全 文 ：度及其在家兔体内药物动力学.中国医师 , 2006;9(11)∶ 1022 ～ 1023
3　张陆军 ,邢东明,王伟 ,等.静脉注射黄芩总苷后黄芩苷在大鼠血浆及
大脑皮层的药物动力学比较.中国药理学通报, 2005;21(6)∶766～ 767
4　杨新建 ,王雷 ,王学艳 ,等.黄芩苷滴丸的体内药动学研究.中国医院
药学杂志 , 2006;26(4)∶445～ 447
5　刘昌孝.实用药物动力学.北京:中国医药科技出版社.
6　路通 ,宋钰 ,谢林 ,等.HPLC法同时测定灌胃黄芩水煎剂后大鼠血浆
中黄芩苷和汉黄芩苷的质量浓度及药动学研究.中草药 , 2005;36(6)∶
870～ 873
豹皮樟总黄酮体外用药对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞 ERK通路的影响＊
葛金芳 ,王婷玉 ,赵　斌 ,彭　磊 ,胡成穆 ,金　涌 ,李　俊
(安徽医科大学药学院 ,合肥　230032)
　　摘　要　目的:研究豹皮樟总黄酮(totalflavonoidsofLitseacoreanaLeve., TFLC)对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞功能及
ERK表达的影响。方法:采用弗氏完全佐剂诱导大鼠佐剂性关节炎(adjuvant-inducedarthritis, AA)模型 , TFLC体外用药 , MTT法
检测 AA大鼠腹腔巨噬细胞(peritonealmacrophages, PMФ)活性 、ELISA法测定 PMФ肿瘤坏死因子 α(tumornecrosisfactor-α, TNF-
α)的含量;westernblot法观察 ERK1/2及磷酸化的 ERK1/2蛋白表达情况。结果:TFLC(50, 5, 0.5mg/L)体外用药可改善 PMФ活
性 , 有效降低 AA大鼠 PMФ产生的 TNF-α水平 ,改善磷酸化的 ERK1/2蛋白表达。结论:TFLC对 AA大鼠的治疗作用可能与其调
节 TNF-α的分泌及磷酸化的 ERK1/2表达有关。
　　关键词　豹皮樟;黄酮;关节炎;丝裂原活化蛋白激酶
　　豹皮樟总黄酮 (totalflavonoidsofLitseacoreanaLeve.,
TFLC)是从药食同源植物豹皮樟提取的有效部位 , 本课题组前
期研究表明 [ 1 ～3] , TFLC具有良好的抗炎和免疫调节作用 , 对弗
氏完全佐剂诱导的大鼠佐剂性关节炎(adjuvant-inducedarthri-
tis, AA)有一定的治疗作用。本文在此基础上 ,对 TFLC提取方
法进行改进 , 以 AA模型所活化的腹腔巨噬细胞为靶细胞 ,研究
TFLC对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞功能及 ERK传导通路
的影响。
1　材料与方法
1.1　试验药物　 豹皮樟总黄酮 , 由本院天然药物化学室研
制。取豹皮樟干燥叶 , 乙醇提取 , 减压浓缩 ,水溶(调 pH至 2),
乙醚萃取 , 有机相精制浓缩 、水相大孔树脂吸附 , 二者混合得总
黄酮含量 >75 %。 A771726, 来氟米特活性产物 , 美国欣凯公
司上海代表处提供 , 批号 20060402。
1.2　 试剂　卡介苗(BacilusCalmeteGuein, BCG), 卫生部上
海生物制品研究所产品 , 批号 060601。肿瘤坏死因子 α(tumor
necrosisfactor-α, TNF-α)ELISA试剂盒 , 美国 BIOSOURCE公司
产品;β -actin、ERK及磷酸化 ERK单克隆抗体 , 均为 NewEng-
landBiolabs公司产品。
1.3　 动物　 SD大鼠 , ♂,体重(180±20)g, 皖医实动准第 02
号 , 由安徽医科大学动物实验中心提供 , 清洁级。
1.4　 方法
1.4.1　AA大鼠 PM活性及 TNF-α、IL-10含量的测定 　按本
课题组常规方法 [ 4]制备大鼠 AA模型 ,致炎后第 28天股动脉放
血处死大鼠 , 常规制备 AA大鼠腹腔巨噬细胞悬液(2 ×106 /
mL), 37℃、 5%CO2培养箱培养 2h后加入 LPS(终浓度为 6μg/
ml)及不同浓度的药物继续培养 , 分别于培养后 24h、 48hMTT
法测定 PM活性 、并收集上清 ELISA测定 TNF-α含量。
1.4.2　Westernblot分析 ERK及 phospho-ERK的表达情况 　
细胞悬液制备及给药方法同上 , 给药 48h后参照文献方法 [ 5] ,
抽提总蛋白及核蛋白经定量后 , 取 100μg样品上样电泳 , 经
10%丙烯酰胺凝胶分离后 , 电转移至 PVDF膜 , 5%脱脂牛奶-
TBST室温封闭 2h后 , 加兔抗鼠磷酸抗体化 ERK、phospho-ERK
(1∶1000), 室温孵育 1h, 4℃过夜。 用 TBST洗涤 3次(15min/
