全 文 ：＊基金项目：广西中药质量标准研究重点实验室开放课题（Ｎｏ．桂中
重开２０１２０１）
△通信作者，Ｔｅｌ：０２０－８３５０１２９２，Ｅ－ｍａｉｌ：２３３５１２８６５４＠ｑｑ．ｃｏｍ
１广西中药质量标准研究重点实验室（广西中医药研究院）　南宁　
５３００２２
收稿日期：２０１４－０３－０５
ＨＰＬＣ法同时测定瑶药定心藤中３种化合物＊
陈　昭　毕晓黎△　罗文汇　赖茂祥１　邱宏聪１
（广东省中医药工程技术研究院　广州　５１００９５）
摘要　目的：建立高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法对瑶药定心藤中的３种化合物进行定量分析。方法：采用 ＨＰＬＣ法，以加速溶剂萃
取法（ＡＳＥ）提取药材所得液体直接进样，色谱条件为：以１％磷酸水溶液（Ａ）－乙腈（Ｂ）为流动相；采用梯度洗脱，梯度程序为
０～４０ｍｉｎ，１５％～４０％Ｂ；４０～５０ｍｉｎ，４０％～６０％Ｂ；５０～６０ｍｉｎ，６０％～１５％Ｂ；检测波长２１０ｎｍ，柱温２５℃，流速０．８ｍＬ／
ｍｉｎ。结果：定心藤中３个目标成分［（＋）－雪松醇、芦丁和豆甾醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷］在０．０１～２μｇ进样量范围内线性良好
（ｒ＝０．９９９　８，ｒ＝０．９９９　７，ｒ＝０．９９９　８），精密度分别为１．５３％，１．３９％和１．２６％，平均回收率分别１０３．８％，１０２．１％和
１０３．５％，ＲＳＤ分别为２．１％，２．３％和２．５％；８批药材三组分含量的ＲＳＤ在１．２％～２．３％之间。结论：该方法灵敏度高、专属
性好、线性范围良好、简便准确，适合于对定心藤中３种化合物进行定量分析测定。
关键词　瑶药；同时测定；ＨＰＬＣ；定心藤
中图分类号：Ｒ９３２．１　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００５－９３０Ｘ（２０１４）０２－０１８９－０４
ＳＩＭＵＬＴＡＮＥＯＵＳ　ＤＥＴＥＲＭＩＮＡＴＩＯＮ　ＴＨＲＥＥ　ＣＯＭＰＯＵＮＤＳ　ＯＦ　ＴＲＡＤＩＴＩＯＮＡＬ　ＹＡＯ　ＭＥ－
ＤＩＣＩＮＡＬ　ＨＥＲＢ　ＭＡＰＰＩＡＮＴＨＵＳＩＯＤＯＩＥＳ　ＢＹ　ＨＰＬＣ
Ｃｈｅｎ　Ｚｈａｏ，Ｂｉ　Ｘｉａｏｌｉ，Ｌｕｏ　Ｗｅｎｈｕｉ，Ｌａｉ　Ｍａｏｘｉａｎｇ，Ｑｉｕ　Ｈｏｎｇｃｏｎｇ．（Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５１００９５，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａｎ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ａｎｄ　ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ａｃ－
ｔｉｖｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｉｎ　Ｍａｐｐｉａｎｔｈｕｓｉｏｄｏｉｅｓ，ａ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ｏｆ　Ｙａｏ　ｐｅｏｐｌｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｈｅｒｂ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ
ｂｙ　ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｄｉｒｅｃｔｌｙ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｔｏ　ＨＰＬＣ　ｓｙｓｔｅｍ　ｆｏｒ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｍｏ－
ｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ　１％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ　ａｃｉｄ（Ａ）ａｎｄ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（Ｂ），ｕｓｉｎｇ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ａｓ　ｆｏｌｏｗ：０～４０ｍｉｎ
１５％～４０％Ｂ（ｖ／ｖ）；４０～５０ｍｉｎ　４０％～６０％ Ｂ；５０～６０ｍｉｎ　６０％～１５％ Ｂ；ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅ　ｌｅｎｇｔｈ：２１０
ｎｍ，ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ：２５℃，ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ：０．８ｍＬ／ｍｉｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄ　ｓｈｏｗｅｄ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅ－
ａｒ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　３ｔａｒｇｅｔ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ［ｎａｍｅｌｙ（＋）－ｃｅｄｒｏｌ，ｒｕｔｉｎ　ａｎｄ　ｓｔｉｇｍａｓｔｅｒｏｌ－３－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ］ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ
ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．０１～２μｇ（ｒ＝０．９９９　８，０．９９９　７ａｎｄ　０．９９９　８；ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ），ｔｈｅ　ＲＳＤｓ　ｏｆ　ｐｅａｋ　ａｒｅａ　ｆｏｒ　ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ
ｗａｓ　１．５３％，１．３９％ａｎｄ　１．２６％；ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｍｅａｎ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　１０３．８％，１０２．１％ａｎｄ　１０３．５％，
ｗｉｔｈ　ＲＳＤｓ　ｏｆ　２．１％，２．３％ａｎｄ　２．５％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；ｆｏｒ　ｒｅａｌ　ｓａｍｐｌｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ，ＲＳＤｓ　ｏｆ　８ｂａｔｃｈｅｓ　ｏｆ
ｃｒｕｄｅ　ｄｒｕｇ　ｌｉｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　１．２％～２．３％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｓｈｏｗｅｄ　ｇｏｏｄ　ｓｅｎ－
ｓｉｔｉｖｉｔｙ，ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，ｌｉｎｅａｒ　ａｎｄ　ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ　ｉｔｓ　ｓｕｉｔａｂｉｌｉｔｙ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ
ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｉｎ　Ｍａｐｐｉａｎｔｈｕｓｉｏｄｏｉｅｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ｙａｏ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　ｈｅｒｂ；ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ＨＰＬＣ；Ｍａｐｐｉａｎｔｈｕｓｉｏｄｏｉｅｓ
　　定心藤（Ｍａｐｐｉａｎｔｈｕｓｉｏｄｏｉｄｅｓ　Ｈｅｎｄ．－Ｍａｚｚ．）为茶茱萸科
植物甜果藤的干燥树藤（Ｍａｐｐｉａｎｔｈｕｓｉｏｄｏｉｄｅｓ　Ｈａｎｄ．－Ｍａｚｚ），
为瑶药“十八钻”之一。因其行气止痛、散瘀消肿的功效，瑶
医常将藤茎用于除湿、消肿和消炎，还可用于治疗毒蛇咬伤
及黄疸［１］。该药材功效显著，活性成分多种多样［２，３］，文献报
道较多的为（＋）－雪松醇，芦丁［４，５］。笔者在预试验中发现该
药材还含有豆甾醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷，经过文献调研，该化
合物为在定心藤中首次发现。到目前为止，对该药材进行含
量测定的方法，仍停留在较为传统的紫外分光光度法，曾立
等［６］曾采用ＧＣ－ＭＳ法检测其中挥发油的含量。然而，后者
仍未涉及定心藤中其他非挥发性成分；且基于高效液相色谱
（ＨＰＬＣ）法同时测定两个以上化合物的研究未见有相关报
·９８１·
广 西 医 科 大 学 学 报
ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＧＵＡＮＧＸＩ　ＭＥＤＩＣＡＬ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ
　２０１４Ａｐｒ；３１（２）
DOI:10.16190/j.cnki.45-1211/r.2014.02.001
道。由于上述３个化合物均具有一定药理及生物活性，且在
该药材中含量最大，故选取三者作为定心藤质量控制的目标
化合物。
１　材　料
１．１　仪器与试药：液—质联用谱仪（ＴＳＱ　Ｑｕａｎｔｕｍ，Ｔｈｅｒｍｏ
Ｆｉｓｈｅｒ）；ＷａｔｅｒｓＥ２６９５ＨＰＬＣ仪；色谱柱为迪马Ｃ１８钻石柱
（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）；加速溶剂萃取仪（Ｄｉｏｎｅｘ　ＡＳＥ
３５０，Ｄｉｏｎｅｘ　Ｃｏｒｐ）。（＋）－雪松醇 （批号 １１５９２８）与 芦 丁
（１０００８０－２００７０７）购自中国药品生物制品检定院。乙腈为色
谱纯（Ｍｅｒｃｋ）；去离子水由 Ｍｉｌｉ－Ｑ系统制备（Ｍｉｌｉｐｏｒｅ，Ｍｏｌ－
ｓｈｅｉｍ）；其余试剂均为分析纯。
１．２　药材：定心藤药材来源于广西壮族自治区金秀县山中，
采集后晒干、切片保存，并经广西中医药研究院赖茂祥研究
员鉴定为茶茱萸科定心藤。
２　方法与结果
２．１　豆甾醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷单体的制备：由于豆甾醇－３－
Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷未有标准品提供，故须自行制备其单体。根
据文献，加速溶剂萃取（ＡＳＥ）法较其他传统方法提取效率更
高［７］，故采用此方法作为本研究中活性成分提取方法。具体
操作如下：将定心藤干燥切片、粉碎后，称取５０ｇ粉末，以５ｇ
为一份，置于ＡＳＥ提取罐中，以１２５℃，３０ｍｉｎ，循环两次的
提取程序进行操作，所用溶剂量为每５ｇ药材加入５０％乙醇
５０ｍＬ（即药材量１０倍体积）；合并所得提取液，旋转蒸发浓
缩后，根据定心藤中不同化合物的极性与结构特点，采用大
孔树酯以不同比例乙醇洗脱各组分。具体操作为：以１０％，
３０％，５０％，６５％，７５％，９５％乙醇各３００ｍＬ，检测，得知该化
合物在５０％乙醇中含量最高，故将该部分合并，旋蒸浓缩后，
挥干溶剂，即得橙黄色粉末状固体化合物，经测定纯度为
９８％。
