全 文 ：Science and Technology of Food Industry 研究与探讨
2015年第14期
棘托竹荪提取液对单增李斯特菌的
抑菌机理初步研究
蓝蔚青，曹 奕，陈 燕，潘迎捷，孙晓红*
（上海海洋大学食品学院，上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心，上海 201306）
摘 要：在细胞超微结构观察的基础上，采用实时荧光定量PCR技术初步分析棘托竹荪提取液对单增李斯特菌的抑
菌机理。使用最小抑菌浓度（15.0mg/mL）的棘托竹荪提取液分别对单增李斯特菌菌液进行0.5、1.0、1.5h处理，提取对
照组与处理组菌株的总RNA，通过反转录获得各自cDNA，并选择相关基因合成引物作Real-time PCR分析。以本菌的
16S rRNA作为内参基因，以prfA、ActA、Iap为转录过程与表达蛋白基因，分析提取液对单增李斯特菌相关基因表达量
的影响。由细胞超微结构观察可知，单增李斯特菌经提取液处理后，菌体细胞的细胞壁变薄，细胞膜的完整性发生改
变，内容物从胞内释放出来。由荧光定量PCR法对不同处理时间下的相关基因相对表达量变化情况分析得出：处理组
的prfA基因在0.5h时表达量有所上调，后期表达量上调速度减慢。1h后表达量基本停止上调，1.5h后，表达量转为下
调，说明提取液能在转录阶段对单增李斯特菌的生命活动构成影响。ActA和Iap基因在处理0.5h后基因表达量上调，
处理1h后上调量最大，ActA基因在1.5h后表达量上调量有所降低，Iap基因表达量出现下调，说明提取液能在转录水平
上调控单增李斯特菌的生命活动，特别是多种毒力因子的表达过程。由此可知，棘托竹荪提取液能对单增李斯特菌细
胞的转录过程和抗性产生显著影响，使菌体的细胞膜受损，细胞质溶出，从而导致菌体细胞死亡。
关键词：棘托竹荪提取液，单增李斯特菌，抑菌机理
Preliminary research on the antimicrobial mechanism of
Dictyophora echinovolvata extracts against Listeria monocytogenes
LAN Wei-qing，CAO Yi，CHEN Yan，PAN Ying-jie，SUN Xiao-hong*
（College of Food Science and Technology Shanghai Ocean University，Shanghai Engineering Research Center of
Aquatic Product Processing and Preservation，Shanghai 201306，China）
Abstract：Based on the observation of cell ultrastructure，the method of real-time fluorescent quantitative PCR
was used to evaluate the antimicrobial mechanism of Dictyophora echinovolvata extracts against Listeria
monocytogenes. The strain was treated with 15.0mg/mL（minimum inhibitory concentration，MIC） of Dictyophora
echinovolvata extracts under 0.5，1.0 and 1.5h. Total RNA of the control and treated group strains were extracted，
cDNA were obtained by reverse transcription and the relevant gene primers were selected for Real-time PCR
method respectively. The strains of 16S rRNA as reference gene，prfA，ActA and Iap as feature genes. It was
showed that the cell wall become thinner，the integrity of cell membrane was changed and the contents
released from intracellular when treated with Dictyophora echinovolvata extracts by the ultrastructure of cell
observations. Compared with the control group，the level of gene expression in prfA was up-regulated at 0.5h，
the speed of up-regulated became slower at 1h，the trend of up-regulation stopped at 1.5h with the prolong of
treatment time，which proved that extracts could affect the activities of Listeria monocytogenes in transcription.
While the level of gene expression in ActA and Iap were up-regulated in 0.5h，the amount of up-regulated
expression was increased fast at 1h. The level of gene expression in ActA was decreased at 1.5h and that in
Iap was down -regulated，which showed that extracts could regulate the level of transcription in Listeria
monocytogenes，especially on the expression of virulence factors. Dictyophora echinovolvata extracts had a
significant impact on Listeria monocytogenes for the process of transcription and the resistant of bacteria，which
could make the damage of cell membrane and the dissolution of cytoplasm leading to the death of cell.
