全 文 ：书 ［收稿日期］ ２０１５－１２－３０；２０１６－０８－０８修回
［基金项目］ 国家中医药管理局项目“国家基本药物目录原料种子种苗繁育（贵州）基地建设”（２０１４－２０１５）；贵阳中医学院博士基金项目“羊
耳菊野生变家种技术研究”（２０１５）
［作者简介］ 成小璐（１９９１－），女，在读硕士，研究方向：中药与民族药品质量及鉴定。Ｅ－ｍａｉｌ：９３０３６８５１２＠ｑｑ．ｃｏｍ
＊通讯作者：魏升华（１９６５－），男，副教授，从事药用植物资源、引种驯化、中药材生产与民族医药开发等的教学和研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｅｉｓｈｅｎｇ－
ｈｕａ６５１２＠１２６．ｃｏｍ
［文章编号］１００１－３６０１（２０１６）０８－０３５０－０１００－０５
羊耳菊种子生活力的最佳测定条件
成小璐，魏怡冰，魏升华＊，檀龙颜
（贵阳中医学院 药学院，贵州 贵阳５５０００２）
［摘 要］为获得羊耳菊种子生活力的最佳测定条件，采用四唑染色法，以氯化三苯基四氮唑（ＴＴＣ）浓
度、染色温度和染色时间为指标，通过正交试验和响应面试验对测定条件进行优化。结果表明：ＴＴＣ浓度
１．５％、染色温度４０℃、染色时间３ｈ为羊耳菊种子生活力测定的最佳条件，３个检测指标对种子生活力测定
的影响为染色温度＞染色时间＞ＴＴＣ浓度。
［关键词］羊耳菊；种子；生活力；ＴＴＣ染色法
［中图分类号］Ｓ５６７ ［文献标识码］Ａ
Ｏｐｔｉｍａｌ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｓｅｅｄ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｉｎｕｌａ ｃａｐｐａ
ＣＨＥＮＧ Ｘｉａｏｌｕ，ＷＥＩ Ｙｉｂｉｎｇ，ＷＥＩ Ｓｈｅｎｇｈｕａ＊，ＴＡＮ Ｌｏｎｇｙａｎ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ５５０００２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｆｉｎｄ ｏｕｔ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｓｅｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｉ．ｃａｐｐａ，ｔｈｅ
ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ２，３，５－ｔｒｉｐｈｅｎｙｌ ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＴＴＣ）ｗａｓ ｅｍｐｌｏｙｅｄ ｗｉｔｈ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ ｏｆ ＴＴＣ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｄｙｅｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｄｙｅｉｎｇ ｔｉｍｅ，ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｂｙ
ｕｓｉｎｇ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：１．５％，４０℃，３ｈｗｅｒｅ ｔｈｅ ｂｅｓｔ
ｄｙｅｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ＴＴＣ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｄｙｅｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ａｎｄ ｄｙｅｉｎｇ ｔｉｍｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｎｄ ｔｈｅ ｏｒｄｅｒ
ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇ ｓｅｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔ ｉｓ ｄｙｅｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ＞ｄｙｅｉｎｇ ｔｉｍｅ＞ＴＴＣ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｉｎｕｌａ ｃａｐｐａ；ｓｅｅｄ；ｖｉａｂｉｌｉｔｙ；２，３，５－ｔｒｉｐｈｅｎｙｌ ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ｄｙｅｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ
