膜损伤保护作用研究
罗霞 2 魏巍 2 余梦瑶 2 江南 2 许晓燕 2 郑林用 1*
1四川省农业科学院 成都 610066
2四川省中医药科学院 成都 610041
摘 要:研究尖顶羊肚菌菌丝体水提液对酒精引起的大鼠急性胃黏膜损伤的保护作用。以 95%乙醇诱导的大鼠胃黏膜损伤为模
型,测定各组胃黏膜损伤指数,并测定胃黏膜超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量,采用幽门
结扎法,测定大鼠胃酸、胃蛋白酶与胃黏液分泌的量。结果表明羊肚菌中、高剂量能明显降低胃黏膜损伤指数(p<0.05);羊
肚菌不能抑制胃酸的分泌(p>0.05),但是能增加胃蛋白酶与胃黏液的分泌(p<0.05);95%乙醇能引起胃黏膜 SOD 活性与
GSH 的降低,MDA 含量的增加,给予羊肚菌能明显抑制这一现象。结果说明羊肚菌对急性酒精性胃黏膜损伤的保护作用是与
增加胃黏液分泌与提高机体抗氧化能力有关。
关键词:尖顶羊肚菌,胃黏膜损伤,超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),谷胱甘肽(GSH),胃蛋白酶
The gastric protective effects of Morchella conica on the ethanol-
induced gastric mucosal lesion in rats
LUO Xia2 WEI Wei2 YU Meng-Yao2 JIANG Nan2 XU Xiao-Yan2 ZHENG Lin-Yong1*
1Sichuan Academy of Agricultural Sciences, Chengdu 610066, China
2Sichuan Academy of Chinese Medicine Science, Chengdu 610041, China
Abstract: The effects of Morchella conica mycelial extract on the ethanol-induced gastric mucosal lesion of rats in vivo were
investigated. The gastric mucosal lesion was induced by 95% ethanol, the lesion index was measured and the superoxide dismutase
(SOD), malonaldehyde (MDA), glutathione (GSH) content in the gastric issues were tested. The gastric acid, pepsin and gastric mucus were
detected in ligated pyloru rats. The result showed that the middle dose and high dose of M. conica mycelial extract could reduce the lesion
index of gastric mucosal (p<0.05); M. conica did not inhibit the gastric secretion (p>0.05) but promoted the pepsin and gastric mucus
DOI:10.13346/j.mycosystema.2011.02.022
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secretion (p<0.05); The SOD activity and the GSH content were reduced, and the MDA content was increased after the rats were gavages by
95% ethanol, but these situations were reversed in M. conica treated groups. These results indicated that protective effects of M. conica
against the ethanol induced gastric lesions were related to its effects of promoting gastric mucus and improving the antioxidant activity.
Key words: Morchella conia, gastric mucosal injury, superoxide dismutase, malonaldehyde, glutathione, pepsin
羊肚菌是名贵食(药)用真菌,不仅味道鲜美
是餐桌上的美味佳肴,还具有极高的营养保健和药
用价值(戴玉成和杨祝良 2008)。羊肚菌具有消食
和胃,化痰理气,调节免疫(孙晓明等 2001a)、
抗肿瘤(陈彦等 2008)、抗疲劳(孙晓明等 2001b)、
保肝(孙玉军等 2008)、保肾(Nitha & Janardhanan
2008)、加强小肠推进和促进排空(吴映明 2007;
吴映明等 2005)等功效。而羊肚菌对酒精引起的
急性胃黏膜损伤的保护作用目前尚无报道。酒精性
饮料是目前世界上最畅销的饮料,饮用过量酒精或
高浓度酒精都会造成胃黏膜的损伤(Gottfried et al.
