全 文 ：紫背金盘中痢止蒿甲素、β-蜕皮激素、8-乙酰基哈帕苷的测定
梁晓岚， 易刚强， 何桂霞* ，干 丽， 李嘉滢， 李云耀
(湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 410208)
收稿日期:2013-06-18
基金项目:湖南省自然科学基金项目 (JJ116079) ;湖南省普通高校教学改革研究项目 (湘教通 ［2012］ 401 号-207) ;湖南中医药大
学 2011 年校级研究生科研创新项目;湖南省中药学重点学科建设项目资助 (湘教通 ［2011］ 76 号) ;湖南中医药大学十二五药物分析学重
点学科资助
作者简介:梁晓岚 (1988—) ，女，硕士生，从事天然药物化学研究。E-mail:23889478@ qq． com
* 通信作者:何桂霞 (1965—) ，女，博士，教授，硕士生导师，从事天然药物化学研究。E-mail:412422047@ qq． com
摘要:目的 建立 HPLC色谱法测定紫背金盘中痢止蒿甲素、β-蜕皮激素和 8-乙酰基哈帕苷的量。方法 采用 Sino-
Chrom ODS-BP色谱柱 (250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ，柱温为 25 ℃，体积流量 0. 8 mL /min。痢止蒿甲素检测波长为
228 nm，流动相为乙腈-水 (70 ∶ 30);β-蜕皮激素检测波长为 243 nm，流动相为乙腈-水 (18 ∶ 82) ;8-乙酰基哈帕苷
检测波长为 212 nm，流动相为乙腈-水 (13 ∶ 87)。结果 痢止蒿甲素、β-蜕皮激素、8-乙酰基哈帕苷分别在 0. 24 ～
2. 40 μg (r = 0. 998 4)、0. 40 ～ 4. 00 μg (r = 0. 996 2)、0. 40 ～ 4. 00 μg (r = 0. 998 6)范围内与峰面积呈良好的线
性关系，平均回收率分别为 98. 90%、97. 36%、99. 18%，ＲSD 依次为 1. 74%、1. 83%、1. 11%。结论 紫背金盘中
8-乙酰基哈帕苷的含有量较高。
关键词:HPLC;紫背金盘;痢止蒿甲素;β-蜕皮激素;8-乙酰基哈帕苷
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2014)06-1241-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2014. 06. 028
Determination of ajuforrestin A，ecdysterone and 8-O-acetylharpagide in Ajuga
nipponensis Makino by HPLC
LIANG Xiao-lan， YI Gang-qiang， HE Gui-xia* ， GAN Li， LI Jia-ying， LI Yun-yao
(College of Pharmacy，Hunan University of TCM，Changsha 410208，China)
ABSTＲACT:AIM To establish an HPLC method for determining contents of ajuforrestin A，ecdysterone and 8-
O-acetylharpagide in Ajuga nipponensis Makino． METHODS The Sino Chrom ODS-BP column (250 mm × 4. 6
mm，5 μm)was used at 25 ℃ with the flow rate of 0. 8 mL /min． Ajuforrestin A was detected at detection wave-
length of 228 nm with the mobile phase of acetonitrile-water (70 ∶ 30)． Ecdysterone was detected at detection
wavelength of 243 nm with the mobile phase of acetonitrile-water (18 ∶ 82)． 8-O-Acetylharpagide was detected at
detection wavelength of 212 nm with the mobile phase of acetonitrile-water (13 ∶ 87)． ＲESULTS The linear
response ranged from 0. 24 － 2. 40 μg for ajuforrestin A (r = 0. 998 4)，0. 40 － 4. 00 μg for ecdysterone (r =
