全 文 ：书·论著·
豹皮樟总黄酮对实验性 2 型糖尿病大鼠胰腺的保护
作用及部分机制研究
周卫凤 汪凌云 孙玉秀 鲁云霞 陈冠军
【摘要】 目的 研究豹皮樟总黄酮(TFLC，Total Flavonoids of Litsea Coreana)对实验性 2 型糖尿病 SD
大鼠胰腺的保护作用及部分机制。方法 以本实验室改良的方法建立 2 型糖尿病大鼠模型，将成模大鼠
分为模型组和治疗组，治疗组分别采用小剂量 TFLC(STFLC)和大剂量 TFLC(LTFLC)治疗 6 周。取胰腺
组织作胰岛素的免疫组化、氧化应激指标(GSH、T-SOD、Mn-SOD 和 T-AOC)和 PTP1B 的蛋白表达分析。
结果 TFLC治疗组胰岛面积显著增加，胰腺的氧化应激明显减轻，胰腺中 PTP1B 的蛋白表达显著降低，
且有一定的剂量效应。结论 TFLC具有明显的保护胰岛作用，其机制可能与减少胰腺中的氧化应激和
PTP1B蛋白表达有关，且表现为一定的剂量效应。
【关键词】 豹皮樟总黄酮; 2 型糖尿病; 胰腺; PTP1B
Ｒesearch of therapeutic effect andpart mechanism of TFLC on pancreas in T2DM Ｒat model ZHOU Wei
－ feng． Department of Clinical Medicine，Anhui Medical College，Hefei，Anhui，230601，China．
【Abstract】 Objective To explore the effects and part mechanisms of TFLC on pancreasof experimental
T2DM rat model． Methods The SD rat model of type 2 diabetes mellitus was constructed by improved method，
then they were randomly allocated into model group and treatment group，rats in treatment group were treated with
large and small dose of TFLC (LTFLC and STFLC)for 6 weeks respectively． The pancreatic tissues were used to
analyze insulin content by using immunohistochemical method． The pancreas homogenates were used to detect the
concentration of SOD，GSH，T － AOC and the protein expression of PTP1B respectively． Ｒesults The pancreatic
islet areasin the treatment group were almost restored and the levels of SOD，GSH，T － AOC in pancreas were
obviously decreased． The expression of PTP1B was significantly decreased in LTFLC group and showed definite
dose effect． Conclusions TFLC has obvious protective effect on pancreas in T2DM rats，the mechanism may
related with decreasing oxidative stress and PTP1B protein expression in pancreas，and showed definite dose
effect．
【Key words】 Total flavonoids of Litseacoreana; Type 2 diabetes mellitus; Pancreas; Protein －
tyrosine phosphatase 1B
2 型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)占所有糖尿
病患者的 90%以上，多数 2 型糖尿病患者存在外周组织胰岛
素抵抗和胰岛 β 细胞的失代偿［1］。已有研究表明蛋白酪氨
酸磷酸酶 1B (protein tyrosine phosphotase 1B，PTP1B)，一种负
调控胰岛素信号通路的酶，可能参与胰岛素抵抗的发生，而
PTP1B的特异性抑制剂则有助于治疗 T2DM［2］。
豹皮樟(Litsea Coreana Leve Var)隶属于樟科木姜子属，
其树叶在民间被制成茶叶饮用，俗称“老鹰茶”，《本草纲目》
中也有“止咳、祛痰、平喘、消暑解渴”等记载。老鹰茶富含多
种活性成分，经安徽医科大学天然药物化学教研室鉴定，其有
效部位为总黄酮(total flavonoids)，含量不低于 70%［3］。
前期研究表明豹皮樟总黄酮(TFLC，Total Flavonoids of
Litsea Coreana)具有明显的抗氧化、降血脂、抗炎、免疫调节及
基金项目:安徽省自然科学基金(1208085MH168);安徽医科大
学校级博士基金资助项目(No XJ201013)
作者单位:230601 安徽医学高等专科学校临床医学系，合肥(周
卫凤)，230001 安徽省妇幼保健院，合肥(汪凌云、孙玉秀)，安徽医科
大学生化教研室(鲁云霞);化学教研室(陈冠军)
通讯作者:鲁云霞，Email:wwwdluyx@ sina． com
降血糖等功效，且可能与其下调肝脏中 PTP1B 的表达有
关［4-5］;但尚未见其改善胰腺功能的相关报道。本课题拟在
