全 文 ：由于脑缺血 ,导致皮质、海马、基底节等结构损伤 ,随
之出现痴呆症状 [10 ] ,由于胆碱能神经元和 AV P肽能
神经元受损 ,脑内学习、记忆的神经生化基础受损 ,
Pepaz环路基础破坏 ,因而出现记忆障碍 . 康复训练
在脑梗死神经功能恢复的研究中有报道 ,发现脑梗死
致运动皮质损伤后 ,康复训练能使脑损伤的周边区发
生功能重组 ,非损伤区在运动功能恢复上发挥重要作
用 [11 ] ,其次康复训练还可促进大脑非损伤区形成功
能环路的重建 [12 ] . 李昭瑛等 [13 ]报道:强化环境的训
练能明显提高学习能力 ,使中枢胆碱能神经元功能活
力有所提高及胆碱能神经元各种结构的部分改善 .
综上所述 ,脑梗死后可出现记忆障碍 ,康复训练
使一些运动能力逐渐恢复 ,从而促使神经功能恢复及
学习记忆功能的逐渐建立 . 对于具体功能恢复的建
立、改变还需进一步研究探讨 .
参考文献:
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编辑 许福明
· 技术方法· 文章编号: 1000-2790( 2000) 12-1558-03
草麻黄中补体抑制成分的纯化和活性
杨 康1 , 刘维永 1 ,白 云 2 ( 1第四军医大学西京医院
心血管外科中心 , 陕西 西安 710033, 2第三军医大学全军免
疫研究所 )
关键词: 麻黄 ;补体抑制剂 ;薄层层析
中图号: R931. 6 文献标识码: A
0 引言 现已明确补体激活成分 C3a, C5a, M AC等是一组
重要的炎性介质 ,在感染、创伤 、缺血再灌注损伤、自身免疫疾
病等多种原因引起的急、慢性炎症反应中 ,参与介导了对自身
组织的损伤 . 因此 ,用补体抑制剂阻断补体活化可能成为治
疗炎症的一种有效手段 . 国外已成功获得基因重组的可溶性
补体一型受体 ( s CR1) ,并用于治疗大鼠心肌缺血再灌注损
收稿日期: 1999-10-18; 修回日期: 1999-11-20
作者简介:杨 康 ( 1964-) ,男 (汉族 ) ,云南省昆明市人 . 博士 (导师刘
维永 ) . Tel. ( 029) 3375311 Emai l. Jinzx @ fmmu. ed u. cn
伤 ,疗效显著 . 目前已临床试用治疗急性成人呼吸窘迫综合
症 ( ARDS) . 但 sCR1价格昂贵 ,产量有限 ,难以推广 . 草麻黄
在我国分布广泛 ,价廉易得 ,是中药方剂中的常用药材 . 我们
以薄层层析分析控制 ,干柱层析制备 ,从草麻黄水抽提物中获
得一单体成分 ,体外实验证实该成分具有良好补体抑制活性 .
1 材料和方法
1. 1 抽提纯化 草麻黄生药 (产地甘肃 ) 400 g ,加 pH 4. 0蒸
馏水 2000 m L, 60℃过夜 ,煮沸 1 h ,过滤除渣 . 2 mo l· L- 1
NaOH调 pH值至 9. 0,出现大量沉淀 , 1500 g离心 10 min,弃
上清 . 无水乙醇洗沉淀 3次 , 60℃烘干后得深褐色粗品 8. 3
g. 补体经典溶血证实粗品有抑制活性 . 8. 3 g粗品粉末溶于
蒸馏水中 , 2 mol· L- 1 HCl调 pH值至 4. 0,室温下磁力搅拌 1
h. 离心弃沉淀 . 2 mo l· L- 1 NaO H调上清 p H值至 9. 0,离心
弃上清 . 上述酸溶碱沉淀过程重复 3次 ,最后所得碱沉淀物
溶于 40 mL蒸馏水中 ,调 p H值至 4. 0, 40℃保存 . 硅胶
GF254(青岛海洋化工厂生产 ,粒度: 200～ 260目 )铺薄层层析
板 , 110℃ 30 min活化 ,粗品溶液点样后吹干 ,以丙酮∶正丁
醇∶水= 5∶ 4∶ 1的混合溶液为移动相 ,上行展开 . 紫外灯
( 254 nm)下观察样品分离情况 ,以薄层层析条件进行干柱层
析: 柱直径 2. 5 cm,柱高 50 cm,下行展开 . 根据薄层层析比移
1558 第四军医大学学报 ( J Fourth M il Med Univ ) 2000; 21( 12)
值 ( Rf值 )将柱体切成 3段 ,以 p H 4. 0的蒸馏水分别洗脱 . 洗
脱液调 p H值至 9. 0, 均出现沉淀 ,离心弃上清 . 沉淀物反复
酸溶碱沉淀 5次以除尽有机溶剂 . 以补体溶血实验分别测定
3个样品的补体抑制活性 .