收稿日期：2014－12－01
作者简介：蓝蔚青（1977-），男，博士，高级工程师，研究方向：水产品低温保鲜技术研究。
* 通讯作者：孙晓红（1978-），女，博士，副教授，研究方向：天然产物研究与开发。
基金项目：上海市教育委员会科研创新项目（11YZ159）；上海市科技兴农重点攻关项目（沪农科攻字（2015）第4-12号）；上海海洋大学科技发展
专项基金（A2-0209-15-200061）。
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研究与探讨
2015年第14期
Vol . 36 , No . 14 , 2015
Key words：Dictyophora echinovolvata extracts；Listeria monocytogenes；antibacterial mechanism
中图分类号：TS201.1 文献标识码：A 文 章 编 号：1002-0306（2015）14-0152-05
doi：10.13386/j.issn1002-0306.2015.14.023
棘托竹荪（Dictyophora echinovlvata）为鬼笔菌目
鬼笔科竹荪属真菌，主要分布于云南、贵州、湖南、四
川等地[1]。其子实体较小，菌盖近钟形，菌裙白色，菌
柄较长，菌托白色或浅灰色，以7~8月为生长高峰期。
棘托竹荪因其营养丰富、香味浓郁、滋味鲜美等特
点，长期以来作为我国珍贵特产之一，其价等黄金。
近年来，国内外少数学者先后围绕竹荪的抗氧化[2]、
免疫调节[3]、降压降脂[4]、凝集保肝[5-6]、抑制癌细胞[7-8]
等方面开展了部分研究工作，也对其抑菌活性进行
了初步研究。其中檀东飞等[9-11]通过不同溶剂的竹荪
子实体浸提实验，并采用水蒸气蒸馏法提取其挥发
油，用牛津杯法测定了其抑菌活性。卢惠妮等[12]通过
琼脂平板打孔法进行抑菌活性的测定，结果得出棘
托竹荪提取液能在中性乃至偏碱性条件下保持其抑
菌活性，但关于棘托竹荪抑菌机理方面的研究尚未
开展。
单增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）为食源
性致病菌之一，在自然界和各类食品中经常被发现，
具有高致病率的特点，且对外界环境具有很强的适
应性[13]，被WHO列为20世纪90年代主要食品致病菌，
是21世纪对中国人卫生健康具有重大影响的12种病
原微生物之一[14]。因此，采用合适的处理方式控制海
产品中的致病菌，尤其是单增李斯特菌对于保证水
产品的安全性具有重要的研究意义。目前，国内外已
有相关学者对抑菌物质作用于菌体细胞的方式开展
了相关方面的研究工作，在抑菌机理方面的表现主
要有损伤细胞壁、改变细胞的透性、改变蛋白质和核
酸分子、抑制酶的作用、作为抗代谢物与抑制核酸的
合成等几种方式[15]。本文在扫描电子显微镜（SEM）和
透射电子显微镜（TEM）观察提取液对细菌形态和结
构作用效果的基础上，通过实时荧光定量PCR法研
究棘托竹荪提取液对单增李斯特菌生命活动相关基
因表达变化的影响，初步评价棘托竹荪提取液对食
源性致病菌的抑菌机理，以期为棘托竹荪的后期开
发利用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
棘托竹荪子实体 购自四川绵阳食用菌所，保
存于干燥避光处；单增李斯特菌 菌株编号：
ATCC19115，购自中科院微生物研究所；胰蛋白胨大
豆肉汤（TSB） 北京陆桥有限责任公司；TRIzol 美
国Invitrogen公司；酚：氯仿：异戊醇 生工生物工程
（上海）有限公司；异丙醇 国药化学试剂有限公司；
DRR047A反转录试剂盒 日本TaKaRa株式会社；
Super Real Pre-mix荧光定量试剂盒 天根生化科技
有限公司。
E-1010离子溅射装置、S3400N扫描电子显微
镜、JEM2010型透射电子显微镜 Hitachi日本株式会
社；PCR仪、电泳仪 美国Bio-Rad有限公司；5424离
心机 美国eppendorf公司；7500型Fast Real -Time
