全 文 ：药 物 研 究
Themedicinestudy
基金项目:国家 “十一五 ” 科技支撑计划 “苗 、 傣 、 土家等民族药中有毒药材的特殊炮制技术研究 ” 子课题 “苗药有毒药材了哥王的
特殊炮制技术研究 ” (项目编号:2007BAI48B08-1)。
作者简介:刘艳 (1985-), 女 (汉族), 贵州六盘水人 , 现为贵阳中医学院在读硕士研究生 , 学士学位 , 主要从事民族药 、 民间药 、
特色中草药的资源研究。
通讯作者:李玮 (1964-), 男 (汉族), 湖南邵东人 , 现为贵阳中医学院副教授 , 硕士生导师 , 主要从事中药炮制研究。
了哥王药材 HPLC指纹图谱研究
刘　艳　李　玮 ＊　周汉华　王建科　林　昶　杨　艳
贵阳中医学院 , 贵州　贵阳　 550002
【摘　要】　目的:建立了哥王的高效液相色谱 (HPLC)指纹图谱。方法:采用 AlltimaC18 (4.6mm×250mm, 5μm)色谱柱;流动
相为 0.1%磷酸水 -乙腈 (梯度洗脱);流速为 1ml· min-1;检测波长为 320nm;柱温为 25℃。结果:建立了哥王 HPLC指纹图谱分析的
研究方法。结论:了哥王药材 HPLC指纹图谱分析方法操作简单 , 精密度高 , 重复性好 , 可用于了哥王的质量控制。
【关键词】　了哥王;HPLC;指纹图谱
【中图分类号】R289.1　　　 【文献标识码】A　　　　 【文章编号】 1007-8517 (2011) 01-0057-03
IdentificationofWikstroemiaindica(L.)C.A.MaybyHPLCfingerprint
LIUYan, LIWei＊, ZHOUHan-Hua, WangJian-Ke, LinChang, YangYan
(GuiyangColegeofTraditionalChineseMedicine, Guiyang, Guizhou550002)
Abstract:Objective:ToestablishHPLCfingerprintfortheidentificationoftheradixofWikstroemiaindica(L.)C.A.May.
Methods:AnHPLCmethodwasestablishedwithaAlltimaC18 colum(4.6mm×250mm, 5μm), amobilephaseofmethanoland
0.1% phosphoricacid-water-acetonitrilesolution(gradientelution), aflowrateof1.0mL· min-1 , adetectionwavelengthof
320nmandacolumntemperatureof25℃ .Results:TheresearchfoundstheanalyzingmethodoftheHPLCfingerprintsofWikstro-
emiaindica(L.)C.A.May.Conclusion:TheanalyzingmethodofHPLCfingerprintofWikstroemiaindica(L.)C.A.Mayhas
thefeaturesofeasyoperation, highexactitudeandexcellentrepetitionwhichcanbeusedtocontrolthequalityofthemedicineandits
herbspieces.
Keywords:Wikstroemiaindica(L.)C.A.May;HPLC;Chromatographyfingerprint.
