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China Pharmaceuticals
2015年 8月 20日 第 24卷第 16期
Vol． 24，No． 16，August 20，2015
＊国家科技支撑计划项目，项目编号:2013BAI11B01;贵州省科技厅资助项目，项目编号:[ 2013 ]4001，[ 2013 ]5062。
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(收稿日期:2015 － 03 － 13 )
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从隔山消中制备 4种苯乙酮对照品＊
张 锦 1，2，胡 露 1，3，李月婷 1，2，刘俊宏 1，3，陈思颖 1，2，张桂青 1，2，李勇军 1，3
(1． 贵阳医学院药学院，贵州 贵阳 550004; 2． 贵州省药物制剂重点实验室，贵州 贵阳 550004; 3． 民族
药与中药开发应用教育部工程研究中心，贵州 贵阳 550004)
摘要:目的 建立从隔山消中分离制备 4 种苯乙酮对照品的方法。方法 采用溶剂提取，应用色谱技术分离纯化，根据化合物理化性质和
光谱数据鉴定结构，用薄层色谱(TLC)法、高效液相色谱(HPLC)法进行纯度检查。结果 制备得到的对照品经薄层色谱检查无杂质，纯
度均在 98%以上，符合中药化学对照品含量测定要求。结论 制备所得的对照品可用于隔山消及其制剂的质量控制。
关键词:隔山消;苯乙酮;对照品
中图分类号:Ｒ284． 1;Ｒ282． 71 文献标识码:A 文章编号:1006 － 4931 (2015 )16 － 0012 － 02
Preparation of 4 Ｒeference Substances of Acetophenone from Cynanchum Auriculatun
Zhang Jin1，2，Hu Lu1，3，Li Yueting1，2，Liu Junhong1，3，Chen Siying1，2，Zhang Guiqing1，2，Li Yongjun1，3
(1． School of Pharmacy，Guiyang Medical College，Guiyang，Guizhou，China 550004; 2． Guizhou Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics，Guiyang，
Guizhou，China 550004; 3． Engineering Ｒesearch Center for the Development and Application of Ethnic Medicine and TCM，Ministry of Education，
Guiyang，Guizhou，China 550004)
Abstract:Objective To establish a method for the isolation and preparation of 4 reference substances of acetophenone from Cy-
nanchum auriculatun． Methods Chromatographic techniques were employed for isolation and purification of the constituents and their
structures were determined by spectral analysis and chemical evidence． The purity was analyzed by TLC and HPLC． Ｒesults The purity
levels of these compounds were all over 98%，which was in auordance with thd content determination requirement of the TCM chemical
reference substance． Conclusion These compounds can be used as a reference substance in the quality control and the preparations of
Cynanchum auriculatun．
Key words:Cynanchum auriculatun;acetophenone;reference substance
隔山消为萝 科植物耳叶牛皮消 Cynanchum auriculatum
Ｒoyle ex Wight 的干燥块根，具有养阴补虚、健脾消食之功效，用
于虚损劳伤、饱胀胃痛等症 [ 1 ]，为贵州苗族的常用药材 [2 ]。现代研
究表明，隔山消中主要含有 C21 甾类、苯乙酮类、多糖、磷脂等多
种化学成分，具有抗肿瘤、抗衰老、抗氧化、神经细胞保护等多种
药理活性 [ 3 － 5 ]，其中苯乙酮类具有较好的抗氧化活性 [ 6 ]。由于隔山
消应用多为水煎煮提取，为寻找隔山消药材水溶性部位质量控制
指标成分，笔者在对隔山消水溶性部位中主要化学成分研究的基
础上，对其中 4 种苯乙酮化合物进行对照品研究，旨在为隔山消
及其制剂的质量控制提供对照品，现报道如下。
