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现 代 中 医 药
Modern Traditional Chinese Medicine
2011 年 07 月第 31 卷第 4 期
Jul． 2011 Vol． 31 No． 4
中 药 研 究
HPLC法测定秦岭柴胡
地上部分柴胡皂苷 a的含量
*
刘 清 卫 昊 王西芳
(陕西中医学院，陕西 咸阳 712046)
摘 要:目的 建立秦岭柴胡地上部分柴胡皂苷 a的含量测定方法。方法 采用 HPLC梯度洗脱法，用 Kromasil
C18色谱柱(4． 6 mm × 250 mm，5μm) ，以乙腈 ∶ 水二元梯度洗脱［0 ～ 5 min(30 ∶ 70) ;5 ～ 10 min(40 ∶ 60) ;
10 ～ 18 min(60∶ 40) ;平衡 5 min，检测波长为 210 nm，柱温室温，流速 1 mL /min。结果 柴胡皂苷 a在 0． 699 ～ 4． 66
μg之间线性关系良好，r = 0． 9999，柴胡皂苷 a平均回收率为 97． 42 %，RSD 为 1． 42 %。结论 秦岭柴胡皂苷 a 的
HPLC梯度洗脱法灵敏、准确，专属性强，重现性好。
关键词:秦岭柴胡;HPLC;柴胡皂苷 a
中图分类号:R 284． 1 文献标识码:A 文章编号:1672 － 0571(2011)04 － 0070 － 02
秦岭柴胡又名金柴胡，为伞形科柴胡属植物的
一种，多年生草本，为区域民间用药，地方使用较为
广泛，疗效较为显著，具有发表祛风、清肝利胆、清
心火、通经之功效，主治感冒、虚劳骨蒸、月经不调、
肝气不舒、黄疸等症［1］。目前已知该药材根部主
要含有柴胡皂苷 a、c、d，此外根中尚含有挥发油，
植物甾醇和有机酸等 ，茎叶、地上部分经分析尚含
有黄酮类化合物，如槲皮素、芸香苷、水仙苷、异鼠
李素等成分［2 － 3］。秦岭柴胡作为地方草药，目前尚
缺乏系统研究，也无地方标准可供参考，鉴于此，本
实验主要通过检测秦岭柴胡地上部分柴胡皂苷 a
含量，建立秦岭柴胡质量标准的研究方法，为秦岭
柴胡的进一步利用和开发提供依据。
1 材料和仪器
1． 1 材料及鉴定 秦岭柴胡:2008 年 8 月中旬采
集于陕西省太白县海拔约 2800 m 的西太白鳌山，
取其带根全草，经过王西芳教授鉴定为伞形科
(Umbelliferae)柴胡属(Bupleurum)秦岭柴胡。
1． 2 仪器与试药 高效液相色谱仪 ALLI-
ANCE600E(美国沃特斯公司) ;GB － 204 电子分析
天平(瑞 ±梅特勒 －托利多) ;乙腈为色谱纯(Fish
公司) ，其余试剂均为分析纯。柴胡皂苷 a 对照品
(批号:11077 － 2000303，中国药品生物制品检定
所)。
2 方法与结果［4 －6］
2． 1 色谱条件 色谱柱 Kromasil C18 色谱柱
(4． 6 mm ×250 mm，5 μm) ，以乙腈 ∶ 水二元梯度
洗脱［0 ～ 5 min(30 ∶ 70) ;5 ～ 10 min(40 ∶ 60) ;
10 ～ 18 min(60 ∶ 40) ;平衡 5 min］，检测波长为
210 nm，柱温 25 ℃，流速 1 ml /min，在此条件下，样
品得到良好分离，柴胡皂苷 a 的理论板数为
68536。
图 1 柴胡皂苷 a标准品图谱
图 2 秦岭柴胡样品图谱
* 基金项目:陕西省教育厅项目(2010JK499)
DOI:10.13424/j.cnki.mtcm.2011.04.025
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2． 2 对照品溶液的制备 精密称取柴胡皂苷 a 对
照品适量，加甲醇制成每 1 mL 含柴胡皂苷 a
0． 233 mg的溶液。
2． 3 地上部分样品溶液制备 称取秦岭柴胡地上
