全 文 ：浙 江 农 业 大 学 学 才良 19 ( 2 ) : 1 8 3 ~ 1 8 7 , 19 9 3
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v e r s i t y
红托竹荪的生物学特性研究
黄义 勇① 曹若 彬
(浙江 农业大学植保系 , 杭州 31 。〔) 2 9)
摘 要 对红托竹荪 ( iD ct y 口户h o ra 。 , b or 、 zva 纽 M aZ gn )的生物学特性进行了研究 ,描述了子 实
体 、双核菌丝和担抱子的形态及芽殖 ;证明了其能利用葡萄糖 、 蔗糖和可溶性淀粉等作碳源 ,能利用
无机氮和有机氮作氮源 . 菌丝生长的最适碳氮比为 30 : 1 , 最适温度为 23 ~ 25 ℃ ,适宜的酸碱度为
p H S
.
0 一 6 . 0 , 最适为 p H S , 5 ;菌丝 生长 的最适宜空气相对湿度为 81 % ,最适宜的料水比为 1 : 2 . 2 ,
光照对菌丝生长具有抑制作用 ,且 蓝光对生长抑制作用最大 ,橙光最小 菌丝在 C O Z 浓度为 。 . 03 一
0
.
3 3%的范围内均能生长 , 以浓 度 。 . 13 % 时生长最好 . 菌丝体生长时分泌的纤维素酶的活力极弱 .
几乎不能崩解滤纸 . 喷施 。 , 1 %和 。 . 5 %的葡萄糖以及 0 . 15 %的亚油酸可促进子实体原基的形成 .
.
关 键 词
中图分类
红托竹荪 ; 生物学特性 ; 营养 ; 环境 因子
5 6 4 6
.
9 ; Q 9 4 9
.
3 2 9
. 白 . . . . 白 .
5
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B io l o g i c a l e h a r a e t e r is t ie s o f D ic t夕叩ho ar r u b r o v a lv a t a . Jo u r n a l o f Z h e ji a o g A g r i e u l t u r a l U n i v e r s i t t y ,
1 9 9 3
,
1 9 ( 2 )
:
18 3 ~ 1 8 7
A b s t r a c t T h e b io lo g i e a l e h a r a e t e r i s t ie s o f 压 c z , P h o r a r: 一 b or : ,a l : , a t a w i t h r e fe r e n e e t o it s n u r r i-
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e r a t u r e 2 3 ~ 2 5℃ . p H 5 . 5 , r a la t iv e h u -
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乐 翻阳卜
收稿 日期 : 19 9 1一 l x 一 2 0
①现在广州市微生物研究所工作
浙 江 农 业 大 学 学 报 9 1卷
红托竹荪 (Di ct yo ho Pa r: u bo rv al vt a a )是著名的珍贵食用菌 ,有 “ 真菌之花 ” 的美称 . 其独特
的风味受到人们的喜爱 ,使需求量 日益增加 . 为提高其产量 , 因而研究其生物学特性具有很大
的现实意义 .
1 材料与方法
1
.
1 材 料
红托竹荪 ( D . o b~ a vl at a) 菌株 0D ,
, 采 自安吉竹林 , 经组织分离获得 . 鉴定参照减穆对该种的
描述 l[ 一 2 : .
1
.
2 培养墓
1
.
2
.
1 普通试验培养墓 ( w . s . A ) 小麦 5 0 9 ① ,蔗糖 2 9 , K H ZP O ` 0 . 0 5 9 , M g s O 、 · 7 H ZO
0
.
0 5 9
,琼脂 2 9 ,蒸馏水 1 0 0 m L , p H 6 . 0 .
1
.
2
.
2 碳源试验培养基 蛋 白脏 1 9 , K H ZP O ` 0 . 1 9 , M g S O 、 · 7 H 20 0 · 0 5 9 , V B , 1 0 0 拌g /
L
,琼脂 2 9 ,蒸馏水 10 0 m L , p H 6 · o ·
1
.
2
.
