全 文 ：基金项目:海南省自然科学基金资助项目(编号:814302)。
作者简介:高湲(1958—)，女，硕士，教授，海南医学院(海口
571199);孙涛、谢毅强、杨世忠，单位同第一作者。
·实验研究·
海南砂仁对肝源性溃疡大鼠胃黏膜
TFF1 及 TFF1mＲNA的影响
高 湲 孙 涛 谢毅强 杨世忠
摘要:目的:观察海南砂仁对肝源性大鼠胃黏膜乳癌相关肽(TFF1)及 TFF1mＲNA蛋白表达的影响。方法:成年健康雄性
SD大鼠 50 只，随机分为 5 组。除正常组外，其余四组在成功复制免疫损伤性肝纤维化大鼠模型的基础上，采用无水乙醇和
阿司匹林灌胃法建立胃溃疡大鼠模型。①溃疡指数测定;②免疫组化和 Ｒeal － time PCＲ 检测实验大鼠胃黏膜 TFF1 和
TFF1mＲNA蛋白表达。结果:① 除正常组外，其余各组大鼠溃疡面积及溃疡指数均较高于正常组，普萘洛尔组和海南砂仁
低、高剂量组溃疡指数均低于模型组(P ＜ 0． 05);② 免疫组化和 Ｒeal － time PCＲ:大鼠胃黏膜 TFF1 和 TFF1mＲNA蛋白表达
模型组略高于正常组，普萘洛尔组、海南砂仁低、高剂量组均有明显提高，尤以海南砂仁高剂量组升高明显(P ＜ 0． 05)。结
论:海南砂仁对大鼠胃黏膜损伤具有保护作用，其机制可能与提高 TFF1 和 TFF1mＲNA蛋白表达有关。
关键词:海南砂仁;肝源性溃疡;胃黏膜;TFF1;TFF1mＲNA;实验研究
中图分类号:Ｒ573，285. 5 文献标识码:A 文章编号:1000 － 7156(2016)07 － 0052 － 03
Effect of amomun longiligulare on TFF1 and TFF1mＲNA of gastric mucosa in rats with hep-
atogenic ulcer GAO Yuan，SUN Tao，XIE Yi-qiang，et al．(Hainan College of Medicine，Haikou
571199，China)
Abstract:Objective:To observe on the effect of amomun longiligulare on expressions of relevant peptide
(TFF1)and TFF1mＲNA protein of gastric mucosa in rats with hepatogenic ulcer． Methods:50 adult healthy male
rats of SD were randomly divided into 5 groups． Except the normal group，the rest of 4 groups were made into mod-
els of rats with gastric ulcer by gavage of anhydrous alcohol and aspirin on the basis of successfully copied models
of rats with hepatic fibrosis of immunologic injury． ①The ulcer indexes were determined． ②The expressions of
TFF1 and TFF1mＲNA protein in gastric mucosa of rats were detected by immunohistochemistry and Ｒeal － time
PCＲ． Ｒesult:①In ulcer indexes:except the normal group，the ulcer area and ulcer indexes of rats in the rest of
each group were higher than those in normal group;the ulcer indexes of Propranolol group and amomun longiligu-
