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瑶药旱田草的定性定量定法研究
蒋秋香
(广西柳州食品药品检验所，柳州 545006)
摘要 目的:建立旱田草药材的定性定量方法，考察广西不同产地、不同采收时节的药材质量。方法:采用 TLC法对旱田草进
行定性鉴别，展开剂为乙酸丁酯－甲醇－甲酸－水(6∶ 1. 5∶ 1. 5∶ 1) ;采用 HPLC法对旱田草中的毛蕊花糖苷进行含量测定，使用
Waters SunFire C18色谱柱(4. 6 mm!250 mm，5 μm) ，柱温 35 ℃，以甲醇 －0. 4%磷酸溶液(32∶ 68)为流动相，流速 1. 0 mL·min
－1，
检测波长 334 nm;参照中国药典 2010 年版一部测定水分、灰分和浸出物。结果:薄层色谱中斑点清晰，分离度好;毛蕊花糖苷
质量浓度在 2. 002 ～ 40. 04 μg·mL －1(r = 1. 000 0)范围内线性关系良好，加样回收率为 98. 61%(ＲSD = 1. 7%，n = 6) ;所测的
12 批样品含量在 0. 196 ～ 16. 76 mg·g －1之间。结论:本文建立的方法可用于瑶药旱田草的质量控制。
关键词:瑶药;旱田草;毛蕊花糖苷;薄层色谱;高效液相色谱
中图分类号:Ｒ 917 文献标识码:A 文章编号:0254－1793(2015)12－2143－05
doi:10. 16155 / j. 0254－1793. 2015. 12. 15
Study on qualitative and quantitative method for Yao medicine
Lindernia ruellioides (Colsm．)Pennell(Hantiancao)
JIANG Qiu－xiang
(Guangxi Liuzhou Institute for Food and Drug Control，Liuzhou 545006，China)
Abstract Objective:To establish a qualitative and quantitative method for Lindernia ruellioides (Colsm．)Pen-
nell，and investigate the quality of this medicine from different habitats and harvest seasons in Guangxi．
Methods:The TLC method was used for qualitative identification and butyl acetate－methanol－ formic acid－water
(6∶ 1. 5∶ 1. 5∶ 1)was used as the developing agent;and the determination of verbascoside was conducted by HPLC u-
sing a column of Waters SunFire C18(4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ，the mobile phase was methanol － 0. 4% phosphor-
ic acid(32∶ 68)at a flow rate of 1. 0 mL·min －1;the detection wavelength was 334 nm，and the column temperature
was 35 ℃ ． The contents of moisture，total ash and ethanol－soluble extractives were determined with the methods in
Chinese Pharmacopeia(ChP 2010)． Ｒesults:The spot of verbascoside could be well identified by TLC． In the sys-
tem of HPLC，verbascoside showed good linear relationship in the ranges of 2. 002－40. 04 μg·mL －1(r = 1. 000 0) ，
The average recovery was 98. 61%(ＲSD = 1. 7%，n = 6)． The contents in 12 batches of samples were between
0. 196 mg·g －1 to 16. 76 mg·g －1 ． Conclusion:The qualitative and quantitative method established can be used for
the quality control of Lindernia ruellioides (Colsm．)Pennell．
Keywords:Yao medicine;Lindernia ruellioides (Colsm．)Pennell;verbascoside;TLC;HPLC
瑶药旱田草系玄参科植物旱田草［Lindernia ruel-
