全 文 ：文爱华，刘济明，王军才，等． 自然干旱胁迫对米槁生理生化的影响［J］． 江苏农业科学，2015，43(7):257 － 260．
doi:10． 15889 / j． issn． 1002 － 1302． 2015． 07． 089
自然干旱胁迫对米槁生理生化的影响
文爱华，刘济明，王军才，高 攀，李丽霞
(贵州大学林学院，贵州贵阳 550025)
摘要:以贵州省罗甸县米槁为研究对象，进行盆栽控水自然干旱 22 d及复水 15 d处理，研究米槁叶片的相对含水
量、水分饱和亏、游离脯氨酸含量、可溶性蛋白质含量、可溶性糖含量、淀粉含量、丙二醛(MDA)含量、过氧化物酶
(POD)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性的变化趋势。结果表明:随着干旱时间的延长，米槁
叶片的游离脯氨酸、可溶性蛋白质、可溶性糖、MDA 含量在一定范围内都呈明显升高趋势，复水后降低;SOD、POD、
CAT变化趋势比较一致，都呈先上升后下降趋势。可见土壤含水量直接影响植物各项生理指标，从而影响植物的正
常生长发育。
关键词:米槁;干旱胁迫;生理生化
中图分类号:S567． 1 + 91． 1 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2015)07 － 0257 － 03
收稿日期:2015 － 01 － 04
基金项目:贵州省林业厅重大项目(编号:黔林科合［2010］重大
04 号)。
作者简介:文爱华(1989—)，女，山东济南人，硕士研究生，研究方向
为野生动植物保护与利用。E － mail:wah0917@ 163． com。
通信作者:刘济明，博士，教授，从事植物生态学研究。E － mail:
karst0623@ 163． com。
水是植物生长发育重要的环境因子，水分过多或过少对
植物生长都不利。据统计，全球每年由旱涝所造成的损失约
占自然灾害总损失的 60%以上，其中干旱造成的损失量超过
其他逆境造成的损失量总和［1］。土壤有效水分匮乏对植物
生长影响显著［2 － 4］，因此植物耐旱潜力是植物生理生态学领
域的研究热点［5］。研究表明，植物体内可溶性蛋白质大多是
参与各种代谢的酶类，在植物受到干旱胁迫时会发生变化;当
植物遭受水分胁迫造成生理性缺水时，植物体内脯氨酸
(Pro)大量积累;植物细胞内自由基的产生与清除处于动态
平衡，一旦该平衡遭到破坏，则自由基积累，丙二醛(MDA)含
量增加;超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化
氢酶(CAT)等能够有效地清除自由基，是酶促防御系统的重
要组成成分［6 － 11］。米槁(Cinnamomum migao H． W． Li)别称
大果木姜子，为樟科樟属高大乔木常绿植物。米槁是贵州省
苗族民间常用药物，其名字来源于苗语，异名有麻槁、大果樟
等［12］。米槁有逐寒、镇痛、健脾、消饱胀等功效，常用于治疗
腹胀、腹痛、晕车呕吐及牛马腹胀等人畜疾病［13 － 18］。目前对
米槁的研究主要集中于其化学成分的分离与鉴定，有关干旱
胁迫对米槁生理生化指标影响的研究尚未见报道。笔者以贵
州省罗甸县米槁幼苗为研究对象，采用盆栽控水方法对米槁
耐旱潜力进行研究，探究干旱胁迫与米槁生理生化指标的相
关性，旨在为在贵州省大面积种植米槁提供依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
选用罗甸县 1 年生米槁幼苗，带回贵州大学林学院苗圃，
采用盆栽方式种植备用(盆口直径为 29 cm，深度为40 cm)。
盆栽土壤一致，选择长势一致的幼苗进行干旱胁迫试验。
1． 2 试验设计
2014年 7月将长势一致、无病虫害的 30 盆幼苗移入隔绝
降水的透明大棚，浇透水后采用自然干旱的方法进行干旱胁
迫。第 2天开始，每次从不同植株上选取中上部同一位置的成
