全 文 ：另外 ,双层渗透泵控释片的片芯要经过一段时间的
水化后 ,才能开始释药。因此 ,在释药前期存在较长
的一段“时滞” ,这是双层渗透泵控释片释药行为的
一个特点[ 3] 。
自制的硝苯地平双层渗透泵控释片在体外释药
条件下释药稳定性见图 5 ,在 3 ～ 14 h内零级特征明
显(r =0.999 5)、平均释药量约为 8%/h 、衣膜完
整。结果表明 ,衣膜的完整性 、能否释放药物以及释
药速度的快慢主要受含药层中高分子相对分子质
量 、渗透压活性物质和助推层中高分子相对分子质
量 、含药层和助推层比及压力 、孔径 、半透膜等因素
的影响。目前本研究的双层渗透泵控释片也存在
“时滞”问题 ,消除时滞目前解决的办法是在控释衣
膜外加包速释含药层 。
图 5　药物释放拟合曲线
Fig 5　Drug release fi t tin g cu rve of optimal formulat ion
参考文献:
[ 1] 　顾复生.硝苯地平控释片的临床应用进展[ J] .中华心血管病
杂志 , 1994 , 22(5):327-328.
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[ 3] 　颜耀东.缓释控释制剂的设计与开发[ M ] .中国医药科技出版
社 , 2005:294.
[ 收稿日期] 2010-01-13
[基金项目] 国家自然科学基金(编号:30960531);贵州省卫生厅优秀医学青年人才专项基金(编号:gzw kj 2008-2-004);贵州省优秀青年科技
人才培养计划(编号:黔科合人字[ 2009] 28号)　[作者简介] 陶玲 ,女 ,硕士 ,副教授 ,电话:0851-6909828;E-m ail:sxc9860@sina.com.cn　[ 通
讯作者] 刘兴德 ,电话:0851-6908608;E-mai l:lxd@gmc.edu.cn
艳山姜果实挥发油对离体家兔胸主动脉条收缩性能的影响
陶玲1 ,肖婷婷1 ,胡涵帅1 ,涂玲2 ,刘兴德2 　(1.贵阳医学院药学院 ,贵州 贵阳 550004;2.贵阳医学院附属医院心内科 ,
贵州 贵阳 550004)
[ 摘要] 　目的:研究艳山姜果实挥发油对兔离体胸主动脉血管条收缩性能的影响 , 为充分利用艳山姜果实资源提供实验依
据。方法:采用家兔离体胸主动脉血管条 , 以不同浓度去甲肾上腺素(NE)、氯化钾为刺激剂 , 观察艳山姜果实挥发油对其量效
曲线的影响;以 NE 为血管收缩刺激剂 , 观察艳山姜果实挥发油对内钙释放与外钙内流的影响。结果:艳山姜果实挥发油使
NE与氯化钾的量效曲线明显右移 ,最大反应性降低 , 对氯化钾量效曲线的抑制作用强于 NE;在无钙 Kerb′s 液中 , 艳山姜果
实挥发油浓度依赖性抑制 NE 诱导的内钙释放所致的血管收缩反应 , 对复钙后 NE 所致的血管持续收缩具有抑制作用的趋
势。结论:艳山姜果实挥发油改善兔离体主动脉条的收缩作用与钙离子拮抗有关 , 且对主动脉依内钙性收缩的敏感性大于依
外钙性收缩;对电压依赖钙通道的拮抗作用强于受体操纵的钙通道。
[ 关键词] 　艳山姜果实;去甲肾上腺素;氯化钾;胸主动脉
[ 中图分类号] R285.6　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2010)23-1966-04
Effects of volatile oils from fructusAlpiniae zerumbet on the contraction of rabbit thoracic aorta
in vitro
TAO Ling1 , XIAO Ting-ting1 , HU Han-shuai1 ,T U Ling2 ,LIU Xing-de2(1.Schoo l of Pharmacy , Guiyang Medical
Univer sity , Guizhou Guiyang 550004 , China;2.Depar tment of Cardio lo gy , Affiliated Hospital o f Guiy ang Medical Univer sity ,
Guizhou Guiyang 550004 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To investig ate the effects of v olatile oils from fructus A lpiniae zerumbet (VOFAZ)on contraction
of rabbit tho racic ao rta in v itro , to o ffer the experimental ba sis fo r taking full advantag e o f f ructus Al piniae zerumbet .METH-