0. 996 2) ，0. 40 － 4. 00 μg for 8-O-acetylharpagide (r = 0. 998 6) ，respectively． Ｒecoveries were 98. 90% with
ＲSD 1. 74% for ajuforrestin A，97. 36% with ＲSD 1. 83% for ecdysterone，99. 18% with ＲSD 1. 11% for 8-O-
acetylharpagide，respectively． CONCLUSION The content of 8-O-acetylharpagide in Ajuga nipponensis Makino
is the highest of the three constituents．
KEY WOＲDS:HPLC;Ajuga nipponensis Makino;ajuforrestin A;ecdysterone;8-O-acetylharpagide
紫背金盘为唇形科筋骨草属植物紫背金盘 Aju-
ga nipponensis Makino 的全草，又名散瘀草、散血
丹，为我国传统中药材，具有清热解毒、凉血散
瘀、抗炎消肿止痛之功效。民间常用紫背金盘及其
同属植物治疗肺热咳嗽、咽喉肿痛、痈肿疮疖及各
种炎症［1-2］。现代药理作用研究发现紫背金盘还具
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有解热、镇痛、抗炎、抑菌，抗肿瘤，降压等多种
活性［3-9］。其主要化学成分类型有二萜类、环烯醚
萜类、甾体酮类［10-11］，紫背金盘中相关成分的定
量测定方法尚未见报道。本实验选取了痢止蒿甲
素、β-蜕皮激素和 8-乙酰基哈帕苷 3 种具有显著药
理作用的成分进行 HPLC 分析，建立 HPLC 定量测
定方法，为紫背金盘药材质量控制提供科学依据。
1 仪器与试药
Agilent1260 高效液相色谱仪 (安捷伦化学工
作站)、TU-1900 双光束紫外可见分光光度计 (岛
津仪器有限公司)、分析天平 (岛津 AUW220D，
十万分之一);紫背金盘采集于湖南省宁乡县，批
号为 20110503、20120507、20130505，经湖南中医
药大学彭菲教授鉴定为唇形科筋骨草属植物紫背
金盘 Ajuga nipponensis Makino的全草，标本存于湖
南中医药大学中药化学教研室。药材常温下阴干
后粉碎，过 20 目筛，得细粉，备用。痢止蒿甲
素、β-蜕皮激素和 8-乙酰基哈帕苷对照品由湖南
中医药大学中药化学教研室从紫背金盘全草中分
离纯化所得，经 HPLC 测定纯度大于 99%。乙腈
为色谱纯 (Sigma公司)，水为双蒸水，其他试剂
均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 SinoChrom ODS-BP 色谱柱
(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)，柱温为 25 ℃，体积
流量 0. 8 mL /min。痢止蒿甲素检测波长为 228 nm，
流动相为乙腈-水 (70 ∶ 30);β-蜕皮激素检测波长
为 243 nm，流动相为乙腈-水 (18 ∶ 82) ;8-乙酰基
哈帕苷检测波长为 212 nm，流动相为乙腈-水
(13 ∶ 87)。痢止蒿甲素、β-蜕皮激素和 8-乙酰基
哈帕苷对照品在各自色谱条件下分别在 19. 791、
21. 762、16. 591 min处出峰，样品中相关检测对象
的色谱峰保留时间均与对照品保留时间一致，且与
其他峰分离度好，结果见图 1 ～图 3。
图 1 痢止蒿甲素对照品 (A)和供试品 (B)HPLC色谱图
Fig. 1 Chromatograms of reference substance of ajuforrestin A (A)and sample (B)
图 2 β-蜕皮激素对照品 (A)和供试品 (B)HPLC色谱图
Fig. 2 Chromatograms of reference substance of ecdysterone (A)and sample (B)
2. 2 对照品溶液制备 精密称取痢止蒿甲素 3. 0
mg、β-蜕皮激素 5. 0 mg 和 8-乙酰基哈帕苷
10. 0 mg，分别置于 25 mL、25 mL、50 mL量瓶中，
加甲醇溶解并稀释至刻度，即配得 0. 12 mg /mL 的
痢止蒿甲素标准液、0. 2 mg /mL 的 β-蜕皮激素标
准液和 0. 2 mg /mL 的 8-乙酰基哈帕苷标准液，进
样前分别过 0. 45 μm微孔滤膜即可。
2. 3 供试品溶液制备 取紫背金盘药材粉末 3 份，