1. 2 补体抑制活性检测 分别在体外检测了纯化产物对人
和猫血清经典活性、旁路活性和后段活性的抑制作用 . 经典
活性和旁路活性按常规微量方法进行 [1 ]. 后段活性检测参照
文献 [ 2]进行 . 样品补体抑制活性用其对上述 3个途径溶血
的抑制百分率表达 ,按以下公式计算: 溶血抑制百分率= (对
照孔 A415-样品孔 A415 ) /对照孔 A415× 100% ,以上 3个实验
中每个 CIC稀释度设 3个复孔 ,每个实验重复 3次 .
2 结果
2. 1 抽提纯化 400 g草麻黄生药得粗品 8. 3 g. 用补体经
典溶血实验测粗品具有抑制活性 . 由于溶解时每次都出现沉
淀 ,粗品的抑制活性无法定量 . 粗品的水溶液经薄层层析得
到 3个点 , Rf值分别为 0. 85, 0. 43和 0. 12,样品获得良好分
离 . 补体经典溶血实验鉴定 3个成分 , Rf值为 0. 85的成分有
抑制活性 . 干柱层析后所得补体抑制成分为白色无定型粉
末 ,共 1. 135 g ,得率为 13. 7% (粗品计算 ) . 此成分经两个展
开系统薄层层析均为单点 ,提示可能为单体物质 .
2. 2 补体抑制活性 该成分对补体经典途径、替代途径 、后
段成分都有剂量依赖的抑制作用 ( Fig 1～ 3) ,其中对经典途径
的抑制最为显著:浓度为 25 mg· L- 1可完全抑制补体经典溶
血 (人血清 );对旁路途径的抑制作用次之: 完全抑制所需的浓
度为 100 mg· L- 1 ,相当于抑制经典途径的 4倍 . 对后段成分
的抑制作用较差: 500 mg· L- 1才能获得 60. 7%的溶血抑制
率 ,完全抑制所需的样品浓度为 1 000 mg· L- 1以上 . 此外 ,
该成分对人和猫血清的补体抑制活性有显著差异 , 对人血清
的作用明显优于对猫血清 .
图 1 CIC对补体经典途径的抑制作用
3 讨论
3. 1 抽提纯化方法 1989年 ,凌敏等 [3]报道麻黄水抽提物
中碱沉淀物具有抑制补体溶血活性 ; 1995年该作者在英国
Morgan实验室用薄层层析法获得从 3 g草麻黄水抽提物粗
品中 250 mg单体成分 ,得率为 8. 3% ,证实有良好的补体抑
制活性 [4] . 但凌氏方法存在两方面的不足:一是薄层层析制
备能力低 ,多为毫克级 ,不能大量生产 ;而且由于补体抑制成
份不溶于有机溶剂 ,只溶于水 ,点样困难 . 二是凌氏方法中用
蒸馏水作为展开剂 . 从理论上讲 ,吸附层析不能用水作为展
开剂 ,以免降低薄层活性 ; 而且由于水的极性最大 ,混合物中
如存在几种极性较小的物质 ,则难以获得分离 . 我们曾多次
用不同 p H值的水展开 ,样品均被推至溶剂前沿 ,不能分离 .
鉴于补体抑制成分为酸性物质 ,我们将抽提液 pH值调至
4. 0, 60℃浸泡过夜 ,增加了该成分溶解 , 提高了抽提效率 ; 并
且发现用丙酮: 正丁醇: 水= 5: 4: 1的混和溶液作为展开剂 ,
在载玻片薄层层析上粗品获得满意分离 . 此外 ,我们将薄层
层析作为分析粗品和制备过程中的质控手段 ,制备分离则用
干柱层析 ,一次获得纯品 1. 135 g ,得率 13. 7% , 产量和得率
均明显提高 .
图 2 CIC对补体替代途径的抑制作用
图 3 CIC对补体后段活性的抑制作用
3. 2 补体抑制机制初步探讨 补体活化是多种蛋白分子参
与的级联反应过程 ,按参与的蛋白成分不同分为两条途径: 经
典途径和替代途径 ,前者的活化顺序为 C1 , C4 , C2 , C3 ,后者
由 B因子参与从 C3开始 ; C5-C9的后段成分为二者共同的途
径 . 本研究中 ,纯化产物对经典途径和替代途径有良好的抑
制作用 ,提示有两种可能:一是通过对后段成分单一靶点的作
用实现其对补体双途径的抑制 ;二是在经典途径和替代途径
中均存在作用靶点 . 反映后段活性的反应性溶血实验发现 ,
该成分对后段活性虽有抑制作用 ,但其活性远低于对经典途
径和替代途径的抑制活性 , 说明该成分对补体系统至少有 3
个以上的作用靶点 .
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编辑 袁天峰
· 经验交流· 文章编号: 1000-2790( 2000) 12-1560-01
腓肠肌肌皮瓣治疗胫骨外露 6例
张 坤 ,靳卫章
(西安市红十字会医院创伤骨科 ,陕西 西安 710054)
关键词: 肌皮瓣 ;修复 ;组织缺损
中图号: R622. 1 文献标识码: B
0 引言 小腿严重的开放性骨折往往发生软组织缺损 ,骨折
端内固定外露情况 . 1999年以来我们采用腓肠肌内侧头肌皮
瓣覆盖外露骨折端及创面 6例取得满意效果 .
