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长白山野生细叶杜香菌根真菌的分离及其特征



全 文 :2015·18 /
长白山野生细叶杜香菌根真菌的分离及其特征
姜云天 1,顾地周 1,李玉梅 2
(1.通化师范学院生物系,吉林通化 134002;2.吉林师范大学生态环境研究所,吉林四平 136000)
摘要:本文以野生细叶杜香为试材,初步对其菌根真菌进行分离与培养,并对其菌落特征进行描述。结果表明:分离得到 36株真菌菌
株,菌落形态特征归为 4 种类型。菌落颜色各异,菌落边缘规则、无孢子产生、无分泌物,菌落呈绒毡状或棉絮状。
关键词:细叶杜香;菌根真菌;分离
基金项目:吉林省教育厅项目(吉教科合字〔2012〕第 361号)
中图分类号:O657.7 文献标识码:A DOI编号:10.14025/j.cnki.jlny.2015.18.024
实验研究SHIYANYANJIU
细叶杜香(Ledum palustre L. var. angustum N. Busch),又
名狭叶杜香、喇叭茶、山白茶、绊脚丝,为杜鹃花科(Ericaceae)
杜香属(Ledum palustre)常绿小灌木[1]。在我国主要分布于东
北地区的大、小兴安岭和长白山区[2]。细叶杜香体内含有多种
有效成分,其叶及嫩枝、花、果实均含有芳香油,具有止咳、祛
痰、消炎及止痒等功效,主要用于防治急慢性支气管炎、流
感、皮肤病等疾病[3];在长白山区,民间有用叶制成药膏治疗
月经不调和不孕[4]。杜香除了具有药用价值外,由于其特有的
芳香还可作为天然香料应用于日用化工、制药皂、脚气水、洗
发水等系列产品[5]。目前,俄罗斯、韩国等学者将杜香提取物
添加到食品中,将其制成软饮料、罐头、面条、酸奶、冰淇淋等
多种功能食品。此外,杜香嫩叶还被用于制作保健茶等保健
品。近年来,随着人们保健意识的增强,杜香需求量越来越
大。为了合理开发利用野生细叶杜香资源,人们采用种子、扦
插及组织培养等方式对其进行人工繁殖,但是由于该植物存
在根系与生境中某些真菌共生的特性,人工繁殖后的种苗出
现存活率低、生长缓慢等问题。因此,为了探讨野生细叶杜香
生境中与之共生的真菌类型,本研究以长白山野生细叶杜香
为试材,对其菌根真菌进行分离与培养,并对其菌落特征进行
描述,以期为细叶杜香菌根真菌的鉴定提供理论依据。
1材料与方法
1.1 试验材料
供试菌株,分离自长白山北坡海拔 1300 米的针阔混交林
下生长的野生细叶杜香(Ledum palustre L. var. angustum N.
Busch)。
1.2 试验方法
2014 年 7 月,从长白山北坡采集附带根际土壤的细叶杜
香根样,用冰盒带回实验室。先用流水将根系上的土壤和附带
物冲洗干净,然后剪成 3~4 厘米根段,用 70%的酒精消毒 30
秒,再放入 0.1%升汞中消毒 4~6 分钟,用无菌水冲洗 5~6 次
后吸干根段上的水分,再将其切成约 0.5 厘米的小根段,接种
于马丁—孟加拉红培养基(简称 MD)和 PDA 培养基上,每个
三角瓶中放3 个根段,25℃下暗培养。待根段剪口处长出菌丝
后,用灭菌的接种针挑取真菌菌丝,转接于新的马丁—孟加拉
红培养基和 PDA 培养基上进行纯化培养,直至得到单一菌
株。培养 14 天记录单一菌株菌落直径及菌落特征。
2 结果与分析
2.1 分离菌株的菌落特征
经过 MD 和 PDA 两种培养基分离纯化培养,从细叶杜香
菌根中分离得到 36 株真菌菌株,根据分离培养菌株的菌落形
态特征初步将其归类为 4 个类型(见表 1)。两种培养基上分
离的菌株均无孢子产生;菌落外形规则,呈圆形;菌落无分泌
物产生。但是在菌落颜色、质地和生长速度上存在较大差异,
其中,MD 培养基上分离得到的菌株生长较缓慢,菌株编号为
a 的菌落颜色呈黄褐色,边缘白色隆起,绒毡状,菌落直径为
4.8 厘米;菌株编号为 b 的菌落颜色则呈白色,中间隆起,棉絮
状,菌落直径为 2.1 厘米。PDA 培养基上分离的菌株生长速度
相对较快;菌株编号为 c 的菌落直径达到 6.5 厘米,菌落呈黑
色,边缘褐色,产生白色菌丝,绒毡状;而菌株编号为 d 的菌落
直径达到 9.6 厘米,菌落中间部位微隆起,橘中带白,边缘橘
色,辐射状。4 种类型的菌落形态特征见图版 1。
表 1 分离菌根真菌菌落特征
3 讨论
两种培养基分离的
真菌类型不同,但菌根
真菌的菌落大多为绒毡
状或棉絮状,菌落边缘
规则,无孢子产生,这与
杜鹃花科植物分离出的
部分真菌特征相似,但
是具体属于哪种真菌还
需从分子生物学角度做
进一步的鉴定。
参考文献
[1]赵子峰,沙伟,赵
子云. 我国的杜香属植
物及杜香属植物的应用[J].生物学教学,2006,31(04):8-9.
[2] 孟彩云,巴俊杰,毕力格.HPLC 法测定细叶杜香中熊果
酸的含量[J].中国民族医药杂志,2010(01):51-52.
[3] 王晓琴,渠弼.细叶杜香中的化学成分[J].中国民族医
药杂志,2010(01):53-54.
[4] 吉林省中医中药研究所.长白山植物药志[M].长春:
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[5] 姜云天,陈艳秋,朱俊义,等.细叶杜香高效快繁体系建
立及种质试管保存研究[J].西南大学学报(自然科学版),2009,
31(02):118-123.
作者简介:姜云天,硕士,通化师范学院生物系,讲师,研
究方向:植物生理与生态的教学。
图版 1 分离真菌菌落特征
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