PCR System 美国Applied Biosystems公司；236HK高
速冷冻离心机 上海湘仪离心机仪器有限公司；超声
波细胞粉碎机 宁波新芝生物科技股份有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 棘托竹荪提取液 采用超临界CO2萃取法（萃
取压力20MPa，萃取温度35℃，萃取时间120min）获得
棘托竹荪提取液，将其稀释至15.0mg/mL（采用微量
肉汤稀释法结合平板涂布法确定其MIC，菌数保持在
106CFU/mL，细菌生长受到明显抑制的提取液最低浓
度为MIC，微量肉汤稀释法的MIC值为肉眼发现无明
显浊度变化的提取液最低浓度[16]），保存于-20℃冰箱
备用。
1.2.2 单增李斯特菌的活化 取甘油管保藏的单增
李斯特菌菌株，TSB活化两次后用相应培养液进行稀
释，使菌液浓度达106CFU/mL。
1.2.3 细胞超微结构观察
1.2.3.1 扫描电子显微镜（SEM）观察 取活化好的
菌液，加入15.0mg/mL竹荪提取液处理6h，以未作任
何处理的菌液为对照组，两组样品同时进行处理。随
后，分别转移至1.5mL离心管，4℃、7000r/min离心5min，
弃上清，反复如上操作，多次离心获得菌体，菌体沉
淀用磷酸缓冲液洗涤3次后，用戊二醛固定、清洗、锇
酸固定12h，使用30%、50%、70%、90%的乙醇梯度脱
水，将样品涂至金属箔片上，采用CO2临界点干燥法
置换乙酸乙酯作临界点干燥固定、喷金，并置于扫描
电镜观察。
1.2.3.2 透射电子显微镜（TEM）观察 样品前处理
同上操作至戊二醛固定，取4℃预冷固定液1.5mL加
入到每个离心管中，4℃固定10h以上，后续清洗、包
埋、切片与制样工作由华东师范大学电镜中心协助
完成。
1.2.4 细菌相关基因表达量变化分析
1.2.4.1 细菌总RNA提取 参考邹晓蕾等 [17]采用
Trizol法进行细菌总RNA的提取。收集菌液，以未做
任何处理的菌液为对照组，采用15.0mg/mL棘托竹荪
提取液分别处理菌株0.5、1.0、1.5h。将处理组与对照
组分别在4℃、12000r/min离心5min（沉淀加入3.0mg/mL
的溶菌酶TE缓冲液100μL孵育10min），弃上清，加
1.0mL Trizol，漩涡振荡器振荡15min，室温静置20min，
加入0.2mL酚∶氯仿∶异戊醇（25∶24∶1），剧烈振荡15s，
静置2min；4℃、12000r/min离心15min，获取上清液；加
入等体积预冷的异丙醇，4℃、12000r/min离心10min，
弃上清。液体混匀，-20℃静置20min；加入1.0mL、
-20℃预冷的75%乙醇，洗涤沉淀。4℃，10000r/min离
心5min，弃上清；晾干后加入30μL的焦磷酸二乙酯
（DEPC）H2O溶解，分装8.0μL用于后续操作，放置
于-20℃，其余RNA放置在-80℃冰箱，测定其RNA浓
度与纯度。
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2015年第14期
1.2.4.2 反转录 将RNA浓度调至200ng/μL进行
DNA去除及反转录，基因组DNA除去反应的配制体
系为5×gDNA Eraser Buffer 2.0μL，gDNA Eraser 2.0μL，
Total RNA 1.0μL，RNase Free dH2O 5.0μL，于PCR仪
上进行DNA去除，随后进行反转录。向10.0μL反应液
中依次加入RNase Free dH2O 5.0μL和5×PrimeScript
Buffer 2（for Real Time）3.0μL，混匀后再添加RT Primer
Mix 1.0μL、PrimeScript RT Enzyme Mix I 1.0μL，并于
PCR仪上进行反转录反应（反应条件：37℃、15min，
85℃、5s，之后温度维持在4℃），得到cDNA保存在-20℃
冰箱中[17]。