ODS　The effects o f VOFAZ on the concentration-response cur ves of noradrenalin and high po tassium we re observ ed on iso ton-
ic cont ractions of the thor acic aor ta strips in vitro.The procedure of free-Ca2+ Kerb′s and Ca2+addition w as de signed to indi-
rectly investiga te the effects o f VOFAZ on intracellular free Ca2+ stimulated by NE.RESULTS　VOFAZ shifted the concentra-
tion-response curv es o f NA and KCl , and the maximum responses w ere decreased.In Ca2+-free medium , VOFAZ concentra-
tion-dependently and significantly inhibited va soconstriction resulting f rom Ca2+ re lease induced by NE and it slightly inhibited
·1966· 中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 23期 Chin H osp Pharm J , 2010 Dec , Vol 30 , No.23
the long- lasting contraction induced by addition of Ca2+.CONCLUSION　VOFAZ had significant r elax ant effect on the con-
traction of tho racic ao rta strips.The effect may be due to the inhibition of the ca lcium channel of ao rtic smooth muscle.VO-
FAZ showed rela tively less effect on the ex tracellular Ca2+-dependent contraction induced by Ca2+ than that on the intracellular
Ca2+-dependent contr action , and more against effec ts on potential dependent Ca2+ channel than recepto rs operated channe l.
KEY WORDS:fructus Alp iniae z erumbet ;no radrenalin;KCl;thoracic ao rta
　　艳山姜为姜科山姜属植物艳山姜 A lpinia
zerumbet (Pers.)Burt t e t Smi th 的干燥成熟果实 ,
具有温中燥湿 ,行气止痛 ,截疟的功效 ,是贵州民间
常用的药物和香料 ,被广泛用于治疗心腹冷痛 ,胸腹
胀满 ,消化不良 ,呕吐腹泻等症状[ 1] 。挥发油是艳山
姜果实的主要活性成分 ,具有抗炎 、镇痛 、降血脂 、以
及防治心血管系统疾患等多方面的广泛的生物活
性 ,尤其是对清醒和麻醉动物血压具有显著的影
响[ 2-3] ,但国外的研究大多集中于艳山姜叶挥发油 ,
而贵州省民族药用部位为艳山姜果实 ,同时挥发油
对主动脉收缩性能的影响未见报道 。本研究观察贵
州民族药艳山姜果实挥发油对血管平滑肌收缩性能
的作用及作用机制 ,为艳山姜果实的临床应用提供
实验依据和研究基础 。现报道如下 。
1　材料
HP 6890/HP5973 GC-MS 联用仪;艳山姜果
实采自贵州省贞丰县 ,经贵阳医学院生药学与药用
植物学教研室陈祖云副教授鉴定为姜科山姜属植物
艳山姜 A lpinia zerumbet (Pers.)Burt t et Smith
的干燥成熟果实;重酒石酸去甲肾上腺素注射液
(NE ,上海禾风制药有限公司 ,规格:2 mL∶10 mg);
Kerb′s液成分(mmol·L-1):氯化钠118.2 ,氯化钾
4.7 ,磷酸二氢钾1.3 ,硫酸镁1.2 ,碳酸氢钠 25 ,氯化
钙2.5 ,葡萄糖11.7(pH 7.4),无钙 Kerb′s液(不含
氯化钙 ,并加入 EGTA 0.5 mmol·L -1);其他同正
常 Kerb′s液;其余试剂均为国产分析纯;新西兰大
耳白家兔 ,体质量2.5 ～ 3.5 kg , ♀♂兼用(贵阳医学
院实验动物中心 ,动物合格证号:合格证号 SCXK
