全 文 ：第 31卷第 2期　　　　　　　　 　西 南 大 学 学 报(自然科学版)　　　　　　　　　　　2009年2月
Vol.31　No.2 Journal of Southw est Unive rsity (N atural Science Edi tion) Feb.　2009
文章编号:1673-9868(2009)02-0118-06
细叶杜香高效快繁体系建立及种质试管保存研究＊
姜云天1 , 　陈艳秋2 , 　朱俊义1 , 　曲柏宏2
1.通化师范学院 生物系 , 吉林 通化 134002;2.延边大学农学院 园艺系 , 吉林 龙井 133400
摘要:以细叶杜香新生嫩芽为外植体 , 应用均匀设计法筛选最适合的培养基 , 结果表明:最适合基部直接再
生芽苗的诱导培养基为:MS+TDZ2.25 mg/ L , 诱导率为 100%;生根培养基:MS(改良)+IAA0.15 mg/ L+
IBA0.02 mg/ L+KT0.05 mg/ L , 生根率达 98%以上;试管保存培养基:1/ 4MS+B91.5 mg/ L+根皮苷 3.1 mg/ L ,
保存时间可达 40 个月以上.以再生植株的茎节为材料进行快繁的结果表明 , 在 30 d 的一个培养周期内 , 增殖倍数
平均达 80 以上.常温条件下 , 采取“低营养矮化延缓生长”的方法在试管内保存种质资源.建立了细叶杜香的离体
培养和种质试管保存体系.
关　键　词:细叶杜香;种质试管保存;组织培养;快速繁殖;均匀设计;根皮苷
中图分类号:Q946 文献标识码:A
细叶杜香(Ledum palustre var.angustum N.Bush.)别名白山茶 , 为杜鹃花科杜香属多年生木本植
物 , 《吉林省野生动植物保护管理暂行条例》中定为省级一类重点保护植物.杜香油中有十多种药用成
份[ 1] , 工业上可用于制革 , 作香料等;医学上可治疗皮肤病 、咽喉炎 、百日咳等疾病.其头状花序 , 花色洁
白 , 可驯化为观赏植物[ 2] .对研究植物区系也具有十分重要的意义[ 3] .还可开发为耐寒及抗病能力强的园
艺新品种 , 作为高山植物育种的种质资源 , 另外 , 其含有特殊的香气 , 可用于日用化工 、制药皂 、脚气水 、
洗发香波等[ 4-5] .其在长白山区数量稀少 , 分布区域十分狭窄 , 仅在长白山国家级自然保护区内有较大种
群分布.因其种子 、扦插等常规繁殖成活率极低 , 开发和利用受到极大的限制.因此 , 在保护好现有野生资
源的同时 , 应对这一野生珍贵稀有植物进行离体快繁和试管保存 , 以防本物种灭绝.同时 , 为缩短培养基
配方的摸索周期 , 应用均匀设计处理和分析数据 , 以期得到最佳培养条件.与其同属的其他种植物的离体
培养已有报道[ 6] , 但细叶杜香高效快繁体系和种质试管保存在国内外迄今未见.
1　材料与方法
1.1　外植体材料的处理
4月于长白山北坡海拔 1 300 m 的针阔混交林下采细叶杜香休眠枝条在实验室内水培促使腋芽萌发.
将新生嫩芽剪下 , 在超净工作台上用 70%酒精涮洗 60 s , 用含 3%青霉素的次氯酸钠(0.3%)溶液浸泡
6 min , 无菌水冲洗 8次.用无菌滤纸吸干表面水分 , 切除被杀菌消毒剂损伤部分后作为外植体备用[ 7-8] .
1.2　嫩芽基部直接再生芽苗的诱导
以 MS 为基本培养基 , 附加不同浓度的 TDZ 和 IAA , 蔗糖30 g/L , 琼脂粉 9.5 g/L , pH 5.7 , 温度(24
±2)℃, 光照强度 1 600 lx , 光照周期 13 h/d.将外植体接种到不同培养基上进行嫩芽基部直接再生芽苗
诱导培养.筛选最适宜的分化培养基及激素浓度配比.统计并计算出芽苗分化率.
＊收稿日期:2008-05-28
基金项目:吉林省科技厅自然科学基金资助项目(200705C05);通化师范学院自然科学基金资助项目(200742;XS060079).
