全 文 ：收稿日期:2015-10-13
作者简介:李玲(1981-)，女，主管中药师，研究方向:中药学;E-mail:lingzi811@ 126. com。
HPLC法测定不同产地苦玄参中 3 种成分的含量
李 玲，金李峰
(浙江省余姚市中医医院药剂科，浙江 余姚 315400)
摘要 目的:采用 HPLC法测定不同产地苦玄参中阿克苷、苦玄参苷ⅠB 和苦玄参苷ⅠA 的含量。方法:Waters
色谱柱(250 mm ×4. 6 mm，5 μm);流动相:乙腈-0. 8%醋酸溶液(40∶ 60);流速:0. 8 mL /min;检测波长:264 nm;柱
温:30 ℃;进样量:20 μL。结果:不同产地 5 批苦玄参中的阿克苷、苦玄参苷ⅠB 和苦玄参苷ⅠA 含量分别为 2. 0 ～
3. 5 mg /g、1. 9 ～ 3. 1 mg /g和 1. 3 ～ 1. 9 mg /g。结论:该实验方法为苦玄参的质量控制提供了参考。广西产苦玄参
质量相对较好。
关键词 HPLC;苦玄参;阿克苷;苦玄参苷ⅠA;苦玄参苷ⅠB
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2016)02-0355-03
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2016. 02. 030
苦玄参系玄参科苦玄参属植物苦玄参 Picria
feltarrae Lour. 的干燥全草，味苦，性寒，具有清热解
毒、消肿止痛的功效〔1〕。苦玄参富含苷类物质，研
究显示阿克苷、苦玄参苷ⅠB 和苦玄参苷ⅠA 是苦玄
参中苷类物质的主要有效成分〔2〕。在我国，苦玄参
主要分布在两广、贵州和云南等地，笔者考察了不同
产地苦玄参中阿克苷、苦玄参苷ⅠB 和苦玄参苷ⅠA
3 个成分的含量。现将结果报道如下。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 Agilent 1200 高效液相色谱仪(美国
Agilent公司);电子天平(德国 Sartorius 公司);HHS
数显恒温水浴锅(郑州长城科工贸有限公司);超声
波清洗机(昆山超声仪器有限公司);3K15 离心机
(美国 Sigma 公司);超纯水仪(美国 Millipore 公
司)。
1. 2 材料 苦玄参苷ⅠA 对照品(批号:111745-
200501)购自中国食品药品检定研究院;阿克苷和
苦玄参苷ⅠB 对照品购自 Sigma 公司，所有对照品
经 HPLC 峰面积归一化法检测质量分数均 ＞
98. 0%。实验用苦玄参样品来源见表 1，经浙江中
医药大学药学院李越兰副教授鉴定为玄参科苦玄参
属植物苦玄参 Picria feltarrae Lour. 的干燥全草。乙
腈和甲醇为色谱纯;冰醋酸为分析纯。
表 1 不同产地苦玄参样品来源
编号 采集地 采集 /购买时间
1 广州 2014. 5
2 广西 2014. 6
3 贵州 2014. 8
4 贵州 2014. 7
5 云南 2014. 8
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Waters 色谱柱(250 mm × 4. 6
mm，5 μm);流动相:乙腈-0. 8%醋酸溶液(40∶ 60);
流速:0. 8 mL /min;检测波长:264 nm;柱温:30 ℃;
进样量:20 μL。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取由 P2O5 减压
干燥至恒重的阿克苷、苦玄参苷ⅠB 和苦玄参苷ⅠA
对照品适量，加适量甲醇溶解稀释并定容至刻度，摇
匀，制成每 1 mL含阿克苷 6. 2 mg、苦玄参苷ⅠB 5. 5
mg和苦玄参苷ⅠA 4. 1 mg的混合对照品溶液，置于
4 ℃冰箱密闭，临用放置室温。
2. 3 供试品溶液的制备 取 60 ℃干燥的苦玄参
粗粉 5 g，精密称定，加 80% 甲醇溶解定容至 100
mL，称定重量，超声(250 W，40 kHz)处理 30 min，放
置室温，再次称定重量，80%甲醇补足减失重量，过
滤，滤液 15 000 r /min 离心 10 min，取上清液，0. 22
μm微孔滤膜过滤，即得。
2. 4 专属性考察 取混合对照品溶液和供试品溶
液适量，按“2. 1”项下色谱条件进样测定，色谱图见
图 1。阿克苷、苦玄参苷ⅠB 和苦玄参苷ⅠA 的保留
时间分别为 14. 9、25. 1 和 32. 3 min，各色谱峰的分
离度均符合要求。
2. 5 线性关系考察 精密量取混合对照品溶液
0. 05、0. 1、0. 4、0. 8、1、2、4 和 5 mL 分别置于 5 mL
棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按“2. 1”项
下色谱条件进样，记录色谱图，以对照品浓度为横坐
标(X)，峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，3 个成
分的线性关系见表 2。
2. 6 精密度试验 取同一批苦玄参供试品，按