(黔)2002-0001)。
2　方法
2.1　艳山姜果实挥发油制备及分析　按中国药典
2005年版一部挥发油提取的要求进行提取挥发油 ,
所得艳山姜果实挥发油为淡黄色透明液体 ,得率为
1.3 mL·kg-1 ,具有较为浓烈的香味 。分析挥发油
组分与含量 , 鉴定了 66 个化合物 , 占其总量的
95.52%,其中 1 , 8-桉叶素(9.17%)含量最高 ,其余
依次为 β-蒎烯(7.86%)、p-牡荆油(7.57%)、β-水芹
烯(7.50%)、α-蒎烯(5.83%)、樟脑萜(5.72%)、桃
金娘烯 醛 (4.80%)、樟 脑 (4.74%)、 L-龙 脑
(4.55%)、石竹烯氧化物(4.31%)、 L-芳樟醇
(3.73%), 以上 11 个化合物共占挥发油总量的
65.78%。挥发油以 DMSO 溶解后 ,以 Kerb′s液稀
释至含挥发油为 40%, 20%, 10%。平滑肌浴槽滴
加药物容积为 100 μL。
2.2　标本制备　2.5 ～ 3.5 kg 的家兔 , ♀♂不拘 ,
用木锤将其击昏并经颈动脉放血后 ,迅速取出胸主
动脉 ,剥去周围结缔组织 ,剪成约长 2 cm ,宽0.3 cm
的螺旋条 ,两端结扎 ,下端接标本板 ,悬吊于含 20
mL Kerb′s液的恒温(37.0±0.5)℃浴槽中 ,上端接
肌张力换能器 ,持续通以 5%CO 2和 95%O 2的混合
气体 ,加前负荷约 2 g ,20 min换液 1次 ,稳定 3 h后
给药 ,用 BL-420 +系统记录肌张力变化 。实验所用
药物浓度按浴槽中终浓度计算[ 4] 。
2.3　N E量效曲线的制备及艳山姜果实挥发油干
预　标本平衡后 ,给予 NE 1×10-5 mol·L-1 ,待动
脉条收缩至坪值后冲洗 ,平衡 1 h后 ,以同法加入同
量的 NE ,重复数次至收缩高度前后 2 次基本不变 ,
视为动脉条收缩已经稳定 ,平衡 1 h后 ,在浴槽中按
0.5对数递增加入 NE(1 ×10-8 ～ 1 ×10 -5 mo l·
L-1),求得对照量效曲线 ,然后用 Kerb′s液反复冲
洗 ,平衡 1 h使血管张力达到给药前水平 ,依次加入
艳山姜果实挥发油溶液 ,使浴槽中艳山姜果实挥发
油终体积分数分别为0.2%, 0.1%, 0.05%。 5 min
后再以同法加入 NE ,作量效曲线[ 5] 。
2.4　高钾量效曲线及艳山姜果实挥发油干预　先
用氯化钾 50 mmo l·L-1作为血管收缩剂 ,观察动脉
条收缩反应的稳定性 ,方法同上。然后在浴槽中按
0.2的对数递增加入氯化钾(10 ～ 100 mmol·L-1),
给药后可见血管条呈剂量依赖性收缩 ,以此为对照。
再反复冲洗并平衡 1 h后 ,依次加入艳山姜果实挥
发油溶液 ,使浴槽中艳山姜果实挥发油终体积分数
分别为0.2%,0.1%,0.05%。 5 min 后再以同法加
入氯化钾 ,作量效曲线[ 6] 。
2.5　艳山姜果实挥发油对 NE 在无 Ca2+液中及复
Ca2+后的缩血管效应[ 7] 　判断动脉条收缩反应稳
定性的方法同 NE 量效曲线实验 。平衡 1 h ,用无
Ca2+ Kerb′s液冲洗 ,稳定 3 min ,再加入 10-6 mmol
·L-1N E ,可见动脉条产生迅速而短暂的收缩。待
·1967·中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 23期 Chin H osp Pharm J , 2010 Dec , Vol 30 , No.23
其舒张平稳后 , 累积加入氯化钙 1.1 , 2.2 mmol·
L
-1 。可见随 Ca2+浓度增加 ,动脉条再次收缩并达
峰值 ,此为药前对照 。然后用正常 Kerb′s液反复冲
洗 ,平衡 1 h ,加入无钙 Kerb′s液同时加入不同剂量
的艳山姜果实挥发油(使最终浴槽内加入的挥发油
量为 40 , 20 , 10 μL ,使浴槽中艳山姜果实挥发油终
体积分数分别为 0.2%, 0.1%, 0.05%), 稳定 5
min ,重复上述试验。实验结束前再做一次无 Ca2+
NE收缩对照 ,将收缩高度与给艳山姜果实挥发油
前基本一致的收入统计资料。
2.6　统计学方法　所有数据资料用 SSPS 10.0统
计软件包进行处理 ,各组间均数比较用单因素方差
分析 、实验组与对照组组间均数比较用独立样本 t
检验 。
3　结果
3.1　艳山姜果实挥发油对 NE 缩血管量效曲线的
影响　加入艳山姜果实挥发油0.2%,0.1%,0.05%
后 ,N E量效曲线明显呈浓度依赖性向右下移 ,最大
反应变小 ,见图 1。随艳山姜果实挥发油剂量的增
加 ,其抑制作用越强 ,最大收缩幅度降低为(89.4±
6.8),(78.4±4.0),(66.8±6.3),与 NE组比较 ,差
异有显著性(P<0.05)。
图 1　艳山姜果实挥发油对去甲肾上腺素浓度-效应曲线的影响