羊耳菊又名羊耳风（贵州）、山白芷等，为菊科
（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）旋覆花属（Ｉｎｕｌａ）植物羊耳菊〔Ｉｎｕｌａ
ｃａｐｐａ（Ｂｕｃｈ．Ｈａｍ．）ＤＣ．〕的根或全草［１］。具有除
风散寒、行气止呕、止咳定喘、止汗、止泻、止血、消肿
解毒及利湿的功效［２］。羊耳菊分布于四川、云南、贵
州、广西、广东、江西、福建及浙江等地［１］。近年来，
对羊耳菊的研究主要涉及化学成分、药理学和生药
学方面［３－１０］。因为羊耳菊具有良好的抗菌和消炎等
药用价值，所以多种中成药把羊耳菊作为主要的原
料药，如莲菊感冒胶囊［１１］、甘菊滴丸［１２］、菊黄上清含
片［１３］及贵州百灵药业的双羊喉痹通颗粒等。尽管
对羊耳菊化学成分和药理学等方面进行了诸多研
究，但有关羊耳菊引种驯化和人工栽培方面鲜有报
道。
随着市场需求量的增加，对羊耳菊的采挖力度
逐年加大，但其野生资源有限，且目前各地尚未有人
工种植。因此，对羊耳菊进行引种驯化研究十分必
要［１４］。而药用植物种子、种苗的生产是药材生产的
基础，其质量是药材产量和品质形成的重要前提和
基础［１５］。种子质量对羊耳菊规模化和规范化种植
起着关键性的作用，发芽率是检测种子质量的重要
指标，但由于羊耳菊的发芽试验时间较长而不能快
速得到结果。测定种子生活力可以快速确定种子发
芽能力，是种子生产和贸易的重要技术［１６－１７］。因此，
笔者等对羊耳菊种子发芽能力的最佳测定条件进行
了试验，为客观评价羊耳菊种子的发芽能力，预测其
播种量和出苗率提供理论依据，为其大田播种育苗
提供技术支持。
１ 材料与方法
１．１ 材料
羊耳菊种子于２０１４年１２月２９日采自贵州省
安顺市西秀区龙宫片区，经贵阳中医学院鉴定为羊
耳菊的种子，于４℃冰箱保存备用，凭证标本保存于
贵阳中医学院药学院标本馆。
试剂为氯化三苯基四氮唑（ＴＴＣ）。
１．２ 种子预处理
１）浸泡。将经观察到具胚、较饱满的种子除去
冠毛，置于滤纸上，加入蒸馏水，加水量以刚没过种
子为宜，待其吸胀后取出，用刀片切去种子靠近冠毛
部位的１／４，置于直径１０ｃｍ培养皿中，每个培养皿
按１０×１０顺序放置１００粒种子，供染色用。
２）染色。每个培养皿加入不同浓度的ＴＴＣ溶
液，分别置于不同温度的恒温培养箱中避光染色，达
贵州农业科学 ２０１６，４４（８）：１００～１０４
Ｇｕｉｚｈｏｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
到时间后取出种子，用清水冲洗，将种子放在滤纸
上，根据染色面积大小及程度判断种子生活力。另
取１００粒种子在沸水中煮１０ｍｉｎ后取出，染色，作
为对照组。每个处理重复３次。
１．３ 种子生活力测定适宜条件的试验
１．３．１ 正交试验 以ＴＴＣ浓度、染色温度和染色
时间３个直接影响生活力测定结果的因素作为检测
指标，每个因素设置３个水平（表１）。
表１ 羊耳菊种子生活力测定条件正交试验的因素和水平
Ｔａｂｌｅ １ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
ｆｏｒ ｓｅｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｉ．ｃａｐｐａ
水平
Ｌｅｖｅｌ
因素 Ｆａｃｔｏｒ
染色温度（Ａ）／℃ ＴＴＣ浓度（Ｂ）／％ 染色时间（Ｃ）／ｈ
１ ３０ ０．５ １
２ ３５ １．０ ２
３ ４０ １．５ ３
１．３．２ 单因素试验
１）染色温度 取羊耳菊种子１００粒，ＴＴＣ浓
度为０．５％，染色时间为１ｈ，染色温度分别为２５℃、
３０℃、３５℃、４０℃、４５℃，测定种子生活力。
２）染色液浓度 取羊耳菊种子１００粒，染色温
度为３５℃，染色时间为１ｈ，ＴＴＣ浓度分别为０．５％、
１．０％、１．５％、２．０％和２．５％，测定种子生活力。
３）染色时间 取羊耳菊种子１００粒，染色温度
为３５℃，ＴＴＣ浓度为１．５％，染色时间分别为１ｈ、
２ｈ、３ｈ、４ｈ及５ｈ，测定种子生活力。
１．３．３ 响应面优化试验 根据单因素试验结果，
以染色温度度（ｘ１）、ＴＴＣ浓度（ｘ２）、染色时间（ｘ３）３
