全 文 ：2.4　齐墩果酸的含量测定
2.4.1　色谱条件 色谱柱为 KromasilC18柱(4.6 mm×25 cm, 5μm);流动相为甲醇-水(9∶1);检测波长 210 nm;流速 1.0 ml/
min;柱温 25℃。
2.4.2　标准曲线的制备 精密称取齐墩果酸对照品 5.6 mg, 用
甲醇定容于 10ml。分别精密移取 0.01, 0.05, 0.1, 0.2, 0.4, 0.6,
0.8ml对照品溶液至 1 ml的量瓶中 , 用甲醇定容至刻度 , 进样 20
μl分析 ,以浓度为横坐标 , 峰面积为纵坐标 , 得回归方程为 Y=
8 591.78X-8.95, r=0.999 9,浓度在 0.005 6 ～ 0.448 mg/ ml范
围内 , 与峰面积呈良好的线性关系。
2.4.3　精密度的测定 取浓度为 0.112mg/ml的对照品溶液 ,进
样 20 μl分析 , 连续进样 5次 , 测定峰面积 , 计算求得峰面积的
RSD为 0.77%, 说明精密度良好。
2.4.4　稳定性实验 取木瓜供试品溶液 , 分别在 0, 2, 4, 8, 12, 24
h测定齐墩果酸的峰面积 , RSD为 2.07%, 表明样品在 24 h内
稳定。
2.4.5　重复性实验 按照供试液的制备方法 , 平行制备 5份 ,进
样分析 , 计算求得含量的 RSD为 1.83%,说明重复性良好。
2.4.6　加样回收率实验 精密称取已知齐墩果酸含量的药材样
品 6份 , 分别精密加入齐墩果酸 ,采用外标两点法进行测定 ,计算
平均加样回收率为 100.15%, RSD为 1.83%。
2.4.7　含量测定 取细粉约 1 g,精密称定 , 加甲醇 50 ml,加热回
流 1 h,放冷 , 滤过 , 残渣加甲醇 25 ml, 加热回流 0.5 h, 放冷 , 滤
过 , 合并两次滤液 , 浓缩 ,置 10 ml量瓶中 , 加甲醇稀释 , 并定容至
刻度 , 摇匀 ,即得。经微孔滤膜滤过 ,进样分析 , 结果见表 1(按干
燥品计算)。
2.5　酸度的测定 [ 1] 取本品粉末 5 g,加水 50 ml, 振摇 ,放置 1 h,
滤过 , 滤液依法 [ 1]测定 ,原药材 、润法和蒸法所得饮片的 pH测定
值均为 3.1。
3　讨论
由表 1可以看出 , 与原药材比较 , 木瓜经过润法 、蒸法软化 ,
各成分变化不大 ,润法样品略有下降 ,可能上是在润制淋水的过
程中 , 损失少量成分;蒸法样品中的成分含量略高 ,可能是在高温
加热的过程中 , 少量有机酸 、黄酮类成分 、齐墩果酸从结合状态游
离出来 。综合分析 , 两种方法软化的木瓜中成分没有显著性差
异 , 润法需要的时间较长 ,蒸法工时较短 , 但需要消耗能量 ,各厂
家可以根据需要选择相应的软化方法。
另外 ,本文建立了木瓜中齐墩果酸的含量测定方法 , 样品制
备简便 ,方法重现性好 , 回收率高 ,值得推广。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:22, 247, 41,附录 VⅡG.
收稿日期:2005-08-26;　修订日期:2006-03-25
作者简介:王贞佐(1966-),女(汉族),吉林长春人 ,现任吉林大学生命科
学学院高级工程师 ,硕士学位 ,主要从事中草药及药物制剂研究工作.
＊通讯作者简介:滕利荣(1954-), 男(汉族),吉林长春人 , 现任吉林大学
生命科学学院教授 ,学士学位 ,主要从事药物提取分离纯化研究工作.
