全 文 ：表 3 泽泻汤加味方影响降压因素的方差分析
方差来源 平方和 自由度 均方 F比 P
A 129． 09 2 64． 55 16． 55 ＜ 0． 01
B 51． 63 2 25． 82 6． 62 ＜ 0． 01
C 91． 78 2 45． 89 11． 77 ＜ 0． 01
误差 164． 01 47 3． 90
与同期高盐饮食饲养的未成模大鼠进行对照。正交
分组试验尿量结果显示，各正交组给药后第 3，5 天
与给药前比较尿量为多，与给药前比较有统计学差
异(P ＜ 0． 01 ～ 0． 05) ，正交组间比较无差异，表明泽
泻汤加味方不同组方均有利尿作用，泽泻汤原方
(泽泻、白术)是起利尿作用的主要组分，尤以君药
泽泻的作用更为突出;各正交组给药 7 天后尿量虽
较给药前为多，但无统计学意义，说明长期的降压作
用是通过利水、活血、祛痰的综合作用实现的。
针对高盐饮食高血压大鼠，泽泻汤加味方降压
效果最佳组合为 A1B1C3，即泽泻 21 g，炒白术 9 g，
泽兰和石菖蒲各 15 g。基本与目前的临床实际用量
比例［3，7］相同，不同组方及不同剂量的泽泻汤加味
方均有利尿作用。说明泽泻汤原方(泽泻、白术)是
起利尿作用的主要组分，尤以君药泽泻的作用更为
突出，泽泻汤加味方的降压作用与其利尿作用有关。
参考文献:
［1］ 曾昭华，Robert M K W Lee，罗碧辉，等．一种新的高盐致高血
压动物模型及其血管重构改变［J］． 中国临床药理学与治疗
学，2005，10(1) :24-28．
［2］ 张 焱，何立人．从湿浊内结、土湿侮木辨治高血压病［J］． 上
海中医药杂志 2006，40(6) :2．
［3］ 范洪亮．内服中药治疗高血压病中医临床进展［J］．承德医学
院学报，2007，24(4)65-66．
［4］ 张 焱，陈咸川，何立人，等．化湿利水泄浊合剂对高血压病患
者血管内皮依赖性舒张功能的影响［J］． 上海中医药杂志，
2005，39(6) :14-16．
［5］ 冯振明．人类钠盐摄入的现状及其对血压的影响［J］．生物学
教学，2003，28(4) :45．
［6］ 王仁安．医学实验设计与统计学分析［M］． 北京:北京医科大
学出版社，2000:47-60．
［7］ Zelinka T，Strauch B，Pecen L，et al． Diurnal blood pressure varia-
tion in pheochromocytoma，primary aldosteronism and Cushing s
syndrome［J］． J Hum Hypertens，2004，18(2) :107-111．
紫背天葵提取物对糖尿病肾病大鼠的作用
王红珊，曹毅敏，李国豪，林美仪，关爱萍，邓丽丽
(广州市第一人民医院 药剂科，广东 广州 510180)
摘 要:目的 研究紫背天葵提取物对糖尿病肾病大鼠的作用。方法 SD 大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素
(STZ) ，建立糖尿病肾病大鼠模型。紫背天葵提取物(5 g /kg)灌胃 4 周后，收集大鼠 24 h尿液，检测尿液中尿蛋白
(UP)、N-乙酰 β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)和 β2 -微球蛋白(β2 -MG)的含量;测定肾脏指数;测定血清中尿素氮
(BUN)、肌酐(Cr)和 β2 -MG的含量。结果 紫背天葵提取物能明显降低糖尿病肾病大鼠 24 h 排尿量、尿蛋白、β2 -
MG和 NAG(P ＜ 0． 01 或 0． 05) ;使肾脏指数下降(P ＜ 0． 05) ;同时能够降低血清中 BUN、Cr 和 β2 -MG 含量(P ＜
0． 01或 0． 05)。结论 紫背天葵提取物可以改善肾脏滤过功能，明显改善糖尿病肾病大鼠临床症状。
关键词:紫背天葵提取物;糖尿病肾病;N-乙酰 β-D-氨基葡萄糖苷酶;β2 -微球蛋白;尿素氮;肌酐
中图分类号:R285． 5 文献标识码:A 文章编号:1005-1678(2012)03-0272-03
Effects of extract of Begonia fimbristipula on the development of
diabetic nephrophathy rats