个因素为变量，以种子染色率（ｙ）为响应值。根据
Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ中心组合试验设计原理，设计３因素
５水平的响应面试验（表２）。
表２ 羊耳菊种子生活力测定条件响应面试验的因素及水平
Ｔａｂｌｅ ２ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ
ｄｅｓｉｇｎ ｆｏｒ ｓｅｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｉ．ｃａｐｐａ
水平
Ｌｅｖｅｌ
染色温度／℃
Ｄｙｅｉｎｇ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
ＴＴＣ浓度／％
ＴＴＣ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
染色时间／ｈ
Ｄｙｅｉｎｇ
ｔｉｍｅ
－１．６８２ ２５ ０．５ １
－１ ３０ １．０ ２
０ ３５ １．５ ３
１ ４０ ２．０ ４
１．６８２ ４５ ２．５ ５
１．４ 数据分析
数据分析软件采用ＳＰＳＳ１６．０和 Ｄｅｓｉｇｎ Ｅｘ－
ｐｅｒｔ ８．０．６软件，Ｐ＜０．０５差异显著，Ｐ＜０．０１差异
极显著。每组试验重复３次。
２ 结果与分析
２．１ 正交试验结果
由表３可知，羊耳菊种子生活力最高（９２％）的
处理组合染色温度４０℃，ＴＴＣ浓度１．０％，染色时
间３ｈ；生活力最低（２９％）的组合为染色温度３０℃，
ＴＴＣ浓度０．５％，染色时间１ｈ。将所得的数据进
行方差分析结果（表４）表明，染色温度差异极显著，
ＴＴＣ浓度和染色时间均差异不明显，３个因素对羊
耳菊种子生活力测定影响的大小排序为染色温度＞
染色时间＞ＴＴＣ浓度。
２．２ 单因素试验结果
由图１看出，染色温度在２５～４０℃时，种子的
染色率随温度升高而升高。但当温度达到４０℃后，
随着温度升高，种子染色率增加缓慢。因此最佳测
定温度定为４０℃左右。羊耳菊种子染色率随着
ＴＴＣ浓度的增加而升高，当 ＴＴＣ浓度达到１．５％
时，种子染色率最高，当浓度再增大时，种子染色率
反而降低，因此将最佳测定浓度定为１．５％。染色
时间在１～３ｈ时，种子的染色率随染色时间延长而
升高。但当时间达３ｈ后，时间再延长，种子染色率
增加缓慢。因此最佳测定时间定为３ｈ左右。
表３ 羊耳菊种子生活力测定正交试验结果
Ｔａｂｌｅ ３ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｆｏｒ ｓｅｅｄ
ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｉ．ｃａｐｐａ
试验号
Ｎｏ．
因素
Ｆａｃｔｏｒｓ
Ａ Ｂ Ｃ
种子活力／％
Ｓｅｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ
１ １ １ １ ２９
２ １ ２ ２ ３７
３ １ ３ ３ ４７
４ ２ ２ １ ６２
５ ２ ３ ２ ８０
６ ２ １ ３ ６１
７ ３ ３ １ ８９
８ ３ １ ２ ８４
９ ３ ２ ３ ９２
表４ 羊耳菊种子生活力测定正交法试验的方差分析结果
Ｔａｂｌｅ ４ ＡＮＯＶＡ ｆｏｒ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｆｏｒ ｓｅｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｉ．ｃａｐｐａ
方差来源
Ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ
离差平方和
Ｓｕｍ ｏｆ ｓｑｕａｒｅｓ ｏｆ ｄｅｖｉａｔｉｏｎｓ
自由度
ＤＦ
方差
Ｖａｒｉａｎｃｅ
Ｆ值
Ｆｖａｌｕｅ
Ｐ值
Ｐｖａｌｕｅ
模型 Ｍｏｄｅｌ ４ ２３２．６６７ ６ ７０５．４４４ ３７．５６８ ０．０２６
Ａ ３ ８４６．８８８ ２ １９２３．４４４ １０２．４３２ ０．０１０
Ｂ ２８２．８８９ ２ １４１．４４４ ７．５３３ ０．１１７
Ｃ １０２．８８９ ２ ５１．４４４ ２．７４０ ０．２６７
误差 Ｅｒｒｏｒ ３７．５５６ ２ １８．７７８ － －
总和Ｓｕｍ ４ ２７０．２２２ ８ － － －
·１０１·
成小璐 等 羊耳菊种子生活力的最佳测定条件
ＣＨＥＮＧ Ｘｉａｏｌｕ ｅｔ ａｌ Ｏｐｔｉｍａｌ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｓｅｅｄ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｉｎｕｌａ ｃａｐｐａ