超临界二氧化碳萃取紫花前胡苷的工艺优化研究
王贞佐1 , 王　迪 1 ,郭　亮1 , 呼海涛 1 , 曹鹏飞1 ,滕利荣 1＊ , 杨景华 2
(1.吉林大学生命科学学院 ,吉林 长春　130012;　2.吉林精优长白山药业有限公司 ,吉林 长春　130033)
摘要:目的 以荧光分析法测定紫花前胡苷(NDK)含量为指标 ,比较紫花前胡中紫花前胡苷的溶剂热回流提取和超临界
CO2萃取方法 , 优化最佳提取工艺。方法 通过正交实验 ,采用超临界 CO2提取技术对紫花前胡提取工艺条件进行考察 ,并与溶剂热回流提取结果比较 ,分析测定紫花前胡苷的含量。结果 通过与传统提取方法进行比较 ,证明超临界 CO2提取技术在紫花前胡苷的提取上具有明显优势。超临界 CO2 提取紫花前胡苷的最佳工艺为萃取压力 20MPa, 萃取温度
50℃, CO
2
动态流量 35L· h-1。结论 不同工艺条件提取紫花前胡苷产率不同 , 萃取温度 、萃取压力 、CO
2
动态流量等工艺
参数对实验指标有显著性影响。
关键词:超临界二氧化碳萃取;　紫花前胡苷;　荧光分析法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2006)08-1487-02
AStudyonOptimizetheTechnologyofNDKfromPurpleflowerAngelicabySupercriti-
calCO2 Extraction
WANGZhen-zuo1 , WANGDi1 , GUOLiang1 , HUHai-tao1 , CAOPeng-fei1 , TENGLi-rong1 ＊ , YANGJing-hua2
(1ColegeofLifeScience, JilinUniversity, Changchun130012 , China;2 JilinJingyouChangbaiMountain
PharmaceuticCo.Ltd., Changchun130033 , China)
Abstract:ObjectiveTomeasurethecontentofNDKwiththefluorescenceanalyticalmethod, andtocomparethemethodofsol-
ventthermalrefluxingwiththemethodofSFECO2 , thatoptimizethebesttechnologiesofextractingNDK.MethodsThecontentofNDKextractedbySFECO2 byorthogonaltestwasanalyzed.ResultsComparingSFEwiththemethodofsolventthermalreflu-xing, itprovesthatSFEhasanobviousadvantageinextractionNDK.Theoptimizedconditionofextractionisthatextractionpress
is20MPa, extractiontemperatureis50℃, andCO2 dynamicfluxis35 L· h-1.ConclusionDifferentextractionmethodshavedif-ferentyieldsofNDK.Extractiontemperature, press, CO2 dynamicfluxandothertechnologicalparameterscanobviouslyafecttheexperimenttarget.
Keywords:SupercriticalCO2;　Nodakenin;　Fluorescenceanalyticalmethod
　　前胡为伞形科植物白花前胡 PeucedanumpraeruptorumDunn 和紫花前胡 PeucedanumdecursivumMaxim的干燥根。主要成分
为香豆素类化合物 ,而紫花前胡的特征性成分为线型二氢吡喃和
二氢呋喃香豆素类化合物 , 紫花前胡苷(nodakenin, NDK)是紫花
前胡中的有效成分 [ 1] , 具有抗血小板凝聚作用 [ 2] 。 现代药理研
究表明 ,许多前胡香豆素成分具有不同程度的钙离子拮抗活性 ,
具有扩张冠状动脉 、缓解心绞痛的作用。 NDK亦显示了很强的
活性。前胡香豆素抗血小板聚集作用显著 ,从新药研制的观点来
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2006VOL.17NO.8 时珍国医国药 2006年第 17卷第 8期
看 , 可成为抗血小板作用药的原型之一。研究表明紫花前胡提取
物中紫花前胡苷的含量越高 , 其疗效越好 , 因此紫花前胡提取物
中紫花前胡苷的含量可作为紫花前胡提取工艺的评判指标。已
报道的提取方法主要是以无水乙醇或氯仿等溶剂加热回流的方
法提取 , 而使用超临界 CO2提取技术尚未见报道。本文采用超
临界 CO2提取技术 [ 3 , 4] ,通过正交实验对紫花前胡提取工艺条件
进行考察 , 以荧光分析法测定不同工艺条件下紫花前胡苷含量来
选择最佳提取工艺。与传统提取方法进行比较 ,证明超临界 CO2
提取技术在紫花前胡苷的提取上具有明显优势。
1　材料
1.1　仪器 HA221-50-06超临界萃取装置(江苏南通华安超临界
萃取有限公司);RF-5301PC紫外荧光分析仪(日本岛津公司)。
1.2　材料 紫花前胡 , 采购于长春市药材公司(批号 0503H);紫
花前胡苷对照品 , 由中国药科大学孔令义教授提供。
2　方法
2.1　紫花前胡苷(NDK)的提取
2.1.1　超临界流体萃取 NDK 采用正交实验设计方法 , 以萃取
压力 、萃取温度 、CO2 动态流量为实验因素 , 取三水平 , 选用 L9
(33)正交表进行实验 , 因素-水平见表 1。
表 1　因素与水平
水平 A　萃取压力 /MPa　
B
　萃取温度 /℃　
C
　CO
2
动态流量 /L· h-1　
1 20 30 35
2 25 40 25
3 30 50 45