1 仪器与材料
超高效液相色谱仪(Acquity UPLC)，质谱仪(Acquity － TQD)，
核磁共振波谱仪(JEOL － ECX － 500);柱层析用硅胶及硅胶G预
制板(青岛海洋化工厂)，Sephadex LH － 20(瑞士 Pharmacia Biotech
公司)，MCI 75 － 150 μm(日本三菱化学公司)，D101 大孔树脂(青
岛海洋化工厂)。试剂均为分析纯，水为蒸馏水。隔山消药材由贵
州飞云岭药业股份有限公司提供，经贵阳中医学院王世清教授鉴
定为萝 科植物耳叶牛皮消 Cynanchum auriculatum Ｒoyle ex
Wight的干燥块根。
2 方法与结果
2．1 提取与分离
取隔山消药材粗粉 15 kg，用 70%乙醇回流提取 3 次，合并
提取液，回收溶剂得稠膏，稠膏用水溶解成每 1 mL含 1 g 生药的
溶液，静置，取上清液上于 D101大孔树脂，依次用水、60%乙醇洗
脱，收集 60%乙醇洗脱部分，减压回收溶剂至稠膏，取稠膏经硅
胶柱层析以氯仿 －甲醇(10 ∶ 0→7 ∶ 3，加少量醋酸)进行梯度洗
脱，分段收集，各段进行薄层色谱(TLC)法检测并合并，得到 7 个
部分。其中 Fr． 2 经反复 LH － 20、硅胶柱层析得到化合物 1
(500 mg)、化合物 2(200 mg)、化合物 3(300 mg)，Fr． 3 经反复的
硅胶柱层析得到化合物 4(9 g)。
2．2 结构鉴定
化合物 1:白色针晶(甲醇)，紫外灯 254 nm 下有暗斑，碘反
应阳性。ESI － MS( m / z ):136． 6 [M + H] +，134． 6 [M － H] －;1H －
NMＲ (500 MHz，CD3OD)δ:7． 86(2H，d，J = 8． 55 Hz，H － 2，6)，
6． 82(2H，d，J = 9． 15 Hz，H － 3，5)，2． 49(3H，s，COCH3);13C －
NMＲ (125 MHz，CD3OD)δ:198． 2(C = O)，162． 6(C － 4)，130． 8
(C － 2，6)，128． 6(C － 1)，114． 9(C － 3，5)，25． 0(－ CH3)。以上波
谱数据及理化性质与文献 [ 7 ]报道的 4 －羟基苯乙酮(4 － hydrox-
yacetophenone)数据基本一致，故鉴定该化合物为 4 －羟基苯乙酮。
化合物 2: 黄绿色粉末，紫外灯254 nm 下有暗斑，碘反应阳
性。ESI － MS ( m / z ):151． 3 [M － H] －;1H － NMＲ(400 MHz，C5D5N)
δ:7． 55 (1H，d，J = 2． 9 Hz，H － 6)，7． 37(1H，dd，J = 8． 8 Hz，
2． 9 Hz，H － 4)，7． 10(1H，d，J = 8． 8 Hz，H － 3)，2． 49(3H，s，
COCH3)。以上波谱数据及理化性质与文献 [ 8 ]报道的 2，5 －二羟
·药物研究·
Drug Ｒesearch
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2015年 8月 20日 第 24卷第 16期
Vol． 24，No． 16，August 20，2015
基苯乙酮(2，5 － dihydroxyacetophenone)数据基本一致，故鉴定该
化合物为 2，5 －二羟基苯乙酮。
化合物 3: 米白色粉末，紫外灯254 nm 下有暗斑，碘反应阳
性。ESI － MS ( m / z ):153． 1 [M + H] +，151． 2 [M － H] －;1H － NMＲ
(400 MHz，CD3OD)δ:7． 71(1H，d，J = 9． 0 Hz，H － 6)，6． 35 (1H，
dd，J = 9． 0 Hz，2． 3Hz，H － 5)，6． 23 (1H，d，J = 2． 3 Hz，H － 3)，
2． 51(3H，s，COCH3);13C － NMＲ(100 MHz，CD3OD)δ:204． 3(C = O)，
166． 5(C － 2)，166． 3(C － 4)，134． 5(C － 6)，114． 4(C － 1)，109． 1
(C － 5)，103． 5(C － 3)，25． 0(－ CH3)。以上波谱数据及理化性质
与 文 献 [ 9 ] 报 道 的 2，4 －二 羟 基 苯 乙 酮 (2，4 －
dihydroxyacetophenone)数据基本一致，故鉴定该化合物为 2，4 －
二羟基苯乙酮。
化合物 4:淡黄色晶体(氯仿 －甲醇)，紫外灯 254 nm下有暗
斑，氯化铁溶液显红棕色，碘反应阳性。ESI － MS m / z:303． 2
[M + H] +，301． 4 [M － H] －，603． 4 [2M － H] －;1H － NMＲ(500MHz，
DMSO － d6)δ:2． 21(3H，s，phenyl － CH3)，2． 54(3H，s，COCH3)，
6． 44 (1H，d，J = 9． 2 Hz，H － 5)，6． 69(1H，d，J = 9． 2 Hz，H － 3)，
6． 75 (1H，d，J = 9． 2 Hz，H － 4)，7． 70(1H，d，J = 9． 2 Hz，H － 4)，
8． 51(1H，s，C5 － OH)，9． 31(1H，s，C6 －OH)，10． 31(1H，s，C2 － OH)，
