全 文 :基金项目: 国家科技支撑计划项目(No. 2007BAD48B06); 国家麻类现代农业产业技术体系建设专项(NYCYTX-19); 中央级公益性科研院
所基本科研业务专项资金(ITBBZD0827); 948 项目(2010-Z6); 海南省自然科学基金项目(80510)资助。
第一作者简介: 刘巧莲, 女, 1976 年生, 大专。 研究方向: 植物病理学。 E-mail:liuqiaolian2004@163.com。
* 通讯作者, 易克贤, 男, 1964 生, 研究员。 E-mail: yikexian@21cn.com。
收稿日期: 2010-07-21 修回日期 2010-10-05
第 31 卷 第 11 期 热 带 作 物 学 报 Vol.31 No.11
2010 年 11 月 CHINESE JOURNAL OF TROPICAL CROPS Nov.2010
13种药剂对剑麻斑马纹病病原菌
的室内毒力测定
刘巧莲 1, 郑金龙 1, 张世清 1, 高建明 1, 陈河龙 1, 江程记 1,3, 易克贤 1,2*
1
中国热带农业科学院热带生物技术研究所
农业部热带作物生物技术重点开放实验室 海南海口 571101
2中国热带农业科学院环境与植物保护研究所, 海南儋州 571737
3海南大学农学院, 海南海口 571101
摘要 为筛选出适合大田防治剑麻斑马纹病的高效低廉的药剂, 采用菌丝生长速率法对 13 种药剂的抑菌效果进
行室内筛选。 综合分析结果表明: 55%敌克松、 70%甲基托布津和 68%精甲霜·锰锌的 EC50和 EC95最小, 抑菌
效果最好; 10%苯醚甲环唑和 66%霜霉威的 EC50和 EC95最大。 通过对药剂抑菌效果和使用成本的分析, 建议生
产上使用 55%敌克松、 70%甲基托布津、 68%精甲霜·锰锌、 72%霜脲·锰锌、 50%烯酰吗啉、 50%锰锌·氟吗啉
和 64%克菌特防治剑麻斑马纹病。
关键词 剑麻斑马纹病; 烟草疫霉菌; 杀菌剂; 毒力测定
doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2010.11.26
中图分类号 S435.63
斑马纹病(Zebra disease 简称 Z.D.), 是目前剑麻生产上一种毁灭性的传染性病害, 由烟草疫霉菌
(Phytophthora nicotianae Breda.)引起[1-2]。 斑马纹病病原菌侵害剑麻植株的各个部分, 引起叶斑、 茎腐和轴
腐, 这三种症状可在同一麻株上单独发生或合并发生, 故称斑马纹复合病。 多数是叶片先感病, 进而波
及茎、 轴, 直至整株死亡。 每年高温多雨季节易发生病害流行, 导致大批麻株死亡, 损失严重。 佩雷格
林等从 1963 年开始在实验室、 温室和大田进行了系列的药剂筛选工作[3]。 张开明等于 1978 年在海南红泉
农场开展了发病规律调查, 并做了一些药剂防治相关的田间试验[4]。 然而, 至今国内外尚未见对剑麻斑马
纹病病原致病力的研究报道, 且由于药剂的更新换代和病原菌株的耐药性, 原先筛选出的药剂有的已停
产, 而更多的是防治效果越来越差, 目前尚无理想的药剂可选用。 因此, 本实验从目前市场上抗真菌的
药剂中, 选出 13 种杀菌剂作供试药剂, 以期筛选出对剑麻斑马纹病病原菌毒力大、 抑制效果好的杀菌
剂, 供生产上使用。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1供试菌株 共 3 个, 分别是来自广东湛江地区的 CH0025、 海南昌江地区的 CH0097 和广西南宁
地区的 CH0101。 供试菌株通过科赫法则进行分离、 纯化和鉴定, 并对其致病性进行测定, 从而筛选出致
病性强的菌株。