熟叶片，将叶片去叶脉后剪碎混合，测定叶片各项生理生化指
标。每处理重复 3次，设置停水 0、7、12、17、22 d自然干旱胁迫
处理和复水 15 d处理，同时测定叶片各项生理生化指标。
1． 3 方法
利用烘干称量法测定叶片相对含水量(ＲWC)和水分饱
和亏(WSD)。采用铝盒环刀法测定土壤含水量。采用硫代
巴比妥酸法测定叶片丙二醛)含量［19］。采用酸性茚三酮显色
法测定叶片脯氨酸含量。采用蒽酮比色法测定叶片可溶性
糖、可溶性淀粉含量。采用考马斯亮蓝 G － 250 与可溶性蛋
白质结合染色方法测定可溶性蛋白质含量。分别采用氮蓝四
唑(NBT)光还原法、高锰酸钾滴定法［19］、愈创木酚法［20］测定
叶片超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物
酶(POD)活性。ＲWC、WSD计算公式如下:
ＲWC =(叶片鲜质量 －叶片干质量)/(叶片饱和鲜质量 －叶
片干质量)× 100%; (1)
WSD = 1 － ＲWC =(叶片饱和鲜质量 －叶片鲜质量)/(叶片饱
和鲜质量 －叶片干质量)× 100%。 (2)
1． 4 数据统计与分析
采用 SPSS 19． 0 软件处理数据。
2 结果与分析
2． 1 不同干旱胁迫时间米槁叶片含水量的变化
从表 1 可见，随着胁迫时间的延长，土壤含水量逐渐降
低;不同胁迫时间处理下土壤含水量与对照均差异显著;胁迫
7 d的土壤含水量与胁迫 12 d的土壤含水量差异显著。随着
土壤含水量的下降，米槁叶片相对含水量也呈逐渐下降趋势，
从 98． 38%逐渐降至 49． 25%;胁迫前 7 d叶片相对含水量下
—752—江苏农业科学 2015 年第 43 卷第 7 期
降趋势较平缓，8 ～ 22 d 呈显著下降趋势，说明胁迫 7 d 后土
壤含水量已影响植株正常生长，为适应土壤水分减少，叶片相
对含水量也相应减少。胁迫 7 d水分饱和亏与对照差异不显
著，说明土壤含水量可以满足植物的正常需求;胁迫 12 d，叶
片相对含水量为 88． 63%，叶片水分饱和亏达 11． 37%，均与
胁迫 7 d差异显著;胁迫 22 d，叶片严重萎蔫枯黄。进行胁迫
后复水发现，复水 15 d植株长出新叶片，恢复正常生长，叶片
相对含水量达 96． 21%，水分饱和亏达 3． 80%。
表 1 不同干旱胁迫时间下土壤与米槁叶片含水量
处理时间
(d)
土壤含水量
(%)
叶片相对含水量
(%)
叶片水分饱和亏
(%)
0 28． 42 ± 3． 80d 98． 38 ± 0． 79d 1． 62 ± 0． 79a
7 20． 57 ± 2． 22c 96． 04 ± 0． 99d 3． 96 ± 0． 99a
12 9． 89 ± 0． 87b 88． 63 ± 3． 16c 11． 37 ± 3． 16b
17 6． 92 ± 0． 50ab 66． 13 ± 2． 27b 33． 87 ± 2． 27c
22 4． 58 ± 0． 11a 49． 25 ± 0． 48a 50． 75 ± 0． 48d
复水 15 d 38． 50 ± 2． 53e 96． 21 ± 19． 26d 3． 80 ± 1． 11a
注:同列数据后标有不同小写字母表示差异显著(P ＜ 0． 05)。
2． 2 不同干旱胁迫时间米槁叶片可溶性糖、淀粉含量变化
干旱条件下，植物可溶性糖含量通常增加，这是植物对干
旱胁迫的适应性反应［21］。从图 1 可见，随着干旱胁迫时间的
延长，植物可溶性糖含量呈上升趋势，并且明显高于对照。胁
迫 22 d，叶片可溶性糖含量达到最大值 6． 541 mg /g。复水
15 d 叶片可溶性糖含量与对照接近。从图 1 可以看出，随着
胁迫时间的延长，淀粉含量变化呈现先下降后缓慢上升的趋
势，胁迫 7 d，淀粉含量达到最低值 0． 243 mg /g，与对照差异明
显，复水后叶片淀粉含量与对照基本一致，这可能与淀粉水解
酶活性升高、淀粉合成关键酶 ADPGPPase活性降低有关［23］。