lare groups of low － and high － dose were lower than those of model group (P ＜ 0． 05)． ②In the immunohisto-
chemistry and Ｒeal － time PCＲ:the expressions of TFF1 and TFF1mＲNA protein of gastric mucosa of rats in mod-
el group were slightly higher than those in normal group;the expressions of Propranolol group and amomun longil-
igulare groups of low － and high － dose were significantly improved;especially，the expression of amomun longil-
igulare group of high － dose was more significantly enhanced(P ＜ 0． 05)． Conclusion:Amomun longiligulare has a
protective effect on injury of gastric mucosa in rats，and its mechanism may be related to the enhancement of ex-
pressions of TFF1 and TFF1mＲNA protein ．
Keywords:amomun longiligulare，hepatogenic ulcer，gastric mucosa;TFF1，TFF1mＲNA，experimental re-
search
中医脾胃病研究肝源性溃疡(指肝硬化合并消化性溃
疡，hepatogenic ulcer，HU)的发病系多种因素导致，与门脉
压力增高，造成内脏血流不畅，胃黏膜血液循环障碍，甚至
血液瘀滞以及胃黏膜屏障作用受损等因素有密切关
系［1 － 2］。现代药理研究证实，砂仁可增强胃的功能，促进消
化液的分泌，增进肠道运动，增加胃肠血液循环，可起到帮
助消化，消除肠胀气等作用，对溃疡有明显抑制作用。本
实验通过海南砂仁的干预，观察其对实验性大鼠胃黏膜
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TFF1 和 TFF1mＲNA蛋白表达的影响和量效关系，探讨海
南砂仁改善肝源性溃疡，促进溃疡愈合的作用机制。
1 材料
1． 1 动物:SPF级雄性 SD 大鼠 50 只，体质量(180 ± 20)
g，长沙市天勤生物技术有限公司提供，许可证号:SCXK
(湘)2009 － 0012。
1． 2 药品:砂仁购自海南省海口市国瑞堂医药公司，经海
南医学院药学院鉴定为南药砂仁的干燥成熟果实。按常
规法自制煎剂，即冷水浸泡 30 min，煮沸 10 min，过滤药液，
加水再煎煮 10 min，合并两次滤液，并将其配成生药浓度为
20%、50%的水煎液备用，冷却后装瓶置于 4 ℃冰箱中保存
备用。普萘洛尔(10 mg /片，国药准字 427H43400，广东金
葫芦制药有限公司生产)，研粉备用。无水乙醇、阿司匹林
购自海南医学院附属医院。
1． 3 主要试剂及仪器
1． 3． 1 主要试剂:PS2、ITF 抗体，免疫组织化学(S － P)
法试剂盒及 TFF1 一抗。TＲIzol 试剂，Taq 酶，Ｒnasin;
MMLVＲT反转录酶(promega 公司);SYBＲgreen PCＲMix
(美国 ABI公司);DNA Marker(广州东盛生物科技有限公
司 ); oligo dT 序 列， 5 ’ － TTTTGTA-
CAAGCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT － 3;β － actin(263
bp):上游 5＇－ GAGACCTTCAA － CACCCCAGCC － 3＇，下游 5＇
－ AATGTCACG － CACGATTTCCC － 3 ＇;TFF1 (169bp )上