1.1.2药剂 75%百菌清(苏州先正达作物保护有限公司), 10%苯醚甲环唑(江苏丰登农药有限公司),
11期 刘巧莲等: 13 种药剂对剑麻斑马纹病病原菌的室内毒力测定
50%烯酰吗啉(青岛瀚生生物科技股份有限公司), 72%霜脲锰锌(美国杜邦公司), 50%咪鲜胺(德国拜耳
作物科学公司), 3%甲基多抗霉素(日本生化科研株式公社菌种生产), 68%精甲霜·锰锌(苏州先正达作
物保护有限公司), 50%锰锌·氟吗啉(沈阳化工研究院试验厂), 64%克菌特(郑州郑氏化工产品有限公司),
66%霜霉威(重庆市化工研究院), 70%锰锌乙铝(江苏新沂利民化工有限责任公司), 55%敌克松(辽宁省
丹东市农药总厂), 70%甲基托布津(江苏龙灯化工有限公司)。
1.2 实验方法
1.2.1 PDA培养基的配制 马铃薯 200 g, 葡萄糖 15 g, 琼脂 18 g, 用去离子水定容至 1 L, 于 121 ℃、
1×105 Pa灭菌 20 min。
1.2.2含药PDA培养基制备 按药剂处理浓度, 用无菌水将 13种药剂分别稀释成 5~7 个不同浓度的母
液, 然后将母液分别定量加入到 45~50 ℃的 PDA 中, 混合均匀后倒入 90 mm 的培养皿中, 每皿大约
15 mL, 冷却后备用。 以加入等量无菌水的 PDA作对照(CK)。
1.2.3参试菌株对几种药剂的室内敏感性测定 采用生长速率法, 根据不同菌株在 0.1、 1、 10、 100 mg/L
含药培养基上的生长情况和抑菌率大小, 设置不同杀菌剂的毒力测定质量浓度梯度, 每种杀菌剂设 5~7
个, 将在 PDA 平板上和 28 ℃培养 5 d 的参试菌株用直径为 5 mm 打孔器取菌落边缘, 移接于上述的备用
平板上, 每菌株每浓度重复 3 次。 置于 28℃培养箱中培养 5 d 后以十字交叉法测量菌落直径, 记载数据,
菌落生长抑制率等按照公式计算:
菌落生长抑制率=[(对照菌落直径-菌饼直径)-(处理菌落直径-菌饼直径)]/(对照菌落直径-菌饼直径)
×100%。
以浓度的对数值(X)和平均抑制菌落生长百分率的机率值(Y)求取各种药剂对参试菌株的毒力回归方
程 Y=a+bX, 并计算出相关系数(r)、 EC50值和 EC95值, 从而比较供试杀菌剂对供试菌株的毒力大小。 此
外, 根据植物病原菌的 EC50值提高 5~10 倍以上为抗药性产生的标准[5], 分析供试烟草疫霉菌对供试药剂
的抗性差异。
2 结果与分析
2.1 13种杀菌剂的毒力测定
2.1.1EC95值比较 由表 1可见, 毒力最强的杀菌剂是烯酰吗啉, 平均 EC95值最小, 为 5.393 6×100 mg/L;
精甲霜·锰锌、 敌克松、 霜脲锰锌、 锰锌·氟吗啉、 甲基托布津和克菌特等次之, 平均 EC95 值均在 10~
100 mg/L 之间; 然后是锰锌乙铝、 甲基多抗霉素和咪鲜胺, 平均 EC95值在 100~1 000 mg/L 之间; 毒力最
弱的是百菌清、 霜霉威和苯醚甲环唑, 平均 EC95值分别为 1.200 7×103、 1.757 9×105和 2.507 9×109 mg/L。
2.1.2EC50值比较 从表 1 还可看出, 13 种供试杀菌剂中, 毒力最强的是敌克松, 平均 EC50值最小,
仅为 0.2387 mg/L; 其次是甲基托布津和精甲霜·锰锌, 平均 EC50值分别为 0.611 6和 0.790 6 mg/L, 均小于
1 mg/L; 之后是百菌清、 烯酰吗啉、 锰锌·氟吗啉、 霜脲锰锌和克菌特, 平均 EC50 值分别为 1.155 8、
2.044 9、 3.919 2、 5.792 1和 8.396 5 mg/L, 对剑麻斑马纹病病原菌烟草疫霉菌有较好的抑制效果; 然后是
锰锌乙铝、 甲基多抗霉素和咪鲜胺, 平均 EC50值介于 10~100 mg/L 之间; 最后是苯醚甲环唑和霜霉威,
