全 文 ：主要参考文献:
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收稿日期:2005-08-11　　＊联系作者 , 副教授。
作者简介:谷文英 ,女 , 扬州大学讲师。主要从事饲料生产的教学与科研工作。
串叶松香和聚合草对球虫感染鸡生化指标的影响
谷文英 1 ,李金贵＊2 ,朱　奎 2
(1.扬州大学动物科学与技术学院 ,江苏扬州 225000;2.扬州大学兽医学院)
摘要:为了探讨串叶松香和聚合草对柔嫩艾美耳球虫感染鸡生化指标以及球虫病的影响。本实验将 15日龄的黄羽
肉鸡随机分成 5组 , 即拌料饲喂串叶松香组 、聚合草组 、串叶松香 +聚合草组 、感染对照组和空白对照组。除空白对照组
外 , 其它组均经口感染柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊 2.0×104个 /只。分别于感染后第 4d、7d采血 , 测定血清中的超氧化
物歧化酶(SOD)的活性;并在第 7d末扑杀试验鸡 , 摘取肝脏 、脾脏 , 用试剂盒测定肝脏 、脾脏中的碱性磷酸酶(AKP)、乳
酸脱氢酶(LDH)的活性以及总抗氧化能力(T-AOC)。血清 SOD活性测定结果表明 , 同时给予串叶松香和聚合草引起
感染鸡血清 SOD活性表现为先降低后升高的趋势。试剂盒的测定结果表明 , 串叶松香和聚合草对肝脏和脾脏 AKP、
LDH活性和 T-AOC均有一定影响 ,但对球虫病没有明显的防治作用。
关键词:柔嫩艾美耳球虫;鸡;串叶松香;聚合草
中图分类号:S853.32　文献标识码:B　文章编号:1003-8655(2006)02-007-04
　　串叶松香(SilpkiumperfoliumL.)具有丰富的
营养 , 能够显著提高奶牛的奶产量 [ 1] 。聚合草
(Symphytumperegrinumledeb.)可促进畜禽的生长
发育 ,可预防和治疗畜禽肠炎[ 2] 。鸡球虫感染会
引起典型的肠道炎症 ,并影响鸡只的生产性能 。本
试验旨在探讨串叶松香和聚合草是否对鸡球虫病
的发生发展产生有益的影响 ,为这两种牧草在畜禽
上的应用提供参考。
1　材料和方法
1.1　材料
雏鸡(由江苏省家禽研究所购入 1日龄黄羽
肉鸡),在严格消毒的环境中饲养至 15日龄 。 E.
tenela为扬州大学兽医学院临床教研室保存株。
试剂盒:碱性磷酸酶(AKP)、乳酸脱氢酶(LDH)、
总抗氧化能力(T-AOC)试剂盒购于南京建成生
物工程研究所。串叶松香和聚合草:取自扬州大学
牧草中心实验基地 ,分别取两种牧草的叶片和茎段
烘干 ,粉碎 ,过 60目筛 ,按 2.5%拌料饲喂 。
1.2　动物的分组及处理
将试验鸡随机分成 5组 ,即:第 1组为 2.5%
串叶松香拌料饲喂组;第 2组为 2.5%聚合草拌料
饲喂组;第 3组为 2.5%串叶松香 +2.5%聚合草
拌料饲喂组;第 4组为感染对照组;第 5期为空白
对照组 。除空白对照组外 ,其它各组雏鸡均经口感
染 E.tenela孢子化卵囊 ,感染剂量为 2.0×104个 /
羽 。试验 1 ～ 3组均连续拌料饲喂 6d。计算脾脏
和法氏囊的脏器系数 ,按 Johnson和 Reid法[ 3]进行
盲肠病变计分 。
1.3　样品的采集与指标测定
各组鸡分别在感染后第 4d、7d进行鸡翼静脉
采血 ,自然凝固 ,离心 2000r, 5min,分离血清 ,采用
邻苯三酚自氧化法[ 4]测定超氧化物歧化酶(SOD)
的活性 。在感染后第 7d末将所有试验鸡称重后剖
杀 ,取肝脏 、脾脏 、盲肠和法氏囊。分别称取 1克肝
脏 、脾脏组织 ,与生理盐水按 1:9的比例加入烧杯
中 ,剪碎组织块 ,将其倒入玻璃匀浆器中于冰浴下
匀浆 , 充分匀浆后 , 组织匀浆液以 3000r离心
10min,上清用于以下指标的测定。用试剂盒对肝
脏和脾脏中 AKP、LDH与 T-AOC的活性进行测
定 ,其中组织中蛋白含量的测定采用紫外分光光度
·7·中兽医学杂志　2006年第 2期(总 129期)
法 [ 4] 。
1.4　数据处理　文中数据以 x±SD表示 ,采用
SPSS10.0软件运行 Anova-Duncan过程进行数据
分析 ,比较各组数据间的差异显著性 。
2　试验结果与分析
2.1　两种牧草对临床球虫病发生发展的影响
