全 文 :热带农业科技 2006,29(3)
Tropical Agricultural Science & Technology
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箭根薯茎尖培养快速繁殖试验
高 燕,白燕冰,赵云翔
(云南省德宏热带农业科学研究所,云南 瑞丽 678600)
摘 要:以箭根薯的茎尖为外植体的组培试验结果:MS+6-BA 1.0mg·L-1+NAA 0.5mg.L-1,MS+6-BA 0.4mg·L-1+NAA
0.05mg·L-1和1/2MS+NAA 0.5mg·L-1+AC 0.2%分别是对其诱导培养、增殖和生根培养较适宜的培养基;幼苗经炼苗后,
移栽到腐殖土∶珍珠岩=2∶1的混合基质上,30d后成活率达95%。
关 键 词:箭根薯;茎尖;组织培养
中 图 分 类 号:S567.239 文 献 标 识 码:B 文 章 编 号:1672-450X(2006)03-0011-02
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Experiment on Tissue Culture of Tacca chantrieri
GAO Yan, BAI Yan-bing, ZHAO Yun-xiang
(Dehong Tropical Agriculture Institute of Yunnan, Ruili 678600, China)
Abstract: The tissue culture was made by the stem tine of Tacca chantrieri.The result shows that the condign medium for inducing the callus
is the MS medium added 6-BA1.0mg.L-1+NAA0.5mg.L-1, the condign medium for propagation is the MS medium added 6-BA0.4mg.L-
1+NAA0.05mg.L-1 and the condign medium for rootage is 1/2MS medium added NAA0.5mg.L-1+AC0.2%.The seedling is outplanted to the
humous medium with perlite after acclimation. The survival rate is up 95% after transplanting 30d.
Key words: Tacca chantrieri; stem tine; tissue culture
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收稿日期:2006-02-24
箭根薯(Tacca chantrieri A d e)又名黑蝴蝶,为
箭根薯科箭根薯属多年生草本植物。箭根薯生长于海
拔170~1 300m的热带雨林的荫湿处。全草高约
60cm,根状茎,近圆柱形,粗短;叶宽大,深绿色;
花暗紫色,花果期4~11月。箭根薯集观叶、观花、药
用于一体,其野生资源越来越少,已被列为国家三级
保护植物。其根状茎味苦、性凉,有清热解毒、消炎
止痛的功效,可治刀伤、胃及十二指肠溃疡、肝炎、
高血压、胃痛、烧烫伤、疮疡等。箭根薯株形优美,株
高适中,花形独特,花期又长,非常适合作室内观赏
植物。箭根薯一般为种子繁殖或茎段繁殖。种子繁殖
因种子结实率低,饱满度差,空秕率高,而难以适宜
生产种植的需要;茎段繁殖所耗材料多,而增殖倍数
有限,为此,我们对箭根薯组培快繁技术进行了研究,
现将结果报道于下:
1 材料和方法
取当地野生箭根薯茎尖为外植体。
1.1 外植体愈伤组织诱导
取生长健壮的箭根薯茎尖,用0.1%的洗衣粉水
冲洗2~3次,用清水洗净,再用0.1%HgCl2灭菌15min,
无菌水冲洗5~6次之后,将茎段切成长2cm小段,晾
干,正向直立接种于MS+6-BA 0.1~2.0mg·L-1+NAA
0.1~0.5mg·L-1+蔗糖3%+琼脂0.6%,pH5.8等 种
处理的诱导培养基,在(25±1)℃ ,光照强度1 500
lx条件下培养,光照10~12h/d 。观察记录愈伤组织
出现的时间和生长情况,30d后转瓶。