WANG Hong-shan，CAO Yi-min，LI Guo-hao，LIN Mei-yi，GUAN Ai-ping，DENG Li-li
(Department of Pharmacy，The No． 1 Peoples Hospital of Guangzhou，Guangzhou 510180，China)
收稿日期:2011-10-22
作者简介:王红珊，女，硕士，副主任药师，研究方向:医院药学
及药理学，Tel:020-81048767，E-mail:whscc@ 126． com。
272 中国生化药物杂志 Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 2012 年第 33 卷第 3 期
Abstract:Purpose To explore the effect of the extract of Begonia fimbristipula on the development
of diabetic nephrophathy rats．Methods Diabetic nephrophathy rat models were established by intraperito-
neally injecting streptozotocin at the dose of 60 mg /kg． After the diabetic nephrophathy rats were adminis-
tered with the extract of Begonia fimbristipula by irrigating stomach at the dose of 5 g /kg for 4 consecutive
weeks，the urine protein(UP) ，β-N-acetyl glucosaminidase(NAG)and β2-microglobulin(β2-MG)in u-
rine，and the contents of blood urea nitrogen(BUN) ，creatinine(Cr)and β2-MG in serum were deter-
mined． Results The extract of Begonia fimbristipula could significantly reduce fasting kidney index，24
hours urine collection，UP，NAG，and β2-MG(P ＜ 0． 01)in urine，and serum BUN，Cr and β2-MG levels
(P ＜ 0． 05)of diabetic nephrophathy rats． Conclusion The extract of Begonia fimbristipula can improve
kidney filtration function，and has obviously improved the diabetic nephrophathy rats clinical symptoms．
Key words:extract of Begonia fimbristipula;diabetic nephrophathy;NAG;β2-MG;BUN;Cr
紫背天葵(Begonia fimbristipula Hanee)为秋海
棠科(Goniaceae)秋海棠属多年生草本植物［1］，近年
来对紫背天葵有效成分的研究提示，紫背天葵富含
黄酮类化合物、多糖、红色素等成分，进一步药理学
研究可预见紫背天葵在心脑血管、抗癌、抗贫血等领
域有良好的发展前景［2-3］。本实验通过检测糖尿病
肾病(diabetic nephropathy，DN)大鼠的肾脏指数、尿
液中的尿蛋白(UP)、N-乙酰 β-D-氨基葡萄糖苷酶
(NAG)和 β2-微球蛋白(β2-MG)的含量和血清中的
BUN、Cr、β2-MG 含量，探讨紫背天葵提取物对肾脏
功能的保护作用。
1 材 料
紫背天葵药材(广西中医学院中药教研室鉴
定) ，采自钦州。
链脲佐菌素(STZ) ，购自美国 Sigma 公司;所有
ELISA检测试剂盒均购于上海基米生物科技有限
公司。
550 型全自动酶标仪，美国 Bio-Rad 公司;TGL-
16G型冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂。