游:5＇－ CT － GGTCATTGAGAACCAGCAAGAA － 3＇;TFF1 下
游:5＇－ TGTCACCAGGCCAGATCCAG －3＇。
1． 3． 2 主要仪器:7000 型实时荧光定量 PCＲ 系统(美国
ABI公司);紫外分光光度计;－ 20 ℃低温冰箱(日本 Sanyo
公司);低温高速离心机;恒压恒流电泳仪;切片机(LEZ-
CAＲM2135);BMJ －Ⅲ型包埋机;BH － 2 型光学显微镜 ;
显微摄像仪;GD － 8 病理摄像多媒体分析仪;Tanon 1600
凝胶图像分析仪。
2 方法
2． 1 动物模型制备与给药:雄性 SD大鼠 60 只，随机分为
5 组，每组 12 只。正常组(N组)、模型组(M组)、普萘洛尔
组(P组)、海南砂仁低(HSD 组)、高剂量组(HSG 组)。除
N组外(生理盐水 ip 2 mL /只，2 次 /周)，其他 4 组按照文
献［3 － 4］等方法略加改进，复制免疫损伤性肝纤维化大鼠模
型，2 次 /周，0． 5 mL /只，造模 4 周。第 5 周开始，除 N组用
0． 9%生理盐水灌胃(2 mL /只，2 次 /周)外，其余各组均采
用无水乙醇和阿司匹林灌胃法建立胃溃疡大鼠模型。
造模成功后，从第 6 周开始，N 组和 M 组均给予等量
的生理盐水，1 mL /100 g 体重灌胃，P 组给予普萘洛尔
5mg /kg·d，HSD 组、HSG 组予 2 mL /kg·d 灌胃，连续 2
周。
2． 2 取材:给药结束后，对各组大鼠禁食 24 h 后，予 2%
戊巴比妥钠 50 mg /kg腹腔注射麻醉后处死，剖检取胃，观
察并采集标本。用于各项指标的测定。
取出全胃，沿胃大弯剖开，分别切取胃窦部、胃体部及
胃底部一部分组织，剪取包括溃疡部位的胃黏膜组织，大
小约 0． 5 cm × 1． 0 cm，用 10% 中性甲醛固定制备石蜡切
片光镜标本;一部分组织液氮速冻，－ 70 ℃度冰箱保存以
备提取总 ＲNA。
2． 3 指标检测
2． 3． 1 溃疡指数 (gastric ulcer，GUI)的检测:以游标卡尺
测量溃疡面的最大长径和垂直于最大长径的最大宽径，以
二者的乘积作为溃疡指数。
2． 3． 2 免疫组织化学(SP 法)检测胃黏膜 TFF1 蛋白表达:
按试剂盒说明书进行。结果以细胞膜和细胞质内出现棕
黄色颗粒为判定标准。按阳性区域表达由强至弱分为:强
阳性(+ + +)、阳性(+ +)、弱阳性(+)、阴性(－)［5］。
2． 3． 3 Ｒeal － time PCＲ 法:对胃黏膜 TFF1mＲNA 行定量检
测和分析，按说明书进行。
2． 4 统计方法:各样品目标基因的相对表达水平通过内参
基因进行校准后用(X ± s)表示，组间差异使用 t检验。计
数资料用 PEMS3． 1 软件分析，比较用 χ2 检验，所有数据均
采用 SPSS13． 0 统计软件进行分析。
3 结果
3． 1 溃疡指数:模型组为(58． 364 ± 5． 280)，高于其他各
组(P ＜ 0． 05);砂仁低剂量组(24． 287 ± 3． 760)、西药组
(22． 366 ± 4． 385)，干预后溃疡指数明显下降(P ＜ 0． 05);
砂仁高剂量组(19． 652 ± 2． 724)，与模型组相比有显著差
异(P ＜ 0． 01)。
3． 2 各组大鼠胃黏膜 TFF1 蛋白表达:正常组呈弱阳性表
达(0． 344 ± 0． 046);模型组 TFF1 表达略高于正常组(0．
389 ± 0． 056)，(P ＞ 0． 05) ;高剂量组表达明显(0． 814 ± 0．
057) (P ＜ 0． 05) ;低、高剂量组间有显著差异(P ＜ 0． 05) ;
西药组(0． 676 ± 0． 070)，与低、高剂量组无差异(P
＞ 0. 05)。
3． 3 各组大鼠胃黏膜 TFF1mＲNA蛋白表达:见图 1。模型
组与正常组比较无差异(P ＞ 0． 05)，其余各组大鼠的 TFF1
－ mＲNA都有明显升高(P ＜ 0． 05)，高剂量组升高明显(P
＞ 0． 05)。
1 模型组 2 普萘洛尔组 3 正常组 4 砂仁低剂量
组 5 砂仁高剂量组