“2. 3”项下方法制备供试品溶液，按“2. 1”项下色谱
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图 1 混合对照品(A)和苦玄参样品(B)的 HPLC图谱
1. 阿克苷 2. 苦玄参苷ⅠB 3. 苦玄参苷ⅠA
表 2 苦玄参中 3 种成分的线性关系考察结果
成分 回归方程 r 线性范围
/
(μg /mL)
阿克苷 Y = 17698X + 1038 0. 9990 62 ～ 6197
苦玄参苷ⅠB Y = 19956X － 1269 0. 9995 55 ～ 5507
苦玄参苷ⅠA Y = 15687X + 1578 0. 9995 41 ～ 4106
条件连续进样 5 次，连续测定 3 d，记录峰面积并计
算阿克苷、苦玄参苷ⅠB 和苦玄参苷ⅠA 的 ＲSD 分
别为 4. 61%、5. 07%和 5. 19%，表明仪器精密度良
好。
2. 7 稳定性试验 取同一批苦玄参供试品溶液，
每隔 1 h进样 1 次，连续进样 6 次，计算阿克苷、苦
玄参苷ⅠB 和苦玄参苷ⅠA 峰面积的 ＲSD 分别为
3. 12%、3. 30%和 3. 37%，表明供试品溶液在 6 h 内
稳定性较好。
2. 8 重复性试验 取同一批苦玄参供试品 5 份，
按“2. 3”项下方法制备供试品溶液，进样测定阿克
苷、苦玄参苷ⅠB 和苦玄参苷ⅠA 峰面积的 ＲSD 分
别为 4. 03%、3. 84%和 3. 67%，表明试验重复性较
好。
2. 9 加样回收率试验 取已知含量的苦玄参供试
品，分别加入混合对照品溶液适量，按“2. 3”项下方
法制备高、中、低 3 种浓度的供试品溶液，每个溶液
连续进样测定 3 次，计算阿克苷、苦玄参苷ⅠB 和苦
玄参苷ⅠA 平均加样回收率分别为 100. 50%、
97. 00%和 103. 23%，ＲSD分别为 4. 25%、4. 12%和
5. 09%，见表 3。
2. 10 含量测定 取 5 批不同产地苦玄参药材适
量，按“2. 3”项下方法制备供试品溶液，在“2. 1”项
色谱条件下进行测定，结果苦玄参中阿克苷、苦玄参
苷ⅠB 和苦玄参苷ⅠA 含量测定结果见表 4。
3 讨论
表 3 苦玄参中 3 种成分的加样回收率试验结果
成分 加入量 /μg 检测量 /μg 平均加样
回收率 /%
ＲSD /%
阿克苷 495. 8 474. 0 100. 50 4. 25
991. 6 1025. 3
1239. 5 1270. 5
苦玄参苷ⅠB 418. 3 422. 4 97. 00 4. 12
836. 5 811. 4
1045. 7 972. 5
苦玄参苷ⅠA 331. 1 326. 8 103. 23 5. 09
662. 2 675. 4
827. 7 902. 2
表 4 不同产地苦玄参中 3 种成分含量(mg/g)
编号 阿克苷 苦玄参苷ⅠB 苦玄参苷ⅠA
1 3. 0 3. 1 1. 3
2 3. 5 2. 8 1. 9
3 2. 8 2. 9 1. 7
4 2. 4 2. 5 1. 5
5 2. 0 1. 9 1. 4
3. 1 色谱条件的选择 色谱条件主要参考文
献〔3，4〕中检测苦玄参苷ⅠB 和苦玄参苷ⅠA 采用的
乙腈、水系统，但本文纳入了阿克苷，采用上述系统，
阿克苷与杂质峰分离效果较差，因此将水替换为低
浓度醋酸，阿克苷与杂质峰分离效果明显改善，柱效
高且峰形理想。
3. 2 提取溶液和提取时间的确定 同时对比了
100% ～30%甲醇、100% ～50%乙醇等提取溶剂，结
果显示 80%甲醇提取的 3 个成分的色谱峰峰面积
最大，因此选择 80%甲醇为提取溶剂。超声提取随
着时间的延长，3 个成分的色谱峰峰面积逐渐增高，
当超声超过 30 min，3 个成分的色谱峰峰面积不再
增高，提示超声提取 30 min为最佳提取时间。
3. 3 样品溶液的稳定性 样品溶液在常温放置，
浓度不会降低，提示在甲醇或甲醇溶液中 3 个苷处
于稳定状态。但苦玄参苷ⅠB 和苦玄参苷ⅠA 在酸
水条件下可水解为次生苷，虽然在本试验中放置时
间较短，但仍不建议采用流动相溶解，因为流动相存
在低浓度的醋酸，若用流动相溶解可能会干扰苷的
含量。这一点也提示苦玄参不宜用醋炮制。
3. 4 不同产地的苦玄参评估 与其他产地比较，
广西的阿克苷、苦玄参苷ⅠB 和苦玄参苷ⅠA 总量较
高，提示广西的苦玄参质量相对较好，有文献〔5-7〕显
示苦玄参中的苦玄参苷ⅠA 含量在每年 6 ～ 7 月份
最高，其余月份相对较低，而广西的采集时间为 6 ～
7 月份，而贵州与云南的采集时间在 8 月份，虽然苦
玄参苷ⅠA 不能代表 3 种苷，但提示苷类含量与季
·653· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 39 卷第 2 期 2016 年 2 月
节可能密切相关，也说明苦玄参采集的季节依赖性
较高，而本次结果仅能提示广西的 6 月份苦玄参质
量较好，还需进行进一步的动态考察。
参 考 文 献
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