1978;Dinoso et al. 1976;Guth et al. 1984),酒精
引起的胃黏膜损伤发病率高、危害大。本实验通
过对酒精引起的大鼠急性胃黏膜损伤中 MDA、
GSH 含量和 SOD 活性的测定,并观测了羊肚菌
对正常大鼠胃分泌功能的影响,研究了尖顶羊肚
菌菌丝体水提液对急性酒精性胃黏膜损伤的保护
作用机制。
1 材料和方法
1.1 菌株、试剂与仪器
1.1.1 菌株和培养基:尖顶羊肚菌 Morchella conica
Pers.由实验室自行分离保存,斜面保存于 4℃冰箱。
培养基:改良 PDA 综合培养基(土豆 200g,葡萄
糖 20g,蛋白胨 2g,KH2PO4 1.5g,MgSO4 0.5g,蒸
馏水 1,000mL)。
1.1.2 试剂与仪器:福尔马林固定液(10%甲醛溶
液);阿利新蓝(Alcian bule,Sigma);SOD、MDA、
GSH 测定试剂盒(南京建成生物研究所),其余
试剂为市售分析纯。
超声恒温提取机(北京弘祥隆);高速冷冻离
心机(Beckman);冷冻干燥机(Thermo);恒温振
荡箱(上海智城);智能光照培养箱(杭州钱龙)。
1.2 动物与分组
Wistar 大鼠(由四川省中医药科学院动物室提
供,川实质第 2005-47 号),180-220g,全雄,饲
养于 SPF 级动物室。动物分为正常组(蒸馏水
1mL/kg)、模型组(蒸馏水 1mL/kg)与高、中、低
剂量给药组(0.5g/kg、1g/kg、1.5g/kg 羊肚菌菌丝
体水提液,后称羊肚菌),每组 8 只。
1.3 羊肚菌菌丝体的制备与提取
使用前将保存菌种转入新鲜斜面活化,25℃ 1
周;将活化的斜面琼脂块(1cm2)接入液体种培养
基中,25℃ 150r/min,摇床培养 7d(Richard 2006)。
液体种子按体积比 10%接入发酵培养基中(25℃,
150r/min,7d)。
菌丝体冷冻干燥后,以 20 倍、15 倍、10 倍、
10 倍蒸馏水在功率 800W,超声提取 4 次,每次
30min,超声/间隔 5/5s。
将 4次提取液混合,60℃减压浓缩至 0.05g/mL、
0.1g/mL、0.15g/mL 生药量,-20℃保存。
1.4 胃黏膜损伤指数的测定
实验分为模型组与羊肚菌高、中、低剂量组。
大鼠连续灌胃 9d,实验前一天禁食不禁水 24h,第
10 天各组灌胃样品 30min 后,除正常组外,各组灌
胃 95%乙醇 1mL/kg,1h 后颈椎脱臼处死取胃,用
PBS 缓冲液冲洗胃内杂质,每只灌注 10mL 福尔马
林固定液,置于入福尔马林固定液固定 2h。沿胃大
弯剪开胃,在解剖镜下记录观察胃黏膜损伤情况。
按 Guth 评分标准,计算胃黏膜损伤指数,并计算
损伤抑制率(Hiroto et al. 2007)。
胃黏膜损伤抑制率=(模型组损伤指数-给药组损伤指
数)/模型组损伤指数×100%
1.5 胃分泌的测定
实验分为正常组与羊肚菌高、中、低剂量组。
大鼠连续灌胃 9d,实验前一天禁食不禁水 24h,第
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10 天各组灌胃样品 30min 后,用乙醚麻醉后,打开
腹腔,结扎幽门,随后结扎幽门并关闭腹腔。12h
后击头处死大鼠将胃取出,沿胃小弯剪开胃壁,收
集胃液,并测量体积后进行胃酸、胃粘液与胃蛋白
的测定(徐叔云 2000;湛先保等 2007)。
1.6 MDA、GSH 含量和 SOD 活性的测定
实验分为正常组、模型组与羊肚菌高、中、低
剂量组。大鼠连续灌胃 9d,实验前一天禁食不禁水
24h,各组灌胃样品 30min 后除正常组外,其余各
组动物每只灌胃 95%乙醇 1mL,30min 后颈椎脱臼
处死取胃,立即在低温下分离胃黏膜,制备组织匀
浆,测定 MDA、GSH 含量和 SOD 活性。
1.7 数据的统计与处理
实验数据以 x ±s 表示,两样平均数比较用 t 检
验。采用 SPSS 13 统计软件对结果进行分析处理。
2 结果与分析
2.1 羊肚菌对酒精引起的大鼠急性胃黏膜损伤的影响
中剂量(1g/kg)和高剂量(1.5g/kg)羊肚菌对
酒精引起的胃黏膜损伤具有明显的保护作用,胃黏
膜损伤指数显著低于模型组(p<0.05,p<0.01),
抑制率达 47.15%和 84.91%,而低剂量(0.5g/kg)
羊肚菌对损伤不具有保护作用(p>0.05)(图 1)。
图1羊肚菌对酒精引起的大鼠急性胃黏膜损伤的影响 与模
型组比较*表示 p<0.05,**表示 p<0.01.