2． 3 不同干旱胁迫时间下米槁叶片可溶性蛋白质、游离脯氨
酸含量变化
植物体内可溶性蛋白质主要是指参与代谢的酶类，其含
量是衡量植物总体代谢强弱的重要指标。由图 2 可见，随着
干旱胁迫时间的延长，米槁叶片可溶性蛋白含量呈先上升后
下降趋势，胁迫 17 d 达到最高值 460． 00 mg /g，随后缓慢下
降。复水 15 d，叶片可溶性蛋白质含量比对照稍高，此现象与
前人研究结果［23］一致。这可能是由于恢复水分后，植物虽有
所恢复但可溶性蛋白质参与的部分代谢反应没有彻底恢复。
植物在逆境条件脯氨酸会大量积累，其积累指数与植物抗逆
性有关［25］。随着干旱胁迫时间的延长，游离脯氨酸含量呈上
升趋势。胁迫 22 d，叶片游离脯氨酸含量达到最高值
133． 09 mg /g;胁迫 17 ～ 22 d明显上升，这可能与米槁在重度
胁迫下的耐受能力有关。胁迫后复水 15 d，游离脯氨酸含量
基本达到未胁迫时水平。
2． 4 不同干旱胁迫时间米槁叶片 MDA含量变化
MDA是植物细胞膜脂过氧化作用的最终产物，是膜系统
伤害的重要标志之一。由图 3 可知，随着胁迫时间的延长，米
槁叶片 MDA含量升高，并且均明显高于未胁迫，胁迫 22d，
MDA含量达到最高值 545． 88 nmol /g。胁迫 12 ～ 22 d，叶片
MDA含量明显上升，表明植株受胁迫强度增大，膜的正常功
能遭到更严重破坏。复水后，MDA 含量有所下降，但比未胁
迫时含量高。研究表明，干旱胁迫下，水稻体内 MDA 含量明
显增加［25 － 26］。
2． 5 不同米槁叶片 SOD、POD、CAT活性变化
干旱胁迫下，植物抗氧化酶可以通过催化植物体内的活
性氧，防止发生过氧化反应。由图 4 可见，随着胁迫时间的延
长，米槁叶片 SOD、POD活性变化趋势基本一致，均呈先升高
后下降趋势。干旱胁迫 17 d 之前，随着水分减少，植物体内
超氧自由基也会增加，这时植株会通过提高体内 SOD、POD
活性来保护植株免受伤害。随着胁迫时间的延长，SOD、POD
活性达到峰值后又开始下降，表明随着土壤水分的减少，超氧
自由基在植物机体内的含量已经超过了植物自身能够清除的
范围，因此 SOD、POD活性降低，说明米槁对干旱胁迫的抗逆
性是有限的。在一定水分胁迫范围内，米槁可通过产生更多
的保护酶抵抗干旱胁迫造成的伤害，但当胁迫超出了植物本
身所能忍耐的范围时，植物体内的保护酶活性反而会下降。
复水 15 d，SOD、POD活性均高于对照，这可能是因为经过了
一定程度的干旱胁迫后，机体产生了一定的的抵抗能力，抗旱
能力提高。CAT活性与 SOD、POD 活性变化趋势略有不同，
—852— 江苏农业科学 2015 年第 43 卷第 7 期
CAT活性先下降后上升再下降，胁迫 7d 出现最低值，随着干
旱时间的延长，CAT 活性增加。复水后，CAT 活性高于未胁
迫，这与前人研究结论［27 － 29］一致。
3 结论与讨论
研究表明，在一定干旱胁迫范围内，随着土壤水分含量的
下降，植物叶片各项生理指标也随之改变，在一定程度上反映
了植物对干旱胁迫的抗逆性。ＲWC、WSD能够较好反映植株
受胁迫时体内水分状况。本研究结果表明，ＲWC 随着土壤水
分含量降低呈现下降趋势。当植物遇到干旱胁迫时，体内会
产生一定数量低分子量的代谢产物，以便体内的细胞质渗透
压能够维持在较高水平，有利于植物在缺乏水分时吸收水分，
植物这种自身调节被称为渗透调节。渗透调节物质主要包括
脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白等［30 － 31］。本研究结果表明，胁
迫 17 d，叶片可溶性糖、可溶性蛋白质、游离脯氨酸含量随着
胁迫程度的加剧都呈现上升趋势;胁迫 22 d，可溶性糖游离、
脯氨酸含量均达到峰值，可溶性蛋白质在胁迫 17 d 达到峰
值。植物遭受干旱胁迫时，细胞膜会因发生过氧化作用而受
到损伤，膜脂过氧化作用产物之一是 MDA，当胁迫超过机体