除空白对照组外 ,感染对照组和拌料给药组的
雏鸡均在感染后第 4d末 、第 5d初开始出现血便现
象 ,并于第 5d、6d时排血便达到高峰 。第 1组即拌
料给予串叶松香草组的雏鸡于感染后第 5d死亡 1
只 ,死亡率为 8.3%;第 2组即拌料给予聚合草组
于感染第 5d死亡 1只 ,第 6d死亡 2只 ,死亡率为
25%;第 3组即同时给予串叶松香和聚合草组于第
5d死亡 3只 ,死亡率为 25%;攻毒对照组(第 4组)
于第 5d、6d分别死亡 1只 ,死亡率为 16.7%,死亡
鸡只盲肠内积血 、坏死等病变严重 ,可判断为因球
虫病而死 ,盲肠病变记分为 4。由表 1可见 ,第 1
组即串叶松香组雏鸡的增重最低 ,显著低于空白对
照组(第 5组)(p<0.05),也明显低于第 4组;第 2
组 、第 3组和第 4组之间的增重差异不明显 。球虫
感染后各试验组鸡只的脾脏系数均显著高于第 5
组(p<0.05),但所有球虫感染组之间没有明显差
异 ,说明脾脏系数没有因为在饲料中添加两种牧草
而受到影响。第 2组即给予聚合草组鸡只的法氏
囊系数显著小于第 4组和第 5组 ,这可能提示聚合
草影响了免疫器官的发育。在病变记分方面 ,除第
5组没有可见病变外 ,其它各组均出现了严重的盲
肠病变 ,但所有球虫感染组之间未见明显差异(见
表 1),说明两种牧草对临床球虫病的发生与发展
没有表现出有益的影响 。
表 1　两种牧草对球虫病发生发展的影响
组别 增重(g) 脾脏系数(%) 法氏囊系数(%) 病变记分
第 1组 145.27±21.55a 0.280±0.027a 0.354±0.096ab 2.54±1.09a
第 2组 179.78±38.29ab 0.276±0.019a 0.309±0.056a 2.67±1.30a
第 3组 161.22±54.02ab 0.303±0.028a 0.345±0.062ab 2.83±1.38a
第 4组 169.70±23.94ab 0.348±0.028a 0.389±0.083bc 2.67±1.19a
第 5组 193.91±36.07b 0.180±0.017b 0.428±0.063c 0b
　注:右上角标字母不同者表示差异显著(p<0.05),角标中有相同字母者差异不显著。下同
2.2两种牧草对球虫感染鸡血清 SOD活性的影响
雏鸡在感染 E.tenela后第 4d就会表现出明
显的临床症状 ,本试验各感染组雏鸡均在第 4d末
表现出聚堆 、怕冷并有少量血便排出 。此时检测血
清 SOD活性结果表明:拌料给予串叶松香草 、聚合
草组鸡只血清的 SOD活性与感染对照组 、空白对
照组之间没有明显差异 ,只有第 3组即同时给予串
叶松香和聚合草组鸡只的血清 SOD活性明显低于
空白对照组和感染对照组 , 且差异显著 (p<0.
05);感染后第 7d即球虫完成一个生活周期时 ,血
清中 SOD活性在各试验组之间没有明显差异(见
表 2)。比较第 4d和第 7d的结果发现 ,只有同时
给予串叶松香和聚合草的第 3组雏鸡血清的 SOD
活性发生了显著变化 ,即第 7d的血清 SOD活性显
著升高(p<0.05),其他组只有升高的趋势 ,但差
异不明显。
表 2　球虫感染后第 4d、7d血清 SOD活性(单位:U/ml)
组别 第 4d 第 7d
第 1组 33.24±14.17ab 33.86±7.97a
第 2组 29.27±11.51ab 30.16±9.76a
第 3组 20.74±4.11a 36.62±2.55a
第 4组 34.15±12.42b 36.15±6.22a
第 5组 33.69±8.93b 36.04±11.09a
2.3　肝脏中的 AKP、LDH、T-AOC酶活性的变化
肝脏疾病时可使 AKP活性升高 ,球虫的内生
性发育阶段虫体可移行到肝脏 [ 5] ,引起一定反应。
本试验利用试剂盒检测的结果表明 ,第 1、2组雏鸡
肝脏的 AKP活性极显著高于第 5组(p<0.01),也
明显高于同时给予串叶松香组和聚合草的第 3组
(p<0.05),但与第 4组之间没有明显差异 。LDH
是体内能量代谢过程中的一个重要酶 ,几乎存在与
·8· 中兽医学杂志　2006年第 2期(总 129期)
所有组织中 ,给予聚合草组(第 2组)的 LDH活性