部分药材 90 g，置圆底烧瓶中，加入 20 倍量 65 %
乙醇，回流提取 2 次，每次约 2 h，合并提取液，减压
回收溶剂，挥至无醇味，过中性 Al2O3 柱(200 ～ 300
目) ，除去色素等杂质，滤液用正丁醇萃取，正丁醇
层蒸干，干粉用色谱甲醇溶解，过滤后置于 50 mL
容量瓶中。
2． 4 标准曲线及线性范围 精密吸取上述柴胡皂
苷 a对照品溶液各 3、5、10、15、20 μL，按上述色谱
条件，注入高效液相色谱议，记录峰面积，以面积对
进样量(μg)回归，得回归方程 Y = 288716X －
3916． 31，相关系数 r = 0． 9999，表明柴胡皂苷 a 在
0． 699 ～ 4． 66 μg之间线性关系良好。
2． 5 精密度试验 吸取供试品溶液 10 uL，连续进
样 5 次，记录峰面积，RSD 为 1． 34 %，本法精密度
良好。
2． 6 重复性试验 取秦岭柴胡地上部分药材 5
份，按供试品制备方法制备样品，测定含量，RSD
为 1． 16 %，本法重复性良好
2． 7 稳定性试验 取重复性试验中的 1 号样，于
不同时间进样 10 uL，记录峰面积，RSD为 0． 60 %，
结果表明，本品在 8 h内稳定性良好。
2． 8 回收率试验 取已知含量的样品(C =
0． 1415 mg /g)加入一定量对照品，按供试品制备方
法制备样品，测定总量，结果见表 1。
表 1 回收率试验结果
序
号
取样量
(g)
相当于柴胡
皂苷 a的量(mg)
加对照品量
(mg)
峰面积
测得总量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1 74． 3080 10． 5146 1． 06 662264 11． 5369 96． 45
2 72． 6100 10． 2743 1． 06 650184 11． 3277 99． 38
3 72． 7243 10． 2905 1． 06 648994 11． 3071 95． 91 97． 42 1． 42
4 71． 4170 10． 1055 1． 06 639696 11． 1461 98． 17
5 72． 5739 10． 2692 1． 06 648548 11． 2994 97． 19
注:结果表明，本方法回收率良好。
2． 9 样品测定 取三批秦岭柴胡地上部分药材样
品，按供试品制备方法和前述色谱条件测定，结果
见表 2。
表 2 样品测定结果
批次 称样量(g) 峰面积 含量(mg /g) 平均含量(mg /g)
1 90． 5487 740791 0． 1424
2 90． 0855 754978 0． 1459 0． 1442
3 90． 111 747502 0． 1444
3 讨论
定量检测(HPLC)中，柴胡皂苷 a峰形较好，含
量较高;据文献报道［1］秦岭柴胡中含有一定量的
柴胡皂苷 d，但本实验中，响应值比较低，无法计算
含量。另外秦岭柴胡地上部分柴胡皂苷 a 含量远
小于根部，和其他文献报道也有所差异。本研究认
为除了与药用部位高度相关外，可能与秦岭柴胡产
地、采收季节等因素有关，柴胡属植物绝大多数药
用部位为根部，故采收季节为春、秋二季，此时柴胡
皂苷 a等成分富集于根部，故含量相对较高。本实
验所用秦岭柴胡，因考虑到当地民间习用带根全草
入药，故选择夏季植物生长旺盛时采集，并分别对
其不同药用部位进行研究，此时由于地上部分生长
旺盛，植物体内组分分布产生一定变化，同时产地、
提取工艺的不同，也可能对含量造成一定影响。
参考文献
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册［M］．北京:科学出版社，1981:390．
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(收稿日期:2011 － 02 － 22)