所承受的范围时，植物 MDA 含量会增加且与细胞内各种成
分发生反应，从而使各种酶、膜遭受严重伤害［32］。本研究结
果表明，叶片 MDA含量随胁迫时间的延长而呈上升趋势;复
水后，含量虽有一定程度下降，但较未胁迫前差异明显。这说
明在水分胁迫下，植物体内代谢紊乱，导致细胞膜受到损害，
MDA积累，一定复水时间内无法恢复到胁迫前水平。植物遭
受干旱胁迫时，细胞内会产生造成细胞受伤甚至死亡的生物
活性氧，细胞内的保护酶系统等能够清除植物体内的活性氧，
使细胞免于受伤，保护酶系统活性增强有利于提高植物抗逆
性［33］。胁迫 17 d以内，植物 SOD、POD 活性随胁迫时间延长
而提高，以增强植物的抗逆性，随后活性开始下降，说明胁迫
程度超出了植物耐受范围，保护酶活性反而下降，说明米槁的
耐胁迫能力有限。复水后的酶活性较胁迫前有所提高，这可
能是因为经历了一段时间干旱胁迫后，植物产生了一定适应
能力，从而提高了其抗旱能力。植物的抗旱能力是复合性状，
不但受多个基因控制，而且通过多个途径来实现。本试验是
在盆栽环境中进行的，与实际生境有一定差异。因此，对米槁
抗旱性进行全面评价时，应当结合实际生境，从生态、生理 2
个方面考虑，为米槁合理栽培与管理提供准确详细的依据。
参考文献:
［1］华北平原作物水分胁迫与干旱研究课题组． 作物水分胁迫与干
旱研究［M］． 郑州:河南科学技术出版社，1991:98 － 103．
［2］惠竹梅，房玉林，郭玉枝，等． 水分胁迫对葡萄幼苗 4 种主要生理
指标的影响［J］． 干旱地区农业研究，2007，25(3):146 － 149．
［3］利容千，王建波． 植物逆境细胞及生理学［M］． 武汉:武汉大学
出版社，2002:64 － 67．
［4］张志良，翟伟菁． 植物生理学实验指导［M］． 北京:高等教育出
版社，2003:46 － 48．
［5］张正斌． 作物抗旱节水的生理遗传育种基础［M］． 北京:科学出
版社，2003:36 － 39．
［6］史玉炜，王燕凌，李文兵，等． 水分胁迫对刚毛柽柳可溶性蛋白、
可溶性糖和脯氨酸含量变化的影响［J］． 新疆农业大学学报，
2007，30(2):5 － 8．
［7］王云龙，许振柱，周广胜． 水分胁迫对羊草光合产物分配及其气
体交换特征的影响［J］． 植物生态学报，2004，28(6):803 － 809．
［8］Ｒay E A． Molecular response to water delicit［J］． Plant Physiology，
1993，103:1035 － 1040．
［9］Bosabalidis A M，Kofidis G． Comparative effects of drought stress on
leaf anntomy of two olive cultivars［J］． Plant Science，2002，163:375 －379．
［10］赵家梅，谢双喜． 干旱胁迫和复水对道真润楠幼树生理特性的
影响［J］． 贵州农业科学，2013，41(3):116 － 118，125．
［11］桑子阳，马履一，陈发菊． 干旱胁迫对红花玉兰幼苗生长和生理
特性的影响［J］． 西北植物学报，2011，31(1):109 － 115．
［12］邱德文，杜茂瑞． 贵州苗药大果木姜子研究及产业化［C］/ /第
二次世界中西医结合大会论文摘要集，2002:470 － 474．
［13］冉先德． 中华药海［M］． 上海:东方出版社，2010:47 － 50．
［14］梁光义，魏惠芬． 大果木姜子挥发油和脂肪油的研究［J］． 贵阳
中医学院学报，1989，5(4):55 － 60．
［15］梁光义，邱德文，魏慧芬，等． 大果木姜子精油化学成分的研究
［J］． 天然产物研究与开发，1992，4(2):67 － 70．
［16］梁光义，邱德文，魏慧芬，等． 大果木姜子的甘油三酯组成［J］．
天然产物研究与开发，1992，4(4):19 － 22．