1.2.4.3 Real-Time PCR 参照孙文烁等[18]选取20μL
的反应体系进行Real-time PCR分析。其中，荧光染
料10.0μL、正向引物（10μmol/L） 1.5μL、反向引物
（10μmol/L） 1.5μL、cDNA模板2.0μL与RNase-free
ddH2O 5.0μL，轻柔混匀并短暂离心。将反应体系置
于荧光定量PCR仪中进行Real-Time PCR两步法反
应，PCR反应条件为，第一阶段：95℃、15min；第二阶
段：95℃、10s与60℃、32s，进行40个循环，所需引物序
列如表1所示。
荧光定量PCR反应结果以2-△△Ct值作为衡量表达
量变化情况的指标，其代表实验组目的基因的表达
相对于对照组的变化倍数，使用这一方法便可直接
得到目的基因相对于内参基因的量。若该值大于1，
则说明特征基因表达量上调；若该值小于1，则说明
特征基因表达量下调[22]。
1.2.4.4 数据处理 实验数据均采用3次平行实验的
平均值，数据用软件origin（Pro）7.5绘图，数据间的
差异通过统计软件SPSS 13.0中的Duncan新复极差法
进行方差分析与多重比较，结果以平均值±标准偏差
表示。
2 结果与分析
2.1 细胞超微结构观察结果
2.1.1 扫描电子显微镜（SEM）观察结果 从图1（a）
中可以看到单增李斯特菌对照组的细菌细胞形态正
常饱满，细胞膜结构完整；图1（b）中对照组的细胞正
在进行分裂繁殖，轮廓清晰可见。由图1（c）可看出：
经棘托竹荪提取液处理后，视野内残留的菌体细胞
变少且不能维持细胞的原有形态；从图1（d）可见，处
理后的菌体细胞形状变得松散，胞内物质发生泄漏。
说明在该菌经MIC竹荪提取液处理后，已对其正常生
长产生明显的抑制作用。
2.1.2 透射电子显微镜（TEM）观察结果 从图2（a）
发现，同扫描电子显微镜对照组的情况一致，透射电
镜视野下对照组的菌体细胞较多，形态完整，内容物
充实，可明显看出细胞正进行分裂而形成的缢痕。从
图2（b）中可以看到，经提取液处理后，细胞的细胞壁
变薄，几乎观察不到完整的细胞膜，且有内容物从胞
内渗透出来。
2.2 荧光定量PCR反应结果分析
prfA是单增李斯特菌中的重要基因之一，其所
表达的转录激活因子能够激活细胞内多类毒力因子
的表达[23]，如ActA蛋白和Iap基因编码的p60蛋白，其
表达量的上调表示单增李斯特菌细胞生命活动旺
序号 目的基因作用 引物名称 引物序列（5′~3′）
1 内参基因[19] 16SRNA
（F）CACGTGCTACAATGGATAG
（R）AGAAT-AGTTTTATGGGATTAG
2 转录过程相关[20] PrfA
（F）GATACAGAAACATCGGT-TGGC
（R）GTGTAATCTTG-ATGCCATCAGG
3 表面蛋白表达[21]
ActA
（F）GCTGATTTAAGAGATAGAGGAACA
（R）TTTATGTGGTTATTTGCTGTC
Iap
（F）CAAACTGCTAACACAGCTACT
（R）GCACTTGAATTGCTGTTATTG
表1 Real-time PCR所需引物序列
Table 1 Primers sequences used for Real-time PCR
a b
c d
图1 单增李斯特菌扫描电子显微镜观察结果
Fig.1 Scanning electron microscopy micrographs of
Listeria monocytogenes
注：a.对照组（10000×）；b.对照组（30000×）；c.MIC处理组
（10000×）；d.MIC处理组（30000×）。
a b
图2 单增李斯特菌透射电子显微镜观察结果
Fig.2 Transmission electron microscopy micrographs of
Listeria monocytogenes
注：a.对照组（15000×）；b.MIC处理组（15000×）。
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盛。单增李斯特菌的特征基因相对表达量变化结果