改良的 T2DM大鼠模型［6］中进一步检测 TFLC的降糖降脂功
效是否与增加 T2DM大鼠胰岛面积、减轻胰腺组织中的氧化
应激、抑制胰腺中 PTP1B的表达有关，旨在进一步探讨 TFLC
应用于临床治疗的可能性。
材料与方法
1．实验动物:清洁级，健康雄性 SD 大鼠，体重 180 ～ 220
g，安徽医科大学实验动物中心，许可证号 SCXK(皖)2011-
001。高热量饲料配制见参考文献［6］。
2．材料与试剂:TFLC(安徽医科大学药学院天然药物化
学室［7］)，用 0． 4%羧甲基纤维素钠配成相应浓度。链脲佐菌
素 (streptozotocin，STZ，Sigma公司)，GSH、SOD和 T － AOC试
剂盒(南京建成生物工程研究所)，小鼠抗大鼠胰岛素、SABC、
DAB试剂(武汉博士德生物技术有限公司)，PTP1B多克隆抗
体(美国 Santa Cruz公司)。
3．主要仪器:752 紫外 /可见分光光度计(上海精密科学
仪器有限公司);TGL-16H型台式高速离心机(珠海黑马医学
仪器有限公司);DYY －Ⅲ电泳仪(北京六一仪器厂)、转移电
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泳仪(Bio － Ｒad公司);Nikon 80i荧光正置显微镜(日本);石
蜡切片机 Leica ＲM2135(德国)。
4．实验方法:(1)分组与给药:大鼠适应性喂养 1 周后，
随机分为正常对照组(NC)、模型组(T2DM)、小剂量 TFLC 治
疗组(STFLC)、大剂量 TFLC 治疗组(LTFLC)，T2DM 模型建
立的具体过程见参考文献［6］，成模后治疗组分别以小剂量
TFLC(300mg /kg /d)、大剂量 TFLC(600mg /kg /d)治疗 6 周。
(2)胰腺胰岛素的免疫组化分析:迅速分离大鼠胰腺组织，多
聚甲醛固定后石蜡包埋，以 4 μm 连续切片，SABC 法进行
Insulin的免疫组化分析，DAB 显色，苏木素复染细胞核，脱水
封片，PBS代替一抗作为空白对照。(3)胰腺氧化应激指标分
析:称取胰腺组织，加生理盐水制成 10%组织匀浆，考马斯亮
兰法进行蛋白质的定量测定，按试剂盒说明书分别测定
GSH、SOD和 T-AOC的含量。(4)胰腺 PTP1B蛋白表达分析:
100 mg胰腺组织裂解，4 ℃离心后取上清液，BCA法测定蛋白
浓度，12% SDS-PAGE电泳，转膜并封闭非特异性结合位点之
后，分别用抗 β-actin和 PTP1B的一抗(抗体稀释浓度分别为
1∶ 800、1∶ 500)孵育，4 ℃封闭过夜，加入辣根过氧化物酶标记
的山羊抗兔或抗鼠二抗(1∶ 5000)室温孵育 2 h，加入 ECL 发
光剂反应 5 min，暗室显影成像，实验重复 3 次。
5．统计学分析:所有数据用平均数 ±标准差(珋x ± s)表示，
用 SPSS 16． 0 软件进行统计分析，组间差异采用 One-way
ANOVA:LSD-t检验，以 P ＜ 0． 05 判断为有显著性差异。
结 果
1． TFLC对 T2DM大鼠胰腺胰岛的影响:胰岛素是由胰
岛 β细胞分泌的唯一降血糖激素，胰岛素的免疫组化结果显
示:NC组胰岛大小均一，形状规则，界限清楚;T2DM 组胰岛
大部分萎缩、多见小胰岛，胰岛细胞数显著减少，表明造模成
功;与 T2DM组相比，各用药组特别是 LTFLC 组胰岛均明显
增生，表现为一定的剂量效应(图 1)。
图 1 TFLC对大鼠胰腺胰岛的影响(× 200)
2． TFLC对 T2DM大鼠胰腺氧化应激的影响:与 NC 组对
比，T2DM组胰腺中氧化应激的清除剂 SOD、GSH、T-AOC 均
明显降低(P ＜ 0． 05)。与 T2DM 组比较，STFLC 治疗组 SOD、
GSH及 T-AOC的变化均无显著性差异(P ＞ 0． 05);LTFLC 组
SOD和 GSH、T-AOC水平均明显升高(P ＜ 0． 05)见表 1。
表 1 TFLC对 T2DM大鼠胰腺氧化应激的影响(珋x ± s，n = 6)
组别
SOD
(U·mgprot － 1)
GSH
(μmol·gprot － 1)
T-AOC
(nmol·mgprot － 1)
NC 37． 04 ± 6． 69 265． 73 ± 58． 26 1． 83 ± 0． 55
T2DM 25． 86 ± 3． 87* 69． 93 ± 18． 21* 3． 16 ± 0． 76*
STFLC 27． 67 ± 3． 12 120． 30 ± 50． 41 2． 41 ± 0． 28
LTFLC 36． 77 ± 7． 96＊＊ 204． 64 ± 45． 04＊＊ 1． 50 ± 0． 91＊＊
注:与 NC组比较，* P ＜ 0． 05;与 T2DM组比较，＊＊P ＜ 0． 05
3． TFLC 对 T2DM 大鼠胰腺 PTP1B 蛋白表达的影响:与
NC组比较，T2DM 组 PTP1B 表达显著升高(P ＜ 0． 05)，2 个
TFLC组的 PTP1B表达量均明显降低(P ＜ 0． 05)，其中 LTFLC
组的 PTP1B 表达量比 STFLC 组更低，表现为一定的剂量效
应。
图 2 TFLC对 T2DM大鼠胰腺 PTP1B表达的影响
讨论 T2DM 与胰岛 β 细胞的关系密切，T2DM 初期，胰
岛 β细胞起到代偿作用;伴随 T2DM 的发展，胰岛 β 细胞功
能障碍;T2DM晚期，胰岛 β细胞逐渐发生凋亡［8］。表 1 结果
显示 T2DM组大鼠由于高血糖及其分解过程中产生的自由基
增多导致其胰腺中抗氧化应激的因子 SOD、GSH、T － AOC 明
显降低，且图 1 显示 T2DM组大鼠的胰岛明显萎缩，但尚有少
部分残留，反应模型构建成功。
研究显示 TFLC可能通过刺激胰岛 β 细胞分泌胰岛素，
抑制肾上腺素引起的肝糖原分解和促进肝糖原的合成来降低
血糖［9］。TFLC治疗组特别是大剂量 TFLC 组可明显增加胰
腺组织中 SOD、GSH、T － AOC 的水平，且部分逆转已萎缩胰
