全 文 ：◇药物分析◇
不同粉碎方法对独活中蛇床子素和二氢欧芹醇
当归酸酯含量测定的影响
张亚中，蒲婧哲，刘军玲，袁 杰，翟宏焱，班永生
( 安徽省食品药品检验所，安徽 合肥 230051)
摘要:目的 考察不同粉碎方法对独活中蛇床子素和二氢欧芹醇当归酸酯含量的影响。方法 分别采用粉碎机和铜钵两种粉
碎方法对独活进行粉碎处理，采用 HPLC法测定其中蛇床子素和二氢欧芹醇当归酸酯的含量。结果 不同粉碎方法处理的独
活中两者含量差异很大，铜钵法处理的样品中蛇床子素的含量明显高于粉碎机处理的样品，而二氢欧芹醇当归酸酯的含量却有
所降低。结论 测定独活中蛇床子素和二氢欧芹醇当归酸酯的含量时，应采用铜钵粉碎。
关键词:独活;粉碎方法;蛇床子素;二氢欧芹醇当归酸酯
Effects of different grinding methods on the content of osthole and
columbianctim in Angelicae Pubescentis Radix
ZHANG Ya-zhong，PU Jing-zhe，LIU Jun-ling，et al
(Anhui Institute for Food and Drug Control，Hefei，Anhui 230051，China)
Abstract:Objective To study the effects of different grinding methods on the content of osthole and columbianctim in Angelicae Pubes-
centis Radix．Methods The content of osthole and columbianctim was detected in pulverizer grinding and copper bowl grinding sample
by HPLC． Results The content of osthole and columbianctim in different grinding sample varied greatly． Osthole in copper bowl grinding
sample was much higher than pulverizer grinding sample，but columbianctim was reduced． Conclusion The copper bowl grinding method
should be used when we detect the content of osthole and columbianctim in Angelicae Pubescentis Radix．
Key words:Angelicae Pubescentis Radix;grinding method;osthole;columbianctim
独活为伞形科植物重齿毛当归 Angelica pubescens Maxim．
f． biserrata Shan et Yuan 的干燥根。性味辛、苦，微温。归肾、
膀胱经。具有祛风，除湿，散寒，止痛之功效，是治疗风寒湿
痹，腰膝酸痛，风湿性关节炎，风寒头痛等症的传统用药。
图 4 累计释放率对时间的曲线
注:1 表示贝母素甲明胶微球的释放曲线，2 表示对照即贝母素甲
和空白微球的释放曲线。
3 讨论
由于明胶天然可生物降解、低毒、价廉易得等优点，本实
验选择明胶作为载体采用乳化-化学交联法［4-5］制备微球。为
了节省药物用量，实验分两步进行，先制备空白明胶微球，然
后再通过正交设计实验进行贝母素甲明胶微球的制备。
微球中药物含量测定时作者分别考察了贝母素甲与苯甲
酰氯、吡啶与苯甲酰氯的物质的量比不同对衍生化的影响，最
后确定贝母素甲 ∶苯甲酰氯 ∶吡啶 = 1∶ 10∶ 30 时反应完全［8］。
测得微球的包封率及载药量［9］均符合要求，但不是很高，可
能是正交设计有缺陷、药物对明胶的亲和性弱、微球处理时溶
剂萃取不完全、衍生条件苛刻等原因造成的。
体外释药测定的技术主要有:膜扩散技术、动态透析技
术、连续流动测定技术、定位取样技术等;本实验采用动态透
析技术［10］考察贝母素甲微球的体外释药规律。由于贝母素