次)后 ,加 HRP标记的羊抗兔 IgG(1∶2000), 37℃孵育 1h, 然后
再用 TBST洗涤 3次(15min/次),加 ECL显色液室温孵育 5min
后 ,用 X光片压片并曝光 ,然后进行显影和定影。
2　结果
2.1　 TFLC对 AA大鼠 PM活性的影响　如表 1所示 , AA模
型组大鼠 PM活性增强 , TFLC体外给药可降低其异常增强的
PM活性 。
2.2　 TFLC对 AA大鼠 PM生成 TNF-α的影响 　结果见表 2,
AA大鼠腹腔巨噬细胞产生 TNF-α水平明显高于正常对照组 ,
TFLC(50、5、0.5mg/kg)体外给药可抑制 AA大鼠腹腔巨噬细胞
生成的 TNF-α。
61中药药理与临床 2009;25(2)
＊ 安徽省科技攻关计划(No.06013134B),安徽省高等学校青年教师科研项目(No.2005jq1095)安徽医科大学校科研基金项目(No.2005KJ29)
DOI :10.13412/j.cnki.zyy l.2009.02.028
　　表 1　 TFLC对 PM活性的影响( x±s, n=4)
组别 剂量(mg/L)
OD570nm
24h　　　 48h　　　
正常对照 0.181±0.016＊＊ 0.174±0.040＊＊
模型对照 0.235±0.051 0.247±0.014
TFLC 50 0.140±0.011＊＊ 0.164±0.015＊＊
5 0.165±0.013＊＊ 0.172±0.017＊＊
0.5 0.144±0.006＊＊ 0.146±0.017＊＊
0.05 0.160±0.021＊＊ 0.142±0.019＊＊
0.005 0.142±0.012＊＊ 0.208±0.020＊＊
A771726 27 0.195±0.043＊ 0.206±0.019＊＊
　　与模型组比较 ＊P<0.05, ＊＊P<0.01(下同)
　　　表 2　TFLC对AA大鼠腹腔巨噬细胞 TNF-分泌的影响( x±s, n
=4)
组别 剂量(mg/L)
TNF-α(pg/ml)
24h　　　 48h　　　
正常对照 196.36±41.62＊＊ 187.39±31.82＊＊
模型对照 368.41±48.40 374.89±81.67
TFLC 50 215.34±44.52＊＊ 221.70±6.39＊＊
TFLC 5 242.73±30.30＊ 214.77±35.70＊＊
TFLC 0.5 216.36±23.19＊ 198.52±22.36＊＊
A771726 27 170.45±12.44＊＊ 200.23±10.98＊＊
2.3　 TFLC对 AA大鼠 PM的磷酸化的 ERK1/2表达的影响
　　如图 1所示 , AA大鼠 PM磷酸化 ERK1/2(p-ERK1/2)表达
较正常对照组明显增强 , TFLC体外用药后显著降低 p-ERK1/2
的表达。
图 1　 TFLC对 AA大鼠腹腔巨噬细胞 ERK和 p-ERK表达的影响
1.Normal;2.Model;3.TFLC(50mg/L);4.TFLC(5mg/L);5.TFLC
(0.5mg/L);6.A771726(27mg/L)
3　讨论
　　类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis, RA)是一种自身免疫
性疾病 , 表现为以关节病变为主伴有多系统受累的慢性炎症 ,
其组织学特点包括单核细胞浸润 、滑膜增生 、新生血管形成 、关
节软骨及骨组织的进行性不可逆性破坏。而大鼠 AA模型可以
复制的多关节炎症 、关节畸形及组织学变化与人类 RA非常相
似 ,是筛选和研究抗炎免疫及抗关节炎药物常用的动物模型。
在 RA的病情进展中 ,巨噬细胞起重要作用 [ 6] 。 RA患者不仅仅
关节滑膜大量巨噬细胞浸润 , 且其数目多寡与临床关节炎积分
和关节破坏程度密切相关 ,而且循环中的单核-巨噬细胞系统也
被广泛激活 ,激活的巨噬细胞可通过分泌炎性细胞因子介导炎
症反应。抑制巨噬细胞异常的细胞因子分泌已成为治疗 RA的
有效措施之一 [ 7] 。
　　丝裂原活化蛋白激酶 (mitogenactivatedproteinkinase,
MAPKs)通路是细胞外信号引起细胞核反应甚至导致细胞死亡
的共同通路 ,参与介导生长 、发育 、分裂 、分化 、死亡以及细胞间
的功能同步等多种细胞过程。 ERK(extracellularsignal-regula-
tedkinase)为 MAPK的一个亚族 , 包括 ERKl和 ERK2, 是将信号
从表面受体传导至细胞核的关键。磷酸化激活的 ERKl/2由胞
质转位到核内 ,进而介导 Elk-1、NF-κB、Ap-1、c-fos和 c-Jun等的
转录活化 ,参与细胞增殖与分化 、细胞形态维持 、细胞骨架的构
建 、细胞凋亡等多种生物学反应。研究表明 , ERK通路的激活
在 RA的发生 、发展过程中起重要作用 [ 5, 8 , 9] 。本课题组前期已