　　了哥王又名南岭荛花 , 为瑞香科荛花属植物了哥王
Wikstroemiaindica(L.)C.A.May.的根及根皮 , 始载于
《岭南采药录 》。其性味苦寒 、 微辛 , 有毒 , 归肺 、 肝经。
具有清热解毒 , 化痰散结 , 消肿止痛的功效。主治风湿性
关节炎 , 淋巴结炎 , 瘰疬 , 痈肿 , 跌打损伤 [ 1] 。 主要含有
黄酮 、 皂苷 、 香豆素 等成分 , 其中西瑞香素具有抗肿
瘤 [ 2] 、 抗炎 [ 3] 、 抗病毒 [ 4]活性 , 是了哥王药材主要有效成
分之一。
中药指纹图谱技术已成为鉴别中药品种和评价中药质
量的有效手段。中药指纹图谱结合多指标成分定量测定可
以作为现代中药质量标准体系的核心技术和基石 [ 5] 。本文
采用中药色谱指纹图谱相似性评价软件系统 2004年 A版
(中国国家药典委员会)进行评价 , 建立了了哥王 HPLC指
纹图谱 , 为了哥王药材的鉴别 、 质量评价及炮制工艺的评
价提供依据。
1　仪器与材料
1.1　仪器　LC-20AT高效液相色谱仪 (SPD-20A检测
器 , LCsolution/Lite工作站);万分之一电子天平 (JT5003,
余姚市金诺天 平一起公司);十万 分之一电子天平
(AUW220D, 岛津), 超声清洗机 (HS10260D, 天津恒奥
科技公司)。
1.2　试剂　甲醇 、 乙腈 (色谱醇 , 天津科密欧公司);水
(娃哈哈纯净水);其余试剂均为分析纯。西瑞香素对照品
为本实验室制备 , 通过归一化法实验得到西瑞香素含量大
于 98%。
1.3　药材　了哥王药材分别采自不同产地 , 经贵阳中医学
院鉴定教研室周汉华教授鉴定为瑞香科植物了哥王 Wikstro-
emiaindica(L.)C.A.May.的根 , 具体来源见表 1。
表 1　11批了哥王药材的产地
编号 采集地 编号 采集地
S1 安徽亳州 S7 贵阳花果园
S2 福建福州 S8 贵阳万东桥
S3 广西博白 S9 贵州黔南
S4 广西桂林 S10 湖南湘西
S5 广西灵山 S11 湖南廉桥
S6 广东广州
2　实验方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱:AltimaC18 (4.6mm×250mm,
5μm);流动相:乙腈 -0.1%磷酸水 , 梯度洗脱见表 2;检
测波长:320nm;柱温:25℃;流速:1.0ml· min-1。
2.2　供试品溶液的制备　精密称取粉碎后药材 (过 40目
筛) 0.5g, 精密加入甲醇 25mL, 称重 , 于 85℃水浴回流提
取 60min, 取出 , 冷却至室温 , 用甲醇补足减失的重量 , 滤
过 , 取续滤液。临用前用 0.45μm微孔滤膜过滤 , 即得供
试品溶液。
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2.3　对照品溶液的制备　精密称取用五氧化二磷干燥的西
瑞香素对照品适量 , 加甲醇制成每 1mL含 0.5mg的对照品
溶液 , 摇匀 , 即得。
表 2　流动相洗脱程序
时间 t/min 乙腈 (%) 0.1%磷酸水 (%)
0 20.5 79.5
30 20.5 79.5
40 24 76
55 24 76
56 27 73
70 27 73
150 48 52
2.4　方法学考察
2.4.1　精密度试验　精密吸取同一供试品溶液 5μL, 连续
进样 5次 , 记录色谱图。用国家药典委员会 《中药色谱指
纹图谱相似度评价系统》 2004年 A版进行相似度评价 , 在
同一台仪器测得色谱指纹图谱的相似度分别为 0.995,
1.000, 1.000, 0.997, 1.000, 均大于 0.950;计算各共有
色谱峰相对保留时间在 0.389 ～ 1.737之间 , 相对峰面积在
0.045 ～ 2.531之间 , 表明仪器精密度良好。
2.4.2　稳定性试验　取同一供试品溶液 , 分别于 0, 4, 8,
12, 24, 48h进样测定 , 记录色谱图。用国家药典委员会
《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》 2004年 A版进行相
似度评价 , 在同一台仪器测得色谱指纹图谱的相似度分别
为 0.996, 1.000, 1.000, 1.000, 0.997, 1.000, 均大于
0.950;计算各共有峰相对保留时间在 0.390 ～ 1.719之间 ,
相对峰面积在 0.046 ～ 2.554之间 , 表明供试品溶液在 48 h
内样品溶液的成分稳定。
2.4.3　重复性试验　取同一样品 6份 , 按供试品溶液制备
方法制备 , 分别进样 , 记录色谱图。 用国家药典委员会
《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》 2004年 A版进行相
似度评价 , 在同一台仪器测得色谱指纹图谱的相似度分别
为 0.998, 0.999, 0.999, 0.998, 0.999, 0.996 均大于