EC50值高于 100 mg/L, 毒力最弱, 对烟草疫霉菌的抑制效果很差。
2.1.3 3个供试菌株对13种药剂敏感性比较 表 1 同时还说明, 3 个来自不同地区的参试菌株对 13 种
药剂的敏感性存在一定的差异。 其中菌株 CH0055 在克菌特和甲基托布津中的 EC50和 EC95较大, 说明其
对这两种杀菌剂具有较强的耐药性; 而在苯醚甲环唑和甲基多抗霉素中, 其 EC50虽然较小, 但其 EC95值
相对偏大, 可从侧面说明其对这两种杀菌剂具有较强的耐药性; 菌株 CH0097在苯醚甲环唑、 咪鲜胺、 霜
霉威中, 其 EC50和 EC95较大, 说明其对这两种杀菌剂具有较强的耐药性; 菌株 CH0101 在敌克松、 锰锌·
氟吗啉中, 其 EC50和 EC95较大, 说明其对此两种杀菌剂具有较强的耐药性。 这可能与当地田间对这两种
2011
热 带 作 物 学 报 31 卷
药剂的使用量与喷药次数有关。 其余如精甲霜·锰锌、 霜脲锰锌、 烯酰吗啉和锰锌乙铝, 3 个菌株对其敏
感性相对一致, 均有较好的抑菌效果。
!!
!!#$
!%!%
&%’((!)*’!(!(
&%’+%)$*’+,,%
&%’-#!,*’%%-!
!’#((!
!’#,-,
!’#-!%
!’#-$
!’,!(#
!’)+#(
!’$#!,
%’+##!.%!
%’--+.%!
%’+,-,.%!
%’-!-.%!
/0
!!
!!#$
!%!%
&!’%,,*’!#+%
&!’%+*(’)%($
&!’,)(*’%%+%
!’#$)(
!’#$)+
!’##)#
!’,,--
+’%,),
!’,-!
%’%)
%’!%-.%!
+’!#%+.%!
(’#$-).%!
%’+!!$.%!
1
!!
!!#$
!%!%
&%’!!%*’!%!
&+’!,$%*+’)-,$
&+’!##%*-’()!
!’#)#(
!’#(-%
!’#,%
!’#$,+
%%’%-%%
’+,#%
’$#+%
(’++$$.%!
,’#(#.%!
-’+!%.%!
(’$#($.%!
2345
!!
!!#$
!%!%
&(’,(,-*-’+,#
&-’,(++*-’$+#
&-’%%,*(’-(,(
!’##+$
!’###-
!’##$$
+’-,%$
+’+-$)
%’-%
+’!((#
’--,(.%!
,’--!.%!
(’%-).%!
’-#-,.%!
67
!!
!!#$
!%!%
&%’(!(*-’--$,
&%’(!%*-’#!#%
&%’$-+#*-’%)
!’#$-,
!’#$-(
!’))+)
%+’!!!
,’!!-+
$’%)#
)’-#,
%’(!-!.%!
)’#($.%!
,’-#-!.%!
#’#%,#.%!
89:;
!!
!!#$
!%!%
&!’+%!*(’,%%(
&!’+-,*(’(+#
&!’+--)*(’(-$)
!’#%#%
!’#,##
!’#$%)
$!’%),
,-’(%#
+-’)$(,
%+#’%,%$
(’$((.%!
%’#(-).%!
+’$!.%!
+’!$#.%!
<=>
!!
!!#$
!%!%
&+’$)+#?!’-$+$
&%’#(#!*%’%#!-
&%’#%#(*%’(,+%
!’#)()
!’#)##
!’#)
)’+--)
#!’!#-)
,#’,###
)%’,$)
-’-+(+.%!
,’+#!+.%!
’!%((.%!
(’)$,-.%!
@ABCD
!!
!!#$
!%!%
&%’-!#,*-’(!)(
&%’$$+!*+’,--%
&-’!()$*!’#)!
!’#,+)
!’#),-
!’#($
%,’(%)
+%’,,-+
+!’$($!
%#’,!#,
+’#,!.%!
%’)-,.%!
$’%),+.%!
%’)-).%!
EF
!!
