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草麻黄对α-葡萄糖苷酶的抑制作用研究



全 文 :天然产物研究与开发 Nat Prod Res Dev 2012,24:966-968
文章编号:1001-6880(2012)07-0966-03
收稿日期:2010-03-02 接受日期:2010-06-08
基金项目:河南省教育厅青年骨干教师资助计划(教高 2008-755)
* 通讯作者 Tel:86-378-3880680;E-mail :kangweny@ hotmail. com
草麻黄对 α-葡萄糖苷酶的抑制作用研究
康文艺* ,曹乃锋
河南大学中药研究所,开封 475004
摘 要:采用 96 微孔板法测定草麻黄抑制 α-葡萄糖苷酶活性。草麻黄正丁醇 (IC50 = 6. 86 μg /mL)、乙酸乙酯
(IC50 = 77. 28 μg /mL)和石油醚部位(IC50 = 190. 20 μg /mL)抑制活性远高于阳性对照阿卡波糖(IC50 = 1081. 27
μg /mL)。研究表明,草麻黄各部位均具有很好的 α-葡萄糖苷酶抑制活性,可进行活性追踪分离活性成分。
关键词:草麻黄;α-葡萄糖苷酶;抑制作用
中图分类号:Q946. 81 文献标识码:A
α-Glucosidase Inhibitory Activity of Ephedrae sinica
KANG Wen-yi* ,CAO Nai-feng
Institute of Chinese Materia Medica,Henan University,Kaifeng 475004,China
Abstract:α-Glucosidase inhibitory activity of Ephedrae sinica was screened by the method of 96-microplates. The activi-
ties of n-Butanol (IC50 = 6. 86 μg /mL) ,ethyl acetate (IC50 = 77. 28 μg /mL)and petroleum ether (IC50 = 190. 20 μg /
mL)were higher than that of acarbose (IC50 = 1081. 27 μg /mL). The results showed that all parts from E. sinica had α-
glucosidase inhibitory activity and active compounds should be isolated by the method of bioassay-guided fractionation in
further study.
Key words:Ephedrae sinica;α-glucosidase;inhibitory activity
草麻黄(Ephedrae sinica)为麻黄科(Ephedrace-
ae)麻黄属植物的干燥草质茎。具发表散寒、宣肺
平喘、利水消肿等功效,用于风寒感冒、胸闷喘咳、风
水浮肿、支气管哮喘等症 [1]。药理研究表明,麻黄
具有发汗、平喘、利尿、抗凝血、降压、抗氧化、抗炎等
作用[2-6b]。文献报道,麻黄对细胞免疫有抑制作
用[7],还具有促进脂肪细胞脂肪合成的作用[8]。
近年来,关于麻黄化学成分的报道很多,其主要
含有生物碱、黄酮、挥发油[9]、有机酸、氨基酸[10]、多
糖和鞣质[11]等,但尚未见麻黄抑制 α-葡萄糖苷酶活
性报道。
本文对麻黄抑制 α-葡萄糖苷酶活性进行研究,
为合理开发麻黄资源提供了依据。
1 试剂与仪器
1. 1 试剂
α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase,EC 3. 2. 1. 20) ;4-
硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(4-N-trophenyl-α-D-glu-
copyranoside,PNPG,026K1516) ;阿卡波糖(Acar-
bose,Lot 16869)和二甲亚砜(DMSO)均购自美国
Sigma公司。
1. 2 仪器
Multiskan MK3 酶标仪(美国 Thermo Electron公
司) ;LRH-150 恒温培养箱(上海一恒科技有限公
司) ;DELTA 320 型 PH 计(美国 Mettler-Toledo 公
司) ;电子天平(美国 Mettler-Toledo公司) ;旋转蒸发
仪(德国 Heidolph公司)。
1. 3 药材
草麻黄于 2008 年 7 月采集于内蒙古阿拉善盟
额济纳旗,经河南大学天然药物研究所生药教研室
李昌勤副教授鉴定为麻黄科麻黄属植物草麻黄
(Ephedrae sinica)的地上部分,标本存于河南大学天
然药物研究所。
2 实验方法
2. 1 提取
草麻黄干燥、粉碎后,用甲醇室温下冷浸 3 次,
每次 2 天。合并提取液后浓缩,浸膏分散水中,依次
用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,分别得到石油醚、