lioides(Colsm．)Pennell］的全草，别名调经草、锯齿草、
田素香等;性甘、淡，性平，具有理气活血、解毒消肿的
功效，主要用于治疗月经不调、痛经、闭经、乳痈、瘰
疬、跌打损伤、蛇犬咬伤［1］;主产于广西、福建、台湾、
湖南等省市，是广西瑶族人民常用的中草药。目前尚
未发现有瑶药旱田草的相关文献报道及法定质量标
准，本文经预试验发现旱田草含活性成分毛蕊花糖
苷，有文献报道［2 － 4］，毛蕊花糖苷具有促进骨细胞的
增殖和分化、拮抗自由基损伤和增强机体免疫功能、
促进肿瘤细胞凋亡和抑制大肠癌等功能。旱田草在
不同产地、不同采收时节中毛蕊花糖苷的含量差异较
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大，本文采用薄层色谱法进行定性鉴别，采用高效液
相色谱法进行含量测定，并建立其水分、灰分、浸出物
等检查项目，为其质量标准的建立提供科学依据。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 Waters 2695－2487 型高效液相色谱仪
(美国 Waters公司) ;UV－2450 紫外分光光度计(日
本岛津公司) ;METTLEＲ XS205 电子分析天平(瑞
士梅特勒公司) ;电热鼓风干燥箱 DHG－9023A(上
海精宏实验设备有限公司) ;程控箱式电炉 SXL－
1216(上海精宏实验设备有限公司) ，超声波清洗机
AS10200AD(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)。
1. 2 试剂 对照品毛蕊花糖苷(批号 111530 －
201309) ，购自中国食品药品检定研究院，供含量测
定用，含量 92. 9%。薄层层析硅胶 G板购自青岛海
洋化工有限公司(粘合剂:CMC－Na;规格:20 cm ×
20 cm;厚度:500 μm)。甲醇为色谱纯，水为超纯
水，其他试剂均为分析纯。
1. 3 药材 采集旱田草药材 12 批，经广西中医药
大学中药鉴定教研室蔡毅教授鉴定为旱田草
Lindernia ruellioides (Colsm．)Pennell，以采自大化县
协台镇批号为 20140529 的样品为对照药材。详细
信息见表 1。
表 1 旱田草详细信息一览表
Tab． 1 List of detailed information of Lindernia ruellioides(Colsm．)Pennell
编号(No．) 批号(lot No．) 采集地点(harvest place) 样品状态(mode)
HTC－1 20131016 岑溪岑城(Cencheng，Cenxi) 全草(herb)
HTC－2 20131019 岑溪大隆(Dalong，Cenxi) 全草(herb)
HTC－3 20140527 岑溪南渡(Nandu，Cenxi) 全草(herb)
HTC－4 20140503 桂平紫荆(Zijing，Guiping)1 全草(herb)
HTC－5 20140715 桂平紫荆(Zijing，Guiping)2 全草(herb)
HTC－6 20140909 桂平紫荆(Zijing，Guiping)3 全草(herb)
HTC－7 20140516 桂平市郊(Guiping suburb) 全草(herb)
HTC－8 20140402 上林(Shanglin) 全草(herb)
HTC－9 20140421 上林西燕(Xiyan，Shanglin) 全草(herb)
HTC－10［对照药材(reference crude drug) ］， 20140529 大化协台(Xietai，Dahua) 全草(herb)
HTC－11 20140706 大化岩滩(Yantan，Dahua) 全草(herb)
HTC－12 20141002 金秀(Jinxiu) 全草(herb)
2 方法与结果
2. 1 检查项目
水分:照水分测定法(中国药典 2010 年版一部
附录Ⅸ H第一法)测定，结果见表 2;总灰分:照灰
分测定法(中国药典 2010 年版一部附录Ⅸ K)测
定，结果见表 2;酸不溶性灰分:照灰分测定法(中国
药典 2010 年版一部附录Ⅸ K)测定，结果见表 2;浸
出物:照醇溶性浸出物测定法(中国药典 2010 年版
一部附录Ⅹ A)测定，结果见表 2。
2. 2 旱田草药材的 TLC鉴别
取本品粉末(过 2 号筛)1 g，加 95% 乙醇 20
mL，超声处理(功率 250 W，频率 40 kHz)30 min，滤
过，滤液蒸干，残渣加乙醇 1 mL使溶解，即得供试品
溶液;另取旱田草对照药材(HTC－10)1 g，同法制成
对照药材溶液;再取毛蕊花糖苷对照品，加 95%乙
醇制成每 1 mL 含 1 mg 的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法试验，吸取上述 3 种溶液各 2 μL，点
表 2 旱田草检查测定结果(%，n =3)
Tab． 2 Ｒesults of the determination
批号
(lot No．)
水分
(moisture)
总灰分
(total ash)
酸不溶性灰分
(acid－insoluble ash)
浸出物
(extract)
HTC－1 11. 00 12. 85 1. 96 20. 13