图 1 各组大鼠胃黏膜 TFF1mＲNA蛋白表述
4 讨论
乳癌相关肽(TFF1)是一类对胃黏膜有保护作用的因
子［6］。当胃肠道黏膜发生损伤时，TFF1 在整个胃肠黏膜损
伤部位均可表达，且较正常黏膜表达明显升高［7］。提示
TFFI可促进细胞的迁移、增殖或分化，在胃黏膜重建、修复
中发挥重要作用［8］。TFF1 对胃黏膜保护作用的机制，林
三仁［7］认为可能通过与黏膜糖蛋白的相互作用，在黏膜表
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面形成黏膜凝胶层，从而增强胃肠道黏膜防御屏障的保护
能力。黏膜凝胶层主要由粘液凝胶内脂类物质(主要为磷
脂)和糖蛋白(主要为氨基己糖)组成，当 TFF1 上调时，黏
膜凝胶层的形成，胃黏膜氨基己糖及磷脂的含量也随之增
加。
海南砂仁的有效成分为砂仁挥发油，具有健脾化湿，
行气和胃等作用。在中医治疗胃肠疾病中应用广泛，具有
确切的疗效。
中医对此病的认识，认为是因外感六淫、饮食劳伤、七
情内伤等病因，导致脏腑的功能异常，肝失疏泄，脾失运
化，气机失调，气血运行不畅，气滞血瘀;津液输布异常，痰
湿停聚。而胃为多气多血之腑，当气机不畅，阴血亏损，血
脉瘀阻时，胃黏膜的微循环受到影响，导致黏膜的局部缺
氧缺血、水肿、坏死、脱落，以致发展形成溃疡。
本研究通过免疫组化和 Ｒeal － time PCＲ 检测发现，正
常组 TFF1 及 TFF1mＲNA均有少量表达，当胃黏膜受损后，
两者的表达均增强。模型组表达略高于正常组，可能与胃
黏膜损伤后黏膜上皮通过自分泌 TFF1 有关。砂仁组表达
明显升高，在量效关系方面，高剂量组明显优于低剂量组。
提示砂仁可能通过上调 TFF1 及 TFF1mＲNA，促进胃黏膜
上皮细胞的迁移、增殖，在胃黏膜重建和修复中发挥重要
作用。这可能也是其促进溃疡愈合的机制之一。
参考文献:
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(收稿日期:2016 － 04 － 30)
本文编辑:王福岗
(上接第 39 页) 尿剂，易产生药物抵抗，利尿效果越来越
差，一旦停药，腹水将会越来越严重。放腹水疗法，易出现
腹腔感染、电解质紊乱、白蛋白丢失的，必须在放腹水的同
时控制感染、维持电解质平衡、补充白蛋白等，只能短暂缓
解症状。腹水超滤对于治疗顽固性腹水有着巨大的优势，
但是在基层医院开展仍面临很多困难。联合中医疗法治
疗肝硬化腹水，能够相互取长补短，提高疗效，缩短病程，
从而快速改善患者症状，减少复发。
中医学认为，肝硬化腹水属于臌胀或水臌等范畴。本
病病机复杂，病程较长，迁延难愈，为中医四大难症之一。
其中酒精性肝硬化腹水者多有长期过量饮酒史，酒毒为湿
热之邪，长期过度饮酒，湿热之邪蕴结于体内，导致肝脾功
能失调，酒湿浊气蕴聚中焦，壅塞气机，肝失调达，气血郁
滞，肝郁脾虚，进而累及于肾，肾之开阖不利，水浊渐积，终
不得泄，导致肝脾肾三脏功能失调，气血水互结而成膨
胀［4］。《张氏医通》谓:“嗜酒之人，病腹胀如斗，此得之湿
热伤脾。胃虽受谷，脾不运输，故成痞胀。”本病病机后期
为本虚标实，故治疗应以温补脾肾为主，兼以清热利湿，标
本兼顾。足三里属于足阳明胃经，为补虚强壮指要穴。现
代医学认为足三里对消化系统、神经系统等均具有调节作
用，能提高机体免疫功能，增强机体抵抗力，有强壮身体，
抗御病邪之功效［5］。艾灸是指利用艾绒熏灼、温熨体表一
定部位，并借助其热力及药物作用来平衡人体阴阳、扶正
祛邪、调节经络脏腑功能以防治疾病的一种方法。艾灸足
三里穴，灸法与穴位配合，更进一步提高温补元阳的作用。
臌胀病人后期机肾阳虚衰，通过艾灸足三里，体现了虚者
灸之使火气以助元阳的功效。西医的常规疗法辅以艾灸
足三里，大大提高了肝硬化腹水的治疗效果，为今后临床
治疗肝硬化腹水提供了新的思路。
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(收稿日期:2016 － 04 － 14)
本文编辑:李艳萍
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