全 文 ：收稿日期：２０１２－０３－０６
三色堇花粉生活力的测定
周玉敏，徐自警
（湖北生态职业技术学院，武汉 ４３０２００）
摘 要：采用４种不同染色方法及培养基萌发法对５种花色的三色堇花粉生活力进行了测定。结果表
明：Ｉ－ＫＩ染色法、醋酸洋红染色法和ＴＴＣ染色法不适用于三色堇花粉生活力的测定，而过氧化物酶沉淀
法与培养基萌发法是测定三色堇花粉生活力较好的方法；蔗糖和硼酸的浓度影响三色堇花粉的萌发，质
量浓度分别为２０ｍｇ／Ｌ、１．５ｍｇ／Ｌ蔗糖和硼酸对三色堇花粉萌发有很好的促进作用；花粉的生活力与贮
藏条件也密切相关。
关键词：三色堇；生活力；花粉
三色堇（Ｖｉｏｌａ ｔｒｉｃｏｌｏｒ Ｌ．），堇菜科堇菜属多年生
草本植物，在其杂交制种和不育系繁殖过程中，父本花
粉的产量及其质量是确定群体种植比例的主要依据之
一［１］。笔者采用Ｉ－ＫＩ染色法、醋酸洋红染色法ＴＴＣ染
色法、过氧化物酶沉淀法、培养基离体萌发试验法对三
色堇进行花粉生活力的测定，以期筛选出最佳测定方
法，为三色堇大规模制种和贮藏花粉的生活力鉴定提
供可靠依据。
１ 材料与方法
１．１ 材料的采集和处理
实验用花粉采集于学院苗圃地栽培的三色堇，于
２０１１年２月６日上午８：００采摘已开花尚未散粉的三
色堇花供测定用。选了５种花色的品种即：一花三色
的品种１、纯黄的品种２、黄紫相间的品种３、花瓣边缘
呈波浪状的品种４、重瓣形的品种５。将采集来的材料
放入４℃冰箱中预处理２ｈ，取出花药，放入准备好的垫
有滤纸的培养皿上，放进恒温干燥箱，温度保持在２２
～２５℃中，让其干燥散粉，以待备用［２］。
１．２ 试验方法
１．２．１ Ｉ－ＫＩ染色法。取准备好的花药，置于载玻片
上，滴１小滴Ｉ－ＫＩ（０．１％）溶液，轻轻挤压花药，涂于载
玻片上，盖上盖玻片，迅速在显微镜下观察，有活力的
花粉被染成蓝色。
１．２．２ ＴＴＣ染色法。取准备好的花药适量放在一个
小玻璃皿内，加入适量ＴＴＣ溶液，轻轻挤压花药，使花
粉粒散在ＴＴＣ溶液中，放在２５℃恒温箱中１５ｍｉｎ，然
后在显微镜下观察。有活力的花粉被染成红色。
１．２．３ 醋酸洋红染色法。取准备好的花药，置于载玻
片上，滴１滴醋酸洋红溶液，轻轻挤压花药，置于载玻
片上，盖上盖玻片，片刻后在显微镜下观察。有活力的
花粉被染色红色。
１．２．４ 过氧化物酶沉淀法
首先将以下试剂配好：①０．５％联苯胺；②０．５％ａ－
蔡酚；③０．２５％碳酸钠；④０．３％过氧化氢。试验前再
将溶液①、②、③各１０ｍＬ混合成试剂Ｉ，溶液④为试剂
ＩＩ，在干洁载玻片上放少量准备的花粉，然后加试剂Ｉ、
ＩＩ各１小滴，搅匀后盖上盖玻片。３０℃条件下１０ｍｉｎ
后在低倍显微镜下观察。有活力的花粉被染成红色。
１．２．５ 培养基萌发试验法
①培养基溶液的配制。将０．８ｇ琼脂放入盛有少
量蒸馏水的１００ｍＬ小烧杯中加热、搅拌至充分溶解后
分成多份，再在其中加入蔗糖和硼酸，分别配成 Ａ、Ｂ
两组培养基溶液：Ａ组为蔗糖浓度不变（质量浓度为
３０ｍｇ／Ｌ）而硼酸浓度变化（质量浓度分别为０、１．０、
１．５、２．０、２．５ｍｇ／Ｌ）的５种培养基浓度；Ｂ组为硼酸浓