— ◇—0;— □—0.05%;— △—0.1%;— ○—0.2%
Fig 1　Ef fect of volat ile oi ls f rom fru ctus Alpiniae z erumbet on th e
cont raction of rabbi t thoracic ao rta induced by NE
— ◇—0;— □—0.05%;— △—0.1%;— ○—0.2%
3.2　艳山姜果实挥发油对高钾去极化所致主动脉
收缩量效曲线的影响 　加入艳山姜果实挥发油
0.2%,0.1%, 0.05%后 ,高钾引起的主动脉最大收
缩幅度明显下降 ,高钾量效曲线显著右移 ,最大收缩
幅度分别降低(49.8±8.9),(58.7±3.0),(83.5±
10.7),结果见图 2。
3.3　艳山姜果实挥发油对 N E在无 Ca2+液中及复
Ca2+后缩血管效应的影响　在无 Ca2+ Kerb′s 液
中 , 1×10-6NE 对血管收缩率为(61.3±4.3)%;
0.1%艳山姜果实挥发油使其收缩率降为(45.2±
9.1)%,与 N E 组比较 ,差异有显著性(P <0.05);
0.2%艳山姜果实挥发油使其收缩率降为(23.2±
图 2　艳山姜果实挥发油对氯化钾浓度-效应曲线的影响
— ◇—0;— □—0.05%;— △—0.1%;— ○—0.2%
Fig 2　E ffect of volati le oils f rom fructus A lp iniae z erumbet on the
con tract ion of rab bit tho racic aorta induced by KCl
— ◇—0;— □—0.05%;— △—0.1%;— ○—0.2%
8.0)%,与 NE 组比较差异有极显著性(P<0.01);
其结果提示艳山姜果实挥发油对 N E诱导内钙释放
所致的短暂收缩有显著的抑制作用。复 Ca2+后 ,受
体操纵的 Ca2+通道导致外钙内流诱发血管收缩效
应 。本实验结果提示 ,内钙释放在血管收缩占主导
地位[内钙:(61.3±4.3)%,外钙:(38.7±4.6)%] ,
艳山姜果实挥发油对外钙内流具有一定的抑制作
用 ,但是与 NE组比较 ,差异未见显著性。
4　讨论
本研究结果证实 ,艳山姜果实挥发油对氯化钾 、
去甲肾上腺素引起的主动脉条收缩有明显的抑制作
用 ,而且使量效曲线明显右移 ,最大反应性降低 ,呈
非竞争性拮抗效应 ,表明其对主动脉条具有一定的
松弛作用;实验结果提示 ,等量的艳山姜果实挥发油
对高钾诱导的血管收缩作用强于去甲肾上腺素诱导
的血管收缩作用 。在无 Ca2+Kerb′s液中去甲肾上
腺素引起的第一相收缩 ,是其引起细胞内 Ca2+释放
所致 ,在第一相收缩的基础上加入 Ca2+ ,产生进一
步收缩 ,则主要是能促进细胞外 Ca2+经 ROC 内流
的结果 ,艳山姜果实挥发油显著抑制内钙释放诱导
的第一相收缩 ,对受体操纵 Ca2+诱导的外钙内流所
产生的第二相收缩作用相对较弱 ,说明其对主动脉
依内 Ca2+性收缩的敏感性大于依外 Ca2+性收缩。
以上 3个实验的结果提示 ,艳山姜果实挥发油对电
压依赖的钙通道的作用强于受体依赖的钙通道 ,这
与 Moura等[ 8] 报道的低醇提取物的研究结果相一
致 。
艳山姜果实挥发油对兔主动脉条的收缩有抑制
作用 ,该作用与钙离子密切有关 ,但作用机制比较复
杂 ,其主要是通过抑制平滑肌细胞膜电压依赖通道
与内钙释放而发挥作用 ,对受体操纵的 Ca2+通道也
具有一定的抑制作用。其作用机制复杂的原因可能
与艳山姜果实挥发油挥发油组分复杂有关 ,因此 ,有
必要进一步研究其可能的效应物质基础 ,促进艳山
·1968· 中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 23期 Chin H osp Pharm J , 2010 Dec , Vol 30 , No.23
姜果实资源的合理开发与利用 。
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[ 收稿日期] 2010-03-03
[作者简介] 陈镜楼 ,男 , 硕士 , 13297965238 , E-mai l:shanghuchuan@126.com 　[ 通讯作者] 阮金兰 , 男 ,教授 , 电话:027-83692311 , E-m ail:
shanghuchuan@sohu.com
正交试验法优选普通针毛蕨地上部位总黄酮提取纯化工艺
陈镜楼 ,刘瑜洁 ,阮金兰 ,蔡亚玲　(华中科技大学同济药学院 , 湖北省天然药物化学与资源评价重点实验室 , 湖北 武汉
430030)
[ 摘要] 　目的:优选普通针毛蕨地上部位总黄酮提取和纯化工艺条件。方法:以总黄酮提取率为考查指标 , 液料比 、提取次