1 对象和方法
1. 1 对象 本组 6例均为男性 ,年龄 21～ 43(平均 31)岁 ;其
中左小腿开放骨折 4例 ,右小腿开放骨折 2例 ;均为车祸所致
挤压伤 ,碾挫伤 ,皮肤缺损骨感染外露时间 2～ 9 mo,外露面
积 6 cm× 10 cm～ 3. 5 cm× 2 cm.
1. 2 方法 首先对创面进行彻底清创 ,切除周缘不稳定瘢痕
及内芽组织 ,对骨感染的病例 ,需切除所有死骨 ,刮凿骨面至
出血为至 . 以抗生素溶液冲洗创面和骨面 ,再以 1 g· L- 1新
洁尔灭溶液浸泡创面 15 min,用无菌盐水彻底冲洗 . 切取肌
皮瓣: 切取肌皮瓣应根据创面部位 ,面积确定范围 . 皮瓣前缘
不得超过胫骨前面的内侧缘 ,后缘可稍超过小腿中线 ,上界为
月国窝线 ,下界位于小退中下 1 /3交界处 . 于胫骨的前缘 ,沿已
修整的创面向胫骨远端纵行切开皮肤 ,皮下至深筋膜下肌膜
上 ,为防止肌皮血管损伤边切开边将筋膜与肌膜缝合 . 切至
中下 1 /3交界时 ,切口弯向后侧接近中线 ,同股骨内髁肌肉起
点及小腿后侧中线纵行切开之切口相接 . 小腿后侧中线切口
深筋膜下可见腓肠神经及伴行静脉 ,勿伤之 . 显露腓肠肌 ,将
其由中线分开 ,并将内侧肌与深面的比目鱼肌钝性分离 ,向下
游离至小腿中下 1 /3中界外 ,切断腓肠肌下端 ,将皮瓣向上翻
转 ,切除腓肠肌深面肌膜 ,以盐水纱布覆盖 . 将肌皮瓣远端边
收稿日期: 1999-11-10; 修回日期: 1999-12-03
作者简介:张 坤 ( 1963-) ,男 (汉族 ) ,陕西省西安市人 . 医学学士 ,主
治医师 . Tel. ( 029) 7850012 BP. 999-150986
缘间断缝合 3～ 4针 ,牵向受区 ,用肌瓣填充骨腔和组织缺损
的腔隙 ,皮瓣与创缘做间断缝合固定 . 供皮区游离植皮 . 膝关
节屈曲位石膏固定 .
2 结果 本组 6例肌皮瓣全部成活 . 4例切口Ⅰ 级愈合 , 2
例切口Ⅱ级愈合 . 2例骨不连接术后半年骨折愈合 , 2例骨折
已有愈合征象 .
3 讨论 胫骨外露创伤深 ,面积大 ,周缘血运差 ,感染性炎症
存在 ,往往伴有骨髓炎 . 要求修复时 ,移植物血运丰富 ,抗感
染力强 ,易成活 ,有一定的厚度及柔软性 [1] . 以住所采用的交
腿皮瓣因受比例、面积和部位等因素的限制 ,而使应用受到影
响 . 游离血管的移植物 ,要求具有一定的吻合血管技术 ,多因
受区血管质量差 ,影响成活而不得不放弃手术方案 [2] . 本法
所采用的腓肠肌肌皮瓣有独立的血管肌枝供应 ,具有血运丰
富 ,抗感染力强 ,转移范围大 ,操作简便等特点 ,对小腿中上段
皮肤缺损能较好覆盖 ,对伴有感染的创面更具优越性 . 由于
该肌皮瓣是血供丰富的肌肉组织与周围组织建立丰富的血
供 ,从而改善了局部血液循环 ,促进骨折愈合 [3] .
本法成功的关键在于 ,术前应采取措施增强患者抵抗力 ,
纠正贫血 ,加强换药 ,根据药敏试验应用敏感抗生素减轻创面
炎症表现 . 术中彻底清除创面炎症组织及不稳定瘢痕 ,凿去
死骨 ,清理钢板周围分泌物 ,用新洁尔灭液反复冲洗浸泡创
面 ,并置入敏感抗生素 . 切取皮瓣要求足够的面积和长度 ,防
止过份扭曲和牵拉皮瓣而影响皮瓣血液循环 . 内固定钢板外
露 ,可根据需要继续留在伤口内不影响皮瓣愈合 . 本结果显
示 ,腓肠肌内侧头肌皮瓣对小腿中上段骨外露创面能较好覆
盖 ,对伴有感染的病例更具优越性 ,是治疗小腿中上段胫骨外
露的一种较好方法 .
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编辑 潘伯荣
1560 第四军医大学学报 ( J Fourth M il Med Univ ) 2000; 21( 12)