Fig. 1 The effect of Morchella conica mycelial extract on the ethanol-
induced gastric mucosal lesion in rat. Compared with the control group
*p<0.05, **p<0.01.
2.2 羊肚菌对大鼠胃分泌功能的影响
羊肚菌对正常大鼠的胃液量与胃酸分泌没有明
显的影响(p>0.05);但是羊肚菌能明显增加胃游离
黏液的分泌量,同时能增加胃结合黏液的分泌量,给
予低剂量,羊肚菌(0.5g/kg)能显著增加正常大鼠结
合黏液的含量(p<0.05),给予中剂量(1g/kg)与高
剂量,羊肚菌(1.5g/kg)能显著增加大鼠结合黏液和
游离黏液含量(p<0.05);另外从结果可以看出,羊
肚菌能增加胃蛋白的活性,羊肚菌低、中、高 3 个剂
量均能显著增加大鼠胃蛋白酶活性(p<0.05)(表 1)。
表 1 尖顶羊肚菌水提液对正常大鼠胃分泌功能的影响
Table 1 Effect of Morchella conica water extract on gastric secretion in rat
胃酸
Gastric acid
胃黏液
Gastric mucosa
胃蛋白
Pepsin
组别
Groups
胃液量
Gastric secretion (mL) 总酸度
Total acid
总酸排出量
Total acid output
游离黏液
Free mucus
(mg/mL)
结合黏液
Adherent mucus
(mg/g)
胃蛋白酶活性单位
Pepsin output (U)
正常组
Normal group
7.88±1.78 8.54±2.78 13.15±3.25 2.18±0.74 2.18±0.74 155.163±24.24
低剂量
Low-dose (500mg/kg)
7.92±2.06 8.56±3.23 13.42±4.13 2.54±1.23 3.02±0.56* 185.36±11.25**
中剂量
Middle-dose (1000mg/kg)
8.03±1.82 8.12±2.36 12.88±3.15 3.05±0.82* 3.64±0.88** 212.36±17.24**
高剂量
High-dose (1500mg/kg)
8.25±3.28 7.98±3.56 12.53±4.75 3.21±1.05** 3.58±1.23** 256.83±19.73**
注:n=8;*表示与空白组相比,p<0.05;**表示与空白组相比,p<0.01.
Note: n=8; *Compared with the control group, p<0.05; **compared with the control group, p<0.01.
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2.3 羊肚菌对酒精引起的大鼠急性胃黏膜损伤SOD、
MDA、GSH 的影响
灌胃酒精后能造成大鼠胃黏膜SOD活性的降低
(p<0.05),过氧化产物 MDA 的增加(p<0.01)以
及 GSH 含量的降低(p<0.05),而给予低剂量羊肚
菌(0.5g/kg)能明显提高 SOD 的活性(p<0.05)与
降低 MDA 的含量(p<0.05);给予中剂量羊肚菌
(1g/kg)能明显提高 SOD 的活性(p<0.01)与降
低 MDA 的含量(p<0.05);给予高剂量羊肚菌
(1.5g/kg)不仅能明显提高 SOD 的活性(p<0.01)
与降低 MDA 的含量(p<0.01),还能明显提高 GSH
的含量(表 2)。
表 2 羊肚菌对酒精引起的的急性胃黏膜损伤中 SOD、MDA、
GSH 的影响
Table 2 Effect of Morchella conica mycelial extract on SOD activity
and the MDA, GSH content in the ethanol induced gastric damage
组别
Groups
超氧化物岐化酶
SOD (U/mg prot)
丙二醛
MDA
(nmol/mg prot)
谷胱甘肽
GSH
(mg/g prot)
正常组
Normal group
693.62±145.48 2.30±0.98 3.65±1.25
模型组
Control group
433.25±118.26# 4.51±1.40## 2.12±1.35#
低剂量
Low-dose
500mg/kg
587.32±57.63* 3.85±0.56* 2.35±1.55
中剂量
Middle-dose
1000mg/kg
644.02±97.71** 2.70±1.29* 2.58±1.02
高剂量
High-dose
1500mg/kg
698.13±107.42** 2.28±0.89** 3.05±1.43*
注:n=8;##表示与空白组比较,p<0.01;*表示与模型组相比,
p<0.05;**表示与模型组相比,p<0.01
Note: n=8; ##Compared with the normal group, p<0.01; *Compared
with the control group, p<0.05; **Compared with the control
group, p<0.01. SOD, superoxide dismutase; MDA, malonaldehyde;
GSH, glutathione.