甲不溶于水，本实验选择了乙醇和 PBS 为释放介质，证明了
贝母素甲明胶微球在体外具有一定的控释性。至于微球的肺
靶向性及相关参数需要在动物体内做进一步的研究。
参考文献:
［1］ 朱 瑄．贝母的药理研究及临床应用［J］．中国现代药物应用，
2010，4(17) :98．
［2］ 陈晓慧，杨峥维． 微球制剂的研究进展［J］． 临床医药实践，
2012，21(7) :534 － 538．
［3］ 陈红宇，王 炎，李 琦． 中药微球介入治疗肿瘤的研究进展
［J］．世界华人消化杂志，2010，18(22) :2350 － 2354．
［4］ 刘永红，丁 红．顺铂泛影葡胺微球的制备及其体外释药特性
考察［J］．中国药物与临床，2012，12(5) :606 － 607．
［5］ Wu YN，Meng WJ，Liu YY，et al． Preparation and in vitro evaluation
of gelatin microspheres for embolization［J］． Journal of Chinese
Pharmaceutical Scinence，2012，21(2012) :242 － 250．
［6］ 裴世成，伍善广，冯艺萍．正交实验优选 α-细辛脑明胶微球制备
工艺［J］．中国药房，2011，22(47) :4452 － 4453．
［7］ 赵万晴．均匀设计在药物制剂中的应用［J］．安徽医药，2010，14
(5) :610 － 612．
［8］ 彭 纓，骆 昉，王淑君，等．柱前衍生高效液相色谱法测定知
母中菝葜皂苷元的含量［J］．沈阳药科大学学报，2008，25(5) :
372 － 375．
［9］ 陈永顺，陈 黎．水飞蓟宾明胶微球的制备及体外释药［J］． 中
国实验方剂学杂志，2011，17(24) :23 － 26．
［10］ 李 健，于耀宁，赵振伟，等． 罂粟碱明胶微球的合成和体外药
物释放研究［J］．医学研究生学报，2010，23(1) :13 － 16．
(收稿日期:2012 － 11 － 15，修回日期:2013 － 01 － 08)
·365·安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2013 Apr; 17( 4)
《中国药典》2010 年版一部以蛇床子素和二氢欧芹醇当归酸
酯为独活药材含量测定指标［1］，其结构式见图 1，但标准中未
明确供试品粉碎方法，在实际工作中发现不同的粉碎方法［2］
对独活中蛇床子素和二氢欧芹醇当归酸酯测定结果影响较
大。为保证测定结果的准确性，本文对两种不同的粉碎方法
进行了考察。
图 1 蛇床子素与二氢欧芹醇当归酸酯化学结构图
1 仪器与试药
1． 1 仪器 IKA 粉碎机(made by IKA) ;岛津 LC-20AT 高效
液相色谱仪(日本) ;Mettler XP26 电子天平(百万分之一) ;
Satorius Bp160p电子天平(万分之一)。
1． 2 试药 蛇床子素对照品(批号:110822-200305，供含量测
定用，中国药品生物制品检定所提供) ;二氢欧芹醇当归酸酯对
照品(批号:111583-200301，供含量测定用，中国药品生物制品
检定所提供) ;独活药材(批号:20111215，合肥凯华制药有限公
司提供) ;乙腈为色谱纯，水为纯化水，甲醇为分析纯。
2 试验方法与结果
2． 1 色谱条件 色谱柱:Agilent C18色谱柱(4． 6 mm × 150
mm，5 μm) ;流动相:乙腈—水(49∶ 51) ;检测波长 330 nm;流
速 1． 0 mL·min －1;柱温:30℃。
2． 2 对照品溶液的制备 取蛇床子素对照品、二氢欧芹醇当
归酸酯对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每 1 mL 各含
150 μg、50 μg的溶液，即得。
2． 3 供试品溶液的制备
2． 3． 1 取样 取独立包装的供试品一袋约 100 g，采用四分
法取样约 20 g，混匀。
2． 3． 2 粉碎 粉碎机粉碎:将取好的样品用粉碎机粉碎(粉
碎时采用间歇粉碎，避免产生高温) ，过三号筛，过筛后的粉
末与最后少量不能通过三号筛的粗粉混匀。
铜钵粉碎:将取好的样品放入冰箱，低温(约 － 10℃)放