作者简介:姜云天(1975-), 男 , 吉林四平人 , 助教 , 硕士研究生 , 主要从事长白山区植物生理生化研究.
通讯作者:曲柏宏 , 教授.
DOI :10.13718/j.cnki.xdzk.2009.02.019
1.3　生根培养基筛选
以改良 MS(1/4大量元素 、1/2微量元素 、 1/3铁盐和 1/2有机成分)为培养基 , 附加不同浓度的 IAA 、
IBA 和 NAA , 同时加入 KT0.05 mg/L(壮苗).蔗糖 15 g/L , 琼脂 8.0 g/ L , pH 5.6 , 温度(22±2)℃, 光
照强度 1 100 lx , 光照周期 9 h/d.筛选最适宜的生根培养基.统计并计算出生根率.
1.4　再生植株快繁体系的建立
采用节培法进行快繁 , 将生根的苗切割成一叶一段转接到优化后的培养基中 , 同时进行腋芽萌发 、伸
长及生根培养.统计并计算出增殖周期和倍数.
1.5　种质试管保存
以 MS 为基本培养基 , 采用“低营养矮化延缓生长”的方法 , 将基部含有少量芽锥的丛生芽团接种到不
同培养基上进行试管保存 , 温度为(20±2)℃, 光照强度 700 lx , 光周期 8 h/d , 蔗糖 30 g/L , 矮化剂采用
B9 , 生长延缓剂采用根皮苷.筛选最适宜的种质试管保存培养基.
1.6　数据分析
数据分析与处理采用均匀设计(Uniform Design)软件.回归分析采用全回归(后退法).
2　结果与分析
2.1　MS培养基中不同浓度 TDZ和 IAA配比对细叶杜香嫩芽基部直接再生芽苗的影响
以MS 为基本培养基 , 附加不同浓度的 TDZ 和 IAA(由预试验可知浓度范围分别为 1.2 ～ 2.4 mg/L 和
0.02 ～ 0.08 mg/L), 为了提高细叶杜香再生芽苗的速度和分化率 , 采用均匀设计法[ 9] , 每个处理数为 30 ,
选用 U 10(108)均匀表(表 1), 同时考察了 TDZ 和 IAA 浓度交叉配比对分化率的影响(在表和方程中 , X1
为 TDZ 浓度 , X 2 为 IAA 浓度 , Y 为分化率 , 结果见表 2).
表 1　U10(102)因素及水平设计
水　平 因素/(mg· L-1)
X1 X 2
1 1.20 0.02
2 1.35 0.03
3 1.50 0.04
4 1.65 0.05
5 1.80 0.06
6 1.95 0.07
7 2.10 0.08
8 2.25 0.02
9 2.40 0.03
10 1.20 0.04
表 2　U10(102)均匀设计实验安排及结果
处理号 因素/(mg · L -1)
X 1 X 2
Y ＊
/ %
1 1.20 0.08 76.0
2 1.35 0.04 79.0
3 1.50 0.04 81.0
4 1.65 0.07 82.0
5 1.80 0.03 85.0
6 1.95 0.03 87.0
7 2.10 0.06 88.0
8 2.25 0.02 97.0
9 2.40 0.02 94.0
10 1.20 0.05 78.0
　　＊为培养 60天的分化率 , 10 瓶平均值.