２．２　豆甾醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷的结构确证：质谱采用ＥＳＩ
源离子源，在正离子模式下进行扫描，具体参数如下：电喷雾
电压４ｋＶ，毛细管温度３５０℃，毛细管电压３５Ｖ，透镜电压
７５Ｖ，鞘气压力２４１．３ｋＰａ，辅助气流速２．４Ｌ／ｍｉｎ，质量数扫
描范围ｍ／ｚ　１５０～１　５００，碰撞诱导解离能３５％，ＨＰＬＣ与 ＭＳ
柱后分流比为７∶３，所得各级质谱图见图１。根据上述结果，
结合文献资料［８］，可判断出该化合物为豆甾醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄
糖苷。
图１　豆甾醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷质谱图
Ａ：一级质谱图；Ｂ：二级碎片质谱图；Ｃ：三级碎片质谱图
·０９１· 广西医科大学学报　２０１４Ａｐｒ；３１（２）
２．３　含量测定
２．３．１　色谱条件：以１％磷酸水溶液（Ａ）—乙腈（Ｂ）为流动
相；采用梯度洗脱，梯度程序为０～４０ｍｉｎ，１５％～４０％ Ｂ；
４０～５０ｍｉｎ，４０％～６０％Ｂ；５０～６０ｍｉｎ，６０％～１５％ Ｂ；检测
波长２１０ｎｍ，柱温２５℃，流速０．８ｍＬ／ｍｉｎ；所有样品进样量
均为１０μＬ。在该色谱条件下，各化合物达到基线分离，分离
度大于１．５。
２．３．２　对照品溶液的制备：分别取（＋）－雪松醇、芦丁和豆甾
醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷３种化合物适量，精密称定，加甲醇制
成浓度均为２０ｍｇ／Ｌ的溶液。
２．３．３　供试品溶液的制备：取定心藤干燥切片，粉碎，取约
２ｇ，精密称定，置 ＡＳＥ提取罐中，以１２５℃，３０ｍｉｎ，循环两
次的提取程序进行操作，所用溶剂量为每２ｇ药材加入５０％
乙醇２０ｍＬ（即药材量１０倍体积），从仪器接收瓶中取出提取
液，７５℃旋蒸挥去部分溶剂，而后将浓缩液置于５０ｍＬ容量
瓶中，以甲醇定容至刻度，所得溶液保存于－４℃冰箱中，备
用。
２．４　方法学考察
２．４．１　标准曲线与线性：标准溶液的制备：分别取以上３种
对照品约１０ｍｇ，精密称定，置于１０ｍＬ容量瓶中，以甲醇定
容至刻度，摇匀，作为储备溶液；分别精密吸取上述３种储备
溶液０．０１，０．０２，０．０５，０．１，０．２，０．５，１，２ ｍＬ，置至同一
１０ｍＬ容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得一系列浓度梯度的
标准溶液，进样后记录峰面积。结果显示，该方法线性良好，
在０．０１～２μｇ进样量范围内线性良好（ｒ＝０．９９９　８，ｒ＝
０．９９９　７，ｒ＝０．９９９　８），能够对定心藤药材中的３个目标化合
物进行准确定量。
２．４．２　精密度试验：取同一批号药材供试品溶液，连续进样
６次，记录峰面积；并计算得（＋）－雪松醇、芦丁和豆甾醇－３－Ｏ－
β－Ｄ－葡萄糖苷峰面积的 ＲＳＤ 值分别为１．５３％，１．３９％和
１．２６％。结果显示，该方法精密度良好。
２．４．３　重复性试验：取同一批药材粉末６份，每份约２ｇ，精
密称定，按２．３．３方法提取后，测定。（＋）－雪松醇、芦丁和豆
甾醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷的含量分别为１．６７９，０．５４４，８．９１４
ｍｇ／ｇ；其对应峰面积的 ＲＳＤ 值 分 别 为 ２．３％，１．３％ 和
１．１％。结果显示，方法重复性良好。
２．４．４　稳定性试验：精密吸取供试品溶液，分别于０，２，４，６，
１２，２４ｈ进样，测得（＋）－雪松醇、芦丁和豆甾醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄
糖苷含量的ＲＳＤ值分别为１．０％，０．７％和０．６％，说明供试
品在２４ｈ内稳定性良好。
２．４．５　回收率实验：取同一批药材粉末６份，每份２ｇ，精密
称定，分别加入以上３种对照品，按２．３．３中所述 ＡＳＥ法提
取，进样，记录峰面积，（＋）－雪松醇、芦丁和豆甾醇－３－Ｏ－β－Ｄ－