12． 88(1H，s，C2 － OH);13C － NMＲ(125MHz，DMSO － d6)δ:203． 2
(C － 7)，203． 1 (C － 8)，162． 5 (C － 2)，162． 3 (C － 6)，148． 0 (C －
5)，146． 9(C － 2)，132． 2(C － 4)，130． 2(C － 6)，118． 1(C － 4)，
117． 4(C － 3)，115． 8(C － 1)，112． 3(C － 3)，111． 5(C － 1)，107． 5
(C － 5)，30． 7(C － 10)，26． 2(C － 9)。以上数据与文献 [ 7 ]报道的
白首乌二苯酮(baishouwubenzophenone)数据基本一致，故鉴定该
化合物为白首乌二苯酮。
2．3 纯度考察
2． 3． 1 TLC法
4 －羟基苯乙酮:将4 －羟基苯乙酮样品用甲醇制成每 1 g / L
的溶液，分别点样 2，5，10，15，20 μL 于硅胶 GF254 板上，分别以
甲苯 －乙酸乙酯 －冰乙酸(7 ∶ 3 ∶ 0． 05)、氯仿 －丙酮 －冰乙酸
(9． 5 ∶ 0． 5 ∶ 0． 05)、氯仿 －乙酸乙酯 －冰乙酸(8 ∶ 2 ∶ 0． 05)为展开
剂。紫外光灯 254 nm 波长下检视后用碘显色，在日光下检视。结
果表明，在 3 种展开剂和 2 种检视方式下，样品均为 1 个斑点，未
见其他杂质斑点。
2，5 －二羟基苯乙酮: 将2，5 －二羟基苯乙酮样品用甲醇制
成 1 g / L 的溶液，分别点样 2，5，10，15，20 μL 于硅胶 GF254 板
上，分别以甲苯 －乙酸乙酯(8 ∶ 2)、氯仿 －乙酸乙酯(9 ∶ 1)、石油
醚 －乙酸乙酯(7 ∶ 3)为展开剂。紫外光灯 254 nm 波长下检视后
用碘显色，在日光下检视。结果表明，在 3 种展开剂和 2 种检视方
式下，样品均为 1个斑点，未见其他杂质斑点。
2，4 －二羟基苯乙酮: 将2，4 －二羟基苯乙酮样品用甲醇制
成 1 g / L 的溶液，分别点样 2，5，10，15，20 μL 于硅胶 GF254 板
上，分别以甲苯 －乙酸乙酯(8 ∶ 2)、氯仿 －乙酸乙酯(9 ∶ 1)、石油
醚 －乙酸乙酯(7 ∶ 3)为展开剂。紫外光灯 254 nm 波长下检视后
用碘显色，在日光下检视。结果表明，在 3 种展开剂和 2 种检视方
式下，样品均为 1个斑点，未见其他杂质斑点。
白首乌二苯酮:将白首乌二苯酮样品用甲醇制成1 g / L的溶
液，分别点样 2，5，10，15，20 μL于硅胶 GF254 板上，分别以氯仿
－甲醇(9． 2 ∶ 0． 8)、氯仿 －乙酸乙酯 －甲醇(7 ∶ 3 ∶ 0． 5)、氯仿 －
丙酮(7 ∶ 3)为展开剂。紫外光灯 254 nm波长下检视后用碘显色，
在日光下检视。结果表明，在 3 种展开剂和 2种检视方式，下样品
均为 1个斑点，未见其他杂质斑点。
2． 3． 2 高效液相色谱(HPLC)法
4 －羟基苯乙酮、2，5 －二羟基苯乙酮、2，4 －二羟基苯乙酮:
称取 3种样品适量，分别用甲醇制成质量浓度为 1 g /L的溶液。色
谱柱为 Agilent Eclipse Plus C18 ＲＲHD柱(100 mm ×2． 1 mm，1． 8μm)，
流动相为 0． 1%甲酸乙腈 － 0． 1%甲酸水溶液，梯度洗脱程序为
0 min(5 ∶ 95)～ 10 min(100 ∶ 0)，流速为 0． 3 mL /min，柱温为 40 ℃，
检测波长为 205，220，254，280，310 nm，进样量为 3μL。结果表明，在
5个波长下所得 HPLC图谱中显示 1个主峰，采集时间为主峰保留
时间的 2倍以上。质量分数以峰面积归一化法计算均大于 98%。
白首乌二苯酮:称取白首乌二苯酮适量，用甲醇制成质量浓
度为 1 g / L 的对照品溶液。色谱柱为 Diamonsil C18 柱(250 mm ×
4． 6 mm，5 μm)，流动相为乙腈 － 0． 1%磷酸溶液，梯度洗脱程序
为 0 min(15 ∶ 85)～ 40 min(80 ∶ 20)，流速为 1 mL / min，柱温为
35 ℃，检测波长为 205，220，254，280，310 nm，进样量为 10 μL。结
果表明，在 5 个波长下所得 HPLC 图谱中显示 1 个主峰，采集时
间为主峰保留时间的 2 倍以上。质量分数以峰面积归一化法计算
均大于 98%。
3 讨论
由于隔山消的主要成分 C21 甾体苷类多为去氧糖甲醚的糖
苷，经试验研究，该类成分无法经水煎煮提取出来。为寻找隔山消
药材水溶性部位质量控制指标成分，笔者对隔山消水溶性部位化
学成分进行研究，对其中含量较高的 4 个化合物进行制备，结果
表明，分离制备得到的 4 个化合物纯度均大于 98%，并进行高
温、高湿和强光照射试验，4 个对照品理化性质均较稳定，达到了
中药新药质量标准用化学对照品的要求，故可作为隔山消及其制
剂的质量控制用对照品。
作者简介:张锦(1991 －)，女，硕士研究生，主要从事中药、民
族药的质量控制研究工作，(电子信箱)1208552141@ qq． com; 李
勇军(1973 －)，男，教授，硕士研究生导师，主要从事天然药物化
学、中药新药制备工艺及质量标准研究，本文通讯作者，(电子信
箱)liyongjun026@ 126． com。
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