健康清洁级雄性 SD 大鼠，体重(200 ± 20)g，
SPF级，购于广东省动物实验中心，粤实验动物证第
20110806 号。适应性饲养 1 周后，用于实验。
2 方 法
2． 1 紫背天葵提取液制备
紫背天葵 1 kg，加水 12 L，浸泡 30 min，加热煎煮
1 h，过滤，收集滤液，滤渣再加水 8 L，加热煎煮 1 h，
过滤，收集滤液。合并两次滤液，浓缩至 1 L，加入乙
醇至终浓度为 70%，4 ℃放置过夜。10 000 r /min 离
心，取上清液在旋转蒸发仪上回收乙醇，蒸至近干，
加水至 125 mL ，即每 1 mL相当于生药 8 g，低温保
存备用。
2． 2 动物模型的建立及分组
采用一次性注射 STZ 的方法建立糖尿病肾病
大鼠模型［4］。实验大鼠禁食 12 h 后，腹腔注射 3%
戊巴比妥钠溶液 0． 15 mL /100 g 麻醉。部分大鼠进
行左侧肾脏切除术;另一部分大鼠只进行切开皮肤
及肌层，然后再缝合的手术。手术 2 周后，所有大鼠
禁食 18 h，切除左肾的大鼠进行一次性腹腔注射
1% STZ溶液 60 mg /kg;只切开皮肤的大鼠进行一次
性腹腔注射等量的 pH 4． 5 枸橼酸缓冲液。STZ 腹
腔注射后，从第 1 周开始检测血糖，并以非空腹血糖
＞ 16． 6 mmol /L、尿量 ＞原尿量的 150%、尿蛋白 ＞
20 mg /24 h为成模标准［5］。
将腹腔注射 pH 4． 5 枸橼酸缓冲溶液的大鼠作
为对照组，将造模成功的大鼠随机分为模型组和治
疗组，每组 15 只。模型组腹腔注射 STZ，治疗组腹
腔注射 STZ 后，使用紫背天葵提取物灌胃，剂量为
5 g /kg，1 次 /d，对照组和模型组灌胃给予等体积生
理盐水，共 4 周。
2． 3 检测指标
大鼠于末次给药后，禁食不禁水，分别收集大鼠
24 h尿液，离心，4 ℃保存。末次给药后 6 h，尾静脉
取血 1 mL，分离血清，4 ℃保存。收集尿液后，摘取
大鼠双肾去掉包膜后称质量，计算肾脏指数。
按试剂盒说明检测尿液中 UP、NAG 和 β2-MG
的含量和血清中 BUN、Cr和 β2-MG的含量。
2． 4 统计学分析
数据用(x ± s)表示，采用 SPSS11． 0 软件进行单
因素方差分析，同时进行 LSD比较。以 P ＜ 0． 05 表
示差异有统计学意义。
3 结 果
3． 1 紫背天葵提取物对肾脏指数、尿量和尿液中
UP、NAG和 β2-MG含量的影响
结果见表 1。与对照组比较，模型组大鼠的肾
372中国生化药物杂志 Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 2012 年第 33 卷第 3 期
脏指数显著升高(P ＜ 0． 01) ;治疗组大鼠的肾脏指
数比模型组显著下降(P ＜ 0． 05) ，说明紫背天葵提
取物具有良好的抑制肾脏肥大的作用。
模型组和治疗组大鼠的 24 h 尿量均明显比对
照组多(P ＜ 0． 01) ;治疗组的 24 h 尿量明显比模型
组少(P ＜ 0． 01) ;模型组大鼠尿液中的 UP和 β2-MG
明显高于对照组(P ＜ 0． 01) ;治疗组大鼠尿液中的
UP 和 β2-MG 均显著低于模型组(P ＜ 0． 05 或
0． 01) ，说明紫背天葵提取物对肾小管具有一定保
护作用。
模型组大鼠尿液中的 NAG 比对照组明显提高
(P ＜ 0． 01) ;治疗组大鼠尿液中 NAG 较模型组明显
降低(P ＜ 0． 01)。表明紫背天葵提取物对肾小管具
有保护作用。
3． 2 紫背天葵提取物对血清中 BUN、Cr 和 β2-MG
含量的影响
结果见表 2。与对照组相比，模型组大鼠血清
中 BUN、Cr和 β2-MG 含量均显著上升(P ＜ 0． 01) ;
治疗组大鼠血清中 BUN、Cr 和 β2-MG 含量较模型
组显著下降(P ＜ 0． 05)。表明紫背天葵提取物能够
明显改善肾小球的过滤功能。
表 1 各组大鼠的肾脏指数、排尿量、UP、NAG、β2 -MG(x ± s，n = 15)
Tab． 1 The effect of the extract of Begonia fimbristipula on kidney index，24-hour urine collection，UP，NAG，and β2 -MG in rats urine