岛的凋亡，发挥保护胰岛的作用。王建青等人则发现 TFLC
有预防肝脂肪变性和减少肝脏氧化应激的作用，与本研究结
果类似［10］。
PTP1B对胰岛素受体及其底物的磷酸化水平的负调控作
用使其成为胰岛素抵抗的重要标志，而 PTP1B基因的表达或
活性降低将有助于提高外周组织对胰岛素的敏感性［2］。本
研究发现 PTP1B 在 T2DM 大鼠胰腺组织中高表达，大剂量
TFLC可显著降低胰腺中 PTP1B 的蛋白表达水平，这与本课
题组前期在肝脏中的研究结果一致［5］。
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总之，TFLC对 T2DM大鼠具有显著的减少氧化应激、促
进胰岛 β细胞增生、降低胰腺中 PTP1B的表达进而改善胰岛
素抵抗的作用，使其成为治疗 T2DM药物的新型潜在药物;其
是否影响胰岛素信号通路中的其它分子?有待于进一步的深
入研究。
参 考 文 献
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(收稿日期:2014-05-15)
自体树突状细胞疫苗对雌、孕激素受体双阴性
乳腺癌患者免疫功能的影响
李娟娟 闵海燕 刘同强 戚春建 钱科卿
【摘要】 目的 评价回输自体肿瘤冻融抗原致敏的自体树突状细胞(ADC)疫苗免疫治疗的处于Ⅱ /
ⅢA期雌、孕激素受体双阴性表达的乳腺癌患者的免疫反应和不良反应。方法 利用自体肿瘤制备 ADC
疫苗。选取符合实验要求的患者 63 例，分为实验组和对照组，实验组患者共接受 4 次皮下 ADC 疫苗回
输。比较两组患者体内淋巴细胞亚群和细胞因子变化;测定实验组疫苗接种前后 IFN － γ + /CD8 + T 细胞
数量。结果 实验组 Th1 辅助细胞分泌细胞因子升高，NK细胞数量增多，而 CD3 +细胞水平下降，与对照
组比较，差异有统计学意义(P ＜ 0． 01)，疫苗接种后提高了 IFN － γ + /CD8 + T 细胞数量，与疫苗接种前比
较有统计学意义(P ＜ 0． 05)。结论 ADC疫苗可以触发乳腺癌患者的免疫应答。
【关键词】 树突状细胞; 乳腺癌; 免疫应答; 免疫学
The change of immune status in estrogen /progestin receptor double － negative breast cancer patients who
received the treatment of autologous dendritic cells vaccine LI Juan － juan，et al． Department of
Oncology，Changzhou NO． 2 Hospital Affiliated to Nanjing Medical College，Changzhou，Nanjing，213003，
China．
【Abstract】 Objective The aim of this work was to assess the immune response of estrogen receptor /
progestin receptor double － negative breast cancer patients (stage II / IIIA)on autologous dendritic cells(ADC)
pulsed with autologous tumorlysate．Methods ADC vaccines were generated from CD14 + precursors pulsed with
autologous tumor lysate． 63 patients who met the requirement were divided into experimental group and control
group． Patients in the experimental groupwere immunized intradermal for four times． Cytokine products and
lymphocyte subsets were determined for the evaluation of the therapeutic efficiency． IFN － γ + /CD8 + T cells in
experimental group were detected before and after vaccination were supplied． Ｒesults ADC vaccines elicited Th1
cytokine secretion and NK cells increased，but the percentage of CD3 + T cells in the peripheral blooddecreased
(P ＜ 0． 01)． IFN － γ + /CD8 + T cells increased after vaccination，compared with the levels before vaccination，
thedifference was statistical significant (P ＜ 0． 05)． Conclusions ADC vaccine was effective in evoking anti －
breast cancer immune response．
基金项目:本项目为国家自然科学基金面上项目资助(编号:81272323)
作者单位:213003 南京医科大学附属常州二院肿瘤内科(李娟娟、闵海燕、戚春建、钱科卿);肾内科(刘同强)
通信作者:刘同强，Email:qiang． lt@ tom． com
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