　　数据经均匀设计软件处理 , 得回归方程 Y =63.4+13.7X1 -57.6X 2 , 样本容量 N =10 , 显著性水平α
=0.01 , 复相关系数 R=0.972 4 , 检验值 F t =60.70 , 临界值 F(0.01 , 2 , 7)=9.547 , F t >F(0.01 , 2 , 7) , 回归方程
显著.对各方程项进行显著性检验可知:检验值 F(2)=2.415 , 临界值 F(0.01 , 1 , 7)=12.25 , F(2)≤F(0.01 , 1 , 7),
此方程项不显著 , 需要剔除.剔除不显著方程项 , 新建回归方程继续计算 , 得回归方程Y =57.9+15.4X 1 ,
复相关系数 R=0.962 6 , 检验值 F t =101.1 , 临界值 F(0.01 , 1 , 8)=11.26 , F t >F(0.01 , 1 , 8) , 回归方程显著.对
方程项进行显著性检验可知 , X 1 对Y 影响均显著.根据回归方程求出Y 的最优值为:X1 =2.4 , 在此组合
基础上求得最优解 , y =94.9 , 此解为回归方程的解析解 , 需按公式Y =y ±uα· s计算出优化值区间估计为
Y =94.9(±6.65), 即 88.25%～ 101.55%.通过实验结果发现 , 当 TDZ 的浓度低于 1.2 mg/L , 嫩茎基部
几乎不分化芽苗 , 超过 2.25 mg/L , 时分化率下降(说明过高的 TDZ 浓度对基部直接再生芽苗起抑制作
用), 且芽苗较细弱;当 IAA浓度超过 0.08 mg/ L 时嫩芽基部产生愈伤组织 , 为确保细叶杜香经组培快繁
后的遗传稳定性 , 不采取愈伤组织再分化产生芽苗的方式.因此 , 以优化值 TDZ2.25 mg/ L 进行验证试
119第 2期　　　　　　　姜云天 , 等:细叶杜香高效快繁体系建立及种质试管保存研究
验 , 嫩茎接种到附加 TDZ2.25 mg/ L 的 MS 培养基上进行再生芽苗诱导培养 , 培养 35 d , 发现基部产生大
量锥形突起 , 继续培养至 45 d锥形突起伸长为芽苗(图1:a), 培养至 50 d再生芽苗可伸长至3.0 cm以上 ,
且苗壮而整齐 , 分化率达 100%, 在估计区间范围内 , 且较 10个试验号的分化率都高.因此 , 细叶杜香嫩
芽基部直接再生芽苗的最佳诱导培养基为 MS+TDZ2.25 mg/ L.
2.2　改良MS培养基中不同浓度生长素配比对细叶杜香组培苗生根的影响
采用改良 MS培养基和附加生长素 IAA 、 IBA 和 NAA , 由预试验可知 , 三种生长素浓度分别控制在
0.05 ～ 0.15 mg/L 、 0.02 ～ 0.10 mg/ L 、 0.01 ～ 0.05 mg/ L 之间 , 过高的生长素导致幼苗基部膨胀或产生愈
伤瘤 , 继续培养根从膨胀部或愈伤瘤上发出 , 这样的苗在移栽时 , 根随愈伤瘤从苗基部脱落 , 移栽成活率
几乎为零 , 可能是根与苗茎的纤维疏导组织连接不完整所致 , 在培养基中附加 K T0.05 mg/L 生根苗较未
附加的粗壮.为了提高细叶杜香的生根率 , 采用均匀设计法 , 每个处理数为 30 , 选用 U 10(108)均匀表(表
3), 同时考察了三种生长素浓度交叉配比对生根率的影响(在表和方程中 , X1 为 IAA 浓度 , X2 为 IBA 浓
度 , X 3 为 NAA 浓度 , Y 为生根率 , 结果见表 4).
表 3　U10(103)因素及水平设计
水　平 因素/(mg· L-1)
X1 X 2 X 3
1 0.05 0.02 0.01
2 0.06 0.03 0.02
3 0.07 0.04 0.03
4 0.08 0.05 0.04
5 0.09 0.06 0.05
6 0.10 0.07 0.01
7 0.11 0.08 0.02
8 0.12 0.09 0.03
9 0.13 0.10 0.04
10 0.15 0.02 0.05
表 4　U10(103)均匀设计实验安排及结果
处理号 因素/(mg· L-1)
X 1 X 2 X 3
Y ＊
/ %
1 0.05 0.06 0.02 44.5
2 0.06 0.02 0.03 52.0
3 0.07 0.05 0.05 53.0
4 0.08 0.10 0.01 57.5
5 0.09 0.04 0.02 67.0
6 0.10 0.09 0.04 69.0
7 0.11 0.03 0.05 75.5
8 0.12 0.08 0.01 80.0
9 0.13 0.02 0.03 88.5
10 0.15 0.07 0.04 95.0
　　＊为培养 35天的生根率 , 10 瓶平均值.