1.2 愈伤组织增殖及丛芽诱导
将形成的愈伤组织切块,接种于MS+6-BA 0.1~
0.8mg·L-1+NAA 0.05~0.1mg·L-1+蔗糖3%+琼脂
0.6% ,pH5.8等 种不同处理的增殖培养基,培养条
件同上。比较不同处理的丛芽生长状况及增殖率,30d
后转瓶。
1.3 继代培养
在继代培养基MS+6-BA 0.4mg·L-1+NAA 0.05mg·
L-1上培养,30d转一次瓶。
1.4 生根培养
待继代培养的幼苗长出2~3片叶时,从基部将
丛芽切成单苗,接种于1/2MS+NAA 0.1~1. mg·
L-1+AC0.2%+蔗糖2%+琼脂0.6% ,pH5.8等4种处理
生根培养基,培养条件同上。比较不同条件下的幼苗
生根情况。
1.5 移栽
DOI:10.16005/j.cnki.tast.2006.03.005
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幼苗在生根培养30d后,长至6~7cm,3~4片
叶,将瓶苗在室内过渡7~10d,取出幼苗,洗净附着
在根上的培养基,用1.0%多菌灵溶液消毒5min,晾
干,移栽在腐殖土∶珍珠岩=2∶1的混合基质中,荫
蔽度80%,保湿培养。
2 结果与分析
2.1 不同激素(浓度)处理对茎尖诱导的影响
茎尖材料接种7d后,顶芽开始萌发,切口形成愈
伤组织,20d后长出不定芽,30d后诱导速度快的可分
化出5~6个不定芽,慢的仅萌发1~2个芽。参试的
8种培养基都能诱导出愈伤组织、分化出幼苗,诱导
率在20%以上。在附加6-BA1.0mg·L-1+NAA 0.1~
0.5mg·L-1的培养基上,诱导率高达90%~97%;6-
BA 1.0mg·L-1+NAA 0.5mg·L-1分化的新芽多,粗壮,
生长较快;当6-BA为2.0mg·L-1时,不定芽出现明
显的变异,愈伤组织肥大、海绵状,叶小(表1)。
2.2 不同激素浓度处理对丛芽分化的影响
试验结果(表2),培养30d后,6-BA 0.4mg·
L-1+NAA 0.05mg·L-1处理的不定芽分化率100%,月
增殖系数达6倍,分化出的不定芽多,粗壮,生长快,
变异少。随着6-BA浓度继续增加,则茎尖愈伤组织
减少,愈伤组织硬化、褐化、变小,颜色淡黄色,呈
海绵化,分化丛芽少、细弱,表明6-BA适当的浓度
对诱导丛芽有促进作用。
2.3 继代增殖培养代数对愈伤组织分化率、增殖
率、成苗率的影响
试验结果(表3),1~2代愈伤组织分化率、增殖
率、成苗率低,愈伤组织受褐化的影响而幼苗生长缓
慢,3~4代愈伤组织增殖和生长状况明显好转,并且
增殖率、成苗率随着代次的增加而增加,但在9代以
后均呈明显下降趋势。
2.4 NAA不同浓度对幼苗生根的影响
试验结果(表4),在NAA 0.5mg·L-1的培养基
上,10d左右开始长根,30d生根率(下转第15页)
表2 不同植物激素(浓度)增殖培养基对不定芽分化的影响
增 殖 培 养 基
(mg·L-1)
接种数
(个)
分化数
(个)
分化率
(%)
丛芽总数
(个)
平均丛芽数
(个)
6-BA 0.1+NAA 0.05 30 15 50 35 2.3
6-BA 0.2+NAA 0.05 30 22 73 99 4.5
6-BA 0.4+NAA 0.05 30 30 100 181 6.0
6-BA 0.8+NAA 0.05 30 26 87 138 5.3
6-BA 0.1+NAA 0.1 30 18 60 50 2.8
6-BA 0.2+NAA 0.1 30 25 83 123 4.9
6-BA 0.4+NAA 0.1 30 29 97 165 5.7
6-BA 0.8 +NAA 0.1 30 27 90 145 5.4
合计 240 189 80 936 4.6
表3 继代代数对愈伤组织萌发、增殖、成苗率的影响
继代数 分化率 (%)
增殖率
(%)
成苗率
(%) 生长状况
1 75 205 65 幼苗茁壮,生长缓慢
3 88 324 91 幼苗茁壮,生长正常
6 98 415 96 幼苗茁壮,生长较快
9 91 354 87 幼苗中等,生长正常
12 62 132 70 幼苗细弱,生长缓慢
表1 不同激素浓度对茎尖诱导的影响
起始培养基
(mg·L-1)
茎尖数
(个)
诱导愈伤
组织数(个)
诱导率
(%) 诱 导 情 况
6-BA 0.1+NAA 0.1 30 6 20 诱导速度慢,抽新芽少,细弱