!!#$
!%!%
&%’$(#*+’#-)#
&+’)+(*%’(!-
&+’!,-*+’(+)%
!’#(($
!’#$+%
!’#$,(
%(’#((,
%,’-+$%
%$’)%-+
%,’-,%,
%’+#-,.%!
,’%,!!.%!
%’%+-).%!
%’!%%%.%!
@GHI
!!
!!#$
!%!%
&!’$%+,*’!%,
&!’$))%*’%+#,
&+’-,*,’$,%(
!’)(
!’#+!$
!’#,$$
!’#()%
!’,)()
!’+!+!
!’,%%,
%’#+)+.%!
)’-$!!.%!
)’##,!.%!
#’+($-.%!
J6K
!!
!!#$
!%!%
&(’+-#+*#’---)
&!’,#,!*’$!,
&!’)%))*’+,))
!’#(%#
!’#%!!
!’##(#
!’!#!
!’%%(
!’(,#,
!’+-)$
+’-+%!.%!
-’(#$.%!
(’$#--.%!
+’$$!$.%!
L45
!!
!!#$
!%!%
&%’-(*(’+!$-
&%’+$!*(’%)+
&%’(!#-*(’!+,
!’##))
!’#$#,
!’#)+-
-’+)(
-’),
(’#%-$
-’#%#+
-’)$$-.%!
(’+%!.%!
$’++!).%!
’%%,-.%!
CM
!!
!!#$
!%!%
&!’,)+*-’+,(%
&!’,+%%*-’%)-+
&!’)$$*-’!(!#
!’##!#
!’#(,!
!’#-
(--’)($
)(%’,+
%#+’-,$,
()#’+#%,
%’-,#%.%!
-’$((.%!
%’#+!.%!
%’$$#.%!
2012
11期
2.2 成本比较
从表 2可知, 配制每 hm2使用杀菌剂、 苯醚甲环唑的成本最低, 不超过 50 元; 敌克松的次之, 仅 54
元; 精甲霜·锰锌、 烯酰吗啉、 克菌特、 咪鲜胺、 甲基多抗霉素、 锰锌乙铝和甲基托布津的成本稍高一
些, 但也不超过 100元, 其余的都在 100元以上。
3 讨论与结论
通过用 13 种杀菌剂对剑麻斑马纹病病原菌烟草疫霉菌进行室内毒力测定, 结果表明: 敌克松对剑麻
烟草疫霉菌的毒力最强; 甲基托布津、 精甲霜·锰锌、 霜脲锰锌、 烯酰吗啉、 锰锌·氟吗啉和克菌特等 6
种杀菌剂对剑麻疫霉菌的毒力较强, 也相对稳定。 因此, 敌克松可作为防治剑麻斑马纹病的首选杀菌剂;
甲基托布津、 精甲霜·锰锌、 霜脲锰锌、 烯酰吗啉、 锰锌·氟吗啉和克菌特等也可用于剑麻斑马纹病的防
治, 其中敌克松抑制效果的测定结果与张开明等的报道相一致; 甲基托布津、 精甲霜·锰锌、 霜脲锰锌、
烯酰吗啉、 锰锌·氟吗啉和克菌特等杀菌剂也与国内已有的报道相一致[7-8]。
通过对 13 种杀菌剂的抑菌效果测定以及杀菌剂成本核算综合分析, 结果表明: 目前我国防治剑麻斑
马纹病的最佳药剂为敌克松, 甲基托布津、 精甲霜·锰锌、 霜脲锰锌、 烯酰吗啉、 锰锌·氟吗啉和克菌特
等 6种杀菌剂次之。
但需要注意的是, 从药剂的作用机理来看, 敌克松是一种保护性杀菌剂, 甲基托布津、 烯酰吗啉二
者为内吸性杀菌剂, 精甲霜·锰锌、 霜脲锰锌、 锰锌·氟吗啉和克菌特等均为混配杀菌剂。 疫霉菌易产生
抗药性, 因此防治剑麻斑马纹病时, 采取正确的药剂抗药性治理策略尤为必要。 生产上, 建议采用两种
或两种以上作用机理不同的、 无相互抗性的杀菌剂混用或轮换使用, 这样既能对病害进行有效的防治,
又可避免单一内吸性杀菌剂的大量施用而致使致病菌耐药性增强的情况。
但是, 由于离体条件下的研究结果不一定能完全反映田间自然条件的使用情况, 原因在于田间防治
效果受到的影响因素很多。 因此, 筛选出来的杀菌剂在生产实践中防治效果究竟如何, 还有待进一步深
入研究。
参 考 文 献
[1] 陈锦平, 刘清芬. 龙舌兰麻杂种 11 648 斑马纹病的分布及其病原的研究[J]. 热带作物研究, 1980(2): 122-129.