证实药食同源植物豹皮樟的有效部位 TFLC对 AA的治疗作用 ,
但具体机制不清 ,本研究结果表明 , TFLC可抑制 PM的活性 , 调
节 PM异常分泌的炎性细胞因子水平及 ERK的蛋白表达。提
示 , TFLC对 AA的治疗作用是以 PM为作用靶点 , 通过抑制 PM
的活性实现的。然而 TFLC对 PM分泌 TNF-α的调节作用是否
与其抑制 p-ERK1/2的表达有关 , 将有待进一步研究证实。
参考文献
1　陈 琳 ,程文明 ,胡成穆 ,等.豹皮樟总黄酮抗炎作用及部分机制研究
.安徽医科大学学报 , 2004;39(6)∶ 439～ 442
2　王婷玉,李俊 ,葛金芳 ,等.豹皮樟总黄酮对大鼠佐剂性关节炎的作
用及部分机制研究.中国药理学通报, 2007;23(12)∶1618～ 1623
3　胡成穆,陈琳 ,李俊.豹皮樟总黄酮对免疫低下小鼠免疫功能的影
响.中国药理学通报 , 2007;23(6)∶ 804～ 808
4　於传斌.免疫性炎症模型.徐叔云 ,卞如濂 ,陈修.药理实验方法学.
第 2版.北京:人民卫生出版社 , 1991∶ 723 ～ 724
5　 ThielMJ, SchaeferCJ, LeschME, etal.CentralroleoftheMEK/ERK
MAPkinasepathwayinamousemodelofrheumatoidarthritis:potential
proinflammatorymechanisms.ArthritisRheum, 2007;56(10)∶3347～ 3357
6　 KinneRW, BrauerR, StuhlmulerB, etal.Macrophagesinrheumatoid
arthritis.ArthritisRes, 2000;2∶189～ 202
7　SmolenJS, SteinerG.Therapeuticstrategiesforrheumatoidarthritis.
NatRevDrugDiscov, 2003;2∶ 473 ～ 488
8　 GortzB, HayerS, TuerckB, etal.Tumornecrosisfactoractivatesthe
mitogen-activatedproteinkinasesp38andERKinthesynovialmembranein
vivo.ArthritisResTher, 2005;7∶ 1140～ 1147
9　 OhoriM.ERKinhibitorsasapotentialnewtherapyforrheumatoidar-
thritis.DrugNewsPerspect, 2008;21(5)∶245～ 250
62 中药药理与临床 2009;25(2)
EfectoftotalflavonoidsfromLitseacoreanaLeve.ontheERKexpression
ofperitonealmacrophagesonadjuvant-inducedarthritisratmodel
GeJinfang, WangTingyu, Zhaobin, Penglei, HuChengmu, JinYong, LiJun
(SchoolofPharmacy, AnhuiMedicalUniversity, Heifei　230032)
　　Aim:ToinvestigatetheefectoftotalflavonoidsofLitseacoreanaLeve.(TFLC)onextracelularsignal-regulatedkinase(ERK)expres-
sionofperitonealmacrophages(PMФ)onadjuvant-inducedarthritis(AA)model.Method:AAwasinducedwithFreundscompleteadju-
vant.Theactivityofperitonealmacrophages(PMФ)wasassayedwithMTTreagent, thecontentsoftumorTNF-αwasmeasuredbyELISA,
andtheexpressionofERK1/2andphospho-ERKwereassayedwithwesternblotting.Results:TFLC(50, 5, 0.5 mg/L)significantlysup-
pressedtheactivityofPMФanddecreasedthecontentofTNF-α, TFLC(50, 5 mgmg/L)markedlyreducedtheexpressionofproteinphos-
pho-ERK1/2onPMФofAArats.Conclusion:TFLChassignificantlytherapeuticefectonAAratsthroughinhibitingtheactivityofperito-
nealmacrophages.