　　数据经均匀设计软件处理 , 得回归方程 Y =23.0+525X1 -63.4X 2 -55.6X 3 , 样本容量 N =10 , 显著
性水平α=0.01 , 复相关系数 R=0.999 2 , 检验值F t =1 257 , 临界值 F(0.01 , 3 , 6)=9.780 , F t >F(0.01 , 3 , 6) , 显
著 , 说明回归方程有意义.对各方程项进行显著性检验可知 , 检验值 F(3)=7.788 , 临界值 F(0.01 , 1 , 6)=
13.75 , F(3)≤F(0.01 , 1 , 6) , 此方程项不显著 , 需要剔除.第 1次剔除不显著方程项 , 新建回归方程继续计算 ,
得回归方程Y =21.2+520X1 -52.6X2 , 复相关系数 R=0.998 2 , 检验值 F t =955.6 , 临界值 F(0.01 , 2 , 7)=
9.547 , F t >F(0.01 , 2 , 7) , 同理 , 对各方程项进行显著性检验可知 , 各方程项对Y 影响均显著.根据回归方程
求出Y 的最优组合为 , X 1 =0.15 , X2 =0.02 , 在此组合基础上求得最优解 y =98.2 , 按公式 Y =y ±uα· s
计算出优化值区间估计为Y =98.2(±3.99), 即 94.21 ～ 102.19.以最优组合做验证试验 , 待嫩芽基部再生
的芽苗长至 3.0 cm 以上时 , 将生长健壮的苗切下 , 然后将其移入附加 IAA0.15 mg/ L+IBA0.02 mg/ L+
KT0.05 mg/L 的改良 MS 培养基中 , 培养 15 d开始生根 , 25 d后幼苗基部或茎部直接发出 3 ～ 5条不定根
(图 1:b), 45 d后苗高可达 4.0 ～ 5.0 cm以上 , 有的产生了侧根 , 根和苗的形态 、发育均正常 , 生根率达
98%, 较 10个试验号的生根率都高.可见 , 细叶杜香最佳生根培养基为 MS(改良)+IA A0.15 mg/L +
IBA0.02 mg/L+KT0.05 mg/L.
2.3　再生植株高效快繁体系的建立
采取节培法进行继代快繁[ 10-11] , 待生根苗伸长至 6.0 cm 以上时 , 留一叶剪下苗干 , 将其切割成一
叶一段转接到附加 2.0 mg/ L GA 3(有利于茎段腋芽的迅速萌发和伸长)的生根培养基中 , 同时进行节伸
长及生根培养 , 培养 15 d苗基部开始生根 , 45 d后苗高可达 5.0 cm 以上 , 大多数苗在基部又分化出多
株粗壮的苗且伴有根产生(图 1:c).30 d为 1个增殖周期 , 每瓶增殖倍数平均达80以上.随着增殖次数
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的增加可适当降低生长素浓度(以免激素积累).因此 , 细叶杜香再生植株增殖培养基为 MS(改良)+
IAA0.15 mg/L+IBA0.02 mg/ L+KT0.05 mg/ L+GA 3 2.0 mg/L.
2.4　炼苗和移栽
苗生根后 , 从培养瓶中取出试管苗 , 在含有 3 mg/ L 高锰酸钾溶液中洗去苗上残留的琼脂 , 植入经 200
倍液多菌灵消毒过的松针和泥炭土(1∶3)混合的基质中 , 薄膜覆盖以保湿保温 , 湿度保持在 80%, 温度控
制在(22±2)℃, 每天自然光照 8 h , 适时通风换气 , 待叶片变为红色后可揭膜 , 每天早晨喷洒清水 1次.
成活率达 95%以上(图 1:d).
2.5　MS培养基中营养成分浓度比例和不同浓度 B9 及根皮苷的交叉配比对细叶杜香种质试管保存的影响
采取降低 MS培养基中营养成分 , 并附加不同浓度的矮壮素 B9 和生长延缓剂根皮苷对基部含有少
量芽锥的丛生芽团进行试管保存.由预实验可知 , B9 浓度控制在 1.5 ～ 2.4 mg/L 之间 , 超过 2.4 mg/L
时苗叶出现卷曲和茎段缩节幅度极大 , 低于 1.5 mg/L 时苗趋于明显生长趋势.根皮苷浓度控制在 1.0
～ 3.10 mg/ L 之间 , 超过 3.10 mg/ L 时芽苗很快变黄最终死亡 , 低于 1.0 mg/L 保存 6个月后恢复生长.