(x ± s，n = 15)
组 别
肾脏指数
/(g /kg)
排尿量
/(mL /24 h)
UP
/(mg /24 h)
NAG
/(U/24 h)
β2-MG
/(μg /24 h)
对照组 3． 96 ± 0． 41 21． 36 ± 2． 03 22． 47 ± 1． 63 0． 36 ± 0． 03 0． 22 ± 0． 02
模型组 7． 51 ± 0． 621 148． 23 ± 13． 271 73． 21 ± 5． 681 1． 08 ± 0． 111 0． 63 ± 0． 051
治疗组 6． 00 ± 0． 382 120． 88 ± 10． 343 56． 34 ± 4． 853 0． 78 ± 0． 062 0． 47 ± 0． 042
与对照组比较:1P ＜ 0． 01;与模型组比较:2P ＜ 0． 05，3P ＜ 0． 01
1P ＜ 0． 01 vs control group;2P ＜ 0． 05，3P ＜ 0． 01 vs model group
表 2 各组大鼠的 Cr、BUN和 β2 -MG(x ± s，n = 15)
Tab． 2 The effect of the extract of Begonia fimbristipula on Cr，BUN，and β2 -MG in rats serum(x ± s，n = 15)
组别 BUN/(mmol /L) Cr /(mmol /L) β2 -MG/(ng /mL)
对照组 6． 85 ± 0． 61 0． 77 ± 0． 10 43． 52 ± 3． 44
模型组 12． 33 ± 1． 691 1． 35 ± 0． 161 82． 22 ± 7． 311
治疗组 10． 42 ± 1． 442 0． 99 ± 0． 132 64． 57 ± 5． 382
与对照组比较:1P ＜ 0． 01;与模型组比较:2P ＜ 0． 05
1P ＜ 0． 01 vs control group;2P ＜ 0． 05 vs model group
4 讨 论
DN是糖尿病最常见、最严重的慢性并发症之
一，以血清中 BUN、Cr 和 β2-MG 水平升高，肾小球
肥大，同时出现蛋白尿和肾功能受损为特征。BUN、
Cr和 β2-MG都是经肾小球滤过后随尿排出，其在血
清中含量可直观反映肾小球的滤过功能，所以血清
中的 BUN、Cr和 β2-MG，可作为肾功能减退如急、慢
性肾衰竭等的标志物。
尿液中的 UP、NAG和 β2-MG均明显增加，预示
着肾小管受损。NAG广泛存在于细胞的溶酶体中，
肾脏是其储存的主要器官之一，尿中的 NAG由近曲
小管释放，其尿排泄量增加可作为近曲小管损伤的
标志。
本研究中，模型组血清中 BUN、Cr 和 β2-MG 水
平均比对照组明显升高;肾脏指数、24 h 尿量、尿液
中 UP、NGA和 β2-MG均较对照组明显升高，表明造
模成功。给予紫背天葵提取物干预后，各指标均较
模型组明显下降，表明紫背天葵提取物能对糖尿病
肾病具有一定的作用。
紫背天葵含黄酮、多糖和红色素和微量元素等，
已有研究表明，黄酮类化合物具有降糖作用［6-8］，我
们推测本研究中发挥作用的主要成分可能是黄酮类
化合物，我们将在此初步研究的基础上，对提取工艺
进一步优化，对提取物的主要成分进行分析，研究发
挥作用的主要成分以及量效关系等，以期为紫背天
葵的开发利用奠定基础。
参考文献:
［1］ 国家医药管理局《中华本草》编委会． 中华本草［M］． 5 卷．上
海:上海科技出版社，2000:495．
［2］ 张林和，屠春燕．紫背天葵中营养成分及总黄铜分析［J］．氨基
酸和生物资源，2004，26(3) :3-5．
［3］ 黄晓梅，吴琼峰．微波法提取紫背天葵红色素的研究［J］．安徽
农学通报，2011，8:38-40．
(下转第 277 页)
472 中国生化药物杂志 Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 2012 年第 33 卷第 3 期
是可 信 的。得 到 的 多 元 一 次 方 程 为:Y =
－340 072 421 +3 501 047 X1 + 930 671 X2 + 674 589
X3 + 3 323 212 X4。
2． 2． 5 最佳水解工艺 由于所有的斜率都是正数，
在本次试验的因素范围内，数值越大水解效果越好。