最低 ,明显低于第 5组 (p<0.05),但第 3组的
LDH活性却与第 5组相当 ,其原因还需要进一步
探讨。在 T-AOC活性方面 ,所有球虫感染组的 T
-AOC均显著高于第 5组 ,但球虫感染的各组之
间未见明显差异 ,说明这两种牧草没有明显增强感
染鸡的抗氧化能力(见表 3)。
表 3　肝脏 AKP、LDH活性和 T-AOC水平
组别 AKP(U/gprot) LDH(U/gprot) T-AOC(U/gprot)
第 1组 8.68±2.75c 33.37±4.99ab 2.61±0.37b
第 2组 8.50±2.35bc 30.18±5.01a 2.17±0.34ab
第 3组 6.34±0.59ab 37.90±1.78b 2.24±0.59ab
第 4组 6.90±1.40abc 32.71±5.79ab 2.31±0.36b
第 5组 4.93±0.84a 36.51±4.58b 1.75±0.28a
2.4　脾脏中的 AKP、LDH、T-AOC酶活性的变化
利用试剂盒检测脾脏相关酶活性的结果表明 ,
脾脏中的 LDH活性明显高于肝脏内的 LDH活性。
如表 4所示 ,第 3组即同时给予串叶松香和聚合草
组的 LDH活性最高 ,明显高于第 1、2组和第 5组
(p<0.05),在肝脏中 LDH活性也是最高 ,但与雏
鸡的增重没有明显的相关性。试验中单独给予串
叶松香或聚合草并不能使 LDH活性增高。第 1组
脾脏 AKP的活性显著低于第 3组 、第 4组和第 5
组;第 3组即同时拌料给予串叶松香和聚合草组的
AKP活性最高 ,也明显高于第 5组和第 4组(p<
0.05);在抗氧化能力 T-AOC活性方面 ,与肝脏中
的类似 ,各球虫感染组的 T-TOC活性都有升高的
趋势 ,其中第 2、3、4组的值均显著高于第 5组 ,但
第 1组即给予串叶松香组雏鸡的 T-AOC活性与
第 5组无明显差异;第 2、3组和第 4组即感染对照
组间也没有明显差异 。这与肝脏中的 T-AOC结
果基本一致 。
表 4　脾脏 AKP、LDH活性和 T-AOC水平
组别 AKP(U/gprot)
LDH
(U/gprot)
T-AOC
(U/gprot)
第 1组 15.41±3.47a 515.48±69.85a 3.39±0.43a
第 2组 20.13±4.34ab 582.98±98.93a 4.97±1.06b
第 3组 48.19±12.57c 716.01±29.65b 5.33±0.69b
第 4组 33.15±11.93b 677.11±106.35b 5.50±0.86 ±
第 5组 30.85±5.87b 561.96±42.80a 2.60±0.74a
　　综合以上各表反映的数据 ,结合临床球虫病的
发生情况以及增重来看 ,通过拌料给予串叶松香和
聚合草虽然能影响肝脏和脾脏的 AKP、LDH活性 ,
但对鸡球虫病的防治并未产生明显的有益作用;其
中串叶松香草会引起球虫感染鸡的脾脏 AKP、LDH
以及 T-AOC活性下降 ,与感染对照组相比还引起
试验鸡增重下降 ,同时给予串叶松香与聚合草使球
虫感染鸡血清 SOD活性下降 ,但能明显增加肝脏
和脾脏 LDH的活性 ,其原因有待于进一步研究 。
3　讨论
柔嫩艾美耳球虫感染时 ,盲肠内容物氧化 -还
原平衡向氧化方向移动 ,机体抗氧化防御系统平衡
就会发生改变 ,在这个系统中 SOD最重要 ,其能清
除超氧化物阴离子自由基 ,使 CAT和过氧化物酶
不失活 ,细胞和组织免受损伤 , CAT和 GSH-Px虽
不直接清除自由基 ,但可清除 H2O2 ,后者还能清除
脂质过氧化物 ,抑制自由基生成反应从而对 SOD
起保护作用 ,故抗氧化防御系统中的这 3种酶可组
成相互保护的防御群[ 6] 。大量的试验表明人工感
染 E.tenela后 ,可导致雏鸡抗氧化系统的短时破
坏 ,这与鸡球虫病的保护性免疫有关 ,因为自由基
对球虫也有毒害作用 , E.tenela子孢子对氧化剂很
敏感 , 接触超氧化物阴离子自由基后很快死
亡 [ 6, 7, 8] ,另外 , E.tenela子孢子还可被自由基反应
性氧中介物很快杀死[ 9] , 从而也就减少了抗原分
子引发机体组织超氧自由基过多的产生 ,而使机体
的抗氧化防御系统很快恢复动态平衡 。
本试验中血清中 SOD活性显著也表现出先低
