全 文 ：第３８卷 第１期
２０１２年３月
延边大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｙａｎｂｉａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ）
Ｖｏｌ．３８Ｎｏ．１
Ｍａｒ．２０１２
收稿日期：２０１１－０９－１３　　　　　基金项目：延边大学“２１１”工程三期建设项目（ＹＢ２１１－０３０２）
＊通信作者：施溯筠（１９７２—），女，博士，副教授，研究方向为天然生物资源的开发与活性成分研究．
文章编号：１００４－４３５３（２０１２）０１－００６４－０３
铃兰抗氧化性研究
李汉熙１，　杨香２，　张民锋１，　施溯筠１＊
（１．延边大学长白山生物资源与功能分子教育部重点实验室，吉林 延吉１３３００２；
２．延边大学工学院 计算机科学与技术系，吉林 延吉１３３００２）
摘要：以ＤＰＰＨ·清除能力作为考察指标，通过正交实验确定铃兰抗氧化物质的最佳提取方案，并测定铃兰提
取物清除羟自由基（·ＯＨ）和过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）的能力及还原力．结果表明：提取铃兰抗氧化物质的最优方案是
用蒸馏水在７５℃下提取３０ｍｉｎ，其对ＤＰＰＨ·的清除率达９６．１％，且对ＤＰＰＨ·的清除能力随浓度的增加而增
强；铃兰水提取物对·ＯＨ和Ｈ２Ｏ２ 表现出较强的清除能力及还原力，这说明铃兰水提物具有较好的抗氧化性．
关键词：铃兰；水提液；抗氧化性
中图分类号：Ｒ２８５．５　　　　　文献标识码：Ａ
Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｃｏｎｖａｌｌａｒｉａ　ｋｅｉｓｋｅｉ　Ｍｉｑ．
ＬＩ　Ｈａｎ－ｘｉ　１，　ＹＡＮＧ　Ｘｉａｎｇ２，　ＺＨＡＮＧ　Ｍｉｎ－ｆｅｎｇ１，　ＳＨＩ　Ｓｕ－ｙｕｎ１＊
（１．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｆｏｒ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅ　ｏｆ　Ｃｈａｎｇｂａｉ　Ｍｏｕｎｔａｉｎ　＆Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ（Ｙａｎｂｉａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ），
Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｙａｎｊｉ　１３３００２，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｏｍｐｕｔｅｒ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｙａｎｂｉａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｊｉ　１３３００２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　Ｃｏｎｖａｌｌａｒｉａ　ｋｅｉｓｋｅｉ　Ｍｉｑ．ａｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｅ
ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｏｆ　ＤＰＰＨ·ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｃａｐａｃｉｔｙ．Ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ｔｈｅ·ＯＨ　ａｎｄ　Ｈ２Ｏ２ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｃａｐａｃｉｔｙ
ａｎｄ　ｒｅｄｕｃｔｉｎｇ　ｐｏｗｅｒ　ｏｆ　Ｃｏｎｖａｌｌａｒｉａ　ｋｅｉｓｋｅｉ　Ｍｉｑ．ｅｘｔｒａｃｔ　ａｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｆｏｒ
ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　Ｃｏｎｖａｌｌａｒｉａ　ｋｅｉｓｋｅｉ　Ｍｉｑ．ａｒｅ　ａｓ　ｆｏｌｏｗｓ：ｔｈｅ　Ｃｏｎｖａｌｌａｒｉａ　ｋｅｉｓｋｅｉ　Ｍｉｑ．ｗｉｔｈ　ｗａｔｅｒ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｆｏｒ　３０ｍｉｎ　ａｔ　７５℃．Ｔｈｅ　ＤＰＰＨ·ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｃａｐａｃｉｔｙ　ｉｓ　９６．１％，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｂｉｌｉｔｙ
ｏｆ　ＤＰＰＨ·ｉｓ　ｅｎｈａｎｃｅｄ　ｗｉｔｈ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．Ｃｏｎｖａｌｌａｒｉａ　ｋｅｉｓｋｅｉ　Ｍｉｑ．ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｓｈｏｗ　ｓｔｒｏｎｇｅｒ
·ＯＨ　ａｎｄ　Ｈ２Ｏ２ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｒｅｄｕｃｔｉｎｇ　ｐｏｗｅｒ．Ｉｔ　ｉｓ　ｓｈｏｗ　ｔｈａｔ　Ｃｏｎｖａｌｌａｒｉａ　ｋｅｉｓｋｅｉ　Ｍｉｑ．ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ
ｈｅｒｅ　ｓｔｒｏｎｇｅｒ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｂｉｌｉｔｙ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃｏｎｖａｌｌａｒｉａ　ｋｅｉｓｋｅｉ　Ｍｉｑ．；ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
　　铃兰（Ｃｏｎｖａｌｌａｒｉａ　ｋｅｉｓｋｅｉ　Ｍｉｑ．）为百合科多年
生草本植物，别名香水草、芦藜花、铃铛花、草玉
铃、君影草、鹿铃草，主要产于我国吉林、黑龙江、
河北、山东、河南、山西、陕西等省，尤以东北盛产，
是一种珍贵的药用植物［１］．铃兰含有丰富的具有
特殊分子结构、功能复杂多样的生物活性物质，可
治疗心力衰竭、心房纤颤以及由高血压和肾炎引
起的左心衰竭等症［２］．正常浓度的自由基具有调
节细胞间的信号传递和细胞生长、抑制病毒和细
菌的作用，若机体自由基产生过多或清除过慢时，
便会通过攻击生命大分子物质及各种细胞器而造
成机体在分子水平、细胞水平及组织水平的各种
损伤，进而加速机体的衰老进程并诱发包括肿瘤
在内的各种疾病［３］．近年来，自由基的产生和清除
一直是生物、医药、环境和农学研究的热点，许多
高效、安全、天然的抗氧化剂不断被发现［４］，但有
　第１期 李汉熙，等：铃兰抗氧化性研究
关铃兰抗氧化的研究未见报道．本实验选择吉林
省长白山产铃兰为研究材料，以ＤＰＰＨ·清除率为
筛选指标，通过对提取溶剂、提取温度和提取时间
等因素进行优化筛选，确定出铃兰提取液的最佳
提取方案，并进一步测定了铃兰提取液的羟自由
基（·ＯＨ）和过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）的清除率及其还原
力，以期综合探讨铃兰的抗氧化能力．
１　材料与仪器
铃兰于２０１０－０６－０５—２０１０－０６－１５采自吉林省
汪清县天桥岭．铃兰全草自然阴干，粉碎，过６０目
筛，备用．１，１－二苯基－２－苦肼基（ＤＰＰＨ）、邻二氮
菲等购自Ｓｉｇｍａ公司．
仪器有：Ｕ－１９００紫外分光光度计（Ｈｉｔａｃｈｉ
Ｈｉｇｈ－Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｊａｐａｎ）；ＨＨ－Ｗ
恒温水浴箱（金坛市恒丰仪器厂）；ＦＡ６０４Ａ电子
天平（上海精天电子仪器有限公司）．
２　测定方法
２．１　铃兰抗氧化物质的提取
通过正交实验［５］考察提取溶剂、提取温度和
提取时间等３个试验因素对铃兰抗氧化物质提取
的影响（表１）．每个因素设３个水平，以１０ｍｇ／ｍＬ
的铃兰水提液对ＤＰＰＨ·的清除率作为指标，选用
Ｌ９（３３）正交试验表优选铃兰抗氧化物质的提取条
件（表２）．
２．２　ＤＰＰＨ·清除率的测定
将０．１ｍＬ的样品和２．９ｍＬ的６２．５μｍｏｌ／Ｌ
ＤＰＰＨ－甲醇溶液混合，空白管以０．１ｍＬ的甲醇
代替样液，对照管为０．１ｍＬ上述样液加２．９ｍＬ
甲醇；涡漩，室温静置２０ｍｉｎ，于５１７ｎｍ处分别