6-BA 0.5+NAA 0.1 30 24 80 诱导速度较快,新芽长势正常
6-BA 1.0+NAA 0.1 30 27 90 诱导速度快,抽生新芽多,生长较快,粗壮
6-BA 2.0+NAA 0.1 30 18 60 诱导速度较快,新芽生长一般
6-BA 0.1+NAA 0.5 30 15 50 诱导速度慢,新芽少,较弱
6-BA 0.5+NAA 0.5 30 26 87 诱导速度较快,新芽生长正常
6-BA 1.0+NAA 0.5 30 29 97 诱导速度快,新芽多,生长快,粗壮
6-BA 2.0+NAA 0.5 30 23 77 诱导速度较快,愈伤组织肥大,海绵化,硬化,褐化,新芽细弱
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2.5 果园土壤肥力
果园覆盖处理(比对照)明显提高所测定的各项
土壤肥力指标,即明显地提高土壤肥力(表4)。覆草
区的土壤有机质、N、P、K含量及土壤微生物量提高
最显著,而生草处理最显著地增加土壤空隙度。
3 讨论
两年的试验表明,蛋黄果果园覆盖能改善果园小
气候和显著提高土壤肥力。在最为干、热的5~6月,
表4 蛋黄果园土壤肥力测定
土壤有效养分(mg/kg) 处 理 有机质 (g/kg) N P K
容重
(g/cm2)
土壤微生物
(106个/ g)
空隙度
(%)
百喜草 1.80 184.8 7.3 162.5 1.17 2.9 57.7 生草区 铺地木兰 1.69 125.4 6.1 158.3 1.17 3.4 57.9
玉米秸秆 2.01 186.6 8.4 222.6 1.19 9.4 55.6 覆草区
木豆枝叶 2.24 218.8 9.6 217.4 1.18 10.1 55.7
清耕区 1.61 112.4 5.2 152.4 1.19 0.1 52.2
表3 2004~2005年5~6月果园相对湿度(%)
生草区 覆草区
百喜草 铺地木兰 玉米秸秆 木豆枝叶
清耕区
73.5 74.2 71.8 72.5 70
(上接第12页)达100%,根长达4.3cm,平均每株苗
有5.3条根,苗高6~7cm,展开叶片3~4片,幼苗生
势粗壮。随着NAA浓度的增加或减少,不定根减少,
幼苗生势变弱。
2.5 移栽
移栽后7d内每天喷雾一次保湿,后每隔2~3d喷
雾一次;移栽15d后,每10~15d喷施0.5%氮肥一次
或MS无机盐的1 000倍营养液。30d后成活率达95%。
3 小结
试验结果:MS+6-BA 1.0mg·L-1+NAA 0.5mg·
表4 NAA不同浓度对幼苗生根的影响
NAA
(mg·L-1)
接种幼苗数
(株)
平均根数
(条)
平均根长
(cm)
生根率
(%)
幼苗生势
0.1 30 2.3 2.4 45 幼苗生势细弱,生根慢
0.25 30 4.2 3.4 90 幼苗生势中等,生根一般
0.5 30 5.3 4.3 100 幼苗生势粗壮,生根较快
1.0 30 4.5 3.8 100 幼苗生势中等,生根一般,变异苗多
L-1,MS+6-BA 0.4mg·L-1+NAA 0.05mg·L-1和
1/2MS+NAA 0.5mg·L-1+AC0.2%分别是箭根薯组培
诱导培养、增殖培养和生根培养适宜的培养基;继代
增殖培养适宜在第9代以前就出瓶进行生根培养;所
使用的炼苗技术可使成活率达95%。
在继代增殖过程中,由于接种愈伤组织块的分泌
物和细菌污染较重,使增殖培养受到影响,因此应提
高继代增殖过程控制污染的技术。对于用田栽的箭根
薯嫩叶柄、嫩叶片为外植体的组培技术还有待进一步
研究。
致谢:肖兵、季丽坤、李桂琳、胡永亮、钏相仙参加了
部分研究工作,谨此致谢。
能有效降低土壤和空气温度、减小温差和提高果园相
对湿度;提高和保持雨后较高的土壤含水量。无疑这
些小环境的改变,有利于蛋黄果在严重干、热的气候
下能良好地生长发育。
试验还表明,两年的覆盖处理明显的提高土壤肥
力,尤以覆草处理最为明显,这很好地验证了果园有
机质覆盖保水、增加肥力的普遍规律。
本项试验时间尚短,主要观测数据取自特殊气候
的月份,试验面积较小,还不足以表现这些处理影响
果园环境的全貌。因此深入研究不同处理对果园小环
境的影响,对于在干热河谷气候条件下改善热带果树
栽培条件,是有一定意义的。
致谢:本文承蒙杨雄飞研究员审阅,尤其是对此文作出
了大量修改,在此谨表谢意!