3 氮源试验培养基 葡萄糖 2 9 , K H Zp O ; 0 . x g , M g S O ` · 7H ZO o · 0 5 9 , V B , I QO 胖 g /
L
,琼脂 2 g m 蒸馏水 1 0 0 m L , p H 6 . 0 ·
1
.
2
.
4 碳氮比试验培养基 ( N H ; ) 2 5 0 ; 0 . 1 9 , N a H ZP O ; 0 . 1 9 , M g S O 、 · 7H Z O 0 . 0 5 9 , K C I
0
.
1 9
,
C a C I
: ·
2H
2
O 0
·
0 3 7 9 , V B
, 1 0 0拜g / L , V B : 10 0 # g / L ,琼脂 2 9 ,蒸馏水 1 0 0 m L , p H 6 . 0 .
L 2
.
5 制备纤维素晦的发酵培养基 梭 甲基纤维 素钠 ( C M C 一 N a )0 . 5 9 , 蛋 白膝 0 . 1 9 ,
( N H
`
)
2
5 0
` 0
.
2 9
,
K H
Z
P O
` 0
.
1 9
,
M g SO
; · 7H
2
0 0
·
1 9
,
V B
, 1 0 0 拌g / L , 蒸馏水 1 0 0 m L , p于I
6
.
0
.
1
.
3 方 法
担饱子经 3%戌二醛 (P H 6 . 5 的磷酸 缓冲液配制 ) 固定 、 制片 、 室 温下 空气 千燥 , F E O L -
1 2 0 o E X 型透射电子显微镜的扫描附件观察 ,加速电压 60 k V , 电镜放大倍数为 8 00 .
测定菌丝生长的营养需要时 ,在基本培养基中加入相应的碳 、 氮源 . 在 W S A 培养基上 , 4
一 35 ℃的范围内测定温度对菌丝生长的影响和在 p H Z一 8 范围内测定酸碱度对菌丝生长的影
响 · 空气相对湿度是在大小相同的玻罩内 , 以各种盐的饱和溶液控制相应的湿度 ’ 3 、 . 二氧化碳
试验则参照苏俐英的的方法 〔们 . 基物含水量试验是在木屑 、 数皮 、 棉籽壳培养基 (木屑 6 0% ,数
皮 24 % ,棉籽壳 14 % ,蔗糖 1% , 石膏粉 1% )上 , 以 1 : 1 . 0一 1 : 3 . 4 的料水 比进行测定 . 在光
照试验中 ,以白色 日光灯管为光源 , 连续光照 ,用不同层数的描图纸和黑纸控制光的强度 ,并用
国产 S T 一 8 0B 型照度计测定其强度 ; 用不同颜争的彩色皱纸控制光质 .
在纤维素酶活性的测定中 , 以 28 ℃ , 在发酵培养基 中振荡培养 6 天 ( 10 次 /而 ,飞)后过滤得
到粗纤维素酶液 ,采用以下两种方法测定 : ①杯碟法「5〕 : 反应基质为 c M C 一 N a 0 . 5 9 ,琼脂 2 9 ,
蒸馏水 1 0 m L , p H 6 . 0 . 混匀融化后倒平板 ,厚约 3 m m ,凝固后在平板上挖 直径 4 m m 的小
孔 , 定量注入粗酶液 , 45 ℃下保温消化 24 h , 然后用 0 . 5%刚果红染 色 , 观察透 明圈的出现 , 以
圈的直径大小作为酶活力大小的指标 . 刚果红染色的方法参照文献〔6〕. 滤纸崩解法 f ,二: 取粗酶
① 以纯小麦 5 0 9 加水煮沸 20 m in ,过馆去渣 ,取滤液作培养基用
黄义勇 曹若彬 红托竹荪的生物学特性研究
液 4m L, 加 p H 4 . 6 , 0 . 2 m ol / L 醋酸缓冲液 l m L ,再加入 I c m , 滤纸 1 张 , 40 ℃往复摇床保温
24 h 后 ,观察滤纸崩解情况 .