度不变（质量浓度为２．０ｍｇ／Ｌ）而蔗糖浓度变化（质量
浓度分别为０、１０、１５、２０、２５、３０ｍｇ／Ｌ）的６种培养基溶
液。
②花粉接种。在超净工作台将配制好的培养基均
匀地倒入凹玻片中，使与玻片齐平，待凝固后，用消毒
过的头发丝将已准备好的花粉接种到所设定的培养基
凹玻片上。标注花粉种类、培养基配方号、采集时间和
接种时间，放于２０～２５℃的恒温箱内。
③镜检和花粉萌发率统计。接种花粉２ｈ后开始
观察花粉萌发情况，了解花粉的萌发速度和花粉管的
生长情况。以花粉管长度超过１／２花粉直径的为有活
力的萌发花粉［３］。
花粉萌发率的计算公式：花粉萌发率（％）＝（萌发
花粉粒／总花粉粒数）×１００％
１．２．６ 综合比较试验。将准备好的花粉分别按照５
种方法测定花粉生活力，每处理３个重复，每重复观察
１０个视野，取平均值计算［４］。
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第４期（总第１１９期） 中 国 林 副 特 产 Ｎｏ．４（ＧＳＮＯ．１１９）
２０１２年８月 Ｆｏｒｅｓｔ Ｂｙ－Ｐｒｏｄｕｃｔ ａｎｄ Ｓｐｅｃｉａｌｉｔｙ ｉｎ Ｃｈｉｎａ Ａｕｇ．２０１２
DOI:10.13268/j.cnki.fbsic.2012.04.026
２ 结果与分析
２．１ 三色堇花粉的染色率和萌发率
２．１．１ 几种染色方法对三色堇花粉粒的染色结果。
通过显微观察，三色堇花粉粒近长柱形，具５孔沟，两
极有近圆形的平面，中部粗糙，外壁光滑。实验结果表
明，与培养基萌发试验法相比，Ｉ－ＫＩ染色法、醋酸洋红
染色法、ＴＴＣ法的效果较差，均不适合三色堇花粉生
活力的测定，而过氧化物酶沉淀法的测定结果与培养
基萌发法的测定结果十分相近。过氧化物酶沉淀法更
为准确，是三色堇花粉生活力测定中最理想的测定方
法。
２．１．２ 不同浓度的蔗糖对三色堇花粉萌发的影响。
蔗糖浓度是影响花粉萌发率的重要因素之一，三色堇
品种１的备用花粉在Ｂ组培养基上培养２４ｈ后，对应
于蔗糖质量浓度为０、１０、１５、２０、２５、３０ｍｇ／Ｌ的培养基
上的萌发率分别为 ０、８．６７％、１５．８８％、３５．０４％、
１９．２１％、１３．１２％。萌发率随着蔗糖质量浓度的变化
而变化，当蔗糖质量浓度为２０ｍｇ／Ｌ时，萌发率达到最
大值３５．０４％。
２．１．３ 不同浓度的硼酸对三色堇花粉萌发的影响。
硼酸浓度对三色堇花粉萌发也有一定的促进作用。三
色堇品种１的备用花粉在Ａ组培养基上培养２４ｈ后，
对应于硼酸质量浓度为０、１．０、１．５、２．０、２．５ｍｇ／Ｌ的
培养基上的萌发率分别为 ０、１５．１１％、３８．２４％、
２０．１０％、１１．４８％。随着硼酸质量浓度的增加，花粉的
萌发率呈现先上升后降的趋势。当硼酸质量浓度为
１．５ｍｇ／Ｌ时，萌发率达最大值３８．２４％。
２．１．４ 五个花色三色堇花粉萌发率的比较。五个花
色三色堇备用花粉粒在含质量浓度分别为２０ｍｇ／Ｌ、
１．５ｍｇ／Ｌ的蔗糖和硼酸的琼脂培养基上的萌发情况见
表１。从表中看出，５个花色三色堇中，一花三色的品