HTC－2 11. 25 12. 60 2. 08 19. 86
HTC－3 11. 14 14. 01 2. 63 19. 28
HTC－4 11. 76 11. 62 1. 67 28. 83
HTC－5 11. 43 11. 96 1. 55 26. 99
HTC－6 10. 14 13. 36 1. 89 24. 00
HTC－7 11. 48 12. 58 4. 05 25. 58
HTC－8 11. 50 17. 62 8. 44 13. 85
HTC－9 10. 73 17. 36 8. 28 17. 81
HTC－10 10. 16 15. 22 6. 27 27. 02
HTC－11 9. 94 16. 72 7. 16 20. 08
HTC－12 9. 50 15. 50 6. 34 21. 94
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于同一以 CMC－Na为粘合剂的硅胶 G薄层板上，以
乙酸丁酯 －甲醇 －甲酸 －水(6∶ 1. 5∶ 1. 5∶ 1)为展开
剂，展开，取出，晾干，喷以 3%三氯化铝乙醇溶液，
晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视，样品色谱中，在
与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相
同颜色的荧光斑点。结果见图 1。
图 1 旱田草药材薄层色谱图
Fig． 1 TLC of Lindernia ruellioides(Colsm．)Pennell
1，14．毛蕊花糖苷对照品(verbascoside) 11．旱田草对照药材［reference crude drug of Lindernia ruellioides(Colsm．)Pennell］ 2 ～ 10．样品(批号:HTC－1 ～ HTC－9)
［samples，No． HTC－1 ～ HTC－9) ］12，13．样品(批号:HTC－11 ～ HTC－12) ［samples(No． HTC－11 ～ HTC－12) ］
2. 3 旱田草药材中毛蕊花糖苷的含量测定
2. 3. 1 对照品溶液制备 精密称取毛蕊花糖苷对
照品 10. 77 mg，置 10 mL 量瓶中，加甲醇溶解并定
容，摇匀，即得对照品储备液;精密吸取储备液 1 mL
于 100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成 10. 01
μg·mL －1的溶液，即得。
2. 3. 2 供试品溶液制备 取本品药材粉末(过 3 号
筛)0. 8 g，精密称定，置 100 mL锥形瓶中，精密加入
90%甲醇溶液 25 mL，称量，加热回流 30 min，取出，
放冷，用 90%甲醇溶液补足减失的量，摇匀，过 0. 45
μm滤膜，即得。
2. 3. 3 色谱条件［5 －9］及系统适用性试验 色谱柱:
Waters SunFire C18(4. 6 mm !250 mm，5 μm) ;流动
相:甲醇 － 0. 4% 磷酸溶液(32 ∶ 68) ，流速:1. 0
mL·min －1;检测波长:334 nm;柱温:35 ℃;进样量:
10 μL。按上述色谱条件进行测定，结果理论板数按
毛蕊花糖苷峰计均不低于 8 000，且与杂质达到基线
分离，分离度大于 2. 0。色谱图见图 2。
2. 3. 4 线性关系考察 精密量取“2. 3. 1”项下对
照品储备液 2 mL于 50 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，
摇匀，精密吸取 1. 0、2. 5、5. 0、7. 5、10. 0、20. 0 mL，
分别置 20 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即
得约相当于毛蕊花糖苷 2. 002、5. 005、10. 01、
15. 02、20. 02、40. 04 μg·mL －1的系列对照品溶液，
进样 10 μL进行分析，记录峰面积。以对照品质量
浓度 X(μg·mL －1)为横坐标峰，以色谱峰峰面积 Y
为纵坐标制作标准曲线，求得标准曲线的回归方程:
Y = 1. 34 × 104X － 6. 89 × 103 r = 1. 000 0
结果表明毛蕊花糖苷质量浓度在 2. 002 ～
40. 04 μg·mL －1范围内线性关系良好。
2. 3. 5 精密度试验 精密吸取对照品溶液，连续进
样 6 次，每次 10 μL，以峰面积计，ＲSD 为 1. 2%;表
明该方法精密度良好。
2. 3. 6 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于
0、2、8、12、20、24 h进样测定，以峰面积进行计算，结
果 ＲSD为 2. 3%;表明供试品溶液中毛蕊花糖苷在
24 h内稳定性良好。
2. 3. 7 重复性试验 取同一样品(批号 HTC－1)各
6 份，分别按“2. 3. 2”项下方法制备供试品溶液，进
样 10 μL，测定。结果样品中毛蕊花糖苷平均含量
(以干燥品计，n = 6)为 0. 276 5 mg·g －1，ＲSD 为
0. 8%;表明该方法重复性良好。