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图 3 8-乙酰基哈帕苷对照品 (A)和供试品 (B)HPLC色谱图
Fig. 3 Chromatograms of reference substance of 8-o-acetylharpagide (A)and sample (B)
每份约取 5. 0 g，精密称定，分别置于 500 mL圆底
烧瓶中，加入 50 倍量 95%的乙醇回流提取 3 次，
每次 1 h，合并提取液，回收溶剂至干得 3 份醇提
浸膏。取适量甲醇将 3 份浸膏溶解并分别定容至
25 mL、25 mL、100 mL，分别作为痢止蒿甲素、
β-蜕皮激素和 8-乙酰基哈帕苷的样品溶液。
2. 4 线性关系考察 分别精密吸取质量浓度为
0. 12 mg /mL的痢止蒿甲素、0. 2 mg /mL 的 β-蜕皮
激素和 0. 2 mg /mL 的 8-乙酰基哈帕苷对照品 2、6、
10、14、18、20 μL，按 “2. 1”项下的色谱条件
分别测定，以色谱峰面积值 (Y)对进样量 (X，
μg)进行线性回归，得痢止蒿甲素回归方程为Y =
4 619. 8X + 127. 43 (r = 0. 998 4);β-蜕皮激素回
归方程为 Y = 2 046. 7X + 13. 219 (r = 0. 996 2) ;8-
乙酰基哈帕苷回归方程为 Y = 246. 01X + 32. 18 (r =
0. 998 6)。结果表明，痢止蒿甲素、β-蜕皮激素和
8-乙酰基哈帕苷分别在 0. 24 ～ 2. 40 μg，0. 40 ～
4. 00 μg，0. 40 ～ 4. 00 μg范围内线性关系良好。
2. 5 精密度试验 精密吸取一供试品溶液，按
“2. 1”项下色谱条件连续进样 5 次，每次 20 μL，
分别测定其色谱峰面积。痢止蒿甲素、β-蜕皮激素
和 8-乙酰基哈帕苷峰面积的 ＲSD 分别为 0. 31%、
0. 54%和 0. 82%，结果表明仪器精密度良好。
2. 6 稳定性试验 取同一供试品溶液在 0、6、
12、18、24 h 分别进样 20 μL，测定各成分峰面
积。结果 6 次进样痢止蒿甲素、β-蜕皮激素和 8-乙
酰基哈帕苷峰面积的 ＲSD 分别为 0. 41%、0. 60%
和 0. 84%，结果表明供试品在 24 h内稳定。
2. 7 重复性试验 精密称取同一批紫背金盘药材
粉末 (批号 20130505)6 份，按 “2. 3”项下供试
品溶液制备方法，平行制备痢止蒿甲素、β-蜕皮激
素和 8-乙酰基哈帕苷的样品溶液各 6 份，按
“2. 1”项下色谱条件，进样 20 μL，测定各成分峰
面积的 ＲSD 依次为 0. 42%，0. 64%，0. 75%，表
明本方法重复性良好。
2. 8 回收率试验 精密称定已知含有量的同一批
紫背金盘药材粉末 (批号 20130505)9 份，每份
约 1. 0 g，分别加入一定量的对照品溶液，各平行
3 份，按“2. 3”项下供试品溶液制备方法操作，
在“2. 1”项的色谱条件下，分别进样 20 μL，测
定各成分峰面积，计算回收率，结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果 (n =9)
Tab. 1 Ｒesults of recovery tests (n =9)
成 分
称样量 /
g
原有量 /
mg
加入量 /
mg
实测量 /
mg
回收率 /
%
平均回收
率 /%
(ＲSD/%)
痢止蒿
甲素
β-蜕
皮激素
8-乙酰
基哈帕苷
1. 009 0 0. 225 0. 100 0. 321 98. 77
1. 004 5 0. 224 0. 100 0. 330 101. 85
0. 977 6 0. 218 0. 100 0. 320 100. 63
1. 000 0 0. 223 0. 200 0. 424 100. 24
0. 995 5 0. 222 0. 200 0. 419 99. 29
1. 004 5 0. 224 0. 200 0. 413 97. 41
0. 986 5 0. 220 0. 300 0. 508 97. 69
0. 973 1 0. 217 0. 300 0. 504 97. 49
0. 982 0 0. 219 0. 300 0. 502 96. 72
1. 055 3 0. 206 0. 100 0. 297 97. 10
1. 005 0 0. 200 0. 100 0. 289 96. 33
1. 065 3 0. 212 0. 100 0. 299 95. 83
0. 995 0 0. 198 0. 200 0. 392 98. 49
1. 045 2 0. 208 0. 200 0. 392 96. 08