测定某些化合物对子实体原基形成的影响时 ,所选用的化 合物为 : ① 0 . 5 %和 0 . 1%的葡
萄糖溶液 ;② 0 . 15 %亚油酸 ;③ 3 , , 5` 一环腺嗦吟核昔酸 ( C A M P ) 1 0 ’ ` m ol / L ; 用清水作对照 . 分
3 次喷施 ,每次喷施量各为单位面积 ( 0 . 25 m Z ) 2 。。 m L . 当覆土层 中布满菌丝体和菌索时 ,进行
第一次喷施 , 其后第 10 天喷第二次 , 再在其后第 14 天喷第三次 .
2 结 果
2
.
1 形态特征
红托竹荪子实体的菌盖钟形 ,顶端具穿
孔 , 四周有肉格 , 表面有橄榄绿色恶臭的抱
体 ; 菌托 球形 , 紫红 色 ; 菌柄 圆柱形 , 长 18
c m
, 白色中空 , 直径 3 . 3 。 m ; 菌幕钟形 白色 ,
长 6 . 2 。m , 网眼多角形 . 一个担子产生 4一 8
个担抱子以 8 个担抱子居多 . 担抱子为椭圆
形 ,壁平滑 ,透明 , 大小为 .2 7一 .3 9 拜m 又 1 · 4
~ 1
.
8 拌m . 其外形有椭圆形一面 内凹的 ;也
有两侧面内凹 , 中央有一隆脊或椭圆形表面
光滑 ;或近 圆形 , 一侧 面内凹的 (图 1) . 担抱
子萌发可产生较长的芽管或芽抱子 .
双核菌丝多分枝 、分隔 , 常观察到锁状联
合 ,个别会产生单个梭状具短柄的芽抱子 ;初
期白色 ,培养时间长后 , 便具有不同程度的粉
红色 , 并分泌出橙黄色的色素渗入到培养基
上 (在 w S A 上 ) ;受机械损伤时变紫蓝色 .
2
.
2 营 养
红托竹荪可以利用大部分单糖 、双糖 、 多
糖等作为生长的碳素营养 (表 1) . 可见以 D -
果糖 、 蔗糖 、甘露糖和 D 一葡萄糖的效果最好 ,
而乳糖 、 鼠李糖和 D 一半乳糖却不能被作为碳
源利用 . 实验中也观察到 ,红托竹荪无法利用
草酸 、 水扬酸 、 D L 一苹果酸 、 丹宁酸和丁二酸
作为碳源 .
在氮源方面 , 红托竹荪能利用一些无机
氮源 ,其中以钱盐最好 . 如氯化钱 、 硝酸按 、 硫
酸铁等 ;也能够利用酒石酸按 、 牛肉膏等多种
有机氮源 , 但不能利用硝酸盐如硝酸钾 、 硝酸
图 1 扫描电镜下的担袍子 (8 0 0 0 又 )
F sg
.
1 cS a n n i n g e l e e t r o n m i e
r o g r a p h
s o f b a
s id i o
s p o r e s
表 1
T a b l e
各种碳源 (2 % )对 菌丝生长的影响 ①
T h e e f fe e t o f v a r i o u s e a r b o n 5 0
、 l r c e s
( 2% )
t e s t e d o
n t h e rn y e e l i a l g r o w t h
碳 , 擎黔 { 碳 源 禁黔
D
一果糖 21 . 2
}
。纂竺 :: . :蔗 糖 20 . 7 }双了圣纤苦不 ’ 艺 ”D一甘露糖 2 0 . 1 } 姚_ _ J少 ’ .}()t
D
一葡萄塘 ” . 4 } 鼠竺哭` ” ’ ”
D
一麦芽糖 15 . 7 } D声乳竺 “ · ’
L一阿拉伯搪 15 . 3 ! 对 照 1 0· o
山梨醉 1 4 . 5
① 2 3 ,C . 12 d a y s
浙 江 农 业 大 学 学 报 1 9 卷
钠及 一精氨酸盐 、 酵母膏 、 L 一甲硫氨酸作为其生长的氮源 (表 )2 .