葡萄糖苷的平均回收率分别１０３．８％，１０２．１％和１０３．５％，
ＲＳＤ分别为２．１％，２．３％和２．５％，结果符合含量测定要求。
２．５　不同批次定心藤药材的含量测定
　　选取８批定心藤药材（编号ＴＺ００１－００８），按２．３．３的方
法处理后，进样，计算含量，见表 １。结果 ８ 批药材中，
（＋）－雪松醇、芦丁、豆甾醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷的含量分别在
１．６６２～１．７５２ ｍｇ／ｇ，０．５２９～０．５５１ ｍｇ／ｇ，７．９８０～８．３５５
ｍｇ／ｇ之间，对应的ＲＳＤ值分别为２．３％，１．３％和１．２％，说
明方法精密度良好，能够满足复杂体系分离分析的要求。
表１　８批定心藤药材含量测定结果
样品编号
组分含量（ｍｇ／ｇ）
１　 ２　 ３
ＴＺ００１　 １．７５２　 ０．５３８　 ８．９７６
ＴＺ００２　 １．６６９　 ０．５２９　 ８．８５５
ＴＺ００３　 １．７０９　 ０．５４９　 ９．１７２
ＴＺ００４　 １．６６２　 ０．５４５　 ８．９９９
ＴＺ００５　 １．６７９　 ０．５４４　 ８．９１４
ＴＺ００６　 １．７６１　 ０．５５１　 ９．０９５
ＴＺ００７　 １．７０８　 ０．５３７　 ９．０００
ＴＺ００８　 １．６６８　 ０．５４５　 ９．０９３
平均 １．７０１　 ０．５４２　 ９．０１３
ＲＳＤ（％） ２．３　 １．３　 １．２
３　讨　论
　　为实现目标化合物与干扰性成分的基线分离，根据文献
调研结果［９，１０］，采用适宜流动相以梯度洗脱进行分离。故本
文选择以１００％的Ａ相（１％磷酸水溶液）为梯度初始比例，在
５０ｍｉｎ内升至６０％的Ｂ相。在多次调节后发现，除峰１外，
前１５ｍｉｎ并无较大色谱峰出现，而在芦丁与豆甾醇－３－Ｏ－β－Ｄ－
葡萄糖苷出峰时间较为接近。故考虑提高有机相初始比例，
节约分析时间，以实现基线分离。最终，在２．３．１所述的梯
度洗脱条件下，３个化合物和周围干扰成分实现了基线分离，
并且在２０ｍｉｎ内出峰，故采取此梯度程序为最优色谱条
件。
本文采用 ＨＰＬＣ法，对定心藤中含量较大的（＋）－雪松
醇、芦丁与豆甾醇－３－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷进行定量测定，并进行
方法学考察。结果可知，该方法快速、高效、精密度高、重现
性好，能够对上述３种化合物进行同时、快速、准确的测定，
为以定心藤为代表的民族药材质量控制提供了具有一定参
考价值的研究结果。此外，ＡＳＥ提取出的样品可不经其他前
处理直接进样分析，大大节约了研究所需的时间及工作量。
参考文献：
［１］ 蔡晨秋，马　瑛，唐　丽，等．药用植物定心藤的研究进
展及民族应用概况［Ｊ］．中央民族大学学报（自然科学
版），２０１１，４（１）：６３－６６．
［２］ 曾　立，向　荣，尹文清，等．瑶药定心藤挥发油的提取
工艺及其ＧＣ－ＭＳ分析［Ｊ］．中成药，２０１２，３４（８）：１　６１３－
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·１９１·陈　昭，等 ．ＨＰＬＣ法同时测定瑶药定心藤中３种化合物
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１９９８，２９（７）：４３５－４３８．
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通中豆甾醇的含量［Ｊ］．时珍国医国药，２００９，２０（３）：
５７４－５７５．
广西医科大学学报　２０１４Ａｐｒ；３１（２）
＊基金项目：广西卫生厅中医药科技专项课题资助项目
（Ｎｏ．ＧＺＰＴ１２３７）
△通信作者，Ｅｍａｉｌ：ｃｙｂ５６５６９＠１６３．ｃｏｍ
收稿日期：２０１４－０２－２６
龙蛭汤对大鼠脑梗死模型梗死灶周围组织ＶＥＧＦ
及Ｆｌｋ－１ｍＲＮＡ表达的影响＊
姜　薇　李若林　陈永斌△
（广西医科大学第一附属医院　南宁　５３００２１）