数 、提取时间 、乙醇浓度为考察因素 ,选用 L9(34)表对提取工艺进行正交试验。以总黄酮提取率 、总黄酮纯度和主要活性成分
原芹菜素(pro toapig enone)物质为考查指标 ,用高效液相色谱法测定原芹菜素含量 , 以加碱水量 , 加碱水次数 , 碱水 pH 值 ,加
酸后 pH 为影响因素 ,选用 L9(34)表对纯化工艺进行正交试验。结果:普通针毛蕨总黄酮提取最佳工艺为 20 倍量 75%乙醇
提取 3 次 ,每次1.5 h。纯化条件为药材醇提浸膏加 2 倍量 pH 9 的氢氧化钠溶液 ,提取 2 次 ,提取液用浓盐酸调节为 pH 1。
结论:优选工艺获得的总黄酮提取率 , 纯度和原芹菜素含量较高。本方法合理 , 便于生产。
[ 关键词] 　正交设计;普通针毛蕨;总黄酮
[ 中图分类号] R284.2　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2010)23-1969-04
Study on extraction and purification processes for the total flavonoids of the aerial parts of Mac-
rothel ypteris torresiana (Gaud.)Ching by orthogonal test
CHEN Jing-lou , LIU Yu-jie , RUAN Jin-lan , CAI Ya-ling(College of Pharmacy , Tongji Medica l Center of Hua-
zhong Univ ersity of Science and Technology , H ubei Key Labo ra to ry of Na tural Medicinal Chemistry and Resoures Eva luation ,
Hubei Wuhan 430030 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To optimize the conditions of ex traction and purification processe s for the to tal flav onoids o f the ae r-
ial par ts o f Macrothelypteris torresiana.METHODS　Or thogonal test w as used fo r study ing the effects of alcohol concentra-
tion , volume , extr action time and the number of times on the content of total flavonoids , and the effects o f alka li ex tractions
pH , volume , the numbe r of time s and acid precipita tions pH on the content of pr otoapig enone , purity quotient and ex traction
rates.RESULTS　The optimal ex traction pro cess is as fo llow:20 times of 75% alcoho l , 3 times o f e xtr action and each for 1.5
hours.The optimal purification pro cess is as fo llow :20 time s of pH 9 alkali ex traction , 2 times of ex traction and pH 1 acid pre-
cipitation.CONCLUSION　The ex traction and purification pr ocesses are reasonable and fit fo r industrialism.
KEY WORDS:or thogona l test;Macrothelypteris torresiana ;the to tal flavonoids
　　普通针毛 蕨 [ Macrothelypteris torresiana
(G aud.)Ching]为金星蕨科(Thelypteridaceae)针
毛蕨属(Macro thelypteris)植物 ,含有大量黄酮类成
分 ,民间应用其地下部位治疗肿瘤[ 1] 。本课题组前
期研究发现 ,普通针毛蕨富含的总黄酮类成分具有
良好的抗肿瘤活性 ,尤其是原芹菜素(protoapig-
·1969·中国医院药学杂志 2010年第 30卷第 23期 Chin H osp Pharm J , 2010 Dec , Vol 30 , No.23