表 2 各种氮源 (0 . 2 % )对 菌丝生长的影响①
T a b le 2 T he e f f e e t o f v a r i o
u s n i t
r o g e n s o u r e e s ( 0
.
2写 ) t e s t e (贡 o n t h e rn y e e li a l g r o w t h
氮 源 擎黔…{ 氮 源 擎黔 …, , 赞黔 …氮 源 叹黔抓化钱 3 0· 9
}
L一峥酸 18 .6 …D L一 “ 一` 基丙酸’ 2 6’ 5 ……硝 酸” 1 2· 6牛肉膏 30 · 4 }{ _竺 _ _ `匕 ” { L一丝氨酸 2 5` 5 {) 醉母资 ` 1 · 5酒石酸钱 2 8 . 3 l “ 一 “ 虱酸 ’ .7 3 } 」 蛋 白陈 2 5· 2 {… `肖酸钠 ’ 。 · 9硝酸按 27 · 6
}
D气哭竺 , ’ “ 8 } 酪肮水 解物 2 .4 2 }……L一 甲硫` “ 8 ’ 7天冬欧胺 2 .6 8 l ~竺竺节_ _ 二 ` .4 ` …“ 一天冬 ` 酸 ` 9 ` 5 …’ 寸 ” ` 2 ’ 2硫酸按 2 .6 8 …“ 一” ’ “ ” ` 2 ` ’L 一丙氨酸 2 6 . 8
① 2 3℃ , 2 2 d a y s ; ② oC n e e n t r a t i o n o f t h e n i t r o g e n s o u r e e s 15 0 . 4 %
在基本培养基中 ,加入不同量的蔗糖作为碳源 ,得到一系列碳氮比 , 试验结果表明 , 菌丝生
长最适宜的碳氮比为 30 : 1 .
.2 3 温度 、 湿度和酸碱度
红托竹荪的菌丝生长温度范围为 10 一 30 ℃ ,最适为 23 ~ 25 ℃ ; 在 p H 2 . 0一 8 . 。 内菌丝均能
生长 , p H S . 5 时为最适宜 .
基物含水量对菌丝生长有很大的影响 . 本试验培养基含 水量范 围为 1 0 % ~ 3 40 % , 以
2 2 0%为最适宜 . 菌丝生长的空气相对湿度范围为 45 % ~ 1 0 % , 最适为 81 % .
.2 4 光照和二氧化碳
菌丝体生长不需要光 , 在散射光下 , 菌丝生 长大为减少 ,与黑暗 (。 lx )下相比 . 其 日生长速
10叨607,钧30
ǎ次)恻公侧瑙琳洲泣刽佃
度减少 16 %一 40 % . 这种影响主要是由蓝光
引起的 , 而橙光对菌丝生长的抑制作用最小
( 见图 2) .
图 2 也表明 ,光强愈大 , 对菌丝生长的抑
制作用愈大 . 当光强达 3 o 0 lx 以上时 ,菌丝
很容易老化 ,呈粉红色 ; 而黑暗中生长者则呈
洁白色 . 菌丝生长的二氧化碳 浓度范 围为
0
.
0 3%一 0 . 3 3% ( w / w ) , 最适为 0 . 1 3 % .
.2 5 菌丝分泌的纤维素酶
杯碟法的测定结果表明 , 加入 0 . 2% ( v/
v ) 的 T w e n 一 8。 可以提高菌株 D 。 ,纤维素酶
的活性 ,透 明圈直 径为 18 . 5 m m , 而未加者
透 明圈直径为 16 . 0 m m . 用滤纸崩 解法 测
定 , 不论其培养液是否加入 T w e e n 一 80 , 分泌
A B C D E F G H 1 J K L
图 2 光对菌丝生长的影响
F ig
.