1. 015 1 0. 202 0. 200 0. 408 101. 49
0. 989 9 0. 197 0. 300 0. 479 96. 39
0. 984 9 0. 196 0. 300 0. 488 98. 39
0. 974 9 0. 194 0. 300 0. 475 96. 15
1. 000 7 2. 822 1. 000 3. 830 100. 21
1. 004 6 2. 833 1. 000 3. 825 99. 79
1. 001 4 2. 824 1. 000 3. 804 99. 47
0. 999 3 2. 818 2. 000 4. 841 100. 48
0. 994 3 2. 804 2. 000 4. 725 98. 36
0. 987 9 2. 786 2. 000 4. 682 97. 83
1. 000 0 2. 820 3. 000 5. 810 99. 83
0. 986 9 2. 783 3. 000 5. 624 97. 25
0. 992 6 2. 799 3. 000 5. 766 99. 43
98. 90
(1. 74)
97. 36
(1. 83)
99. 18
(1. 11)
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2. 9 样品测定 取 3 批紫背金盘药材样品，按
“2. 3”项下样品溶液的配制方法，分别配制痢止
蒿甲素、β-蜕皮激素和 8-乙酰基哈帕苷的样品溶
液，在“2. 1”项的色谱条件下，分别进样 20 μL，
测定各成分峰面积并计算，结果见表 2。
表 2 紫背金盘中痢止蒿甲素、β-蜕皮激素、8-乙酰基哈帕苷的量 (n =3)
Tab. 2 Content determination of ajuforrestin A，ecdysterone and 8-O-acetylharpagide in Ajuga nipponensis Makino (n =3)
批 号 痢止蒿甲素 /(mg·g － 1) β-蜕皮激素 /(mg·g － 1) 8-乙酰基哈帕苷 /(mg·g － 1)
20110503 0. 223 0. 199 2. 835
20120507 0. 224 0. 200 2. 812
20130505 0. 222 0. 201 2. 820
3 讨论
3. 1 检测方法的确定 通过用紫外检测器对痢止
蒿甲素、β-蜕皮激素和 8-乙酰基哈帕苷的对照品溶
液进行全波长扫描，分别在 228 nm、243 nm 和
212 nm处有最大吸收，3 个成分没有共同的较大的
吸收波长，故选取 228 nm 作为痢止蒿甲素的检测
波长，243 nm 作为 β-蜕皮激素的检测波长，
212 nm作为 8-乙酰基哈帕苷的检测波长。同时检
测 3 个成分的方法有待于进一步探索。
3. 2 紫背金盘质量控制探讨 选取痢止蒿甲素、
β-蜕皮激素和 8-乙酰基哈帕苷 3 种具有显著药理活
性的化学成分，采用高效液相色谱法测定其在紫背
金盘药材中的含有量，方法专属性较强、重复性
好。实验结果显示痢止蒿甲素和 β-蜕皮激素在药
材中的量相对较低，而 8-乙酰基哈帕苷的量较高，
达到了 0. 28%，可考虑将此成分作为紫背金盘药
材鉴定及质量控制的重要指标成分。
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艾叶顶空萃取的挥发油指纹图谱
张小俊1，2， 赵志鸿2 * ， 张壮丽2， 王桂芳2， 陈慧平2， 邹 敏2
(1． 郑州大学药学院，河南 郑州 450001;2． 郑州大学医药科学研究院药化室，河南 郑州 450052)
收稿日期:2013-08-12
基金项目:河南省重点攻关项目 (122102310651)
作者简介:张小俊 (1981—) ，女，助理研究员，主要从事药物分析、新药研发。Tel: (0371)66658217，E-mail:sparkjun@ 163． com
摘要:目的 建立艾叶顶空萃取的 GC-MS挥发油指纹图谱，并与传统水蒸气蒸馏法建立的指纹图谱进行比较。方法
艾叶用 100 μm聚二甲基硅氧烷萃取头在 80 ℃萃取 40 min，在 250 ℃解吸附 3 min，然后进行 GC-MS检测。结果
11 批艾叶样品，顶空萃取指纹图谱有 31 个共有峰，蒸馏法指纹图谱有 37 个共有峰，聚类分析结果基本一致。结论
顶空萃取与水蒸气蒸馏仅在艾叶高沸点化合物存在差异。
关键词:艾叶;顶空萃取;水蒸气蒸馏;指纹图谱;挥发性成分
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2014)06-1244-06
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