但是因素 B和 C的影响相对小于 A和 D的影响，因
此我们可以在确定加酸量以及加热时间的前提下，根
据实验的需要以及节省成本的角度，来适当选取其他
两个因素。确定最佳水解工艺为用盐酸与药液比为
5∶2，盐酸浓度 3 mol /L，时间为 3 h，温度为 100 ℃。
2． 2． 6 刺槐素的分离、纯化 由表 3 可知，水解后
的水溶液中残留的刺槐素含量较低，需要大量的氢
氧化钠中和盐酸。本着节省成本及时间的目的，舍
去残留在水中的含量不足 1%的刺槐素。将器壁析
出的黑色物质用三氯甲烷溶解，进行硅胶柱分离，用
三氯甲烷-甲醇(50∶1)进行洗脱，所得组分分别进行
回收，回收后用 HPLC 进行检测。收集含有刺槐素
组分的部分。
将含有刺槐素的部分，进行葡聚糖凝胶柱分离，
洗脱剂为三氯甲烷-甲醇(1∶1) ，收集各个组分，进行
HPLC检测，得到刺槐素部分。重结晶进一步纯化，
HPLC图见图 2，并通过质谱、核磁共振等进行结构
鉴定，证实为刺槐素。刺槐素为纯度 99%，产率
为 6． 5%。
图 2 重结晶后刺槐素的 HPLC图谱
Fig． 2 HPLC chromatograms of acacetin after recrystallization
3 讨 论
均匀设计是一种多因素与多水平实验的设计方
法，它能有效的处理多水平的试验。且让实验点在
实验范围内均匀分布，与单因素实验相比，减少了实
验次数，并能准确地预测和优化实验条件和结果，具
有方便、实用、预测性好等特点，是优选中药成分提
取条件的一种非常实用的方法。近十年来，均匀设
计在国内得到了广泛的应用。
刺槐素具有较好的抗炎和抗肿瘤作用，其对直
肠癌、非小细胞肺癌、乳房癌、前列腺癌、肝癌均有良
好的治疗效果，而对人类正常成纤维细胞毒性较小，
因其高效低毒而具有良好的应用前景。但国内外报
道的刺槐素的提取方法较少，多以提取总黄酮为主，
并且提取方法较为繁琐。而野菊花价格低廉，药材
中游离刺槐素的含量约为万分之三，含量较少。但
野菊花中含有多种含刺槐素的苷，因此选取合适的
水解工艺十分重要。经过均匀设计优选后得到的水
解方法，可以得到大量的刺槐素。该法经济，快速，
较为实用，从而也为刺槐素进一步研究开发提供了
研究基础。
参考文献:
［1］ 中国药典［S］．一部． 2010:295．
［2］ Hsu Y L，Kuo P L，Lin C C． Acacetin inhibits the proliferation of
Hep G2 by blocking cell cycle progression and inducing apoptosis
［J］． Biochem Pharmacol，2004，67:823-829．
［3］ Hsu Y L，Kuo P L，Lin C C． Acacetin-induced cell cycle arrest and
apoptosis in human non-small cell lung cancer A549 cells［J］．
Cancer Lett，2004，212:53-60．
［4］ 李 静，张 莉，曹 玲，等．高效液相色谱法测定首乌丸中大
黄素的含量［J］．中国生化药物杂志，2009，30(2) :118-120．
［5］ 方开泰． 均匀设计与均匀设计表［M］． 北京:科学出版社，
1994．
(上接第 274 页)
［4］ 雷作熹，罗 仁，董晓蕾，等． STZ 诱导糖尿病肾病大鼠模型的
建立［J］．中国实验动物学报，2005，13(3) :163-165．
［5］ 李世芬，王心如，胡 奇，等．链脲佐菌素不同方法诱导 SD 大
鼠糖尿病肾病模型的研究［J］． 中国现代医学杂志，2010，14
(7) :2109-2113．
［6］ 杨宏莉，张宏馨，王 燕，等．山药多糖对 2 型糖尿病大鼠肾病
的预防作用研究［J］．中国药房，2010，21(15) :1345-1347．
［7］ 刘 蕊．黄酮类化合物的药理作用研究进展［J］．黑龙江医药，
2010，23(2) :234-236．
［8］ 李志洲．苦瓜中黄酮类化合物的提取及抗氧化性研究［J］．中
国生化药物杂志，2007，28(4) :264-266．
772中国生化药物杂志 Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 2012 年第 33 卷第 3 期