0.950;测得各共有峰的相对保留时间在 0.389 ～ 1.738之
间 , 相对峰面积在 0.045 ～ 2.538, 表明该方法重复性良好。
2.5　指纹图谱的建立　分别取 11批不同批号的了哥王药
材 , 按供试品溶液制备方法制备 , 精密吸取供试液 5 μL注
入高效液相色谱仪 , 按 2.1项下选定的色谱条件 , 进行检
测 , 记录 150min的色谱图。
2.6　指纹图谱的分析
2.6.1　共有指纹峰的标定　经比较 11批样品的色谱图 ,
其中有 20个峰是共有的 , 确定为共有指纹峰 , 见图 1。 14
号为西瑞香素色谱峰 (S), 图谱中西瑞香素的色谱峰处于
图谱的中间位置 , 吸收强 , 峰面积较大 , 性质稳定 , 且西
瑞香素为了哥王主要有效成分 , 因此选用西瑞香素的色谱
峰作为参照峰进行分析 。共有峰相对保留时间见表 3, 共有
峰相对峰面积见表 4。
2.6.1　相似度评价　将 11批了哥王样品的色谱数据导入
《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》 (2004年 A版)进行
相似度评价 , 考察色谱峰相似度的一致性 , 进行相似度评
价 , 各地药材指纹图谱见图 2, 相似度见表 5。
表 3　11批了哥王药材共有峰的相对保留时间
共有峰 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11
1 0.399 0.409 0.388 0.400 0.421 0.413 0.382 0.403 0.404 0.416 0.407
2 0.418 0.432 0.407 0.417 0.435 0.433 0.401 0.426 0.423 0.435 0.427
3 0.453 0.462 0.445 0.453 0.454 0.465 0.439 0.457 0.457 0.466 0.459
4 0.491 0.495 0.485 0.492 0.491 0.499 0.482 0.493 0.494 0.500 0.495
5 0.533 0.551 0.538 0.544 0.544 0.553 0.532 0.543 0.546 0.555 0.549
6 0.555 0.562 0.550 0.555 0.556 0.565 0.547 0.559 0.558 0.566 0.561
7 0.587 0.580 0.583 0.587 0.604 0.591 0.583 0.581 0.588 0.593 0.588
8 0.649 0.635 0.647 0.650 0.649 0.653 0.647 0.637 0.651 0.654 0.650
9 0.732 0.734 0.730 0.733 0.733 0.738 0.729 0.734 0.734 0.738 0.736
10 0.745 0.748 0.743 0.745 0.746 0.751 0.742 0.748 0.747 0.752 0.749
11 0.823 0.825 0.821 0.823 0.828 0.830 0.819 0.824 0.826 0.831 0.829
12 0.851 0.852 0.848 0.851 0.853 0.857 0.846 0.851 0.853 0.858 0.855
13 0.872 0.872 0.869 0.871 0.873 0.876 0.867 0.871 0.874 0.877 0.875
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共有峰 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11
14 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000
15 1.184 1.192 1.187 1.184 1.189 1.182 1.188 1.184 1.181 1.177 1.181
16 1.303 1.305 1.306 1.302 1.303 1.295 1.309 1.306 1.300 1.294 1.298
17 1.391 1.411 1.393 1.390 1.387 1.380 1.399 1.387 1.387 1.378 1.382
18 1.569 1.560 1.575 1.566 1.564 1.554 1.580 1.571 1.563 1.551 1.557
19 1.580 1.571 1.586 1.578 1.575 1.565 1.591 1.582 1.575 1.562 1.568
20 1.674 1.657 1.681 1.671 1.666 1.656 1.687 1.673 1.667 1.652 1.659
表 4　11批了哥王药材共有峰的相对峰面积