为了摸索细叶杜香试管保存时 MS培养基营养成分降低的比例 、矮壮素 B9 及根皮苷浓度的最佳配比和
降低生长率 , 采用均匀设计法 , 每个处理数为 30 , 选用 U 10(108)均匀表(表 5), 同时考察了 MS 营养成
分浓度比例 、B9 和根皮苷浓度交叉配比对生长率的影响(在表和方程中 , X 1 为 MS 的倍数 , X 2 为 B9 浓
度 , X 3 为根皮苷浓度 , Y 为生长率 , 即生长长度与生长后总长度的比值 , 结果见表 6).
表 5　U10(103)因素及水平设计
水　平
因　　　素
X1
/MS
X 2
/(mg· L-1)
X 3
/(mg· L-1)
1 1/ 10 1.50 1.00
2 1/ 9 1.60 1.25
3 1/ 8 1.70 1.50
4 1/ 7 1.80 1.75
5 1/ 6 1.90 2.00
6 1/ 5 2.00 2.25
7 1/ 4 2.10 2.50
8 1/ 3 2.20 2.75
9 1/ 2 2.30 3.00
10 1 2.40 3.10
表 6　U10(103)均匀设计实验安排及结果
处理号
因　　　素
X1
/MS
X2
/(mg · L -1)
X3
/(mg · L -1)
Y ＊
/ %
1 1/ 10 1.90 2.50 3.61
2 1/9 2.40 1.50 4.90
3 1/8 1.80 3.10 3.02
4 1/7 2.30 2.25 4.19
5 1/6 1.70 1.25 5.00
6 1/5 2.20 3.00 3.57
7 1/4 1.60 2.00 4.50
8 1/3 2.10 1.00 6.05
9 1/2 1.50 2.75 4.55
10 1 2.00 1.75 7.48
　　＊为保存 12个月的生长率 , 10 瓶平均值.
　　数据经均匀设计软件处理 , 得回归方程 Y =4.96+3.41X 1 +0.456X 2 -1.02X 3 , 样本容量 N =10 , 显
著性水平 α=0.01 , 复相关系数 R =0.999 9 , 检验值 F t =1.963e+4 , 临界值 F(0.01 , 3 , 6)=9.780 , F t >
F(0.01 , 3 , 6) , 回归方程显著.对各方程项进行显著性检验可知 , 各方程项均显著.根据研究目的(反向优化)
和回归方程求出Y 的最优组合为:X 1 =1/10 , X 2 =1.5 , X 3 =3.1 , 将其代入方程 , 求得 y =2.81 , 按公式Y
=y ±uα· s计算出优化值区间估计为Y =2.81(±5.97e-2), 即 2.750 3 ～ 2.869 7.由预试验可知 , 营养成
分为 1/5MS 以下时 , 培养 6个月芽苗叶片由鲜绿色转为黄绿色 , 可能是营养成分过低导致的.所以 , 需要
对优化值进行改良 , 即 1/4M S+B9 1.5mg/L+根皮苷 3.1 mg/L , 然后再进行验证试验 , 结果表明:将含有
丛生芽团接种到附加 B91.5 mg/L 和根皮苷3.1 mg/L 的 1/4MS 培养基上进行保存(图1:e), 保存 12个月
丛生芽团上的苗平均生长率仅为 2.72%, 继续保存至 40个月后 , 测其平均生长率为 2.847%以下 , 较 10
个试验号的生长率都小.因此 , 细叶杜香丛生芽团的最佳试管保存培养基为 1/10MS +B93.5 mg/L +根皮
苷 2.6 mg/L .
经 40个月的保存后 , 将丛生芽团转接到芽苗诱导培养基 MS+TDZ2.25 mg/ L 上进行解除保存培养 ,
培养 30 d后 , 芽苗叶片由浅绿逐渐转为翠绿色 , 继续培养至 50 d , 芽苗恢复迅速生长状态 , 丛生芽团基部
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再次分化出大量芽苗 , 并伴有气生根发生 , 分化率达 100%, 且苗粗壮 、生长旺盛 , 形态和发育均未出现异
常(图 1:f).对保存后基部再生的芽苗进行生根实验发现 , 培养 4周后在苗基部和茎部产生根锥 , 6周后根
长可达 1.0 cm 以上 , 且生根率达 100%.
a.芽苗直接再生;b.生根培养;c.节增殖培养;d.移栽;e.种质试管保存;f.解除保存后生长情况.