3 讨论
高浓度的酒精能直接引起胃黏膜上皮细胞的
变性坏死,另外乙醇分子中既有疏水性的烃基,又
含亲水性的羟基,还可以破坏黏膜的防御系统,使
胃肠黏膜极易遭受胃酸、各类消化酶的侵袭,进而
引起黏膜的损伤。胃酸、胃蛋白酶是参与消化的物
质之一,但也是胃黏膜损伤的攻击因子(刘玮等
2006)。当胃酸浓度过高时,对胃壁具极强的腐蚀
性;胃蛋白酶在酸性环境下能强烈地分解蛋白质,
能对胃壁直接攻击,是造成胃损伤的最主要因素。
在本文实验中发现羊肚菌对胃酸分泌并没有影响,
反而能增加胃蛋白的分泌量,而古书中记载羊肚菌
具有“消食和胃”的功能,另外羊肚菌报道过具有
加强小肠推进和促进排空(吴映明 2007;吴映明
等 2005),提示羊肚菌具有促进消化的功能。因此
羊肚菌对胃黏膜的保护作用不是通过抑制胃酸、胃
蛋白酶实现的。
本文研究发现羊肚菌能刺激胃黏液的分泌。胃
黏液是覆盖于胃黏膜上皮细胞表面的一层凝胶层,
具有较高的黏滞性和水不溶性,和黏膜上皮细胞分
泌的碳酸氢根离子构成了黏膜保护的第一道屏障
(Alien & Flemstrom 2005)。胃黏液合成和分泌以
及黏液层厚度的变化受神经、体液、内分泌激素、
局部刺激和食物、药物等多种因素的调节。胃黏液
分泌调节的研究资料较少,现已知道前列腺素
(PG)参与胃黏液的合成和分泌调节(覃志远和
何善明 2010),推测羊肚菌能增加胃黏液的分泌量
与 PG 有关。
乙醇所致胃黏膜损伤与氧自由基有密切的关
系(阎月等 1994)。过量的饮酒使乙醇在体内不能
及时氧化代谢,就会通过酶或非酶系统产生氧自由
基,引起脂质过氧化,并形成脂质过氧化产物
——MDA。MDA 与蛋白质、核酸等生物大分子结
合形成脂褐质沉积于细胞中,造成细胞损伤。胃黏
膜产生的氧自由基经过两条途径被清除,一条是在
SOD 酶的催化下变成 H2O2,再经过氧化氢酶分解
为 H2O 和 O2;另一条是被谷胱甘肽等低分子还原
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性物质所清除。已有研究证明,抗氧化剂对乙醇诱
发的大鼠胃黏膜损伤有很明显的保护作用,可显著
降低胃黏膜损伤指数(Ahmet et al. 2003;Nigel &
Pierangelo 2007)。本文研究发现,高浓度的酒精能
造成大鼠胃组织中的氧化损伤,预先给予羊肚菌能
明显抑制 SOD 活性的降低,增加 GSH 的含量,从
而抑制 MDA 含量的升高。据 Mau et al.(2004)报
道,羊肚菌 M. esculenta 的甲醇提取物在体外具有明
显的抗氧化作用。这说明,羊肚菌可通过增加机体
抗氧化能力,从而抵抗酒精引起急性胃黏膜损伤。
综上所述,羊肚菌对酒精引起的急性胃黏膜
损伤的保护作用是通过增加胃黏液的分泌以及提
高机体抗氧化能力实现的,其具体的机制还有待
进一步的研究。
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