如图3所示。
从图3中可以看出，prfA基因在0.5h时表达量有
所上调，随着处理时间延长，其表达量上调速度减
慢。处理1h后表达量基本停止上调，处理1.5h后，其
表达量转为下调。ActA基因在处理0.5h后较处理前
基因表达量上调，处理1h后上调量达到最大，处理
1.5h后表达量上调量有所降低。Iap基因在0.5h与1h
的基因表达量变化与ActA基因基本相似，但在1.5h
后表达量呈下调趋势。可见，单增李斯特菌经棘托竹
荪提取液处理后，已对菌体的基因表达产生影响，对
其生长产生抑制。而表达量的下调则说明竹荪提取
液能通过在转录水平上调控单增李斯特菌的生命活
动，抑制菌体的活性。但竹荪提取液的作用发挥仍需
一段时间，因此才会出现prfA表达量在0.5h时仍处于
上调的现象。
3 结论
通过进行细胞超微结构观察结果显示，提取液
处理后，视野内残留的菌体细胞已经很少，不能维持
细胞的原有形态，菌体细胞形状变得松散，细胞的细
胞壁变薄，几乎观察不到完整的细胞膜，胞内物质泄
漏。说明在该菌经MIC竹荪提取液处理后，已对其正
常生长产生明显的抑制作用。单增李斯特菌经棘托
竹荪提取液处理后，prfA基因表达量的上调速度逐
渐减慢，在1h后由上调转为下调，说明提取液对其基
因表达产生影响，对其正常生长产生抑制作用。而在
其表达量转为下调后，ActA和Iap基因表达量的上调
速度也迅速下降，说明竹荪提取液能够通过在转录
水平上调控单增李斯特菌的生命活动，特别是多种
毒力因子的表达过程。然而，竹荪提取液从处理到开
始发挥作用，需要一段时间，细胞可能会对其产生一
定抗性，从而使prfA表达量在0.5h时处于上调阶段。
由实验可知，棘托竹荪提取液对单增李斯特菌
细菌转录水平和能量代谢的影响尤为明显，对细胞
膜的破坏能力也较强。其特性与同为植物源天然产
物的乌梅提取液[24]、蓝莓提取物 [25]较为类似，这也可
在一定程度上说明了植物源天然产物的抑菌作用机
制基本相同。课题组还将在后期进一步开展研究工
作，以深入探究棘托竹荪提取液对食源性致病菌的
抑菌机理。
参考文献
[1] 刘振祥，张胜. 食用菌栽培技术[M]. 北京：化学工业出版
社，2007：122-127.
[2] 江玉姬，王宏雨，谢宝贵，等.食用菌的抗氧化活性及竹荪抗
氧化物质提取工艺的优化[J].热带作物学报，2011，32（1）：76-78.
[3] Malaguarnera L， Ferlito L， Lmbesi R M， et al .
Immunosenescence：a review [J] ． Archives of Gerontology and
Geriatrics，2001，32（1）：1-14.
[4] 林海红，林浪. 长裙竹荪对大鼠血脂的影响[J]. 福建农业大
学学报，2000，29（2）：238-241.
[5] 林玉满，苏爱华. 棘托竹荪凝集素的纯化及其生化特性[J].
植物资源与环境学报，2004，13（3）：1-6.
[6] 蔡美珠，唐礡. 竹荪托盖液对小鼠肝、肾功能的影响[J]. 医
学理论与实践，2004，17（5）：497-498.
[7] 杜昱光，白雪芳，卜宗式，等. 竹荪深层发酵菌丝体对小鼠
免疫功能的影响及其抗肿瘤活性的影响 [J]. 中国食用菌，
1998，17（5）：25-26.
[8] N Kodama，K Komuta，H Nanba. Effects of maitake（Grifola
frondosa） D -fraction on the activation of NK cells in cancer
patients[J]. Journal of Medicinal Food，2003，6（4）：371-377.
[9] 檀东飞，黄儒珠，卢真，等. 棘托竹荪菌托的化学成分及抑
菌活性研究（I）[J]. 菌物学报，2006，25（4）：603-610.
[10] 檀东飞，黄儒珠，卢真，等. 棘托竹荪菌盖的化学成分及抑
菌作用研究（II）[J]. 微生物学杂志，2007，27（6）：8-12.