种
子
染
色
率
/%
Dy
ei
ng
ra
te
0
20
100
40
60
80
50
60
100
70
80
90
0
20
100
40
60
80
120
染色时间/h
Dyeing time
TTC 浓度/%
TTC concentration
染色温度/℃
Dyeing temperature
25 30 35 40 45 0.5 1 1.5 2 2.5 1 2 3 4 5
种
子
染
色
率
/%
Dy
ei
ng
ra
te
种
子
染
色
率
/%
Dy
ei
ng
ra
te
图１ 不同染色温度、ＴＴＣ浓度和染色时间种子的染色率
Ｆｉｇ．１ Ｄｙｅｉｎｇ ｒａｔｅ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｙｅｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ＴＴＣ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｙｅｉｎｇ ｔｉｍｅ
２．３ 响应面试验结果
２．３．１ 模型的建立 利用 Ｄｅｓｉｇｎ Ｅｘｐｅｒｔ ８．０．６
软件对表５的数据进行多元回归分析，得回归方程
表５ 羊耳菊种子生活力测定响应面试验结果
Ｔａｂｌｅ ５ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ ｆｏｒ ｓｅｅｄ
ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｉ．ｃａｐｐａ
试验号
Ｎｏ．
Ａ染色
温度／℃
Ｄｙｅｉｎｇ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
Ｂ ＴＴＣ
浓度／％
ＴＴＣ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
Ｃ染色
时间／ｈ
Ｄｙｅｉｎｇ
ｔｉｍｅ
种子
活力／％
Ｓｅｅｄ
ｖｉａｂｉｌｉｔｙ
１ ０ ０ ０ ９２
２ ０ ０ １．６８ ９６
３ ０ ０ ０ ９２
４ １ －１ －１ ９３
５ １ １ －１ ９５
６ ０ ０ ０ ９２
７ －１．６８ ０ ０ １９
８ １ １ １ ９７
９ １．６８ ０ ０ ９８
１０ －１ １ １ ５２
１１ ０ －１．６８ ０ ６１
１２ －１ －１ －１ ３７
１３ ０ ０ ０ ９２
１４ ０ ０ ０ ９２
１５ ０ ０ ０ ９２
１６ －１ －１ １ ４５
１７ １ －１ １ ９６
１８ －１ １ －１ ４８
１９ ０ ０ －１．６８ ７０
２０ ０ １．６８ ０ ６６
为ｙ＝９１．８８７ ７２＋２４．３００ ０１ｘ１＋２．１５３ ４２ｘ２＋
４．４４６ ６０ｘ３－１．８７５ ００ｘ１ｘ２ －０．８７５ ００ｘ１ｘ３ －
０．６２５ ００ｘ２ｘ３－１１．１１０ ２５ｘ２１ －９．３４２ ４８ｘ２２ －
２．４４８ １９ｘ２３。对模型进行方差分析（表６），Ｆ＝
８０．５９，且Ｐ＜０．００１，模型差异极显著。模型中决定
系数Ｒ２为０．９８６ ４，调整决定系数ＲＡｄｊ２为０．９７４ ２，
表明响应值为８９．６７％的变化来源于所选变量。模
型的变异系数为５．１６％（＜１０％），表明试验有良好
的稳定性。模型的信噪比为２９．４０６（＞４），表明该
模型适用于种子生活力测定指标的优化。对模型系
数的显著性进行检验，结果表明ｘ１、ｘ２１、ｘ２２和ｘ３对羊
耳菊种子生活力测定影响极显著，各因素及其一次
项和二次项对羊耳菊种子生活力测定的影响显著，
且３个因素对种子生活力测定的影响顺序为染色温
度＞染色时间＞ＴＴＣ浓度。
２．３．２ 响应面分析 响应面图能直观体现各两个
因素的交互作用对种子生活力响应值的影响，响应
曲面的坡度越陡峭，则表明两个因素的交互作用对
种子生活力测定响应值的影响越显著。从图２看
出，染色温度和 ＴＴＣ浓度、染色温度和染色时间、
ＴＴＣ浓度和染色时间对种子生活力测定可产生影
响，这与方程的方差分析结果一致。
表６ 羊耳菊种子生活力测定响应面试验的方差分析结果
Ｔａｂｌｅ ６ ＡＮＯＶＡ ｆｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｑｕａｄｒａｔｉｃ ｍｏｄｅｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ ｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｓｅｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｉ．ｃａｐｐａ