［17］魏慧芬，任永全，贺祝英，等． 大果木姜子精油无机元素的研究
［J］． 微量元素与健康研究，1994，12(2):30，18．
［18］Wang H，Nair M G，Strasburg G M，et al． Antioxidant polyphenols
from tart cherries (Prunus cerasus) ［J］． Journal of Agricultural and
Food Chemistry，1999，47(3) :840 － 844．
［19］邹 琦． 植物生理学实验指导［M］． 北京:中国农业出版社，
2000:33 － 35．
［20］张立军，樊金娟． 植物生理学实验教程［M］． 北京:中国农业大
学出版社，2007:26 － 28．
［21］《植物生理学通迅》编辑部． 植物生理学专题讲座———纪念罗宗
洛教授［M］． 北京:科学出版社，1987:323．
［22］陈立松，刘星辉． 水分胁迫对荔枝叶片糖代谢的影响及其与抗
旱性的关系［J］． 热带作物学报，1999，20(2):31 － 36．
［23］池 馨，廖小峰，刘济明，等． 自然干旱胁迫下艾纳香的生理生
化特性［J］． 贵州农业科学，2014，42(8):48 － 51．
［24］党云萍，李春霞，刘东雄． 水分胁迫对植物生理生化研究进展
［J］． 陕西农业科学，2012，58(5):89 － 93，122．
［25］孙骏威，杨 勇，黄宗安，等． 聚乙二醇诱导水分胁迫引起水稻光
合下降的原因探讨［J］． 中国水稻科学，2004，18(6):539 －543．
［26］晏 斌，戴秋杰，刘晓忠，等． 玉米叶片涝渍伤害过程中超氧自
由基的积累［J］． 植物学报，1995，3(9):738 － 744．
［27］张文辉，段宝利，周建云，等． 不同种源栓皮栎幼苗叶片水分关
系和保护酶活性对干旱胁迫的响应［J］． 植物生态学报，2004，
28(4):483 － 490．
—952—江苏农业科学 2015 年第 43 卷第 7 期
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［28］范苏鲁，苑兆和，冯立娟，等． 干旱胁迫对大丽花生理生化指标
的影响［J］． 应用生态学报，2011，22(3):651 － 657．
［29］谢志玉，张文辉，刘新成．干旱胁迫对文冠果幼苗生长和生理生
化特征的影响［J］． 西北植物学报，2010，30(5):948 － 954．
［30］孙 群，胡景江．植物生理学研究技术［M］．杨凌:西北农林科技
大学，2006．
［31］何 淼，李文鹤，卓丽环．野菊幼苗对自然干旱胁迫的生理响应
［J］． 草业科学，2011，28(8):1456 － 1460．
［32］张朝阳，许桂芳，向佐湘． 干旱胁迫对 4 种常绿藤本植物抗性
生理生化指标的影响［J］． 江西农业学报，2008，20(12):42 －
45．
［33］孙国荣，彭永臻，阎秀峰，等． 干旱胁迫对白桦实生苗保护酶活
性及脂质过氧化作用的影响［J］． 林业科学，2003，39
(1):165 － 167．
卢月霞，郑素月，柳焕章． 鸡腿菇原生质体制备与再生研究［J］． 江苏农业科学，2015，43(7):260 － 261．
doi:10． 15889 / j． issn． 1002 － 1302． 2015． 07． 090
鸡腿菇原生质体制备与再生研究
卢月霞，郑素月，柳焕章
(河北工程大学农学院，河北邯郸 056021)
摘要:以鸡腿菇双核菌丝为材料，利用溶壁酶制备原生质体，采用单因素试验确定最佳条件。结果表明，原生质体
产量最高的条件是取菌龄为 5 d的液体静置培养的菌丝体，以 0． 6 mol /L 蔗糖为渗稳剂，在酶解温度 30 ℃、酶浓度
20 g /L、菌丝量 20 g /L的条件下酶解 3 h，制备的原生质体量为 2． 5 × 107 个 /mL。将制备的原生质体稀释并涂布于再