2. 3. 8 加样回收率试验 精密称取同一批(批号
HTC－1)已知毛蕊花糖苷含量为 0. 276 5 mg·g －1的样
品 0. 4 g，共 6 份，分别精密加入对照品溶液(10. 01
μg·mL －1)10 mL，按“2. 3. 2”项下方法操作，制备供
试溶液，进样测定，计算回收率。结果毛蕊花糖苷平
均回收率(n =6)为 98. 61%，ＲSD为 1. 7%。
—5412—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(12)
图 2 毛蕊花糖苷对照品(A)、旱田草样品(B)HPLC色谱图
Fig． 2 HPLC chromatography of verbascoside(A)and sample of Lindernia ruellioides (Colsm．)Pennell(B)
2. 3. 9 样品测定 按“2. 3. 2”项下方法制备供试
品溶液，进样测定，测定 12 批旱田草药材中毛蕊花
糖苷的含量，其含量(以干燥品计)在 0. 196 ～ 16. 76
mg·g －1范围内。
3 讨论
3. 1 常规检查项目方法的考察
按中国药典 2010 年版一部附录项下的水分、总
灰分、酸不溶性灰分和浸出物测定方法，对 12 批旱
田草进行检测。水分在 9. 50% ～ 11. 76%之间，该
药主产于南方，而南方气候较为湿润，建议将该药材
的水分限度定在 13%以下，有利于运输和储存;总
灰分在 11. 62% ～ 17. 62% 之间，酸不溶性灰分在
1. 55% ～8. 44%之间，总灰分和酸不溶灰分的量较
药典上一般药材的量稍大，其原因可能是旱田草以
全草入药，根部有些许泥沙不可避免，这就要求以后
在采收、除杂质过程中尽量完全，建议该药材的总灰
分含量不得超过 18. 0%，酸不溶性灰分含量不得超
过 9. 0%;对于浸出物的含量测定，本文分别进行了
水溶性浸出物(冷浸法、热浸法)和醇溶性浸出物
(冷浸法、热浸法)试验，结果表明，用醇溶性浸出物
中的热浸法测定，得到的浸出物含量最高。因此，最
终确定以乙醇作溶剂，照醇溶性项下的热浸法测定。
测得的含量在 13. 85% ～ 28. 83% 之间，除 1 批为
13. 85%外，其余都在 20%及以上，所选方法能有效
全面地提取其有效成分。
3. 2 薄层色谱鉴别方法的考察
曾参照中国药典［5］中地黄项下的鉴别(3)中的
方法制备 TLC 供试品溶液，其中有超声、滤过、溶
解、萃取 4 次、蒸干等操作，复杂烦琐，但所得到的薄
层斑点并不清晰。参考相关文献［10 － 12］，且经过不断
试验，最后以 95%乙醇超声 30 min 制备供试品溶
液，以乙酸丁酯－甲醇－甲酸－水(6 ∶ 1. 5 ∶ 1. 5 ∶ 1)为
展开剂，以 3%三氯化铝乙醇为显色剂，在紫外光灯
(365 nm)下检视，样品和对照品斑点显色清晰，颜
色相同，Ｒf 值适中。所选的方法操作简单，结果理
想可靠，可作为药材旱田草中毛蕊花糖苷的 TLC 鉴
别方法。
3. 3 含量测定方法考察
为了选定最佳的含量测定供试品溶液制备方
法，本文参考相关文献［13 － 15］，且分别用 10%乙醇、
30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇、10%甲
醇、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、90%甲醇、甲醇
(超声、回流)处理 30 min，结果发现以 90%甲醇回
流 30 min 最佳;在提取时间的选择上，分别用回流
30、45、60min比较，结果发现以 90%甲醇回流提取
30min，测得的毛蕊花糖苷含量最高，且杂质峰相对
—6412— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(12)
较少，故以 90%甲醇加热回流 30min 为供试品制备
方法。
4 结论
本文以毛蕊花糖苷作为指标成分对 12 批旱田
草进行薄层色谱定性鉴别和含量测定，结果 TLC 斑
点清晰，与杂质斑点能较好地分离，在取样量和点样
量一致的情况下，同一薄层板上的毛蕊花糖苷斑点
大小与含量测定结果相符，如 HTC－1、HTC－2 号样
品斑点较小，其含量也相应低，而 HTC－10 号样品斑
点大，其含量相对较高，说明所选的定性定量方法能
较好地反映旱田草的指标成分毛蕊花糖苷的内在质
量。旱田草为一年生草本，夏秋季节采收［1］，本文
的 12 批旱田草均于 4 到 10 月份采自广西各地，从
毛蕊花糖苷的含量可知，符合其采收季节特征。结
合本文上述所做的各项检查测定，为瑶药旱田草质
量控制标准的起草提供较全面、可行的参考。但是
不同产地、不同采收时节，旱田草中毛蕊花糖苷的含
量差异较大，如 HTC－10 与 HTC－8 号样品的含量相
差了 85 倍之多。地域的差别及采收时节的不同对
其含量有何影响，其影响的规律如何，是笔者下一步
讨论的课题。
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(本文于 2015 年 2 月 5 日收到)
—7412—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(12)