[11] 檀东飞，黄儒珠，卢真，等. 棘托竹荪子实体鲜品的化学成
分及抑菌活性研究[J]. 福建师范大学学报：自然科学版，2010，
26（2）：100-105.
[12] 卢惠妮，潘迎捷，孙晓红，等. 棘托竹荪子实体抑菌活性的
研究[J]. 食品科学，2009，30（15）：120-123.
[13] Vazquez-Boland JA，Kuhn M，Berche P，et al. Listeria
图3 单增李斯特菌相关基因相对表达量变化
Fig.3 Relative expression levels of several related genes
resistance of Listeria monocytogenes
注：a.prfA；b.ActA；c.Iap。
处理时间（h）
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
2-
△△
Ct
a
处理时间（h）
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
2-
△△
Ct
b
处理时间（h）
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
2-
△△
Ct
c
（下转第160页）
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Science and Technology of Food Industry 研究与探讨
2015年第14期
pathogenesis and molecular virulence determinants [J]. Clinical
Microbiology Reviews，2001，14（3）：584-640.
[14] 孙会芳. 单核细胞增生性李斯特杆菌单克隆抗体的制备
[D]. 兰州：西北民族大学，2007.
[15] 小佩尔扎MJ，里德RD，詹ECS. 微生物学[M]. 武汉大学生
物系微生物教研室译. 北京：科学出版社，1987：359-361.
[16] 曹奕，孙晓红，陈燕，等. 微量肉汤稀释法测定长裙竹荪多
种提取液对食品中常见细菌的抑制效果[J].食品工业科技，2013
（1）：16-20.
[17] 邹晓蕾，刘礼崔，罗立新. 细菌总RNA提取方法的比较[J].
现代食品科技，2013，30（7）：1948-1954.
[18] 孙文烁，靳梦曈，王敬敬，等. 运用Real time PCR建立即食
虾中副溶血性弧菌分子预测模型[J]. 现代食品科技，2014，30
（7）：142-148.
[19] Maria A O，Eliana G R，Alzira M B，et al. Quantification of
Listeria monocytogenes in minimally processed leafy vegetables
using a combined method based on enrichment and 16SrRNA
real-time PCR[J]. Food Microbiology，2010（27）：19-23.
[20] Peter R，Martina K，Martin W，et al. Detection of Listeria
monocytogenes in food using a combined enrichment/real -time
PCR method targeting the prfA gene[J]. Research in Microbiology，
2006（157）：763-771.
[21] Xiaohui Z，Xinan J. Polymerase chain reaction detection of
Listeria monocytogenes using oligonucleotide primers targeting
actA gene[J]. Food Control，2005（16）：125-130.
[22] Kim B R，Nam H Y，Kim S U，et al. Normalization of reverse
transcription quantitative-PCR with housekeeping genes in rice
[J]. Biotechnology Letters，2003，25（21）：1869-1872.
[23] 王海艳，刘中学，石新华，等. 单增李斯特菌及其表面蛋白
的研究进展[J]. 检验检疫科学，2006，16（2）：76-80.
[24] 耿飞，王伟，周涛. 乌梅提取液对李斯特菌的抑菌机理[J].
食品科学，2012，32（15）：88-93.
[25] 谢庆超. 蓝莓提取物的抑菌效果及其抑制副溶血性弧菌
机理的研究[D]. 上海：上海海洋大学，2012.
元素含量表明，抹茶的生化成分丰富，水浸出物含量
较高，均值为46.9%~49.3%，茶滋味鲜，游离氨基酸
总量较高，均值为6.00%~6.52%；矿质元素也很丰富，
Se、K、Ca、Mg、Fe等矿质元素高于普通富硒茶叶（恩
施玉露），且不含重金属元素。电子鼻LY型传感器研
究表明，蒸青富硒抹茶可能含一定量的硫化物成分。
因此，采用蒸青杀青能够更好地固定富硒抹茶的硒
元素、茶多酚、总糖等主要营养物质和香气物质，可
以作为提高富硒抹茶品质的加工措施；此外，电子鼻
和电子舌可以作为评价抹茶品质的有效手段。
参考文献
[1] 尹春英，刘乾刚. 抹茶溯源及其利用[J]. 茶叶科学技术，2008
（2）：13-15.