共有峰 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11
1 0.332 0.270 0.290 0.177 0.231 0.615 0.351 0.144 0.427 0.154 0.151
2 1.195 0.896 0.865 0.899 0.191 1.562 1.240 0.479 1.968 0.738 0.505
3 0.202 0.145 0.166 0.095 0.487 0.852 0.198 0.053 0.181 0.078 0.144
4 0.200 0.151 0.158 0.120 0.388 0.943 0.184 0.051 0.169 0.090 0.150
5 0.166 0.142 0.163 0.132 0.264 0.496 0.309 0.091 0.262 0.112 0.144
6 0.341 0.448 0.418 0.272 0.823 1.107 0.400 0.317 0.463 0.202 0.365
7 0.422 0.728 0.968 0.528 0.525 0.364 0.982 0.468 0.518 0.813 0.307
8 0.466 0.788 0.371 0.401 0.141 0.880 0.775 0.219 0.784 1.175 0.311
9 1.165 0.919 1.395 0.664 1.437 2.379 1.338 0.668 1.230 0.534 0.725
10 0.217 0.194 0.236 0.125 0.392 0.807 0.274 0.075 0.260 0.134 0.161
11 0.140 0.230 0.364 0.314 0.069 0.273 0.305 0.093 0.305 0.111 0.108
12 0.180 0.140 0.165 0.115 0.161 0.466 0.169 0.057 0.205 0.095 0.104
13 0.250 0.194 0.295 0.146 0.419 0.833 0.265 0.104 0.290 0.140 0.197
14 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000
15 0.284 0.044 0.220 0.194 0.283 0.257 0.215 0.011 0.253 0.033 0.107
16 0.323 0.163 0.142 0.396 0.337 0.213 0.132 0.012 0.176 0.103 0.243
17 0.436 0.052 0.095 1.369 0.141 1.013 0.210 0.013 0.207 0.525 0.091
18 1.240 0.489 0.227 0.723 1.376 1.142 0.605 0.068 0.915 0.351 0.811
19 0.112 0.061 0.032 0.047 0.195 0.214 0.073 0.006 0.083 0.043 0.098
20 0.322 0.184 0.064 0.145 0.666 0.649 0.228 0.019 0.224 0.113 0.325
表 5　11批不同产地了哥王药材色谱图相似度计算结果
图谱号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11
相似度 0.929 0.960 0.917 0.818 0.832 0.857 0.971 0.908 0.927 0.871 0.903
3　讨论
在供试品的制备上采用甲醇 、 50%乙醇 、 60%乙醇 、
70%乙醇 、 90%乙醇 、 无水乙醇作为提取溶剂进行提取溶
剂的选择 , 结果甲醇提取出峰数量多 , 吸收较强 , 故选择
甲醇作为提取溶剂。回流提取与超声提取出峰数相差不大 ,
但回流提取主要成分吸收较强 , 因此选择回流提取。考察
不同波长下的指纹图谱 , 在 320nm处出峰数多 , 分离度较
高 , 了哥王的主要成分有较强吸收 , 故选择 320nm作为指
纹图谱的检测波长。
本实验经查阅相关文献 , 选择了 0.1%磷酸水和甲醇 、
0.1%磷酸水和乙腈为流动相系统进行实验比较 , 结果以甲
醇和 0.1%磷酸水溶液进行梯度洗脱色谱图 , 出峰较少 , 峰
形较宽流动相 , 以乙腈和 0.1%磷酸水溶液进行梯度洗脱色
谱图 , 出峰较多 , 且较多峰可以达到基线分离。
通过不同产地了哥王药材的 HPLC指纹图谱可以看出 ,
11批了哥王药材的相似度在 0.818 ～ 0.971之间 , 说明不同
产地间了哥王的质量存在一定差异 , 不同地理环境 , 生态
条件对了哥王药材质量有一定影响。
参考文献
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(收稿日期:2010.11.10)
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