方差来源
Ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ
平方和
ＳＳ
自由度
ＤＦ
均方
Ｍｅａｎ ｓｑｕａｒｅ
Ｆ值
Ｆｖａｌｕｅ
Ｐ值
Ｐｖａｌｕｅ
显著性
Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ
模型 Ｍｏｄｅｌ １１ ２０７．２３ ９ １ ２４５．２５ ８０．５９ ＜０．０００ １ ＊＊
ｘ１ ８ ０６４．２４ １ ８ ０６４．２４ ５２１．８９ ＜０．０００ １ ＊＊
ｘ２ ６３．３３ １ ６３．３３ ４．１０ ０．０７０ ５
ｘ３ ２７０．０３ １ ２７０．０３ １７．４８ ０．００１ ９ ＊＊
ｘ１ｘ２ ２８．１３ １ ２８．１３ １．８２ ０．２０７ ０
ｘ１ｘ３ ６．１３ １ ６．１３ ０．４０ ０．５４３ １
ｘ２ｘ３ ３．１３ １ ３．１３ ０．２０ ０．６６２ ５
ｘ２１ １ ７７８．８９ １ １ ７７８．８９ １１５．１２ ＜０．０００ １ ＊＊
ｘ２２ １ ２５７．８５ １ １ ２５７．８５ ８１．４０ ＜０．０００ １ ＊＊
ｘ２３ ８６．３８ １ ８６．３８ ５．５９ ０．０３９ ７ ＊
残差 Ｒｅｓｉｄｕａｌ ｅｒｒｏｒ １５４．５２ １０ １５．４５
失拟项Ｌａｃｋ ｏｆ ｆｉｔ １５４．５２ ５ ３０．９０
纯误差Ｐｕｒｅ ｅｒｒｏｒ ０ ５ ０
总和Ｓｕｍ １１３６１．７５ １９
注：“＊”为显著（Ｐ＜０．０５），“＊＊”为极显著（Ｐ＜０．０１）。
Ｎｏｔｅ：＊ａｎｄ＊＊ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ５％ａｎｄ １％ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｌｅｖｅｌｓ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
·２０１·
贵 州 农 业 科 学
Ｇｕｉｚｈｏｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
种
子
生
活
力
/%
Se
ed
vi
ab
ili
ty
染色时间/h
Dyeing timeTTC 浓度/%
TTC concentration
染色温度/℃
Dyeing temperature
种
子
生
活
力
/%
Se
ed
vi
ab
ili
ty
种
子
生
活
力
/%
Se
ed
vi
ab
ili
ty
染色温度/℃
Dyeing temperature
染色时间/h
Dyeing time
TTC 浓度/%
TTC concentration
染
色
时
间
/h
Dy
ei
ng
tim
e
染
色
时
间
/h
Dy
ei
ng
tim
e
TT
C
浓
度
/%
TT
C
co
nc
en
tra
tio
n
染色温度/℃
Dyeing temperature
染色温度/℃
Dyeing temperature TTC 浓度/%
TTC concentration
0
20
100
40
60
80
120
0
20
100
40
60
80
120
0
20
100
40
60
80
120
-1 -0.5
0
0.5
1
-1-0.5
0
0.5
1
-1
-0.5
0 0.5
1
-1
-0.5
0
0.5
1
-1
-0.5
0
0.5
1
-1
-0.5
0
0.5
1
-1 -0.5 0 0.5 1-1
-0.5
0
0.5
1
-1 -0.5 0 0.5 1
-1
-0.5
0
0.5
1
-1 -0.5 0 0.5 1
-1
-0.5
0
0.5
1
图２ 各因素交互作用对生活力测定影响的响应面
Ｆｉｇ．２ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｖｅｒｙ ｔｗｏ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｎ ｔｅｓｔｉｎｇ ｓｅｅｄ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ
２．３．３ 最佳测定条件确定 经过 Ｄｅｓｉｇｎ Ｅｘ－
ｐｅｒｔ８．０．６软件的分析，羊耳菊种子生活力测定的最