图 1　细叶杜香组织培养各阶段的培养物形态
3　讨论与结论
实验证明 , 培养基 MS+TDZ2.25 mg/L 对细叶杜香嫩芽基部直接再生芽苗的诱导效果最好 , 细叶杜
香离体培养采取新生嫩芽基部直接再生方式 , 遗传稳定性好 , 速度快 、分化率高.培养基 MS(改良)+
IAA0.15 mg/L +IBA0.02 mg/ L+K T0.05 mg/ L 较适合于细叶杜香的生根 , 在培养基中附加 0.05 mg/L
的 KT , 再生植株较未附加的粗壮且长势好.再生植株快繁采取节培法 , 在生根培养基的基础上进行优化 ,
附加 2.0 mg/ L 的 GA 3 有利于茎段腋芽的迅速萌发和伸长 , 从而缩短了增殖周期 , 提高了增殖倍数.方法
简捷 , 经济实用 , 可操作性强 , 达到了再生植株快繁的目标.目前 , 国内外已有很多关于植物种质保存方面
的报道 , 大多采取低温处理 、玻璃化 、包埋 、低温结合弱光照等方法[ 12-13] .本研究对细叶杜香的种质保存
采取“低营养矮化延缓生长”的方法[ 14] , 需特殊改良的 MS培养基且不需加生长素和细胞分裂素 , 只需加入
矮壮素 B91.5 mg/L 和根皮苷 3.1 mg/L 对丛生芽团进行试管保存 , 这种方法可在常温下保存细叶杜香种
质达 40个月以上.通过对解除保存的丛生芽团进行分化和生根试验证明 , 解除保存后丛生芽团很快恢复生
长 , 并能很快于基部再生出芽苗且生长旺盛 , 形态和发育均未出现异常.应用均匀设计法处理和分析数据
大大缩短了培养基配方的摸索周期.本研究结果证明 , 已成功建立了细叶杜香高效快繁体系 , 达到了试管
保存的目的 , 对长白山野生杜香的开发利用 、工厂化育苗和种质试管保存有一定的参考意义.
致谢:在试验研究和数据处理过程中 , 得到通化师范学院生物系顾地周老师的大力支持和帮助 , 谨此致谢.
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122 西南大学学报(自然科学版)　　　　　投稿网址 http://xbg jx t.sw u.cn　　　　　第 31卷
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Highly Efficient Micropropagation System
and in vitro Germplasm Preservation for
Ledum palustre var.angustum N.Bush.
JIANG Yun-tian1 , 　CHEN Yan-qiu2 , 　ZHU Jun-yi1 , 　QU Bai-hong2
1.Department of Biology , Tonghua Normal University , Tonghua Jilin 134002 , China;
2.Department of Horticul ture , Yanbian Agricultural College of Yanbian University , Longjing Jilin 133400 , China
Abstract:Young buds of Ledum palustre var.angustum N.Bush.were used as explants and sui table me-
dium composi tions w ere screened in a Uni fo rm Design experiment.The resul ts showed that MS +TDZ
2.25 mg/L w as opt imum fo r shoo t reg eneration , the regene ra tion rate being as high as 100%;MS (modi-
f ied)+IAA 0.15 mg/L +IBA 0.02 mg/L+KT 0.05 mg/ L w as most suitable for plant le t root ing , w ith a
roo ting rate o f >98%;1/4M S+B9 1.5 mg/L +phloridzin 3.1 mg/ L w as most suitable fo r in vit ro germ-
plasm prese rv ation , under w hich the plant materials could be maintained fo r 40 months.S tem segments
wi th one node each w ere cut f rom the regenerated shoots and cul tured fo r rapid propagation , and an 80-fold
pro li feration rate w as achieved w ithin 30 day s.The method of “ low nutrients w ith defering g row th and
dw arfing” was utilized fo r germplasm prese rv ation in vi t ro at ambient temperature.An in vit ro culture and
germplasm preservation sy stem for L.palustre var.angustum N.Bush.has thus been successfully estab-
li shed.
Key words:Ledum palustre var.angustum N.Bush.;in v it ro germplasm preservation;ti ssue cul ture;
micropropagation;phlo ridzin
责任编辑　胡　杨　　　　
123第 2期　　　　　　　姜云天 , 等:细叶杜香高效快繁体系建立及种质试管保存研究