摘要　目的：研究龙蛭汤（自拟方）对脑梗死大鼠梗死灶周围组织血管内皮生长因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ　Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ，
ＶＥＧＦ）及其受体（Ｆｅｔａｌ　Ｌｉｖｅｒ　Ｋｉｎａｓｅ　１，Ｆｌｋ－１）ｍＲＮＡ表达的作用，初步探讨其对脑梗死恢复作用的机制。方法：１２０只ＳＤ雄
性大鼠，采用线栓法复制大鼠脑缺血模型，随机分实验组、对照组和空白组。３组分别给予不同处理。于处理后第３，７，１４，２８
天处死大鼠，通过定量反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测脑梗死灶周围组织中ＶＥＧＦ、Ｆｌｋ－１ｍＲＮＡ的表达量。结果：３
组大鼠ＶＥＧＦ　ｍＲＮＡ的表达量从第３天开始均呈下降趋势，实验组３～７ｄ下降速率略快于对照组和空白组，而７～１４ｄ和１４
～２８ｄ的下降速率较另两组减缓。３组大鼠Ｆｌｋ－１ｍＲＮＡ的表达量３～７ｄ出现暂时升高，７ｄ后逐渐下降。实验组３～７ｄ
Ｆｌｋ－１ｍＲＮＡ表达量上升的速率略快于对照组和空白组，而７～１４ｄ以及１４～２８ｄ的下降速率较另两组下降减缓，３组各时间
点比较，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。经相关性分析，３组ＶＥＧＦ、Ｆｌｋ－１ｍＲＮＡ的表达量与时间均具相关性，且实验组与时
间的相关性高于对照组和空白组（均Ｐ＜０．０５）。结论：龙蛭汤有可能通过作用于ＶＥＧＦ和其受体Ｆｌｋ－１基因以促进脑梗死灶
周围组织的血管新生，从而达到加快脑梗死的康复进程。
关键词　龙蛭汤；补阳还五汤；脑梗死；ＶＥＧＦ；Ｆｌｋ－１
中图分类号：Ｒ７４３．５　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００５－９３０Ｘ（２０１４）０２－０１９２－０５
　　脑梗死是全球人口致残和死亡的重要原因之一，脑卒中
已连续５年为我国人口第２位的死亡原因，同时也是目前世
界人口死亡原因第２位的疾病，严重危害着人们的健康［１］。
近年有研究发现血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）参与脑梗死的康
复进程，ＶＥＧＦ是一种高度特异性的促血管内皮生长因子，
它通过与其受体结合而发挥生物学作用。Ｆｅｔａｌ　Ｌｉｖｅｒ　Ｋｉｎａｓｅ
１（Ｆｌｋ－１）是 ＶＥＧＦ的受体家族成员之一，它在脑梗死后
ＶＥＧＦ的促进血管生成中发挥主要作用［２］。中医中药治疗
脑梗死因其具有独特的优势和良好的疗效而被广泛应用于
临床，其中活血化瘀类药物高频率使用尤为突出［３］。龙蛭汤
正是重用了活血化瘀药兼施补气药，在临床用于脑梗死治疗
上取得了较好的效果，但其疗效的作用机制尚未清楚。本研
究拟通过建立大鼠脑梗死模型，研究龙蛭汤对梗死灶周围组
织ＶＥＧＦ及其受体Ｆｌｋ－１ｍＲＮＡ表达的作用，以初步探讨其
对脑梗死神经恢复作用的影响。
１　资料与方法
１．１　实验动物、材料和仪器：清洁级ＳＤ雄性大鼠１２０只，体
重２８０～３００ｇ，由广西医科大学实验动物研究中心提供。荧
光定量ＰＣＲ试剂：Ａｘｙｇｅｎ的总ＲＮＡ小量制备试剂盒；大连
宝生物工程有限公司逆转录试剂盒（货号：ＤＲＲ０４７Ａ）；德国
Ｒｏｃｈｅ定量ＰＣＲ试剂盒（货号：４９１３９１４００１），其他常用试剂
为国产分析纯。高速冷冻离心机（５８１０Ｒ，德国Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ），
快速震荡混匀器（ＳＫ－１，国产金坛市神科仪器厂），ＰＣＲ仪
（９７００，美国 ＡＢＩ），定量ＰＣＲ仪（Ｍａｓｔｅｒｃｙｃｌｅｒ　ｅｐ　ｒｅａｌｐｌｅｘ　４，
德国Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ），电泳仪（ＪＹ－ＥＣＰＴ３０００，北京六一仪器厂），
凝胶成像仪（１７０－８１７０，美国Ｂｉｏ－ｒａｄ），微量紫外分光光度计
·２９１· 广西医科大学学报　２０１４Ａｐｒ；３１（２）