Keywords　 LitseacoreanaLeve.;flavonoid;arthritis;MAPKs
水蔓菁总黄酮对前列腺增生小鼠模型的影响＊
苗明三 ,张玉林 , 纪晓宁 , 王力男
(河南中医学院 ,郑州　450008)
　　摘　要　目的:探讨水蔓菁总黄酮对小鼠前列腺增生模型的作用特点。方法:采用皮下注射丙酸睾酮造小鼠前列腺增生模
型 , 观察水蔓菁总黄酮对小鼠前列腺增生模型的影响。结果:皮下注射丙酸睾酮可成功建立小鼠前列腺增生模型 ,水蔓菁总黄酮可
降低前列腺增生小鼠的前列腺指数 、睾酮水平 、前列腺体密度和比表面积 ,各给药组可明显改善小鼠前列腺增生的组织形态结构。
结论:水蔓菁总黄酮对小鼠前列腺增生有治疗作用。
　　关键词　水蔓菁总黄酮;前列腺增生模型
　　水蔓菁为玄参科婆婆纳属植物水蔓菁 Veronicalinariifolia
Pal.exLinksubsp.Dilatata(NakaietKitag)Hong的干燥全草 ,
具有清热解毒 、利尿 、止咳化痰的功能。临床用于支气管炎 、肺
脓疡 、急性肾炎 、尿路感染及疖肿的治疗。在临床应用中发现以
水蔓菁为主要原料的勒马回片等对泌尿系统感染 、慢性前列腺
炎 、前列腺增生及泌尿系结石有很好疗效 [ 1] 。 我们前期研究表
明水蔓菁总黄酮对大 、小鼠前列腺炎模型有较好疗效 , 本文探
讨水蔓菁总黄酮对小鼠前列腺增生模型的影响。
1　材料与方法
1.1　试验药物　水蔓菁总黄酮:取水蔓菁切碎 ,回流提取后减
压回收乙醇 , 浸膏加适量水溶解 ,用石油醚萃取 3次 , 取水层浓
缩后加入已处理好的聚酰胺柱中洗脱 , 至洗脱液中不含黄酮类
成分为止 , 回收乙醇 , 水浴上挥干即得水蔓菁总黄酮 , 含量 90%
以上 , 由河南中医学院院化学实验室提供。癃闭舒胶囊 , 石家庄
科迪药业有限公司生产 ,批号 060102。
1.2　动物　雄性昆明种小鼠 , 清洁级 , 60只 , 20 ～ 23g, 由河北
省实验动物中心提供 ,合格证号 608155。
1.3　.试剂　丙酸睾酮注射液 , 上海通用药业股份有限公司生
产 ,批号 040303;睾酮(T)测定试剂盒 , 北京科美东雅生物技术
有限公司生产 ,批号 20060925;雌二醇(E2)测定试剂盒 ,北京科
美东雅生物技术有限公司生产 ,批号 20060925。
1.4　方法　小鼠随机分为 6组 , 其中 5组用丙酸睾酮(溶于豆
油)每日按 5mg/kg皮下注射造模 [ 2] ,连续 3周。造模 5组分别
灌服大 、中 、小剂量的水蔓菁总黄酮 (180mg/kg、 90 mg/kg、 45
mg/kg)、癃闭舒胶囊(450 mg/kg)或等体积的生理盐水 ,每日 1
次 ,连续 3周。另 1组为空白对照。于末次给药后(禁食 12 h)
1h, 称重 ,眶静脉取血 ,离心 , 分离血清。用放免法测血清中睾酮
(T)、雌二醇(E2)水平 ,测定方法按试剂盒说明书操作。然后脱
颈椎处死小鼠 , 迅速取前列腺组织 , 称重;并计算前列腺指数
(前列腺指数 =前列腺湿重 mg/鼠体重 g)。取前列腺用 10%甲
醛固定 , 切片 、染色 , 光镜观察 , 立体剂量学测定腺体的体密度
(Vv)和比表面(S)。
2　结果
　　小鼠前列腺重及前列腺指数见表 1, 血清中睾酮(T)、雌二
醇(E2)水平结果见表 2,前列腺腺体体密度(Vv)和比表面(S)
结果见表 3。
63中药药理与临床 2009;25(2)
＊ 基金项目:河南省高等学校创新人才培养工程(2004-23)