乙酸乙酯和正丁醇部位。
2. 2 α-葡萄糖苷酶抑制活性的筛选方法
按文献[12]构建反应体系,在 96 孔板上进行检
测,于 405 nm 波长下测定其 OD 值计算抑制率,并
用 Origin8. 0 软件求出相应 IC50值。
3 结果与讨论
表 1 显示,在相同浓度(1. 5 mg /mL)下,麻黄各
部位均有较好的 α-葡萄糖苷酶抑制活性,其抑制率
远高于阳性对照 Acarbose (55. 63%)。
为进一步研究抑制活性,对草麻黄各部位初筛
终浓度依次对半稀释进行 IC50值计算。阳性对照
Acarbose (IC50 = 1081. 27 μg /mL) ,远高于石油醚部
位 (IC50 = 190. 20 μg /mL)、乙酸乙酯部位 (IC50 =
77. 28 μg /mL)和正丁醇提取物 (IC50 = 6. 86 μg /
mL) ,表明草麻黄各部位均具有较好的 α-葡萄糖苷
酶抑制活性。其中,正丁醇部位的抑制活性最好。
表 1 草麻黄 α-葡萄糖苷酶抑制活性
Table 1 The α-glucosidase inhibitory activity of E. sinica
部位
Fractions
提取物终浓度
Final
concentration
(mg /mL)
抑制率
Inhibition rate
(%)
IC50
(μg /mL)
石油醚 1. 5 95. 2918 190. 20
乙酸乙酯 1. 5 100. 0626 77. 28
正丁醇 1. 5 98. 6378 6. 86
阿卡波糖 1. 5 55. 6300 1081. 27
3. 1 草麻黄对 α-葡萄糖苷酶抑制活性的影响
图 1 显示,草麻黄 3 个部位对 α-葡萄糖苷酶抑
制活性均与浓度呈正量效关系,它们的最大抑制率
几乎均达 100%,但正丁醇部位 IC50小于乙酸乙酯部
位和石油醚部位,因此草麻黄正丁醇部位对 α-葡萄
糖苷酶抑制活性最强。
图 1 提取物质量浓度对 α-葡萄糖苷酶活性的影响
Fig. 1 Effect of the mass concentration of extracts on
inhibitory activity of α-glucosidase
3. 2 不同部位质量浓度对 α-葡萄糖苷酶抑制作用
比较
表 2 显示,不同部位浓度对 α-葡萄糖苷酶抑制
作用。其中,石油醚部位在 0. 1875 mg /mL 时,抑制
率为 51. 5439%;浓度为 1. 5 mg /mL时,达到了最大
抑制率 91. 4904%。乙酸乙酯提取物在 0. 0938 mg /
mL时,抑制率为 64. 9053%;浓度为 1. 5 mg /mL时,
抑制率已经达到其最大抑制率 101. 5579%。正丁
醇 提 取 物 在 0. 0059 mg /mL 时,抑 制 率 为
42. 7298%;浓度为 0. 0468 mg /mL 时,抑制率也达
到了最大(98. 5140%)。此后,再增加提取物的浓
度,其相应的抑制率变化不明显。说明各部位的 α-
葡萄糖苷酶抑制活性呈剂量依赖性。
表 2 不同部位质量浓度对 α-葡萄糖苷酶抑制作用
Table 2 The mass concentration of different extracts effect on inhibitory activity of α-glucosidase
石油醚部位
Petroleum ether fraction
乙酸乙酯部位
Ethyl acetate fraction
正丁醇部位
n-Butanol fraction
浓度
Concentration
of n-Butanol
fraction(mg /mL)
抑制率
Inhibition rate
浓度
Concentration
of n-Butanol
fraction(mg /mL)
抑制率
Inhibition rate
浓度
Concentration
of n-Butanol
fraction(mg /mL)
抑制率
Inhibition rate
1. 5 91. 4904 1. 5 101. 5579 0. 0468 98. 5140
0. 75 90. 1451 0. 75 95. 4105 0. 0234 96. 4792
0. 375 81. 2951 0. 375 95. 4386 0. 0117 93. 0651
0. 1875 51. 5439 0. 1875 93. 6421 0. 0059 42. 7298
0. 0938 12. 5213 0. 0938 64. 9053 0. 0030 14. 6548
0. 0469 0 0. 0469 22. 3158 0. 0015 6. 9730
0. 0234 0 0. 0234 0 0. 0007 0. 1372
769Vol. 24 康文艺等:草麻黄对 α-葡萄糖苷酶的抑制作用研究
4 结论
研究表明,草麻黄各部位的抑制活性均与浓度
呈正相关性,草麻黄正丁醇部位的活性最好,可采用
活性追踪方法对活性成分进行研究。
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