测定吸光值［６］．样品对ＤＰＰＨ·的清除率（％）＝
［１－（Ａ－Ａｂ）／Ａ０］×１００％，其中Ａ、Ａｂ 和Ａ０ 分
别为样品管、对照管及空白管测定的吸光值．
２．３　·ＯＨ清除率的测定
采用邻二氮菲－Ｆｅ氧化法［７］进行测定．
２．４　Ｈ２Ｏ２ 清除率的测定
参照郑超楠等的方法［８］进行测定．
２．５　还原力的测定
参照Ｏｙａｉｚｕ的方法［９］进行测定．
３　实验结果
３．１　铃兰抗氧化物质的提取
ＤＰＰＨ·的清除率是评价物质抗氧化能力的
指标之一．从表２直观分析可知：得Ａ１＞Ａ２＞Ａ３、
Ｂ１＞Ｂ２＞Ｂ３、Ｃ３＞Ｃ２＞Ｃ１；在１０ｍｇ／ｍＬ的浓度
和Ａ１Ｂ１Ｃ３ 条件下，铃兰提取液的ＤＰＰＨ·清除率
最高，达９６．１％，即用蒸馏水在７５℃提取３０ｍｉｎ
为铃兰抗氧化物质提取的最佳提取条件．从表２
还可看出，各因素对铃兰抗氧化物质提取的影响
依次为Ａ＞Ｃ＞Ｂ，即提取溶剂＞提取温度＞提取
时间．
表１　铃兰抗氧化物质的提取因素水平表
水平
因素
Ａ提取溶剂 Ｂ提取时间／ｍｉｎ　Ｃ提取温度／℃
１ 蒸馏水 ３０　 ４
２ 无水乙醇 ６０　 ２０
３ 石油醚 １２０　 ７５
表２　铃兰抗氧化物质的提取Ｌ９（３３）正交试验表
列号 Ａ　 Ｂ　 Ｃ ＤＰＰＨ
·
清除率／％
１　 １　 １　 １　 ８５．３
２　 １　 ２　 ２　 ９５．１
３　 １　 ３　 ３　 ８９．８
４　 ２　 １　 ２　 ８９．４
５　 ２　 ２　 ３　 ７５．９
６　 ２　 ３　 １　 ８１．５
７　 ３　 １　 ３　 ３６．７
８　 ３　 ２　 １　 ８８．０
９　 ３　 ３　 ２　 ４２．１
Ｉ　 ２７０．２　 ２５４．８　 ２０３．３ Ｇ＝６８３．８
Ⅱ ２４６．８　 ２２６．６　 ２１３．３ ＣＴ＝５１　９５３．６
ＩＩＩ　 １６６．８　 ２０２．４　 ２６７．２
Ｒ　 １０３．４　 ５２．４　 ６３．９
３．２　铃兰水提物对ＤＰＰＨ·的清除作用
以上述方法制备不同浓度的铃兰水提物，测
定其对ＤＰＰＨ·的清除能力．与 Ｖｃ比较显示：铃
兰也具有明显地清除ＤＰＰＨ·的能力（图１），并且
随着铃兰水提物浓度的增加，其对ＤＰＰＨ·的清
除率逐渐上升；其浓度为 ６ｍｇ／ｍＬ 时，清除
ＤＰＰＨ·的能力与Ｖｃ接近，这表明铃兰水提物是
一种较好的ＤＰＰＨ·清除剂．
５６
延边大学学报（自然科学版） 第３８卷　
图１　铃兰水提物对ＤＰＰＨ·的清除作用
３．３　铃兰水提物对·ＯＨ的清除作用
对上述方法制备的不同浓度的铃兰水提物进
行·ＯＨ清除能力的测定．图２显示：铃兰水提物
具有明显地清除·ＯＨ的能力，并且随着铃兰水提
物浓度的增加，其对·ＯＨ的清除率逐渐上升；其
浓度为４ｍｇ／ｍＬ时，清除·ＯＨ的能力已与Ｖｃ接
近，这表明铃兰水提物是一种较好的·ＯＨ清除剂．
图２　铃兰水提物对·ＯＨ的清除作用
３．４　铃兰水提物对Ｈ２Ｏ２ 的清除作用
对上述方法制备的不同浓度的铃兰水提物进
行Ｈ２Ｏ２ 清除能力的测定．图３显示：铃兰水提物
具有较好地清除Ｈ２Ｏ２ 的能力，并且随着铃兰水提
物浓度的增加，其对 Ｈ２Ｏ２ 的清除率逐渐上升；其
浓度为１ｍｇ／ｍＬ时，对 Ｈ２Ｏ２ 的清除率（７９．２３％）
接近于Ｖｃ的水平．
图３　铃兰水提物对 Ｈ２Ｏ２ 的清除作用
３．５　铃兰水提物的还原力
对上述方法制备的不同浓度的铃兰水提物进
行还原力的测定．图４显示：铃兰水提物具有较强
的还原力，并且随着铃兰水提物浓度的增加，反应
液的Ａ７００值逐渐上升；其浓度为５ｍｇ／ｍＬ时，其
还原力的Ａ值已与Ｖｃ的Ａ值接近．
图４　铃兰水提物的还原力
４　结论
本研究表明：铃兰水提物对·ＯＨ和 Ｈ２Ｏ２ 表
现出较强的清除能力及还原力，说明铃兰水提液
具有很好的抗氧化性；铃兰抗氧化物质的最佳提
取条件是用蒸馏水在７５℃下提取３０ｍｉｎ，其对
ＤＰＰＨ·的清除率达９６．１％，且对ＤＰＰＨ·的清除
能力随浓度的增加而增强．
参考文献：
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ｔｉｏｎｓ：ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｏｆ　ｂｒｏｗｎ－
ｉｎｇ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｆｒｏｍ　ｇｌｕｃｏｓａ　ｍｉｎｅ［Ｊ］．Ｊａｐａ－
ｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，１９８６，４４：３０７－３１５．
６６