[2] 陈锦平, 刘清芬. 龙舌兰麻杂种 11648 斑马纹病原烟草疫霉菌(Phytophthora nicotianae Breda.)生物学及形态特征的初步研究[J]. 热带作
物学报, 1982, 3(1): 65-70.
[3] 张开明. 国外龙舌兰麻斑马纹病的防治研究[J]. 热带作物译从(世界热带农业信息), 1977(3): 25-30.
!!!!!!! !!! ! #!!
$% !!!!!!! &! ’’’ (!!!
) !(’!!( !! ’*! (*!
+,-. !(’!!( *!! ’ */0
12 !!!!!!! !! ’* 0*
3456 !(!!!!! !!! !*! ’*!
789 !’!!(! !! ! #!!
:;<=> !!//!!!! !!! ! *’!
?@ !!**!!!! *!! ! #!!
:ABC !!//!!!! 0!! ’ /0*
D1E !!’*!!(!! !! !#! &!
F-. !((!!!! !! ’!! 0!!
=G !’!!(! *!! ’/ ((!
HIJKLMNOPQRSTU !!!!!TVWN!!
X!!! YK
LMZ[HI\]P^_RY***/‘
abcd[ea!f/
TgM‘a#!!
RSh
刘巧莲等: 13 种药剂对剑麻斑马纹病病原菌的室内毒力测定 2013
热 带 作 物 学 报 31 卷
[4] 张开明, 黄庆春, 刘清芬, 等. 龙舌兰麻斑马纹病的发生规律和药剂防治试验[J]. 热带农业科学, 1980(02): 115-122.
[5] 杨 谦. 植物病原菌抗药性分子生物学[M]. 北京: 科学出版社, 2003, 3.
[6] 卢 颖. 植物化学保护[M]. 北京: 化学工业出版社, 2009, 201.
[7] 刘爱勤, 桑利伟, 孙世伟, 等. 香草兰疫霉菌对 9 种杀菌剂的敏感性测定[J]. 农药, 2008, 47(11): 847-848.
[8] 尹敬芳, 曹 锦. 杀菌剂对辣椒疫霉不同形态菌体的毒力差异[J]. 农药学学报, 2005, 7(3): 227-323.
The Indoor Toxicity Determination of 13 Fungicides Against
Phytophthora nicotianae Isolates from Sisal
Liu Qiaolian1, Zheng Jinlong1, Zhang Shiqing1, Gao Jianming1, Chen Helong1, Jiang Chengji1, 3, Yi Kexian1, 2
1 Institute of Tropical Biosciences and Biotechnology, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences,
Key Laboratory of Ministry of Agriculture for Tropical Crop Biotechnology, Haikou, Hainan 571101;
2 Institute of Environment and Plant Protection, CATAS, Danzhou, Hainan 571737;
3 College of Agronomy, Hainan University, Haikou, Hainan 571101
Abstract To screen suitable fungicides with high efficiency and low cost to control zebra leaf spot disease
of sisal caused by Phytophthora Nicotianae, the anti activity of 13 fungicides were tested in the laboratory
by mycelium growth rate method.The results showed that the best ones of bacteriostatic effect with the
lowest EC50 and EC95 were fenaminosulf 55% , thiophanate -methyl 70% and metalaxyi·mancozeb 68% .
However difenoconazole 10% and propamocarb 66% were the highest with EC50 and EC95 value. By
analysis of inhibiting effect and cost of these fungicides, It is suggested that fenaminosulf 55% ,
thiophanate -methyl 70% and metalaxyi·mancozeb 68% , cymoxanil mancozeb 72% , dimethomorph 50% ,
flumorph·mancozeb 50% and 64% oxadixyl could be used for controlling Zebra disease effectively.
Keywords zebra leaf spot of sisal; Phytophthora nicotianae; Fungicides; Laboratory screening
责任编辑: 叶庆亮
2014