种１的花粉生活力最强，其次是花色为纯黄的品种２，
重瓣形的品种５花粉的生活力最差。
表１ 三色堇花粉的萌发情况
三色堇花粉的花色
萌发率／％
培养６ｈ 培养１２ｈ 培养１８ｈ 培养２４ｈ
品种１（一花三色） ２０．６ ２６．１ ３２．０ ３６．２
品种２（纯黄） １７．２ ２１．８ ２７．９ ３１．６
品种３（黄紫相间） １６．３ １８．４ ２６．４ ２７．９
品种４（花瓣边缘为波浪状） １６．２ １０．６ １９．５ ２１．４
品种５（重瓣形） ９．３ １０．４ １５．９ １５．２
２．２ 低温储藏后三色堇花粉的染色率和萌发率
三色堇花粉在温度为２～５℃，空气湿度为３０％～
５０％的条件下贮藏２～５天后，再次对其进行染色试验
和萌发试验。试验结果显示：其染色率与备用花粉没
有大的变化，但在含质量浓度分别为２０ｍｇ／Ｌ、１．５ｍｇ／
Ｌ的蔗糖和硼酸的琼脂培养基上的萌发率有明显变
化。培养１４ｈ后，５个花色三色堇的花粉都有明显的
萌发；培养２４ｈ后，品种１、品种２、品种３、品种４、品种
５五个花色三色堇花粉的萌发率分别为９０．５％、
８４．１％、８０，２％、７８．５％、８０．２％。但是随着贮藏时间
的继续延长而花活生活力下降。
３ 小结
３．１ 在实验所进行的５种试验方法中，Ｉ－ＫＩ染色法、
醋酸洋红染色法和ＴＴＣ染色法效果不明显，不适用于
三色堇花粉生活力的测定，这主要是由于三色堇的花
粉壁较厚，染色物质不容易进入造成的。过氧化物酶
沉淀法和培养基萌发试验法，表现出对三色堇花粉快
速、准确地染色效果，故可认为其是测定三色堇花粉生
活力的最佳染色方法。
３．２ 蔗糖起着维持花粉与培养基之间渗透平衡的作
用，也是花粉萌发的营养物质和能量来源。蔗糖浓度
对花粉萌发有明显影响。不同植物花粉萌发的适宜蔗
糖浓度有所不同。本次试验发现蔗糖质量浓度为
２０ｍｇ／Ｌ时能较好地促进三色堇花粉萌发；硼酸可以促
进糖的吸收与代谢，增加氧的吸收，参与果胶的合成，
有利于花粉管在生长壁中的建造。本次试验发现硼酸
质量浓度为１．５ｍｇ／Ｌ时对三色堇花粉萌发有较好的
促进作用。
３．３ 花粉贮藏时，随着贮藏时间的增加，花粉内贮藏
物质的消耗增多，酶活性下降，水分逐步流失，花粉的
生活力会逐渐下降。因此，花粉的贮藏环境与花粉生
活力密切相关，即保存的花粉比新鲜花有更高的离体
萌发率。这个发现对于花粉的贮藏具有很大的意义。
参 考 文 献
［１］ 王孝鹏，孙晓梅．三色堇花粉生活力最佳测定方法的筛
选［Ｊ］．安微农业科学，２００８，３６（７）：２７５６－２７６９．
［２］ 贾文庆，刘宇．紫薇花粉生活力的测定［Ｊ］．陕西农业科
学，２００７（１）：４６－４８．
［３］ 张志良．植物生理学实验指导［Ｍ］．北京：高等教育出
版社，２０００：２４０－２４２．
［４］ 张亚利，曾宪宝．梅花花粉生活力的测定和比较［Ｊ］．湖
北农业科学，２００５（６）：８４－８６．
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２０１２年 周玉敏等：三色堇花粉生活力的测定 第４期