称取 200 g粉碎成 20目的紫花前胡药粉装入料筒后置于萃
取釜中。经多次预实验确定分离 Ⅰ 的压力为 10 MPa, 温度为
45℃, 分离Ⅱ的压力为 8MPa, 温度为 40℃,萃取时间 70 min。主
要影响因素和水平按正交表安排实验 [ 5]。
2.1.2　氯仿热回流法提取 NDK[ 6] 精称紫花前胡细粉(20目)
适量 , 用滤纸包好后 , 置 150 ml索氏提取器中。在索氏提取器的
烧瓶内加入适量氯仿后 , 加热回流 ,当第 1次回流时开始计时 ,提
取约 6 h。回收氯仿。提取产物以甲醇溶解并定容至 10 ml,制成
供试品溶液。此实验平行做 3次 , 取其平均值。
2.2　紫外荧光法测定紫花前胡苷的含量
2.2.1　最大激发波长的选择 对紫花前胡苷对照品甲醇溶液于
200 ～ 900nm波长范围内扫描 , 在 396nm处 , 荧光强度最大 ,因此
可以初步确定紫花前胡苷的发射波长为 396 nm。
以 396 nm为测定波长 ,再次对紫花前胡苷对照品进行扫描 ,
描波长范围是 220 ～ 396 nm, 两个峰值 277 nm和 366 nm, 但是
277nm处的荧光强度小于 366 nm处的荧光强度。因此选择 366
nm为紫花前胡苷的激发波长。
以 366 nm为激发波长 , 验证紫花前胡苷的发射波长。经过
366 ～ 600 nm范围内的扫描 ,得到一个峰。峰值强度对应的波长
依然是 396 nm。说明为确定激发波长时所选择的发射波长是正
确的。由此可以确定紫花前胡苷的最大激发波长为 366 nm。
2.2.2　标准曲线及线性范围 精密称取 105℃干燥至恒重的对
照品 20mg置 100ml容量瓶中 ,加甲醇使溶解并稀释至刻度线 ,
摇匀 , 即得对照品溶液。精密吸取对照品溶液 0.5, 1.0, 2.0,
3.0, 4.0, 5.0, 6.0ml分别置 50 ml容量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度
线 , 摇匀 , 以空白溶剂为参比 , 照荧光分析法 , 在最大激发波长处
测定荧光强度 , 以浓度 C为横坐标 , 荧光强度 A为纵坐标绘制标
准曲线 , 并进行线形回归分析 , 求得标准曲线回归方程如下:
Y=4 555.3X+ 3.238 7 , r=0.999 3 ;线性范围:0.002 ～
0.024mg/ml
2.2.3　样品溶液的制备 精密称取萃取物和回流提取物各 200
mg,用甲醇溶解 , 分别定容至 10 ml。在最大激发波长下测量其
荧光强度。利用标准曲线回归方程 ,计算出各自浓度及产率。
3　结果
3.1　超临界流体萃取法实验结果和极差方差分析 见表 2, 表 3。
由表 2极差分析可知 , CO2流量有显著差异 , C>B=A;由表
3可知 , CO2流量也具有显著性差异。最佳工艺为 A1B3C1 , 即在
压力为 20MPa, 萃取温度 50℃, CO2动态流量 35 L· h-1时产率
最高。
3.2　氯仿热回流萃取物中 NDK产率实验结果 经过 3次氯仿热
回流法提取紫花前胡中 NDK的实验 ,得出表 4的实验结果。 计
算出每次水平实验的产率 , 并求得了平均值 0.000 9 mg/g, 相对
标准偏差 3.02%。将此平均值作为传统方法提取 NDK的产率 ,
并与超临界提取方法做比较。 可以看出超临界方法比传统方法
具有明显的优势。
表 2　正交实验结果
序号 压力P/MPa温度 T/℃ CO2流量 V/L· h-1 总产率 C/mg· g-1
1 1 1 1 0.063 088
2 1 2 2 0.042 707
3 1 3 3 0.039 173
4 2 1 2 0.010 478
5 2 2 3 0.033 328
6 2 3 1 0.057 486
7 3 1 3 0.022 133
8 3 2 1 0.034 175
9 3 3 2 0.04 297K1 0.144 0.096 0.156K
2 0.102 0.111 0.096K3 0.099 0.141 0.096K1 0.048 0.032 0.052 ∑ =0.345K2 0.034 0.037 0.032K3 0.033 0.047 0.032R 0.015 0.015 0.020
表 3　方差分析结果
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F P
A 4.22×10-4 2 2.11×10-4 3.87B 5.81×10-4 2 2.91×10-4 5.34C 1.031×10-3 2 5.15×10-4 9.45 <0.1误差(E) 1.09×10-4 2 5.45×10-5
　　f(2, 2)0.1 =9.0
表 4　氯仿热回流法NDK产率
原料重
量 m/g
荧光强
度
浓
度
产率
C/mg· g-1
平均值
C/mg· g-1
相对标准偏差
(%)
8.65 5.879 0.000 580 0.000 67 0.000 9 3.02
11.79 9.684 0.001 415 0.001 2
13.36 8.230 0.001 109 0.008 3
3.3　验证实验 以最佳工艺条件下提取了 5批样品 , 经含量测定
后相对标准偏差均符合标准 , 说明用超临界 CO2萃取紫花前胡
可行。
4　讨论
本文探讨了用超临界 CO2萃取紫花前胡的方法 , 确定提取
的最佳工艺为:压力 20MPa, 萃取温度 50℃、CO2动态流量 35 L·
h-1 , 此时产率最高 , 较其他方法具有明显优势 , 可以为生产提供
依据。
参考文献:
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京:人民卫生出版社 , 1986:1155.
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时珍国医国药 2006年第 17卷第 8期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2006VOL.17NO.8