生培养基，再生率为 10． 9%，研究为鸡腿菇原生质体融合及优良品种选育提供研究基础。
关键词:鸡腿菇;原生质体;制备;再生
中图分类号:S646． 03 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2015)07 － 0260 － 02
收稿日期:2014 － 06 － 25
基金项目:河北省现代农业产业技术体系食用菌产业创新团队建设
专项资金。
作者简介:卢月霞(1973—)，女，河北邯郸人，硕士，讲师，现从事食用
菌教学与科研工作。E － mail:275548367@ qq． com。
通信作者:郑素月，博士，教授，研究方向为食用菌新品种选育与菌种
生产技术。E － mail:zhengsuyue@ sina． com。
鸡腿菇别称毛头鬼伞(Coprinus comotus)，是一种具有营
养保健功能的珍稀食用菌，是人工开发的具有商业潜力的珍
稀食用菌新品，被誉为“菌中新秀”。鸡腿菇生长周期短，生
物转化率较高，易于栽培，具有降血糖、降血脂、提高免疫活
性、抗肿瘤、抑菌等一系列生物活性［1］，深受消费者欢迎。
近年来，原生质体技术成为了研究蕈菌生理、生化、遗传
等基础理论和改良菌种的一种重要方法和有效手段［2］。该
技术可以实现远缘杂交、扩大遗传物质的重组范围以及基因
转化和定向诱变，获得具有突出优良性状的新类型，产生更丰
富的遗传变异［3］。在国内，食用菌原生质体融合正在广泛地
开展，进行原生质体融合，首先必须获得大量有活力的原生质
体，因此必须对原生质体的分离和再生条件做深入研究［4］。
迄今为止，关于鸡腿菇原生质体制备和再生的研究在国内鲜
有报道，本研究探索鸡腿菇原生质体制备及再生的较适条件，
旨在为鸡腿菇新品种选育及基因工程研究奠定基础。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 供试菌株 鸡腿菇 1 号由中国农业科学院农业资源
与农业区划研究所提供，为 ACCC编号菌株。
1． 1． 2 培养基 (1)PDA综合培养基:马铃薯(去皮)200 g，
葡萄糖 20 g，MgSO4 0． 5g，KH2PO4 1 g，琼脂 20 g，蒸馏水定容
至 1 000 mL。(2)MYG培养基:麦芽糖 10 g，葡萄糖 4 g，酵母
膏 4 g，琼脂 20 g，蒸馏水定容至 1 000 mL。(3)MYG 再生培
养基:麦芽糖 10 g，葡萄糖 4 g，酵母膏 4 g，0． 6 mol /L蔗糖，琼
脂 20 g，蒸馏水定容至 1 000 mL。
1． 2 方法
1． 2． 1 原生质体制备条件研究 将双核菌丝接种于 PDA 平
板中，于 25 ℃培养 10 d，再将活化菌丝接种于 PDA液体培养
基中，于 25 ℃静置培养 6 ～ 7 d。取新鲜的鸡腿菇菌丝用无菌
滤网过滤，再用无菌蒸馏水于 3 500 r /min洗涤 5 min，洗涤 2
次。无菌滤纸吸干菌丝水分，分别研究酶解时间、渗稳剂种
类、菌丝量、菌龄对原生质体产生量的影响。在优化条件下
30 ℃酶解完毕后，采用无菌脱脂棉过滤法过滤除去残留菌
丝，滤液于8 000 r /min 洗涤 10 min，弃上清液、收集沉淀，适
量稀释后用血球计数板计数。
1． 2． 2 原生质体再生研究 原生质体用渗稳剂稀释至
104 个 /mL 左右，取 0． 1 mL 涂布于再生培养基上，接种后在
恒温箱 25 ℃遮光培养，用无菌接种针在显微镜下挑取单个原
生质体菌落，转至 PDA 试管斜面上，25 ℃再扩大培养 10 d;
最后，根据单核菌丝无锁状联合的特点镜检确定挑取的单菌
落是否为单核体，舍弃有锁状联合的个体，获取再生菌落，观
察计数。再生率 =(再生培养基上生长的菌落数 － PDA 培养
基上生长的菌落数)/接种数 × 100%。
2 结果与分析
2． 1 原生质体制备条件研究
2． 1． 1 渗稳剂种类及酶解时间对原生质体产量的影响 据
—062— 江苏农业科学 2015 年第 43 卷第 7 期