2 E f f e e t o f l ig l
l t o n m y e
七
Isa l g r o w t h
注 : A : 1 0 l x , B : 5 0 I x , C : 1 5 0 l x , D : 5 0 0 l x , E : 3 0 00 l x ,
F
: 5 o o o l x
,
G
: 橙光 , H : 红光 , I : 绿光 , J : 全光 , K :
黄光 , L : 蓝光
的纤 维素酶 的活性极 弱 , 几 乎不能崩 解天 然滤纸 ,这 说 明滤 液 中的纤维 素酶主 要成 分为
p
一
1
,
4
一葡聚糖酶 ( c : 酶 ) ,而其中的 c , 酶活性极低 〔 , 〕 .
2期 黄义勇 曹若彬 红托竹荪的生物学特性研究
2. 6几种影响子实体原墓形成的物质
试验结果指出 ,喷施一定浓度的亚油酸 ,葡萄糖都不同程度地促进了子实体原基的形成 ,
使菌蕾的数量增加和 出现的时间提早 . 其 中以喷施 。 . 弓%的葡萄糖效果最好 , 在单位 面积
(0
.
2 5 m
,
)上菌蕾数比对照多 10 个 ,菌蕾出现的时间比对照提早 n 夭 ; 其次为 1 . 0%的葡萄糖
和 。 . 15 %的亚油酸 ,单位面积上的菌蕾数分别比对照多 5 个和 3 个 , 菌蕾出现的时问分别 比
对照提早 8 夭 . 但用 10 “ 书 m ol / L 的 C A M P 处理的未出现菌蕾 .
3 讨 论
以上研究结果证明 ,红托竹荪能利用的碳素和氮素营养相当广泛 , 单糖 、 双糖 、 多糖及糖醉
等都可作为其生长的碳源 , 同样对多种无机氮和有机氮也能很好利用 . 在实验 中也观察到 ,它
不能利用酪氨酸 、 半脱氨酸及甘氨酸中氮素 .
温度 、湿度 、 酸碱度 、光照和二氧化碳等也是影响红托竹荪菌生长的重要因子 . 张光亚认为
红托竹荪菌丝生长最适温度为 15 ~ 18 ℃ , 最适空气相对温度为 60 % 一 70 % ! 8 ( ;而本研究结果
是 ,菌丝生长最适温度为 23 一 25 ℃ ,最适空气相对湿度为 81 % . 差异原因可能是 由于不同分
布区域的菌种所致 . 由于光照会抑制菌丝生长 , C O 。 浓度为 0 . 08 % ~ 0 . 13 %时可促进菌丝生
长 , 因此在菌丝生长阶段 , 应尽可能保持培养室或裁培场地较弱的光线和适当的通气 . 在实验
中也观察到 , 这种菌分泌的纤维素酶相当弱 , 故在裁培时选拔一些易于分解 、 利用的腐熟或半
腐熟的材料作为原料 .
一些研究表明 ,在培养基中添加亚油酸等植物油 ,可促进双袍蘑菇的菌丝体生 长和子实体
原基的形成及产量的提高 L,一 ’ 。 二; 1%葡萄糖可促进裸盖菇 (尸、 il o cy be p a 二 eo il fo lr 、 i、 )子实体的
高产 「` ’ 注. 本实验的结果也表明 , 0 . 5% 和 1%的葡萄糖可不同程度促进红托竹荪子实体原摧的
发生 . 由于外加适当的碳源不仅提供碳源和能量 . 同进也提高了基质的碳氮比 , 利于子实体的
发生 〔, , ` 2了. 因此 , 实际生产中 , 可以在菌丝体生长的适当时期 ,即营养生长向生殖生长转变的时
期 ,喷施一定浓度的亚油酸和葡萄糖 , 以促进子实体原基的形成和提高子实体的产量 .
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22 e h
a n召 5 T o n d Q u i m i o T H . T r o p i c : , I n 、 u 、 、l r o m s b i o l o g i e ,、 1 n a t u r e ; . n ( 1 e u l t i v ;、 t i o n rn o t } l o d s r l o n g k o n g : t l: 。 c l、 . 。 。 、 e
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