佳条件为染色温度４０．８４℃，ＴＴＣ浓度１．５７８％，染
色时间３．１５ｈ，在此测定条件下羊耳菊的生活力为
９８．３９６ ５％。为验证方法的可行性，采用上述方法
测定羊耳菊种子生活力，将其条件改为染色温度
４０℃，ＴＴＣ浓度１．５％，染色时间３ｈ，在此条件下
测定生活力进行３组平行试验，平均生活力为
９８．０５％。该结果与理论预测值相差０．３４６ ５％，充
分说明响应面分析法对羊耳菊生活力测定条件进行
的优化可靠，有实用性。
３ 结论与讨论
１）尽管不同植物的种子用四唑染色法测定生
活力时其适宜的测定条件各不相同，但一般选取
ＴＴＣ浓度、染色温度和染色时间为检测指标。如白
花前胡种子生活力测定的最佳条件以浸泡时间、
ＴＴＣ溶液浓度、染色温度和染色时间为检测指
标［１８］；测定巨紫荆种子生活力的最佳条件以 ＴＴＣ
浓度、染色温度和染色时间为检测指标［１９］。因此，
笔者等以ＴＴＣ浓度、染色温度和染色时间为考察
因素，测定羊耳菊种子生活力的最佳测定条件。白
花前胡［１８］和巨紫荆［１９］种子生活力测定的最佳条件
分别为ＴＴＣ浓度１ｇ／Ｌ、染色温度３５℃、染色１６ｈ
和ＴＴＣ浓度０．１％、染色温度３５℃、染色时间为
８ｈ。由此可知，ＴＴＣ浓度、染色时间和染色温度的
不同都会影响种子生活力的判断，何伶俐［１８］研究得
出，染色温度低于３０℃和 ＴＴＣ液浓度高于５ｇ／Ｌ
时，白花前胡种子不染色或染色情况极差，将温度设
置在３５℃左右，ＴＴＣ 液浓度在５ｇ／Ｌ 以下。凌
敏［１９］发现，ＴＴＣ浓度低于０．１０％和染色温度高于
５０℃时，巨紫荆种子不染色或者染色情况较差，故将
ＴＴＣ浓度设置高于０．１０％，染色温度低于５０℃。
本试验在种子生活力测定前，也对羊耳菊种子生活
力的ＴＴＣ浓度及染色温度做了简单对比，结果表
明ＴＴＣ浓度低于０．５％，温度高于５０℃时，羊耳菊
种子不染色或染色情况差，因此试验时将 ＴＴＣ浓
度设置高于０．５％，温度低于５０℃。
２）测定种子生活力染色前不同种子切割方法
不同。白花前胡种子吸水膨大后取出，用刀片沿种
子胚的中心线纵切为两半［１８］。栀子种子［２０］用刀片
沿种子胚中轴纵切成两半。益母草种子［２１］用刀片
在距胚端３／４横切，带种胚部分进行染色。本研究
中羊耳菊种子细小，胚难以取出，横切面直径很小，
因此靠近胚端方向１／４纵切，带种胚部分进行染色。
３）中心复合设计－效应面法是近年来应用较多
的一种优化方法。优化当归多糖提取工艺时，盛小
莉等［２２］用正交法，以浸泡时间、加水量、提取时间和
提取次数为考察因素，结果发现４个因素对结果均
无显著性影响，只能依据直观分析结果确定最佳条
件；但王艳艳等［２３］和纪鹏等［２４］分别用效应面法时，
均得到４个因素对当归多糖得率影响均较显著，并
结合回归方程和响应面结果图确定最佳工艺条件。
此外，在优化丹参提取工艺时，李绍林等［２５］用正交
法，以提取次数、提取时间、醇浓度和溶媒量作为考
察因素，只有提取次数对提取结果具有显著性影响；
而黄元红等［２６］用效应面法得到４个因素影响均较
显著，并结合回归方程和响应面结果图确定最佳工
艺条件。效应面法能考察各因素间的相互作用，试
验次数少，精密度高。将效应值对影响因素作曲面
图，直接读取，有直观、精密的优点。集数学和统计
学方法于一体使结果更加科学可靠，在药学应用上
·３０１·
成小璐 等 羊耳菊种子生活力的最佳测定条件
ＣＨＥＮＧ Ｘｉａｏｌｕ ｅｔ ａｌ Ｏｐｔｉｍａｌ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ Ｓｅｅｄ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｉｎｕｌａ ｃａｐｐａ
成效显著［２７］。但至今未有将此方法应用于种子方
面的研究。笔者分别用正交法和效应面法进行数据
分析，以生活力大小为指标考察羊耳菊种子生活力
的最佳测定条件，得到染色温度４０℃、ＴＴＣ浓度
１．５％、染色时间３ｈ为羊耳菊种子生活力测定的最
佳条件，且３个因素对种子生活力测定的影响顺序
为染色温度＞染色时间＞ＴＴＣ浓度。与正交设计
分析法相比较，响应面分析法在试验设计和结果表
达方面更加优良，可作为四唑染色法测定羊耳菊种
子生活力的方法。
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（责任编辑：聂克艳
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（责任编辑：刘忠丽）
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