后升高的趋势 ,其中同时给予串叶松香和聚合草组
的雏鸡表现突出。 AKP是组织化学中最常研究的
酶之一 ,其在体内的作用催化各种醇和酚的磷酸脂
水解 ,常见于活跃运输膜上[ 10] 。 ALP升高临床上
常见于胆管阻塞 、成骨细胞增强 、恶性肿瘤和一些
药物反应。当甲状腺功能不足时 , ALP活性通常降
低 。本试验进行了球虫病鸡体内 AKP、LDH等的
检测 ,结果表明肝脏 AKP活性升高与两种牧草的
添加有一定联系 ,但更可能是上肠上皮细胞遭破坏
并有子孢子移行到肝脏的结果。脾脏 AKP活性在
不同处理组表现了较大的差异 ,与肝脏的测试结果
·9·中兽医学杂志　2006年第 2期(总 129期)
明显不一致 。另外按照试剂盒说明进行测试 ,本试
验发现脾脏的 LDH活性明显高于肝脏 ,是后者的
10倍 ,造成这种差别的原因还不清楚。在 T-AOC
方面 ,各球虫感染组都高于空白对照组 ,也未受到
两种牧草的明显影响 。结合临床球虫病的发生情
况可以说明拌料给予串叶松香和聚合草虽能部分
影响鸡体的抗氧化能力和能量代谢水平 ,但对球虫
病并没有防治作用。
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收稿日期:2005-09-06
作者简介:王小莺(1969-), 硕士 ,副教授 , 从事兽医药理学教学和科研工作。
保肝护脾液对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用
王小莺 1 ,胡国良 1 ,张彩英 1 ,何　新 1 ,章和文 2
(1.江西农业大学动科院 ,南昌 330045;2.进贤县温圳兽医院)
摘要:目的:观察保肝护脾液对四氯化碳化学性肝损伤的保护作用。 方法:采用皮下注射 2%四氯化碳石蜡油溶液
5ml/kg.bw造成小鼠急性肝损伤为模型 , 测定保肝护脾液对肝损伤小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的
活性 , 同时观察肝脏组织的病理学变化以评价肝脏损伤程度和药物的保护作用。结果:该药物能明显降低四氯化碳致小
鼠急性肝损伤血清 ALT、AST升高 , 减轻四氯化碳对肝脏细胞的病理损伤。 结论:保肝护脾液对四氯化碳致小鼠急性肝
损伤有一定的保护作用。
关键词:保肝护脾液(BGHPY);　　四氯化碳(CCl4);　　急性肝损伤;　　小鼠
中图分类号:S853.74　文献标识码:B　文章编号:1003-8655(2006)02-0010-02
　　本研究所选用的保肝护脾液是由龙胆 、白术 、
茯苓 、柴胡 、栀子 、甘草 、黄芩 、泽泻制成的煎剂 ,由
太原日升昌药业有限公司生产。为了探讨该药对
急性肝损伤的保护作用 ,我们作了如下研究。
1　材料和方法
1.1　药物和试剂:保肝护脾液 ,由太原日升昌药业
有限公司惠赠 ,批号:2004110501;
ALT、AST测定试剂盒 ,由南京建成生物工程研究
所生产;99%的四氯化碳 ,分析纯;
FAA固定液 ,临用前配置(95%乙醇:甲醛:冰醋酸
90:10:1)
1.2　主要仪器:722 型可见光分光光度计
(KJD50412707),上海光谱仪器有限公司制造 。
1.3　实验动物:雄性健康小鼠 30只 , 18 ～ 25g,购
至江西医学院实验动物中心。
1.4　实验方法　雄性健康小鼠 30只 ,随机分成三
组 ,空白对照组 、四氯化碳模型组 、药物组。空白对
照组和四氯化碳模型组灌胃生理盐水 15ml/kg.
bw,药物组灌胃等量的保肝护脾液 ,一天两次 ,连
续灌胃 3天 ,首次灌胃后除空白对照组外 ,其余组
小鼠立即皮下注射 2%CCl4石蜡油溶液 5ml/kg.
bw,末次灌药后禁食 20h,摘除眼球采血 ,分离血
清 ,用赖氏法检测血清 ALT、AST含量 ,严格按试剂
说明书操作。所获数据用 Exce17.0软件统计。采
血后立即剖腹 ,分离肝脏 ,肉眼观察其病变 ,分别取
肝大叶相同部位一小块肝组织 ,用生理盐水洗净 ,
滤纸吸干 ,固定于 FAA溶液中 ,做石蜡切片 , HE染
色 , 400倍光镜下观察肝组织的病理变化 。
2　结果
2.1　血浆中 ALT和 AST的活性变化见表 1
·10· 中兽医学杂志　2006年第 2期(总 129期)