置 24 h 后，取出，用铜钵碾碎，过三号筛，过筛后的粉末与最
后少量不能通过三号筛的粗粉混匀。
2． 3． 3 供试品溶液的制备 分别取上述两种粉碎方法得到
的粉末各 0． 5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇
20 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率 360 W，频率 50 kHz)
30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤
过，精密吸取续滤液 5 mL，加入 10 mL 容量瓶中，用甲醇定
容，摇匀，即得。
2． 4 测定方法 分别精密吸取对照品溶液和上述两种供试
品溶液，注入液相色谱仪，测定。记录色谱图，结果见图 2。
2． 5 实验结果 两种不同粉碎方法制备的供试品溶液测定
结果见表 1。
表 1 供试品中蛇床子素与二氢欧芹醇当归酸酯含量
粉碎方法 蛇床子素含量 /% 二氢欧芹醇当归酸酯含量 /%
粉碎机 0． 25 0． 726
铜钵 0． 84 0． 455
图 2 蛇床子素(A)、二氢欧芹醇当归酸酯(B)、粉碎机粉碎的
供试品(C)、铜钵粉碎的供试品(D)的 HPLC图
《中国药典》一部 2010 年版“独活”项下规定本品按干燥
品计算，含蛇床子素(C15 H16 O3)不得少于 0． 50%，含二氢欧
山芹醇当归酸酯(C19H20O5)不得少于 0． 080%。如果采用粉
碎机粉碎，在结果判断时为不符合规定，如果采用铜钵粉碎，
在结果判断时为符合规定。
3 讨论
独活的主要成分包括香豆素类和挥发油类，还有少量甾醇
和糖类成分。其中香豆素类化合物分子量小，主要包括蛇床子
素、二氢欧山芹醇、二氢欧山芹素、二氢欧山芹醇乙酸酯、二氢
欧芹醇当归酸酯等。其中二氢欧山芹醇、二氢欧山芹素、二氢
欧山芹醇乙酸酯、二氢欧芹醇当归酸酯同属于呋喃香豆素类化
合物，结构相似［3-7］。由图 1与表 1中可以看出，在独活药材中
蛇床子素与二氢欧芹醇当归酸酯含量测定中，仅粉碎方法不
同，但测定结果差异很大。其中，蛇床子素的测定结果显示用
粉碎机粉碎比用铜钵粉碎含量下降了 70%，二氢欧芹醇当归
酸酯测定结果显示用粉碎机粉碎比用铜钵粉碎含量增加了
60%。文献报道［8］独活提取液中蛇床子素在 65℃和 75℃长达
8 h仍能保持稳定，但粉碎机粉碎时由高速转动产生的瞬时高
温可能使物质相互转化，具体原因还有待进一步分析。
除独活外，其它含有挥发性成分的药材，在含量测定时也
发现用粉碎机粉碎的样品在指标成分测定时要明显低于用铜
钵碾碎的样品。因此建议《中国药典》在此类药材的含量测
定方法中应明确粉碎方法。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会．中国药典:一部［S］．北京:中国医药科技出版
社，2010:246．
［2］ 李银珠． 制备生发丸中熟地黄粉碎方法新探［J］． 求医问药，
2011，12(9) :543．
［3］ 孔令雷，胡金凤，陈乃宏．香豆素类化合物药理和毒理作用的研
究进展［J］．中国药理学通报，2012，28(2) :165 － 169．
［4］ 张才煜，张本刚，杨秀伟．独活化学成分的研究［J］．解放军药学
报，2007，23(4) :241 － 245．
［5］ 杨秀伟，郭庆梅，张才煜，等．独活化学成分的进一步研究［J］．
解放军药学报，2008，24(5) :389 － 392．
［6］ 周 刚，马宝花． 中药独活的研究进展［J］． 中国当代医药，
2012，19(16) :15 － 16．
［7］ 闫 俊，宣伟东，卞 俊．蛇床子素的研究进展［J］． 中国药业，
2012，21(11) :110 － 112．
［8］ 刘 芳，刘 虹，姜 佳，等．独活提取液浓缩过程中蛇床子素
的稳定性研究［J］．天津中医药大学学报，2011，30(1) :48 － 49．
(收稿日期:2012 － 11 － 07，修回日期:2012 － 12 － 20)
·465· 安 徽 医 药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2013 Apr; 17( 4)