[2] 黄媛媛，王煜，胡秋辉． 抹茶冰淇淋，抹茶奶茶和抹茶面条
的研制[J]. 食品科学，2004，25（4）：122-124．
[3] 程华平，万娅琼，李翠红，等． 抹茶酥性饼干加工技术的研
究[J]. 食品工业科技，2011，32（12）：374-376．
[4] 葛云，马淑凤，王周平． 抹茶奶茶加工工艺研究[J]. 食品研
究与开发，2013，34（5）：35-38．
[5] 王飞飞，余芳，辛志宏，等. 富硒绿茶功能成分的超声波提取
技术及其抗氧化活性研究[J]. 食品科学，2007，28（1）：142-147.
[6] 胡秋辉，潘根兴，朱建春，等. 硒提高茶叶品质效应的研究
[J]. 茶叶科学，2000，20（2）：137-140.
[7] 安康市质量技术监督局. DB6124.01-2010富硒食品硒含量
分类标准[S]. 安康市质量技术监督局，2010.
[8] 朱德文，岳鹏翔，袁弟顺，等. 不同杀青方法对绿茶品质的
影响[J]. 农业工程学报，2009，25（8）：275-279.
[9] 胡云铃，黄建安，施兆鹏，等. 不同杀青方式对绿茶品质的
影响[J]. 茶叶，2008，34（1）：24-28.
[10] 李拥军，施兆鹏. 炒青绿茶加工中香气的动态变化[J]. 茶
叶科学，2001，21（2）：124-129.
[11] 敖存，唐德松，张俊，等． 不同杀青工艺对秋茶香气品质的
影响[J]. 食品工业科技，2011，32（5）：309-311.
[12] 中国标准出版社第一编辑室. 茶叶标准汇编[M]. 北京：中
国标准出版社，2011.
[13] 钟耀广. 功能性食品[M]. 北京：化学工业出版社，2004.
[14] 杨敏文. 快速测定植物叶片叶绿素含量方法的探讨[J]. 光
谱实验室，2002，19（4）：478-481.
[15] 师萱，陈娅，符宜谊，等. 色差计在食品品质检测中的应用
[J]. 食品工业科技，2009，30（5）：373-375.
[16] 韩立新，李冉. ICP-AES法测定茶叶、茶水中的矿物质和
微量元素[J]. 光谱学与光谱分析，2002，22（2）：304-306.
[17] 崔海容，陈建华，谷家越，等. 顺序注射HG-AFS法测定富
硒农产品中无机硒和有机硒[J]. 分析科学学报，2005，21（5）：
545-548.
[18] 张健，章苏宁，田怀香，等. 不同品种茶叶有效成分及香气
特征的比较分析[J]. 食品工业，2011（4）：90-93.
[19] 刘远方，李阳，梁飞，等. 绿茶香气的电子鼻分析方法研究
[J]. 食品科技，2012，37（1）：58-62.
[20] 甘芝霖，刘远方，杨阳，等. 基于电子鼻技术的信阳毛尖茶
品质评价[J]. 食品工业科技，2013，34（2）：54-57.
[21] 姜莎，陈芹芹，胡雪芳，等. 电子舌在红茶饮料区分辨识中
的应用[J]. 农业工程学报，2009，25（11）：345-349.
[22] 龚淑英. 日本感官评审茶叶的方法及特点[J]. 中国茶叶加
工，2001（4）：50-51.
[23] IKEDA G，NAGAI H，SAGARA，Y. Development of food
kansei model and its application for designing tastes and flavors
of green tea beverage[J]. Food Science and Technology Research，
2004，10（4）：396-404.
[24] 刘东娜，聂坤伦，杜晓，等. 抹茶品质的感官审评与成分分
析[J]. 食品科学，2014，35（2）：168-172.
[25] 杜晓，王孝仕，何春雷. 蒸青绿茶加工过程中品质生化成
分的变化[J]. 西南农业学报，2006，19（1）：116-119.
[26] 李支霞，方世辉，王志耕. 超微茶粉酸奶的工艺优化[J]. 茶
业通报，2005，27（1）：27-29.
（上接第155页）
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